Ekokardiyografik inceleme farelerde sık sık kullanılır. Bu amaç için pahalı yüksek çözünürlüklü ultrason cihazları geliştirilmiştir. Bu iletişim kuralı histolojik xarakteristikaları analizler ile kardiyak Morfoloji belirlemek için birlikte uygun fiyatlı bir Ekokardiyografik yordamı açıklar.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Kardiyak Morfoloji Ekokardiyografik ve histolojik muayene fare
Bu makalede
Özet
Özet
Genetiği değiştirilmiş fare modelleri artan sayıda son yıllarda kullanılabilir hale gelmiştir. Ayrıca, farmakolojik çalışmalar farelerde gerçekleştirilen sayısı yüksektir. Bu fare modelleri fenotipik karakterizasyonu de kardiyak fonksiyon ve Morfoloji incelenmesi gerekir. Ekokardiyografi ve manyetik rezonans görüntüleme (MRG) kardiyak fonksiyon ve Morfoloji farelerde karakterize etmek için yaygın olarak kullanılan yaklaşımlar vardır. Küçük kemirgen kullanımda ve pahalı bir özel alanı gerektirir için Ekokardiyografik ve MRI donanımları uzman. Bu iletişim kuralı bir 15 MHz insan vasküler sonda ile klinik bir Ekokardiyografik sistemiyle farelerde kardiyak ölçüleri açıklar. Ölçümler imzalat yetişkin fareler üzerinde gerçekleştirilir. En az üç görüntü sıralarını kaydedilir ve her hayvan için M-modu parasternal kısa eksenli görünümünde analiz. Daha sonra kardiyak histolojik inceleme yapılır ve cardiomyocyte çapları Hematoksilen üzerinde belirlenir-Eozin - ya da buğday tohumu agglutinin (WGA)-parafin kesitler lekeli. Gemi kararlı morphometrically Pecam-1 immunostaining sonra yoğunluğudur. Protokol farmakolojik çalışmalar başarıyla uygulanan ve farklı genetik hayvan modelleri temel koşullar altında hem de deneysel akut miyokard infarktüsü sol ön inen koroner arter (kalıcı ligasyonu tarafından sonra oldu ÇOCUK). Bizim deneyim, Ekokardiyografik inceleme imzalat hayvanlara sınırlıdır ve en az ağırlığında yetişkin farelerde uygulanabilirdir 25 gr.
Giriş
Genetiği değiştirilmiş fare modelleri, büyük bir çeşitlilik vardır ve farmakolojik çalışmalar farelerde yüksek1,2sayısıdır. Ekokardiyografi ve MRI kardiyak fonksiyon ve Morfoloji bu fare modelleri3fenotipik karakterizasyonu için yaygın olarak kullanılan yaklaşımlar vardır. Amacı sunulan protokolü, kardiyak fonksiyon ve Morfoloji yetişkin farelerde analiz etmektir. Ekokardiyografi, histolojik, birleştirir ve immunohistokimyasal ölçümleri. Ekokardiyografik inceleme fareler4,5,6,
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
ilgili Kurumsal ve Fransız hayvan refah yasaları, kuralları ve ilkeleri ile uyumlu burada açıklanan deneyler yapılmıştır. Fransız Etik Komitesi tarafından onaylanmış olan (Comité Institutionnel d ' ki Pour l ' hayvan de Laboratoire; sayı NCE/2012-106).
1. Ekokardiyografi
- kullanarak uygun konumlandırma emin olmak için bir standart laboratuvar denge hafifçe kuyruğundan tutarak farenin vücut ağırlığını belirlemek.
- 50 mg/kg Fentobarbital 25 , 26 mayi (IP) enjeksiyonu ile hayvan anestezi.
Not: aynı iletişim kuralını çalışma kullanılırsa, anestezi ba....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Şekil 1' de, genetiği değiştirilmiş farelerde kardiyak fenotipleri tanımlamak için Ekokardiyografi kullanışlılığı temsilcisi Ekokardiyografik kayıtları gösterir. Bir fare ile normal kardiyak fonksiyon (şekil 1A) ve dilate sol ventrikül ve azaltılmış LV fonksiyonu (şekil 1B) bir hayvanla arasındaki fark kolayca tespit edilebilir. Resim 2 (şekil 2A
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Kardiyak yapısı ve fonksiyonu farelerde, Ekokardiyografi, kontrast-artırılmış MRI, CT mikro ve PET taraması gibi değerlendirmek için farklı yöntemler geliştirilmiştir. Maliyet-etkililik ve kolaylık nedeniyle Ekokardiyografi fareler11fonksiyonel analiz için en çok kullanılan tekniktir. Genel olarak, kalp ve nabız farelerde, dönüştürücü bir frekans ile yüksek frekans küçük boyutu nedeniyle > 10 MHz kullanılmalıdır, her ne kadar başarılı ölçümleri 8 ya da 9 MHz güç çeviriciler4<.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa gerek yok.
Teşekkürler
Çalışma "Yatırımlar gelecek için" LABEX SIGNALIFE program sayesinde (başvuru ANR-11-LABX-0028-01) (Ulusal araştırma ajansı, ANR) Fransız hükümeti tarafından desteklenen ve K. hibe tarafından Derneği'nden D. W. pour la Recherche sur le kanser, Fondation de France ve kanser INSERM planı. D. B. ve A. V. Arkadaş grupları sırasıyla Fondation pour la Recherche Médicale ve Nice şehir aldı. Philips tarafından sağlanan echocardiograph ve dönüştürücü nazik idi. A. Borderie, S. Destree, M. Cutajar-Karatepe, A. Landouar, A. Martres, A. Biancardini ve S. M. Wagner onların yetenekli teknik yardım için teşekkür ederiz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Buğday tohumu aglütininin (WGA) konjuge tetrametilrodamin | Yaşam Teknolojileri, Moleküler Problar | W849 | |
| Biyotinile Keçi Anti-Tavşan IgG Antikoru | Vectorlabs BA-1000 | ||
| Avidin/Biotin Engelleme | Kiti Vectorlabs | SP-2001 | |
| VECTASTAIN Elite ABC HRP Kiti (Peroksidaz, Standart) | Vectorlabs | PK-6100 | |
| DAPI | Vectorlabs | H-1200 | |
| SIGMAFAST 3,3'-Diaminobenzidin tabletleri | Sigma | D4168 | |
| Hidrojen peroksit çözeltisi | Sigma | H1009 | |
| Anti-Pecam-1 (CD31) antikoru | Abcam | ab28364 | |
| Ultrason iletim jeli, Jel Aquasonic 100 | Parker | ||
| Lineer ultrason probu, L15-7io, | Philips Sağlık Ekokardiyografı | ||
| , IE33 xMATRIX, | Philips Sağlık Sektörü | ||
| Mikroskobu, Leica DMi8 | Leica | ||
| Floresan Filtre Seti, DAPI | Leica | 11525304 | |
| TxR | Leica | 11525310 | |
| Dijital Fotoğraf Makinesi, SPOT, RT3, Renk Kaydırıcı | Spot Görüntüleme | ||
| Görüntüleme Yazılımı, SPOT 5.2 Gelişmiş ve Temel Yazılım | Spot Görüntüleme | ||
| Görüntüleme Bilgisayarı | Dell | ||
| İnce Makas | Güzel Bilim Araçları | 14028-10 | |
| Büyük Makas | Güzel Bilim Araçları | 14501-14 | |
| Neşter bıçakları | Güzel Bilim Araçları | 10023-00 | |
| Graefe Forseps | Güzel Bilim Araçları | 11650-10 | |
| Kemirgen tıraş makinesi | Harvard Aparatı | 34-0243 | |
| parafin gömme için kasetler | Sakura | 4155F | |
| nötr tamponlu Formalin | Sakura | 8727 | |
| Ksilen | Sakura | 8733 | |
| Parafin TEK III | Sakura | 4511 | |
| otomatik gömme aparatı, Tissue-Tek VIP | Sakura | 6032 | |
| parafin gömme istasyonu Tissue-Tek TEC 5 | Sakura | 5229 | |
| mikrotom bıçakları, Accu-Edge S35 | Sakura | 4685 | |
| mikroskopi slaytları, Tissue-Tek | Sakura | 9533 | |
| lamel kılıfları, Tissue-Tek | Sakura | 9582 | |
| Montaj ortamı Tissue-Tek | Sakura | 1408 | |
| sürgülü kutular | Sakura | 3958 | |
| eozin çözeltisi | Sakura | 8703 | |
| hematoksilen çözeltisi | Sakura | 8711 | |
| mikrotom, RM2125RT | Leica | 720-1880 (VWR) | |
| su banyosu, Leica HI1210 | Leica | 720-0113 (VWR) | |
| Etanol | VWR | ACRO444220050 | |
| 15 ml tüpler | VWR | 734-0451 | |
| boyama cam tabağı | VWR | MARI4220004 | |
| boyama kavanozları | VWR | MARI4200005 | |
| İnkübatör | Bağlayıcı | 9010-0012 | |
| DAB ve üre hidrojen peroksit tabletleri, SIGMAFAST 3,3 & prime; -Diaminobenzidin tabletleri | Sigma | D4293 | |
| PBS (10X) | Thermo Fisher Bilimsel | 70011044 |
Kaynaklar
- Ormandy, E. H., Dale, J., Griffin, G. Genetic engineering of animals: ethical issues, including welfare concerns. Can Vet J. 52 (5), 544-550 (2011).
- Karl, T., Pabst, R., von Hörsten, S. Behavioral phenotyping of mice in pharmacological and toxicological resear....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
