Burada, sistemik olarak ve direkt olarak sıçan yaşlanmasına bağlı laringeal kasların yeniden şekillendirilmesi için nevrotropin 4'ü (NTF4) tanımlamak için bir protokol sunuyoruz.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Osmotik Pompalar veya Doğrudan Kas Enjeksiyonu Kullanılarak Subkutanöz Neurotrophin 4 İnfüzyonu, Yaşlanan Farenin Larinks Kaslarını Arttırır
Bu makalede
Özet
Özet
Yaşlılarda laringeal işlev bozukluğu, ses bozukluklarından disfajiye ve hava yolu koruyucu reflekslerde azalmaya neden olan önemli bir sakatlık nedenidir. Yaşa bağlı laringeal kas disfonksiyonunu hedef alan az sayıda, varsa, terapiler mevcuttur. Nörotrofinler, kas innervasyonu ve nöromüsküler kavşakların (NMJ'lerin) farklılaşmasına katılırlar. Nörotrofinlerin nörotransmitter salınımını arttırarak nöromüsküler iletimi arttırdığı düşünülmektedir. Nöromusküler kavşaklar (NMJ'ler) fonksiyonel denervasyon bulguları ile sıçan laringeal kas yaşlanmasında daha küçük ve daha az miktarda bulunur. İnsanın laringeal kas yaşlanmasında fonksiyon geliştirmek için NTF4'ün ileride klinik kullanıma yönelik terapötik olarak etkilerini araştırdık. Burada, sıçan laringeal kasının yaşlanması NTF4 uygulamasına tepki olarak yeniden şekillenme yeteneğini araştırmak için sistemik uygulama ve doğrudan NTF4 enjeksiyonu için ayrıntılı protokolü sunuyoruz. Bu yöntemde, sıçanlar NTF4'ü ya sistemik olarak oSmotik pompa veya vokal kıvrımlar yoluyla doğrudan enjeksiyon yoluyla uygulanabilir. Larinks kasları ayrıldı ve morfolojinin histolojik incelenmesi ve yaşla ilişkili denervasyon için kullanıldı.
Giriş
Larinks kasları hızla ve sürekli olarak kasılır ve yaşlanmanın olumsuz etkilerine karşı savunmasızdır. Bu sabit etkinliğin, 65 yaş üzerindeki 1 , 2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 7 numaralı kişilerde görülen ses problemlerine veya disfajiye katkıda bulunduğu düşünülmektedir. Birkaç moleküler ve patofizyolojik mekanizma bu yaşla ilişkili disfonksiyona katkıda bulunmaktadır. Bu mekanizmalar laringeal mukozanın yeniden şekillendirilmesi, kas lifi atrofisi veya kaybı, vasküler kıvrımların eğilmesine ve glottis kapanmasının başarısız olmasına neden olan kas lifi rejenerasyonu veya atrofisinin eksikliği içerebilir 8,9,10,11. Şu anda, kanıtlanmış bir tıbbi tedavi yoktur.Bu kaslarda bu yaşa bağlı değişiklikleri kolayca önlemek veya rehabilite etmek.
Nöromüsküler bulaşmanın etkinliğinin modülasyonu, nöromotor performansı büyük ölçüde etkiler. Nörotrofinin ailesi, sinir büyüme faktörü (NGF), beyin türevi sinir büyüme faktörü (BDNF), nörotrofin 3 (NTF3) ve NTF4 12 , 13'ü içerir . Nörotrofinlerin sinaptik etkinliği 1 , 4'ü modüle ettiği gösterilmiştir. Hepatosit büyüme faktörü, dönüştürücü büyüme faktörü beta ve fibroblast büyüme faktörü son zamanlarda insanlarda vokal kıvrım skarlanması 15-17 tedavisinde kullanılmıştır. NTF4 ayrıca NMJ etkinliğini düzenler; NTF4'ten yoksun fareler , 11 , 18 , 19 numaralı NMJ'leri parçalamıştır. Bu çalışmalar, tedavi edici etkilere yol açmaktadırLaringeal kas bozukluklarının yaşlanması ve büyüme faktörleri ile denervasyon.
Vokal kıvrımların dokularına direkt enjeksiyon tedavileri insanlarda eşi benzeri görülmez. Örneğin, botulinum toksininin lokal enjeksiyonları şu anda spazmodik disfoni ve bilateral tekrarlayan laringeal sinir paralizisi gibi larenks kaslarını etkileyen nörolojik hareket bozuklukları için etkili bir tedavi olarak kullanılmaktadır 20,21. Hyaluronik asit hidrojel, vokal kat korkutma ve glotal yetmezliği tedavi etmek için kullanılan başka bir enjekte edilebilir 22 , 23 . Enjeksiyon larinkoplasti, çeşitli iletişim bozukluklarını tedavi etmek için kullanılabilir 24 . Bu doğrudan enjeksiyon yöntemleri vokal fonksiyonu iyileştirmek ve yaşlanan popülasyonlarda yutmak için söz verir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Bu protokol için 6 ve 30 aylıkken erkek Fischer 344-Brown Norveç sıçanları kullanın. Sıçanlar Ulusal Yaşlanma Enstitüsü'nden kemirgen koloni elde edildi. Bu çalışma için sıçanlar kullandık, çünkü sıçan larenksinin yapısı, havayolu koruması ve türe özgü seslendirme işlevini yerine getiren işlevsel olarak insandakine benzerdi. Bu çalışma, PHS İnsan Gücü Bakımı ve Laboratuar Hayvanları Kullanımı, Laboratuar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı için NIH Rehberi ve Hayvan Refahı Yasası (7 USC ve ark.); Hayvan kullanımı protokolü, Kentucky Üniversitesi'nin Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır.
1. Sıçan Anestezi
- Ketamin hidroklorür (dissosiyatif anestetik) ve ksilazin hidroklorür (sedatif ve analjezik) tamponlu salinde karıştırılarak anestezi hazırlayın. Nihai çözeltideki ketamin ve ksilazinin konsantrasyonları kg başına 100 mg / 8 mgVücut ağırlığı.
- 25 G iğneli bir şırınga kullanarak intraperitoneal uygulama vasıtasıyla anestezi fareye enjekte edilir.
- Parmağın ayak parmağını veya ayağı forsepsle tutarak sıçanın yeterince anestezi edildiğini belirleyin. Eğer sıçan sıkışmaya tepki vermezse, ameliyat başlayabilir. Sıçan ayak parmaklarına refleks veya kasılmalar ile tepki verirse, 1-2 dakika bekleyin ve sıkma testini tekrarlayın. Sıçan tekrar tepki gösteriyorsa, sıçanı yeni bir hayvanla değiştirin ve adım 1.2'den başlayarak işlemi yineleyin.
- Sıçanın hareketsiz kaldıktan sonra sıçan gözlerine oftalmik merhem uygulayın, böylece kornealar kurumaz.
2. Osmotik Pompa İmplantasyonu
- Sıçanın ventralini aseptik cerrahi alana yerleştirin. Bir preanestetik ilaç olarak meloksikam uygulayın. 25 G'lik bir iğneli bir şırınga kullanarak intraperitoneal olarak 1-4 mg / kg vücut ağırlığı dozunda uygulayın.
- Yaklaşık birimi kaldırmak için makas kullanınBoynunun arkasından 1 "x 1" kare kürk ve omuzlar arasında yaklaşık 1 "kaudal alan olabildiğince cildin yakınına tıraş edin.
- Dezenfekte etanol (70%) ile sırt ve boynu ıslatın.
- Tıraştan sonra, boyun dorsal boyasını, alkolle bitirme iyod-alkol art arda 3 fırça ile fırçalayın.
- Sıçanın vücut ısısını, 34 ° C'ye ayarlanmış bir ısıtma yastığı üzerine yerleştirerek koruyun.
- Aseptik olarak hazırlanmış ozmotik pompaları ya sistemik NTF4 tedavisi için 50 μL NTF4 veya tuzlu su ile doldurun ( Şekil 1 ).
- Deriden yaklaşık 2 cm genişliğinde yatay bir kesi yapmak için bir neşter kullanın, sadece kafa parçalarının arasından skapula arasında boşluk bırakın. Hemostatların ucunu yerleştirirken insizyonun arka kenarını bir elinizle forsepsle kaldırın ve posteri insizyona yavaşça itin.
- Hemostatların ucu yaklaşık 2 cm sonraKesiye giden yolda, hemostatların üzerindeki kolları açın, insizyon bölgesine subkutan içi boş bir "cep" oluşturacak şekilde ipuçlarını genişletin. Bu, pompa için yerleştirme bölgesi olacaktır.
- NTF4'ün herhangi bir etkileşimini ve cebin kesilme bölgesinin iyileşmesini en aza indirgemek için, pompa dağıtım portalı ucunu yerleştirdikten sonra yönlendirin.
- 7-14 gün boyunca 50 μL NTF4 salin verin. 7 günlük grup, toplam 47.04 mg doz için 6.72 mg / gün NTF4 aldı. 14 günlük grup, 94.08 mg NTF4 25 toplam dozu için 6.72 mg / gün aldı.
- Pompa yerleşimi için yapılan kesi kapatmak için 5-0 naylon dikiş ipliği, hemostatlar ve forseps kullanın.
- Anesteziden kurtulduklarından sıçanları en az 30 dakika izleyin. İzlemenin tamamlanması için kriterler, hayvanın faal hale gelmesi, kafesin etrafında hareket edilmesi, içme suyunun alınması ve damat tutumu gibi diğer normal faaliyetlerin başlatılmasıdır.
- Günlük hayvanları izleyinCerrahi alan iyileşmesi, normal yem ve su tüketimi ve idrar / dışkılardan geçme ve stres, ağrı veya diğer ameliyat sonrası komplikasyonların herhangi bir anormal davranış belirtileri gözlenerek ilk hafta için.
- Eğer fare ağrı ya da sıkıntılı görünüyorsa, ağrıdan kurtulmak için her 24 saatte bir 5 mg / kg subkutanöz karprofen enjeksiyonu yaptırınız.
- Bir enfeksiyon var gibi görünüyorsa, yaranın iyileşmesini sağlamak için bir veterinerle görüşün.
- Hangi deney grubuna girildiğine bağlı olarak, ipliğin tahriş olmasını önlemek için ameliyattan 7-10 gün sonra 5-0 naylon dikişini çıkarın.
3. Direkt Enjeksiyonluk Sıçan Anestezisi
- Prosedürden önceki gece fareden yemek yemeyin. Bu, endoskopu veya enjeksiyon iğnesini bloke edecek yiyecek bulunmamasını sağlar.
- Sıçanları tartın ve acepromaz 1-2 mg / kg vücut ağırlığı hazırlayın. Kas içine enjekte edin (IM konumuSol tiroksinoid kas).
- Sıçanı, indüksiyon kutusuna yerleştirin. İndüksiyon kutusunda% 5 izofluran ve 1 Ç 2 ile anestezi uygulayın.
- Sıçanı,% 2 izofluran ve 600 mL O 2 içeren burun konisine taşıyın.
- Parmağın ayak parmağını veya ayağı forsepsle tutarak sıçanın yeterince anestezi edildiğini belirleyin. Sıçan tutamağa tepki vermezse, enjeksiyon protokolü başlayabilir. Sıçan ayak parmaklarına refleks veya kasılmalar ile tepki verirse, 1-2 dakika bekleyin ve sıkma testini tekrarlayın. Sıçan tekrar tepki gösteriyorsa, sıçanı yeni bir hayvanla değiştirin ve adım 3.4'ten başlayarak yinelemeyi tekrarlayın.
4. Doğrudan Enjeksiyon ve Görselleştirme
- Enjeksiyondan önce 30 dakika boyunca 25 ° C'ye ayarlanmış bir H20 b banyosunda NTF4 veya salin içeren aseptik olarak hazırlanmış 50-μL dozajlar yerleştirin.
- Sıçanı bir pleksiglas platformda sırtüstü yatırın ve yatırın ( Şekil 2 ). SusSıçanı platformun üst kısmında bulunan bir kılavuz tel vasıtasıyla ön üst kesici uçlarından geri duran duruşta tutun.
- 1.9 mm, 30 ° sinüs endoskopuna 50 mm, 30 gauge, 100 μL şırınga takın ( Şekil 3 ).
NOT: Şırınga düzeneği kanülü sıkıca endoskopun dış duvarına tutan bir alet yardımıyla bağlanır. Endoskop vokal kıvrımların görselleştirilmesine ve şırınganın rehberliğine intraoral olarak izin verir. Kanül ucunun konumu, ucun endoskopik görünümü ( Şekil 4 ) aracılığıyla tam ve açık şekilde görülebilmesini sağlamak için her hayvandan önce ayarlanır. - Dili uzatmak ve yana doğru hareket ettirmek için lastik uçlu bir forseps kullanın. Daha sonra, oral açıklığı korumak için plastik bir spekulum takın. Kesikleri uçları kopararak pürüzsüz cilalanarak, 1.5 ila 2 cm'lik bir uzunluğa kesilen 5 mL'lik bir plastik şırınga varilinden spekulum yapın.
- Işıklardaki ışıkları kapatM ve endoskopa bir halojen ışık kaynağı takın. İşlemi kaydetmek için video kaydediciyi açın.
- Sıçanın ağzına yerleştirildiğinde cam ucu üzerinde yoğuşma gelişimini en aza indirgemek için endoskopun distal ucunu ılık suya birkaç saniye batırın.
- Monitörden gelen görsel geribildirimi kullanarak, iğne dikkatli bir şekilde sol ses katmanının alanına yönlendirilir.
- Vokal katın tümüne erişmek için solüsyonun solunum döngüsünün inspirasyon fazıyla birlikte enjeksiyon zamanı. Solunumun inspiratuar fazı boyunca vokal kat tam olarak açığa çıkar.
- Ses kıvrımı tamamen görünür hale geldiğinde, iğneyi vokal katın beyaz medyal kenarının yan tarafında bulunan sol tiroarenoid içine yerleştirin. İğne yerinde iken enjektörü şırınganın depresyondan geçirin.
- Endoskop ve video oynatıcıdaki halojen ışık kaynağını kapatın ve ro'yu geri çevirinIşıklar.
- Sıçanı evdeki kafese geri getirin ve ısıtma yastığına yerleştirin.
- Isı pedinden çıkarmadan önce sıçanın iyileşmesine izin verin. Kafesdeki yiyecek ve suyu değiştirin.
- Enjeksiyondan sonra sıçanları 7 gün boyunca izleyin ve ardından öksüzleştirin. Kriyoteksiyon için larideleri çıkarın 24 .
Sıçanların Euthanizasyonu
- Sıçanları, ketamin hidroklorür ve ksilazin hidroklorür (100 mg / 8 mg / kg vücut ağırlığı enjekte edilen intraperitoneal enjeksiyon) ile anestezi altına alınız.
- Medial torakotomiyi takiben kanama önleme yöntemiyle euthanize olun.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Sıçanlar, 2 hafta ozmotik pompa infüzyonundan sonra veya NTF4'ün doğrudan enjeksiyonundan 1 hafta sonra ötenazi yapıldı. Larenjler hasat edildi, kriyoprotektan (% 30 sükroz ve% 70 fosfat tamponlu salin) içine yerleştirildi ve daha sonra bir kriyostat ile 10 um'lik genişlikte kesit olarak kesildi. Yaşlanma laringeal kasları, NTF4 25'in uygulanmasından etkilenir. Genç ve yaşlı sıçanın yanısıra, tiroidenoid kasların enjekte edilen ve enjekte edilmeyen tar...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Larinks kasları yaşlanmanın olumsuz etkilerine karşı savunmasızdır. Önceki çalışmalar, kontraktil fonksi- yon ve miyozin izoform değişikliklerine ek olarak lif boyutu, toplam lif sayısı, rejeneratif yeteneği, NMJ boyutu ve miktarı değişikliklerini içeren yaşlanma laringeal kaslarında değişiklikler olduğunu göstermiştir 4 , 11 , 27 , 30 , 31 . Yaşlanma laringe...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.
Teşekkürler
Bu çalışma, Ulusal Sağırlık ve Diğer İletişim Bozuklukları Enstitüsünün (R21DC010806'dan CAM ve JCS'ye ve R01DC011285'den CAM'e) hibeleriyle desteklendi.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Nörotrofin 4 | Pepro Tech | 450-04 | 50 &mu'da 200 ng; L |
| Alzet Ozmotik Pompa | DURECT Corporation | 2001D | |
| 30 & deg; endoskop | Stoltz | 61029D | |
| 50 mm 30 ölçer 100-μ L şırınga | Hamilton | 84850 ve 201812 | |
| salin (sodyum klorür çözeltisi) | Sigma-Aldrich | S8776 | |
| ketamin hidroklorür | Henry Schein | 56344 | |
| ksilazin hidroklorür | Henry Schein | 33198 | |
| 25 G 5/8 iğne | Becton-Dickinson | 305901 | |
| 1 mL şırınga | Becton-Dickinson | ||
| oftalmik merhem | Henry Schein | 8897 | |
| makası | Oster | 44-018 | |
| etanol | Decon | 2716 | |
| iyot (Betadine) | Purdue Pharma LP | ||
| ısıtma yastığı | Sunbeam | 731-5 | |
| 5-0 naylon sütür ipliği | AD Cerrahi | PMN-518R6 | |
| kıvrım kanama | durdurucu Güzel Bilim Araçları | 13005-14 | |
| hassas sütür bağlama forseps | Güzel Bilim Araçları | 11063-07 | |
| meloksikam | Henry Schein | 49756 | |
| carprofen | Merritt Veteriner Malzemeleri | 148700 | |
| antibiyotik merhem | Henry Schein | 57110 | |
| asepromizin Aceproject | Henry Schein | 3845 | |
| izofluran İzotezi | Henry Schein | 50033 | |
| indüksiyon kutusu (anestezi kutusu) | Harvard Aparatı | 50-0116 | |
| oksijen sıkıştırılmış tank | Scott Brüt | UN1072 | |
| pleksiglas platform | Small Parts Inc (Amazon) | ||
| kauçuk uçlu forseps | İnce bilim araçları kauçuk | 11075-00 | |
| Lowe's | 42518 | üzerindeki forseps için sıvı kauçuk | |
| (BD şırınga boyuna kesilmiş) | Becton-Dickinson | 309659 | |
| halojen ışık kaynağı gergedan stroboskop | Kay-Pentax | RLS 9100 B | |
| video kaydedici | Kay-Pentax | ||
| sükroz | Sigma-Aldrich | S0389-500G | |
| fosfat tamponlu salin | Sigma-Aldrich | P4417-100TAB | |
| kriyostat Mictotom HM525 | Thermo Scientific | HM 525 | |
| Solungaç 1 hematoksilen | VWR | 10143-142 | |
| Sigma-Aldrich | S0819'da | anti-sodyum kanalı Nav1.5 antikoru | |
| makine | Smiths Medikal | CDS 9000 |
Kaynaklar
- Trupe, E. H., et al. Correlates and consequences of eating dependency in institutionalized elderly. J. Am. Geriatrics Society. 34 (3), 192-198 (1986).
- Ward, P. H., Colton, R., McConnell, F., Malmgren, L., Kashima, H., Woodson, G. Aging of the voice and swallowing. Otolaryngol. Head Neck Surg. 100 (4), 283-286 (1989).
- Gay, E. G., Kronenfeld, J. J., Dettmann, F. G. A comparison on the effect of regulation on health care for the older American: a tale of two states. Gerontologist. 34 (6), 787-796 (1994).
- Hagen, P., Lyons, G. D., Nuss, D. W. Dysphonia in the elderly:diagnosis and management of age-related voice changes. South. Med. J. 89 (2), 204-207 (1996).
- Broniatowski, M., et al. Current evaluation and treatment of patients with swallowing disorders. Otolaryngol. Head Neck Surgery. 120 (4), 464-473 (1999).
- Lundy, D. S., et al. Aspiration: cause and implications. Otolaryngol. Head Neck Surg. 120 (4), 474-478 (1999).
- Schindler, J. S., Kelly, J. H. Swallowing disorders in the elderly. Laryngoscope. 112 (4), 589-602 (2002).
- Gambino, D. R., Malmgren, L. T., Gacek, R. R. Age-related changes in the neuromuscular junctions in the human posterior cricoarytenoid muscles: a quantitative study. Laryngoscope. 100 (3), 262-268 (1990).
- Sinard, R. J. The aging voice: how to differentiate disease from normal changes. Geriatrics. 53 (7), 76-79 (1998).
- Baker, K. K., Olson-Raming, L., Sapir, S., Luschei, E. S., Smith, M. E. Control of vocal loudness in young and old adults. J. Speech Lang. Hear Res. 44 (2), 297-305 (2001).
- McMullen, C. A., Andrade, F. H. Functional and morphological evidence of age-related denervation in rat laryngeal muscles. J. Gerontol. A. Biol. Sci. Med. Sci. 64 (4), 435-442 (2009).
- Lai, K., Ip, N. Y. Postsynaptic signaling of new players at the neuromuscular junction. J. Neurocytol. 32 (5-8), 727-741 (2003).
- Huang, E. J., Reichardt, L. F. Neurotrophins: roles in neuronal development and function. Annu. Rev. Neurosci. 24 (1), 677-736 (2012).
- Gonzalez, M., et al. Disruption of Trkb mediated signaling induces disassembly of postsynaptic receptor clusters at neuromuscular junctions. Neuron. 24 (3), 567-583 (1999).
- Hirano, S., Kishimoto, Y., Suehiro, A., Kanemaru, S., Ito, J. Regeneration of aged vocal folds: first human case treated with fibroblast growth factor. Laryngoscope. 118 (12), 2254-2259 (2008).
- Branski, R. C., et al. Effects of transforming growth factor-beta 1 on human vocal fold fibroblasts. Ann. Oto. Rhinol. Laryngol. 118 (3), 218-226 (2009).
- Kishimoto, Y., et al. Effects of exogenous hepatocyte growth factor on vocal fold fibroblasts. Ann. Otol. Rhinol. Laryngol. 118 (8), 606-611 (2009).
- Belluardo, N., et al. Neuromuscular junction disassembly and muscle fatigue in mice lacking neurotrophin-4. Mol. Cell. Neurosci. 18 (1), 56-57 (2001).
- Johnson, A. M., Ciucci, M. R., Connor, N. P. Vocal training mitigates age-related changes within the vocal mechanisms in the old rat. J. Gerontol. A Biol. Sci. Med. Sci. 68 (12), 1458-1468 (2013).
- Roscow, D. E., Parikh, P., Vivero, R. J., Casiano, R. R., Lundy, D. S. Considerations for initial dosing of botulinum toxin in treatment of adductor spasmodic dysphonia. Oto. HeadNeck Surg. 148 (6), 1003-1006 (2013).
- Benninger, M. S., Hanick, A., Hicks, D. M. Cricothyroid muscle botulinum toxin injection to improve airway for bilateral recurrent laryngeal nerve paralysis, A case series. J. Voice. 30 (1), 96-99 (2016).
- Coppoolse, J. M. S., et al. An in vivo study of composite microgels based on hyaluronic acid and gelatin for the reconstruction of surgically injured rat vocal folds. J. Speech Lang Hear Res. 57 (2), S658-S673 (2014).
- Hertegård, S., et al. Cross-linked hyaluronan used as augmentation substance for treatment of glottal insufficiency: Safety aspects and vocal fold function. Laryngoscope. 112 (12), 2211-2219 (2002).
- Walker, W. F. Jr, Homberger, D. G. Anatomy and dissection of the rat. , Third Edition, W.H. Freeman and Company. New York. (1997).
- Ohno, T., Hirano, S., Rousseau, B. Age-associated changes in the expression and deposition of vocal fold collagen and hyaluronan. Ann. Oto. Rhinol. Laryngol. 25 (1), 192-197 (2009).
- Stemple, J. C., et al. Enhancement of aging rat laryngeal muscles with endogenous growth factor treatment. Physiol. Rep. 4 (10), e12798(2016).
- McMullen, C. A., Andrade, F. H. Contractile dysfunction and altered metabolic profile of the aging rat thyroarytenoid muscle. J. Appl. Phys. 100 (2), 602-608 (2006).
- Engle, W. K., Cunningham, G. C. Rapid examination of muscle tissue. An improved trichrome method for fresh-frozen biopsy section. Neurology. (13), 919-923 (1963).
- Sheehan, D. C., Hrapchack, B. B. Theory and practice of histotechnology. Battelle. , Columbus, OH. (1980).
- Kulakowski, S. A., Parker, S. D., Personius, K. E. Reduced TrkB expression results in precocious age-like changes in neuromuscular structure, neurotransmission, and muscle function. J. Appl. Phys. 111 (3), 844-852 (2011).
- Nishida, N., et al. Age-related change in rat intrinsic laryngeal muscles: analysis of muscle fibers, muscle fiber proteins and subneural apparatuses. Eur Arch Otorhinolaryngol. 270 (3), 975-984 (2013).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
