Method Article

Floresan-aracılı tomografi algılama ve fare bağırsak iltihabı makrofaj ile ilgili miktar

DOI:

10.3791/55942

⸱

December 15th, 2017

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Medicine B, University Hospital Münster, 2Translational Research Imaging Center, Department of Clinical Radiology, University Hospital Münster

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hedef özgü probları protein ifade çeşitli hastalık (Örneğin, iltihap, enfeksiyon ve tumorigenesis) gibi moleküler mekanizmaları analiz etmek için yenilikçi bir araç temsil eder. Bu çalışmada, bağırsak makrofaj infiltrasyonu F4/80 özel tomografi Floresans aracılı kullanarak kolit, fare modeli üç boyutlu bir nicel tomografik değerlendirilmesi açıklar.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hastalığın fare modelleri bilimsel araştırma için vazgeçilmezdir. Ancak, endoskopi veya tomografik görüntüleme gibi birçok tanılama araçlarını düzenli olarak hayvan modellerinde istihdam değil. Geleneksel deneysel veriler çoğunlukla intra bireysel izleme sınavları önlemek ve çalışma hayvanların gerekli sayıda artışı post mortem ve ex vivo analizlere kullanır. Floresan-aracılı tomografi floresan problar non-invaziv, tekrarlayan, nicel, üç boyutlu bir değerlendirme sağlar. Son derece duyarlı ve özel algılama ve ayrı moleküler hedeflerin karakterizasyonu için izin veren moleküler yapımcıları, kullanımına izin verir. Özellikle, hedeflenen probları gen harekete geçirmek ve protein ekspresyonu inflamasyon, otoimmün hastalığı, enfeksiyon, damar hastalıkları, hücre göç, tumorigenesis, vbolarak analiz etmek için yenilikçi bir araç temsil eder. Vivo algılama ve inflamasyon (Yani, F4/80-pozitif makrofaj infiltrasyonu), yaygın olarak kullanılan bir fare modeli karakterizasyonu için bu makalede, biz bu sofistike görüntüleme teknolojisi üzerinde adım adım yönergeler sağlar bağırsak iltihabı. Bu teknik de bağışıklık hücre veya kök hücre izleme gibi diğer araştırma alanlarda kullanılabilir.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hayvan modelleri bilimsel araştırmalarda yaygın olarak kullanılır ve hastalık etkinliğini izleme ve canlılık, vücut ağırlığı değişiklikler miktar veya kan, idrar ve dışkı analizi gibi birçok non-invaziv prosedürleri var. Ancak, bu da tabi arası bireysel farklılıklarına sadece dolaylı temsilci parametre vardır. Onlar sık sık post mortem analizleri tekrarlanan zaman noktalarda seri gözlem engeller doku örnek tarafından tamamlanabilir gerekir ve gözlem fizyolojik veya patolojik içinde vivoişler doğrudan. Sofistike küçük hayvan görüntüleme teknikleri, çapraz kesit görüntüleme, optik görüntüleme ve Endoskopi, bu süreçlerin doğrudan görselleştirme ve ayrıc....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm hayvan deneyleri Landesamt für Natur, Umwelt und Verbraucherschutz (LANUV) Nordrhein-Westfalen göre Alman hayvan koruma kanunu (Tierschutzgesetz) tarafından kabul edildi.

1. malzeme ve deneysel Kur

  1. Hayvan bakımı.
    1. Cinsiyet ve yaş uyumlu fare DSS-duyarlı herhangi bir baskı (Örneğin, C57BL/6) 20-25 g vücut ağırlığı kullanın.
    2. Deney grubu ve ev başına en az beş veya daha fazla fare fareler yerel hayvan bakımı esaslarına göre planlayın.
    3. Standart bir kemirgen chow diyet ve autoclaved içme suyu ad libitumsağlar.
    4. Standart chow kaldırmak ve en az üç gün ön....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kolit değerlendirilmesi:

DSS kaynaklı kolit insan IBD benzer ve kilo kaybı, rektal kanama, yüzeysel ülserasyonun ve duyarlı fareler15Mukozal hasara yol açar bağırsak iltihabı kimyasal olarak indüklenen bir fare modeldir. Doğuştan gelen bağışıklık sistemi bağırsak iltihabı10,11gelişimine katkısını incelemek özellikle yararlıdır. Ku.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tıbbi görüntüleme teknikleri son yıllarda hızla geliştiğini rağmen biz hala bizim yetenek iltihabi süreçleri veya tümörler, hem de diğer hastalıklar erken onların geliştirme aşamalarında algılamak için sınırlıdır. Ancak, bu anlayış tümör büyüme, işgali, ya da metastaz kalkınma ve hücresel süreçler enflamatuar bozuklukları ve dejeneratif, kardiyovasküler ve immünolojik hastalıkların gelişiminde çok önemlidir. Geleneksel görüntüleme teknikleri fiziksel veya fizyolojik parametrelerine güveniyor olsa da, moleküler görüntülem.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ifşa gerek yok.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bayan Sonja Dufentester, Bayan Elke Weber ve Bayan Klaudia Niepagenkämper mükemmel teknik destek için teşekkür ederiz.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Reaktifler< / güçlü >
yonca içermeyen diyetHarlan Laboritories, Madison, ABD2014
Bepanthen göz merhemiBayer, Leverkusen, Almanya80469764
Dekstran sülfat sodyum (DSS)TdB Konsolosluğu, Uppsala, İsveçDB001
EosinSigma - Aldrich, Deisenhofen, AlmanyaE 4382
Etilendiamintetraasetik asit (EDTA)                                                 Sigma - Aldrich, Deisenhofen, AlmanyaE 9884
Florene 100V/VAbbott, Wiesbaden, AlmanyaB506
Hematoksilin ve nbsp;                                                                                                      Sigma - Aldrich, Deisenhofen, AlmanyaHHS32-1L
O.C.T. Tek Doku Bileşiği                                                                 Sakura, Zoeterwonde, Hollanda4583Histolojik analizler için fiksatif
Fosfat tamponlu salin, PBSLonza, Verviers, Belçika4629
Sodyum Klorür %0,9Braun, Melsungen, Almanya5/12211095/0411
Sodyum bikarbonat tozuSigma Aldrich Deisenhofen, AlmanyaS5761
Standart diyetAltromin, Lage, Almanya1320
Tissue-Tek CryomoldSakura, Leiden, Hollanda4566
Hemokült (guaiac kağıt testi)Beckmann Coulter, Almanya3060
Biotin sıçan-anti-fare anti-F4/80 antikoruSerotec, Oxford, İngiltereMCA497B
Biotin sıçan-anti-fare anti-GR-1 BD Pharmingen, Heidelberg Almanya553125
Streptavidin-Alexa546Moleküler Problar, Darmstadt, AlmanyaS-11225uyarma / emisyon maksimum:  556 / 573nm
Anti-CD11b sıçan-anti-fare antikoru TCCalteg, Burlingame, ABDR2b06
Saflaştırılmış anti-fare F4/80 antikoruBioLegend, Londra, Birleşik Krallık123102
DAPISigma-Aldrich, Deisenhoffen, AlmanyaD9542
FITC konjuge anti-Ly6C sıçan-fare antikoruBD Pharmingen, Heidelberg, Almanya553104
FACS tamponuBD Pharmingen, Heidelberg, Almanya342003
Cy7 NHS EsterGE Healthcare  Avrupa, Freiburg, AlmanyaPA17104
MPO ELISAImmundiagnostik AG, Bensheim, AlmanyaK 6631B
Cy5.5 etiketli anti-fare F4/80 antikoruBioLegend, Londra, Birleşik Krallık123127kullanıma hazır etiketli Antikorlar (alternatif)
Anti-Mouse F4/80 Antijen PerCP-Cyanine5.5eBioscience, Waltham, ABD45-4801-80kullanıma hazır etiketli Antikorlar (alternatif)
DMSO (Dimetil sülfoksit)Sigma-Aldrich, Deisenhoffen, Almanya67-68-5
IsofluranSigma-Aldrich, Deisenhoffen, Almanya792632
EtanolSigma-Aldrich, Deisenhoffen, Almanya64-17-5
Sığır Serum Albüminleri (BSA)Sigma-Aldrich, Deisenhoffen, AlmanyaA4612
Tris Tamponlu Salin Çözeltisi (TBS)Sigma-Aldrich, Deisenhoffen, AlmanyaSRE0032
NameCompanyKatalog NumarasıComments
Equipment
FACS Calibur Akış Sitometri SistemiBD Biosciences GmbH, Heidelberg, Almanya
FMT 2000 In Vivo Görüntüleme SistemiPerkinElmer Inc., Waltham, MA, ABDFMT2000
True Quant 3.1 Görüntüleme Analiz YazılımıPerkinElmer Inc., Waltham, MA, ABD,FMT2000
Leica DMLB Floresan MikroskobuLeica,  35578 Wetzlar, Almanya DMLB
Bandelin Sonopuls HD 2070Bandelin, 12207 Berlin, AlmanyaHD 2070ultrasonik homojenizatör
Tek kullanımlık neşter No 10Sigma-Aldrich, Deisenhoffen, AlmanyaZ692395-10EA
Metzenbaum makas 14cmEhrhardt Medizinprodukte GmbH, Geislingen, Almanya22398330
luer kilit şırıngası 5mlSigma-Aldrich, Deisenhoffen, AlmanyaZ248010
şırınga iğneleriSigma-Aldrich, Deisenhoffen, AlmanyaZ192368 
Falcon Tube 50mlBD Biosciences, Erembodegem, Belçika352070

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Bruckner, M., et al. Murine endoscopy for in vivo multimodal imaging of carcinogenesis and assessment of intestinal wound healing and inflammation. J Vis Exp. (90), (2014).
  2. Lewis, J. S., Achilefu, S., Garbow, J. R., Laforest, R., Welch, M. J.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Fluorescence mediated TomographyMacrophage DetectionIntestinal InflammationMurine Colitis ModelF4 80 AntibodyNon invasive Imaging3D ReconstructionAntibody TracerDisease Activity MonitoringIn Vivo Tracking

Related Articles