Yöntem makalesi

Beyaz sinekten Endosimbonların Çıkarılması İçin Yöntemler Bemisia tabaci

DOI:

10.3791/55809

⸱

19 Haziran 2017

 ,  ,  ,  ,  , 
1Ministry of Agriculture Key Laboratory of Molecular Biology of Crop Pathogen and Insects, Institute of Insect Sciences, Zhejiang University

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada, beyaz sinek Bemisia tabaci'den endosimiviyonları diseksiyon ve filtrasyon yoluyla izole etmek için bir protokol sunuyoruz. Büyütmeden sonra DNA örnekleri, endosimbiyonlar ile beyaz sinek arasındaki karşılıklı etkileşimin izlenmesi ve izlenmesi için uygundur.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bakteriyel sembiyonlar ev sahipleri ile samimi bir ilişki kurarlar ve çoğu durumda ev sahiplerine avantaj sağlarlar. Genomik bilgi, konukçularındaki bakteri sembiyonlarının işlevlerini ve evrimini incelemek için kritik önem taşır. Çoğu simbiyon, in vitro ortamda kültürlenemediğinden, genom dizilimi için yeterli sayıda bakteri izole etme yöntemleri çok önemlidir. Beyaz sinek Bemisia tabaci'de, çeşitli endozimbiyonlar tespit edilmiş ve zararlıların gelişimi ve çoğaltılmasında çoklu yaklaşımlarla önemi olması öngörülmüştür. Bununla birlikte, derneklerin altında yatan mekanizma halen bilinmiyor. Engel, kısmen bakteriositlerle sınırlandırılmış beyaz sinir hücrelerindeki endozimbiyonların konukçu hücrelerden ayrılması zor olmasından kaynaklanmaktadır. Burada beyaz sinek B. tabaci'den başta dissekte olmak üzere endozimbiyonların tanımlanması, ekstraksiyonu ve saflaştırılması için bir adım adım protokol bildirilmektedirVe filtrasyon. Bu yöntemle hazırlanan endosymbiont örnekleri, yine de farklı endosimbit türünün bir karışımı olmasına rağmen, B. tabaci'de endozimbiyonların olası rollerinin analizi ve izlenmesi için uygundur. Bu yöntem aynı zamanda endozimiviyonları diğer böceklerden ayırmak için de kullanılabilir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nispeten konaklarla yakın bir simbiyotik ilişki oluşturan bakteriler eklembacaklılarda yaygın 1 . Beslenme metabolizması, reprodüksiyon, çevresel streslere verilen cevaplar 2 , 3 , 4 vb. Gibi neredeyse her gelişme evresindeki endosymbionların konukçuların özelliklerini etkilediği gösterilmiştir 5 . Bununla birlikte, derneklerin altında yatan mekanizma halen bilinmiyor. Bakterilerin potansiyel işlevleri ve rolleri incelendiğinde genomik öncelik ve önem taşır. Bazı temel bilgiler, yani taksonomik durum, fonksiyonel genler, metabolizma yolları, salgı sistemleri, simbiyozlarda sembiyonların potansiyel rollerini aydınlatan genom dizilerinden çıkarılabilir. Yüksek verimli sekanslama geliştirildiğinde, çok sayıda bakteri genomu dizilenmiştir.Çeşitli işlevler gösterdi 6 .

Endosymbionts, hemipteranlarda yaprak bitleri 7 , bedbugs 8 , psyllids 9 , kahverengi planthoppers 10 ve cicadas 11 gibi hayati öneme sahiptir. Örneğin, zorunlu sembiyot olan yaprak bitleri içindeki Buchnera'nın , yaprak biti genomundan genler ile birlikte gerekli amino asitler biyosentezine karıştığı gösterilmiştir. Dahası, 13 Buchnera'nın transkripsiyonel düzenlenmesi de ortaya çıkarılmıştır 13 . Psyllids'de, Carsonella sıralanır ve şimdiye kadar bulunan en küçük bakteri genomasına 14 puan yerleşmiştir. Endozimbiyonların tüm bu belirteçleri genom dizilerinden kaynaklanır ve çıkarılır. Bu endozimbiyonlar in vitro ortamda kültürlenemediğinden, sıra için yeterli bakteri izole etmek için çeşitli yaklaşımlar uygulanmıştıruencing. Yaprak bitlerinde, endozimbiyonlar santrifüjleme ve filtrasyon yoluyla ekstrakte edilir ve daha ileri genomik ve transkriptomik analizlere tabi tutulur 5 . Kahverengi plantopperlerde endozimbiyonlar bütün böcek genomu 10 ile birlikte dizilir.

Whitefly B. tabaci , 35'den fazla morfolojik olarak ayırt edilemez türü (kriptik türler) içeren bir tür kompleksidir ve bunların arasında iki istilacı tür tüm dünyayı işgal etti ve tarımsal üretime büyük zarar verdi 15 . Dikkat edin, B. tabaci türleri içerisindeki endosimiviyonlar zararlıların gelişiminde önem taşırlar 16 . Bugüne kadar, zorunlu sembiyot , Candidatus Portiera aleyrodidarum ve yedi sekonder sembiyot dahil olmak üzere , beyaz sinekte sekiz endonimviyon belirlendi Hamiltonella , Rickettsia , Arsenophonus , Cardinium ,Em> Wolbachia, Fritschea ve Hemipteriphilus 17 , 18'i tanımladı .

Daha önce tarif edilen hemipteranlardan farklı olarak, beyaz sinek B. tabaci sadece 1 mm uzunluğunda çok küçük bir böcektir. Çoğu endozimbiyon, bakteriositler 19 (B. tabaci'de bakteri oluşturan simbiyon içeren özel hücreler) ile sınırlandırılmıştır. Buna ek olarak, bu endozimbiyonlar in vitro kültürlenemezler. B. tabaci'den endozimbiyon elde etmenin tek yolu bakteriyi ayırmaktır. Bununla birlikte, diseksiyonda zorluk vardır. Öncelikle, kırılgan bakteriom her zaman whitefly'un diğer dokuları ile birbirine bağlanır ve bu da ayrılması zor olur. İkincisi, beyaz sinekin küçük boyutu, yeterli bakteri oluşumunu sınırlar. Üçüncü olarak, endozimbiyonlar bakteride birleşir, tek bir bakteri türü edinmek son derece karmaşık hale gelir.

Burada, whitefly endosimbiyonlarını izleyen metagenome dizilimi için basit ve ucuz bir protokol bildirdik. Diseksiyon, arıtma ve amplifikasyon yoluyla yeterli endozimivyon DNA elde edilebilir ve bakteri türleri teyit edilebilir. Tarif edilen protokol, diğer eklembacaklılarda benzer şekilde kullanılabilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Beyaz sinek yetiştiriciliği ve şifreli türlerin teşhisi

  1. 27 ± 1 ° C,% 70 ± 10 nem ve 14 saatlik ışık koşullarında kafeslerde pamuk Gossypium hirsutum (Malvaceae) (cv. Zhe-Mian 1973) üzerindeki beyaz sinek türlerini 10 saat karanlık rejimde muhafaza edin.
  2. Tek bir erişkin beyaz sinek toplayın ve 30 uL liziz tamponunda (10 mM Tris, pH 8.4, 50 mM KCI,% 0.45 [ağ / hacim] Tween-20,% 0.2 [ağ / hacim] jelatin,% 0.45 [hac / hac] Hacim] Nonidet P 40, 60 g / mL Proteinaz K).
  3. Homojenatı 65 ° C'de 1 saat inkübe edin ve daha sonra 100 ° C'de 10 dakika inkübe edin.
    NOT: Gerekirse, 65 ° C'de inkübasyon süresi arttırılabilir. 100 ° C'de inkübasyon süresi, Proteinaz K'yi yeterince inaktive etmek ve DNA hasarını önlemek için kritik bir şekilde kontrol edilmelidir.
  4. Mitokondrial sitokrom oksidaz primerlerine dayanan beyaz sinek DNA'sını (bölüm 1.3'te edinilen) kullanarak polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) gerçekleştirin.
    COI-F: 5'-TTGATTTTTTGGTCATCCAGAAGT-3 '
    COI-R: 5'-TAATATGGCAGATTAGTGCATTGGA-3 '
    1. PCR reaksiyonlarını, 1 U Taq DNA polimeraz, 2.5 uL 10x Tampon, 0.2 mM dNTP, her primerin 0.2 mM'si ve beyaz sinek DNA'sının 2 uL'si içeren 25 uL'lik bir son hacimde gerçekleştirin.
    2. Aşağıdaki PCR prosedür koşullarını kullanın: 95 ° C'de 3 dakika ilk denatürasyon ardından 45 saniye için 95 ° C'de (denatürasyon), 45 saniye boyunca 50 ° C'de (tavlama) ve 1 dakika süreyle 72 ° C'de (uzatma) 35 devir döngüsü ve Daha uzatmak için 72 ° C'de 10 dakika.
  5. PCR ile güçlendirilmiş ürünü bir DNA jel özütleme kiti ile önerilen protokolle temizleyin.
  6. Saflaştırılmış DNA örneklerini üreticinin talimatlarını izleyerek bir DNA numune sıralama sistemi ile sıralayın.
  7. Beyazilin kriptik türlerini tanımlamak ve diğer spesifikasyonların bulaşmasını önlemek için, Temel Yerel Hizalama Arama Aracını (BLAST) kullanarak dizileri analiz edines.

2. Endosymbiont Tanımlama ve Yerelleştirme

  1. Beyaz sineğin içindeki her endozimbiyonun spesifik genlerini yükseltmek için beyaz sinek DNA'sında (Adım 1.3'te edinilen) PCR yapın (PCR tarifi Bölüm 1.4'te anlatılmıştır ve PCR prosedürleri ve primerler Tablo 1'de listelenmiştir).
  2. Güçlendirilmiş numuneyi, her bir bakterinin spesifik genini tanımlamak için önceden yayınlanmış protokol 20'ye (1% agaroz jel, çalışma tamponu olarak Tris-asetat-EDTA, voltaj 5 V / cm) göre agaroz jel elektroforezine tabi tutun.
  3. Beyaz sinek içindeki bakteri türünü belirlemek için her bandı kurtarın ve sekanslayın (bkz. Bölüm 1.5-1.7).
  4. Daha önce yayınlanmış olan protokole göre endozimbiyonların yerlerini tanımlamak için beyaz sinekler üzerinde yerinde melezleşmeleri (FISH) gerçekleştirin 19 .
    NOT: Gerekirse floresan problarının konsantrasyonunu artırın.

3. İletim Elektron Mikroskopisi (TEM)

  1. Beyaz sinekler,% 2.5 [hac / hacim] glutaraldehit içeren fosfat tamponunda (0.1 M, pH 7.0) 4 saat boyunca daldırıp sabitleyin.
  2. Numuneleri fosfat tamponu (0.1 M, pH 7.0) içinde üç kez yıkayın, her seferinde 15 dakika yıkayın.
  3. Numuneleri, 2 saat boyunca% 1 [ağırlık / hacim] OsO 4 içeren fosfat tamponunda (0.1 M, pH 7.0) tekrar batırın ve sabitleyin.
  4. Numuneleri her seferinde 15 dk dereceli bir etanol serisi (% 30,% 50,% 70,% 80,% 90,% 95 ve% 100) ile kurutun.
  5. Numuneleri 20 dk için% 100 aseton içine aktarın ve daldırın.
  6. Numuneleri, oda sıcaklığında 1 saat boyunca% 100 aseton ve% 100 Spurr reçinesi (1: 1) karışımı içine yerleştirin.
  7. Numuneleri oda sıcaklığında 3 saat boyunca% 100 aseton ve% 100 Spurr reçinesi (1: 3) karışımına aktarın.
  8. Numuneleri, 9 saatten fazla süreyle% 100 Spurr reçinesine (70 ° C'de inkübe edin) aktarın ve daldırın.
  9. Beyaz sinek numunelerini bir mikrobana göre.
  10. 5-10 dakika boyunca mutlak uranyil asetata daldırarak ultra ince filmleri (bölüm 3.9'da edinilen), ardından 5-10 dakika süreyle% 50 alkalin kurşun sitrat içine daldırın.
    NOT: Bölüm 3.1-3.10'da kullanılan reaktiflerin hacimleri numunelere bağlıdır. Numunelerin reaktiflere batırıldığından emin olun.
  11. Bakteri lokalizasyonunu, şeklini ve büyüklüğünü belirlemek için transmisyon elektron mikroskopisi (15,000X) altında örnekleri inceleyin (bkz. Bölüm 4.6).

4. Whitefly Bakteriomunun Diseksiyonu ve Saflaştırılması

  1. Bir mikroskop lamı üzerine 100 uL 1x PBS solüsyonu ekleyin. Pamuk yapraklarından 3. veya 4. talaş nimflerini seçin ve onları PBS solüsyonuna daldırın.
  2. Bir stereomikroskop altında ince entomolojik iğneler kullanın ve bakteriomları beyaz sinek cisiminden çekin.
    1. Nimfin bir tarafındaki bir deliği yavaşça kesip diğerine hafifçe bastırınBakterilerin dışarı çıkmasına izin verin.
  3. 0.5-10 μL'lik bir pipette 20 μL'lik bir mikro yükleyici (bakteriomun boyutunu karşılamak için ön uç kesilmiş olarak) monte edin. Tekli bakteriyi PBS solüsyonundan mikro yükleyiciye çıkarın.
  4. Bakteriyi PBS solüsyonuna pipetle atarak ve bakteri özütleyerek diğer beyaz sinir dokularının kontaminasyonunu gidermek için bakteri yıkayın. Üç kez tekrarlayın.
  5. Hemen yıkanmış bakteri 60 μL 1x PBS çözeltisi içeren bir santrifüj tüpüne pipetleyin.
  6. Şırınga-monte edilen bakteri 5 μm filtre membranı ile filtrelenir (beyaz sinekte bakteriositlerinin bakteri ve çekirdek boyutlarına göre belirlenir). Karışık sıvıyı filtre zarından iyice geçirmek için defalarca tekrarlayın.
    NOT: Daha iyi bir amplifikasyon ve sıralama sonucu elde etmek için, 100'den fazla bakteriomu bir araya getirin. Bakteri kaybını azaltmak için önce 1x PBS çözeltisi kullanarak filtre zarını ıslatın.Membrana bağlanma.

5. Endozymbiont Genomlarının Amplifikasyonu

  1. Süzüntüyü (esas olarak beyaz sinek endozimiviyonlarını içeren) bir DNA amplifikasyon kiti kullanarak, önerilen protokol ile bir miktar değişikliğe uğratarak büyütün.
    1. Kan veya hücrelerden genomik DNA amplifikasyonunun önerilen protokolünü seçin ve sonraki deneyler için D2 tamponu hazırlayın.
    2. Direkt olarak 1.5 μL süzüntü (bkz. Bölüm 4.6) santrifüj tüpüne, ardından 1.5 μL Tampon D2 ilave edin ve iyice karıştırın.
    3. 10 dakika boyunca buz üzerinde inkübe edin ve 1.5 mcL durdurma solüsyonu ekleyin.
    4. Reaksiyon tamponu ve 1 μL DNA polimeraz'dan 15 uL ekleyin ve hafifçe karıştırın.
    5. Karışımı 30 ° C'de 16 saat inkübe edin, bunu takiben 65 ° C'de 3 dakika inkübe edin.
  2. Doğrudan amplifiye süzüntü üzerinde PCR gerçekleştirin (gerekirse amplifiye edilmiş numuneleri seyreltin), bac için tasarlanmış spesifik primerler kullanarakTeria'nın bakteri türlerini teyit etmesi için (bkz. Bölüm 2.1).
  3. Daha önce yayınlanmış yöntem 21'e göre beyaz sinek gen beta-Aktin ve EF1 primerler kullanılarak konukçu genomunun kontaminasyon olup olmadığı teyit etmek için PCR uygulayın (PCR tarifi, bölüm 1.4'te tanımlanmıştır).

6. Endosymbiont Metagenom Dizilemesi

  1. Numunelerin kalitesini test etmek için sekanslandınlmadan önce amplifiye filtrat bir spektrofotometreye ve bir florometreye (imalatçının talimatlarına göre) tabi tutulur ve numunelerin sıralama için kriterleri karşılayıp karşılamayacağına karar verilir.
  2. Üretici üreticinin talimatlarına göre amplifikatı bir genom dizisine tabi tutun.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

B. tabaci kompleksinin Ortadoğu Küçük Asya 1 (MEAM1) türü, açıklama için bir örnek olarak alınmıştır. Beyaz sinekler ve beyazlatıcıların birkaç gelişme evresi için pamuk, bir pamuk bitkisi, yetişkin beyaz sinek ve beyaz sinekin 1., 2. ve 4. talaş nimfleri dahil olmak üzere Şekil 1'de gösterilmektedir ( 3. yaş çiçekleri, 4. talaş perdesine benzer şekilde görünür ). 4. instar nimfin 1. ve 2.<...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Beyaz sineklerdeki endosimbiyontlar in vitro kültürlenemediğinden, diseksiyon ve bakteriyositlerin birleştirilmesi, endosimbiyontların yeterli genetik materyalini elde etmenin etkili bir yoludur. Diseksiyondan önce, ilgili beyaz sinek türleri ve endosimbiyontlar açıkça doğrulanmalıdır. Beyaz sinek B. tabaci, morfolojik olarak ayırt edilemeyen 35'ten fazla türe sahip bir tür kompleksidir ve farklı kriptik türler farklı endosimbiyontlar içerebilir. Portiera, zorunlu bir ortakyaşam

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu araştırma için maddi destek Ulusal Anahtar Araştırma ve Geliştirme Programı (2016YFC1200601) ve Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (31390421) tarafından sağlanmıştır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Taq DNA polimerazTakaraR001A, rTaq, 10 kez dahil; Tampon ve dNTP
Jel DNA ekstraksiyon kitiQiagen28704
DNA numune dizileme sistemiABIABI-3730XL
MikrotomLeicaEM UC7
Transmisyon elektron mikroskobuHitachiH-7650 TEM
Stereo mikroskopZeissStemi 2000-C
20 & mu; L mikro yükleyiciEppendorfF2771951
Filtre tutucuMilliporeSX0001300
Filtre membran filtresiMillipore SMWP0013005.0 & mu; m SMWP
REPLI-g UltraFast Mini KitQiagen150033DNA amlifikasyon kiti
NanoDropThermo ScientificNanoDrop 2000
Qubit FlorometreThermo Fisher ScientificQ33216
Genom DizileyiciIlluminaHiseq 2000

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Buchner, P. Endosymbiosis of animals with plant microorganisms. J. Basic Microbiol. 7 (2), Interscience. New York. (1967).
  2. Sloan, D. B., Moran, N. A. Endosymbiotic bacteria as a source of carotenoids in whiteflies. Biol. Letters. 8 (6), 986-989 (2012).
  3. Stouthamer, R., Breeuwer, J. A., Hurst, G. D. Wolbachia pipientis: microbial manipulator of arthropod reproduction. Annu. Rev. Microbiol. 53, 71-102 (1999).
  4. Brumin, M., Kontsedalov, S., Ghanim, M. Rickettsia influences thermotolerance in the whitefly Bemisia tabaci B biotype. Insect Sci. 18 (1), 57-66 (2011).
  5. Hansen, A. K., Degnan, P. H. Widespread expression of conserved small RNAs in small symbiont genomes. ISME J. 8, 2490-2502 (2014).
  6. Moran, N. A., McCutcheon, J. P., Nakabachi, A. Genomics and evolution of heritable bacterial symbionts. Annu. Rev. Genet. 42, 165-190 (2008).
  7. Shigenobu, S., Watanabe, H., Hattori, M., Sakaki, Y., Ishikawa, H. Genome sequence of the endocellular bacterial symbiont of aphids Buchnera sp. APS. Nature. 407, 81-86 (2000).
  8. Nikoh, N., et al. Evolutionary origin of insect-Wolbachia nutritional mutualism. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 111 (28), 10257-10262 (2014).
  9. Sloan, D. B., et al. Parallel histories of horizontal gene transfer facilitated extreme reduction of endosymbiont genomes in sap-feeding insects. Mol. Biol. Evol. 31 (4), 857-871 (2014).
  10. Xue, J., et al. Genomes of the rice pest brown planthopper and its endosymbionts reveal complex complementary contributions for host adaptation. Genome Biol. 15 (12), 521(2014).
  11. Campbell, M. A., et al. Genome expansion via lineage splitting and genomereduction in the cicada endosymbiont Hodgkinia. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 112 (33), 10192-10199 (2015).
  12. Wilson, A. C., et al. Genomic insight into the amino acid relations of the pea aphid, Acyrthosiphon pisum, with its symbiotic bacterium Buchnera aphidicola. Insect Mol. Biol. 19, 249-258 (2010).
  13. Degnan, P. H., Ochman, H., Moran, N. A. Sequence conservation and functional constraint on intergenic spacers in reduced genomes of the obligate symbiont Buchnera. PLoS Genet. 7 (9), e1002252(2011).
  14. Nakabachi, A., et al. The 160-kilobase genome of the bacterial endosymbiont Carsonella. Science. 314 (5797), 267(2006).
  15. De Barro, P. J., Liu, S. S., Boykin, L. M., Dinsdale, A. B. Bemisia tabaci: a statement of species status. Annu. Rev. Entomol. 56, 1-19 (2011).
  16. Himler, A. G., et al. Rapid spread of a bacterial symbiont in an invasive whitefly is driven by fitness benefits and female bias. Science. 332 (6026), 254-256 (2011).
  17. Bing, X. L., Ruan, Y. M., Rao, Q., Wang, X. W., Liu, S. S. Diversity of secondary endosymbionts among different putative species of the whitefly Bemisia tabaci. Insect Sci. 20 (2), 194-206 (2013).
  18. Bing, X. L., Yang, J., Zchori-Fein, E., Wang, X. W., Liu, S. S. Characterization of a newly discovered symbiont of the whitefly Bemisia tabaci (Hemiptera: Aleyrodidae). Appl. Environ. Microbiol. 79 (2), 569-575 (2013).
  19. Kliot, A., et al. Fluorescence in situ hybridizations (FISH) for the localization of viruses and endosymbiotic bacteria in plant and insect tissues. J. Vis. Exp. (84), e51030(2014).
  20. Lee, P. Y., Costumbrado, J., Hsu, C., Kim, Y. H. Agarose gel electrophoresis for the separation of DNA fragments. J. Vis. Exp. (62), e3923(2012).
  21. Rao, Q., et al. Genome reduction and potential metabolic complementation of the dual endosymbionts in the whitefly Bemisia tabaci. BMC Genomics. 16 (1), 226(2015).
  22. Thao, L. L., Baumann, P. Evolutionary relationships of primary prokaryotic endosymbionts of whiteflies and their hosts. Appl. Environ. Microbiol. 70 (6), 3401-3406 (2004).
  23. Zhu, D. T., et al. Sequencing and comparison of the Rickettsia genomes from the whitefly Bemisia tabaci Middle East Asia Minor I. Insect Sci. 23 (4), 531-542 (2016).
  24. Gottlieb, Y., et al. Identification and localization of a Rickettsia sp. in Bemisia tabaci (HomopteraAleyrodidae). Appl. Environ. Microbiol. 72 (5), 3646-3652 (2006).
  25. Zhang, C. R., et al. Differential temporal changes of primary and secondary bacterial symbionts and whitefly host fitness following antibiotic treatments. Sci. Rep. 5, 15898(2015).
  26. Shan, H. W., et al. Temporal changes of symbiont density and host fitness after rifampicin treatment in a whitefly of the Bemisia tabaci species complex. Insect Sci. 23 (2), 200-214 (2016).
  27. Zchori-Fein, E., Brown, J. K. Diversity of prokaryotes asscociated with Bemisia tabaci (Gennadius) (Hemiptera: Aleyrodidae). Ann. Entomol. Soc. Am. 95 (6), 711-718 (2002).
  28. Thao, M. L., Baumann, P. Evolutionary relationships of primary prokaryotic endosymbionts of whiteflies and their hosts. Appl. Environ. Microbiol. 70 (6), 3401-3406 (2004).
  29. Zchori-Fein, E., Perlman, S. J. Distribution of the bacterial symbiont Cardinium in arthropods. Mol. Ecol. 13 (7), 2009-2016 (2004).
  30. O'Neill, S. L., Giordano, R., Colbert, A. M., Karr, T. L., Robertson, H. M. 116S rRNA phylogenetic analysis of the bacterial endosymbionts associated with cytoplasmic incompatibility in insects. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 89 (7), 2699-2702 (1992).
  31. Nirgianaki, A. Wolbachia infections of the whitefly Bemisia tabaci. Curr. Microbiol. 47 (2), 93-101 (2003).
  32. Everett, K. D., Thao, M. L., Horn, M., Dyszynski, G. E., Baumann, P. Novel chlamydiae in whiteflies and scale insects: endosymbionts 'Candidatus Fritschea bemisiae' strain Falk and 'Candidatus Fritschea eriococci' strain Elm. Int. J. Syst. Evol. Micr. 55, 1581-1587 (2005).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Endosimbiyont EkstraksiyonuBeyaz Sinek DiseksiyonuBakteriyom zolasyonuFiltrasyon Y ntemiDNA AmplifikasyonuPCR AnaliziJel ElektroforeziGenom DizilemeFISH AnaliziTransmisyon Elektron Mikroskobisi

İlgili makaleler