İnsan sıtma parazitlerine kemirgen sıtma parazitlerinin yaşam döngüsü ve biyolojisinin çarpıcı benzerlikleri nedeniyle, kemirgen sıtma modelleri sıtma araştırmaları için vazgeçilmez hale gelmiştir. Burada, vahşi tip ve transgenik kemirgen sıtma türlerinin fenotipeksi analizinde kullanılan en önemli tekniklerden bazılarını standardize ettik.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Kemirgen Sıtma paraziti Asexual ve cinsel kan aşamaları ve sivrisinek aşamaları phenotypic Analizi
Bu makalede
Özet
Özet
Genetik ve sistem biyoloji teknolojilerinde yapılan son gelişmeler, sıtma parazitlerinin biyoloji anlayışımızı moleküler düzeyde teşvik etmiştir. Ancak, aşı ve kemoterapi gelişimi için etkili Sıtma paraziti hedefleri hala sınırlıdır. Bu büyük ölçüde insan Plasmodium türleri için ilgili ve pratik in vivo enfeksiyon modellerinin olmaması nedeniyle, en önemlisi p. falciparum ve p. vivaxiçin. Bu nedenle, kemirgen sıtma türleri yaygın olarak sıtma aşısı, ilaç hedefleme, bağışıklık tepkisi ve korumalı Plasmodiumspp. genes fonksiyonel karakterizasyon çalışmaları için pratik alternatif olarak vivo modeller olarak kullanılmıştır. Nitekim, kemirgen sıtma modelleri, özellikle sivrisinek iletim ve karaciğer sahne biyoloji keşfetmek için, paha biçilemez olduğu kanıtlanmıştır ve immünolojik çalışmalar için vazgeçilmez idi. Ancak, transgenik ve vahşi tip aseksüel ve cinsel kan aşamasında parazitlerin fenotipleri değerlendirmek için kullanılan yöntemlerle farklılıkları vardır. Bu tutarsızlıkları örnekleri kan-sahne parazitleri ve erkek gamet exflagellation değerlendirilmesi ile kemirgenler intravenöz vs intraperitoneal enfeksiyon seçimdir. Burada, haberci-geni veya vahşi tip kemirgen Sıtma paraziti türlerini ifade eden transgenik parazitlerin aseksüel ve cinsel kan aşamalarında fenotipleri değerlendirmek için standartlaştırılmış deneysel yöntemler ayrıntılarıyla. Ayrıca, Anopheles sivrisinek vektörler içinde Sıtma paraziti sivrisinek aşamalarının (gametes, ookinetes, oocysts ve sporozoites) fenotipleri değerlendirmek için yöntemler ayrıntılarıyla. Bu yöntemler ayrıntılı ve burada p. berghei ve p. yoelii ölümcül ve ölümcül olmayan suşları için Basitleştirilmiş ama aynı zamanda p. chabaudi ve p. vinckei kemirgen sıtma türleri bazı ayarlamalar ile uygulanabilir.
Giriş
Sıtma parazitleri insanlar dünya çapında sıtma enfeksiyonları yüzlerce milyonlarca neden, 600.000 ' den fazla ölüm her yıl1. İnsan enfeksiyonları beş Sıtma paraziti türünün neden olduğu, yani p. falciparum, p. vivax, p. ovale, p. malariae, ve p. knowlesi. Çoğu klinik sıtma mortaliteleri, Sahra-altı Afrika 'da P. falciparum 'dan kaynaklanır1. Sahra-altı Afrika dışında geniş dünya çapında morbiditelerin neden olduğu başka bir insan Sıtma paraziti türü P. vivax2' dir. Diğer üç tür daha coğrafik olarak sınırlıdır ve ölümcül P. knowlesi3
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Burada açıklanan tüm hayvan deneyleri, Tulane Üniversitesi 'nin kurumsal hayvan bakımı ve kullanım Komitesi 'nin (ıAYUC) onaylı protokollerine ve Bezmialem vakif Üniversitesi hayvanlar etik komitesine göre yürütülmüştür. Diğer tüm deneysel protokoller ve rekombinant DNA kullanımı Tulane Üniversitesi Kurumsal Biyogüvenlik Komitesi (ıBC) onaylı protokollere göre yürütülmüştür.
1. kan ile fareler enfeksiyon-sahne parazitler için Parasitemia analiz ve sivrisinek enfeksiyonu Assays
- Gün-3: alıcı fareler içine fenilhidazin isteğe bağlı enjeksiyon
- Bir 26 G iğne kullanarak outbred SW veya CD1 alıcı fareler (sivri....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Sıtma parazitlerine ters genetik araçlar ve teknikler uyguladığınız başarı, sıtma araştırmaları alanında devrim yaratıyor, çeşitli Plasmodium türlerinin39belirli genomik segmentlerini ekleme, silme veya değiştirme yeteneği ile. Önemlisi, vazgeçilebilir genomik loci tespit edilmiş ve başarılı bir şekilde tüm yaşam döngüsü aşamalarında istikrarlı bir ifade sağlamak için, Çift Homolog rekombinasyon tarafından kemirgen ve insan sıtma parazitleri floresan prote.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
İnsan sıtma parazitleri onların yaşam döngüleri Genel Biyoloji benzerlik rağmen, fare sıtma modelleri de güvenilir in vivo modelleri olarak kullanımını sınırlamak olacak ınsan Plasmodium türleri için pek çok benzerlik vardır. Örneğin, aşılar olarak canlı zayıflatılmış parazitlerin dışında, altbirim ve DNA ve diğer aşılar ile tüm aşı çalışmaları fare modelinde mükemmel sonuçlar verdi, ancak endemik bölgelerde yaşayan insanlarda, sonuçlar tatmin edici değildi.
Başka bir sorun, .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların ifşa etmesi gereken hiçbir şey yok.
Teşekkürler
Ahmed aly, Türkiye Kalkınma Bakanlığı Grant 2015BSV036 ' dan Bezmialem vakif Üniversitesi 'ne finansman sağlayarak ve Tulane Üniversitesi Kamu Sağlığı ve tropikal Tıp Fakültesi tarafından sağlanan finansman ve R21Grant için NIH-NIAID ' e fon vererek desteklenmektedir. 1R21Aı111058-01A1.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Heparin | Sigma | 375095-100KU | |
| Ksantürenik asit | Sigma | D120804-5G | |
| Hipoksantin | Sigma | H9377-25G | |
| Alsever'in çözümü | Sigma | A3551-500ML | |
| Sodyum Bikarbonat | Sigma | S5761-500G | |
| Fenilhidrazin | Sigma | P26252-5G | |
| Gliserol | Sigma | G5516-500ML | |
| Giemsa | Sigma | GS1L-1L | |
| 26 G x 3/8 Hassas Kayma İğnesi, | Becton Dickinson | 305110 | |
| 1 mL TB Şırınga, 26 G x 3/8 | Becton Dickinson | 309625 | |
| 1 cc İnsülin Şırıngası, U-100 27 G | Becton Dickinson | 329412 | |
| İzofluran, USB | Piramal | 2667- 46- 7 | |
| PBS, pH 7.4 | Gibco | 10010049 | |
| RPMI | Gibco | 22400105 | |
| DMEM | Gibco | 11995065 | |
| Pencillin/Streptomisin | Gibco | 10378016 | |
| Fetal Sığır Serumu | Gibco | 10082147 | |
| Cam Elyaf Yünü | Corning | 3950 |
Kaynaklar
- Who/Unicef Report. Malaria Mdg Target Achieved Amid Sharp Drop in Cases and Mortality, but 3 Billion People Remain at Risk. Neurosciences (Riyadh). 21, 87-88 (2016).
- Naing, C., Whittaker, M. A., Nyunt Wai, V., Mak, W. J.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
