Burada, organizmanın iyi beslenmiş bir beslenme durumundan aç kalmış beslenme durumuna geçmesiyle bakırdan kaçınma davranışındaki ve ortak bir besin kaynağını bulma yeteneğini değerlendirmek için tasarlanmış Caenorhabditis elegans spesifik bir analiz sunuyoruz.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Bu makalede
Özet
Özet
Canlılığı sağlamak için organizmalar, tutarlı bir gıda kaynağı temin ederken, olumsuz habitatlardan kaçınabilmelidir. Caenorhabditis elegans , çeşitli çevresel uyarıların saptanması üzerine lokomotif kalıplarını değiştirir ve açlık koşullarına cevaben davranışsal tepkiler setini modüle edebilir. Nematodlar tipik olarak, bir gıda kaynağından 30 dakika boyunca çıkarıldığında azaltılmış aversive yanıtı sergiler. Değişen bir beslenme durumuna yanıt olarak davranış değişikliklerinin gözlenmesi, iyi beslenmiş bir durumdan aç bırakılan bir duruma geçişi düzenleyen mekanizmalara dair bilgiler sağlayabilir.
Nematodun caydırıcı bir bariyerden ( mesela bakır) geçme yeteneğini ölçen bir deney geliştirdik ve daha sonra uzunca bir süre bir gıda kaynağına ulaştık. Bu protokol, önceki çalışmalara, organizmaların bir aya doğru kaymasıyla devam eden veri toplamanın yapılmasına izin verecek şekilde çoklu değişkenleri entegre ederek oluşturmaktadırGiderek açlık çeken durum. Dahası, bu tahlil, daha büyük popülasyon nematodların eşzamanlı olarak değerlendirilebilmesi için, numune sayısının arttırılmasına izin verir.
Bakır tespit etme veya tepki verme yeteneğine sahip olmayan organizmalar, kimyasal bariyerden geçerler, vahşi tip nematodlar başlangıçta itilir. Vahşi tip solucanlar giderek açlığa kavuştuğundan bariyerini aşmaya ve besin kaynağına ulaşmaya başlarlar. Bu tahlil, gıda sansasyonu veya caydırıcı kimyasalların saptanması da dahil olmak üzere çeşitli çevresel ipuçlarına cevap veremeyen bir mutantı değerlendirmek üzere tasarlandı. Bu protokol aracılığıyla değerlendirildiğinde, kusurlu organizmalar hemen engelden geçtiler, ancak bir gıda kaynağını bulamıyorlardı. Dolayısıyla, bu mutantlar geçici olarak bir besin kaynağına ulaşmalarına rağmen kimyasal bariyerini tekrar tekrar aşar. Bu tahlil, kaçınma ve açlık ile ilgili potansiyel yol hatalarını değerlendirmek için solucan popülasyonlarını basitçe test edebilir.
Giriş
Caenorhabditis elegans , sadece 302 nöron 1'den oluşan bir sinir sisteminin devresini analiz etmede göreli kolaylık nedeniyle onlarca yıldır nörobiyolojinin çalışması için bir model olarak kullanılmıştır. Organizmanın çevresel ipuçlarına tepki vermeye güvenmesi koşuluyla, sinir sisteminin büyük bir kısmı çevresel sinyallere entegrasyonu düzenlemekle yükümlüdür 2 . Sinir sisteminin sadeliğine rağmen, C. elegans , kovucular 3 , cezbediciler 4 , sıcaklık 5 ve hatta nem 6 da dahil olmak üzere çeşitli çevrese....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. Deneysel Organizmaların Hazırlanması
- Test yapılan organizmaların genç erişkin olmasını sağlamak için tahlile başlamadan 24 saat önce 10 L4 safhalı nematod seçin. Test edilen her mutant veya kontrol nematodu için 10 L4s seçin (kontrol için 10, test için 10).
- L4 organizmalarını standart yöntemler 26 , 27 kullanarak 24 saat süreyle OP50 Escherichia coli ile tohumlanan standart agar plakaları üzerinde muhafaza edin. Organizmalar sonraki yıkama adımlarında kaybolursa, başlangıç örneği boyutunu arttırarak telafi edin ( örn . 10'dan çok 20 solucan alın)....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Biz vahşi tip (N2), npr-9 (tm1652) ve bir npr-9 aşırı sentezleme soy, yani npr-9 (GF) (IC836- npr-9 :: npr-9; sur-5 :: gfp; odr -1 :: rfp), açlık ve bakır kaçınma yanıtlarını değerlendirmek için. Vahşi tipli organizmalar aversive bakır bariyerini algılama ve yanıt verme yeteneğine sahiptirler, buna karşın npr-9 (GF) mutantları, 4 saatlik test 21 üzerinden bakırdan aversive tepki başlatmaz. 30 dakika aç bırakıld.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu tahlil tasarımı, gıda yarış tahlilini 24 , nefis bir orta hat bariyeri oluşturmak için bir bakır solüsyonu ve nematodların kaybını önlemek için plakanın kenarı etrafında değiştirir. Canlılar, caydırıcı bariyerden geçme ve 4 saatlik bir sürede bir yemeğe erişme yetenekleri açısından test edilir. Npr-9 (GF) bağlamında, açlığın aversive yanıtları nasıl etkilediğini ve gıdanın tespitini değerlendirmek için bu tahlilden yararlandık. Daha önce npr-9'u (GF) yiyecek ve caydırıcı .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Açıklayacak bir şeyimiz yok.
Teşekkürler
Bu çalışma Kanada Doğa Bilimleri ve Mühendislik Araştırma Konseyi tarafından Discovery Grant RGPIN36481-08 tarafından William G. Bendena'ya desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| M9 Çözeltisi [3 g KH2PO4, 6 g Na2HPO4, 5 g NaCl, 1 ml 1 M MgSO4, H2O 1 litre'ye kadar. Kullanmadan önce sterilize etmek için otoklavda işleyin.] | Laboratuvarda üretildi | ||
| Cupric Sülfat | Sigma | C-1297 | 0.5M konsantrasyonuna uygun şekilde askıya almak için su kullanın |
Kaynaklar
- White, J. G., Southgate, E., Thomson, J. N., Brenner, S. The structure of the nervous system of the nematode Caenorhabditis elegans. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 314 (1165), 1-340 (1986).
- Bargmann, C. I. Chemosensation in C. elegans (October 25, 2006). The C. e....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
