Method Article

Elektrokonvulsif nöbetler fareler ve onların Hippocampi ayırma nöbet kaynaklı değişiklikleri postsinaptik yoğunluğu proteinlerde incelemek için

DOI:

10.3791/56016

⸱

August 15th, 2017

 ,  , 
1Department of Molecular and Integrative Physiology, University of Illinois at Urbana-Champaign, 2Neuroscience Program, University of Illinois at Urbana-Champaign

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Elektrokonvulsif nöbet (ECS) Elektrokonvulsif terapi şiddetli depresyon için bir deneysel hayvan modeldir. ECS synaptogenesis ve sinaptik plastisite yol hipokampüs, faaliyet genel olarak uyarır. Burada, ECS indüksiyon Sıçanlarda nöbet kaynaklı sinaptik protein değişimler incelemek için kendi hippocampi hücre altı ayırma yöntemleri açıklanmaktadır.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Elektrokonvulsif nöbet (ECS) Elektrokonvulsif terapi, şiddetli depresyon için en etkili tedavi deneysel hayvan bir modeldir. ECS düşük mortalite ve nöronal ölüm ile jeneralize Tonik klonik nöbetler neden olmaktadır ve ekran anti-epileptik ilaçlar için yaygın olarak kullanılan bir model. Burada, bir ECS indüksiyon yöntemi açıklamak hangi kısa bir 55-mA akım 0,5 için teslim edilir içinde s erkek için 200-250 g ağırlığında kulak-küçük elektrotlar aracılığıyla sıçanlar. Üretilen bu tür ikili stimülasyon sahne yaklaşık 10 süren 4-5 klonik nöbetler s. Akut veya kronik ECS bırakma sonra en rats davranışsal ayırt olmak kurtarıldı "nöbet" fareler sham. ECS genel olarak beyin aktivitesini yükseltir çünkü da faaliyet bağlı değişiklikler sinaptik proteinlerin ve sinaptik gücü birden çok yöntem kullanarak üzerindeki etkileri incelemek için kullanılmıştır. Özellikle, bu özel sinaptik yapısı, sinaptik proteinlerin bereket kantitatif tayin postsinaptik yoğunluğu (PSD), Western Blot birlikte hücre altı ayırma sağlar. Kemirgen beyin büyük miktarda gerektiren bir önceki ayırma yöntemi aksine, biz burada Sükroz degrade Santrifüjü olmadan tek bir sıçan hippocampi dan PSD yalıtmak için küçük ölçekli ayırma yöntemi açıklanmaktadır. Bu yöntemi kullanarak, biz izole PSD kesir postsinaptik membran proteinlerinin, PSD95, GluN2B ve GluA2 de dahil olmak üzere içerir gösterir. Presynaptic işaretçisi synaptophysin ve çözünür sitoplazmik protein α-tübülin başarılı PSD yalıtım gösteren PSD kesir dışlandı. Ayrıca, kronik ECS GluN2B ifade bizim küçük ölçekli PSD ayırma yöntemi genetik, farmakolojik veya mekanik tedaviler sonra Hipokampal PSD proteinler tek bir sıçan gelen değişiklikleri algılamak için uygulanabilir olduğunu belirten PSD olarak azalmıştır .

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Elektrokonvulsif terapi ağır ilaca dirençli depresyon, bipolar depresyon, Parkinson hastalıkları ve şizofreni1,2de dahil olmak üzere büyük depresif bozuklukların tedavisinde kullanılmaya başlanmıştır. Bu terapi, nöbet elektrik uyarıcı epicranial elektrotlar1,2,3üzerinden imzalat hastalar başkanı teslim tarafından oluşturulur. ECS tekrarlayan yönetimini ilaca dirençli depresif bozukluklar1,2,3' e klinik olarak yararlı olmuştur....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hayvan konular da dahil olmak üzere tüm deneysel prosedürler kurumsal hayvanlar bakım ve kullanım komite toplantısında Urbana-Champaign'deki Illinois Üniversitesi tarafından onaylanmıştır.

1. bir sıçan koloni Bakımı

  1. (Bkz. Tablo reçetesi) Sprague-Dawley Rat doğurmak ve 12-h koyu döngüsü ve gıda ve su ad libitum erişim ile standart koşullarda proje.
  2. Fare pups postnatal gününde (P) 28 vazgeçirmek ve 2-4 erkek veya kadın littermates gruplar halinde onları evi.
  3. Erkek rats kuyruk toksik olmayan kalıcı bir siyah kalem tanımlama için WITH mark.
  4. Haftada 3 kez erkek rats tartmak ve onların body....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ayrıntılı yordam kullanılarak sunulan burada, bir elektrik çarpması (55 anne, 0,5 için 100 bakliyat/s s) kulak-küçük elektrotlar indüklenen yinelenmeyen sahne ile 4-5 Tonik-klonik nöbetler içinde rats (şekil 1A-B) teslim. Toplam 8 sıçan akut ECS indüksiyon alınan ve sahne 4-5 Tonik-klonik nöbetler görüntülenir. Nöbetler hakkında 10 sürdü s ve 1-2 dk içinde nöbet bırakma kurtarılan tüm rats. Sahte "yok nöbet" fareler bir elektrik çarpması alma.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada, biz onların hippocampi nöronal aktivite küresel uyarılması ortaya çıkarır bir ECS indüksiyon yöntemi Sıçanlarda açıklayın. ECS Elektrokonvulsif terapi, klinik olarak insanlar1,2,3' te uyuşturucu ateşe dayanıklı depresif bozuklukların tedavisinde kullanılır hayvan bir modeldir. Elektrokonvulsif terapi şiddetli depresyon tedavisi için kullanılmasına rağmen kesin altta yatan mekanizma belirsizdir. ECS depressant-gibi davran.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar onlar rakip hiçbir mali çıkarları var bildirin.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar Dr. Eric C. Bolton onun santrifüj ayırma ve Dr. Graham H. Diering için bize PSD ayırma için küçük ölçekli kuralıyla sağlamak için John Hopkins Üniversitesi'nde Dr. Richard L. Huganir'ın laboratuarında kullanmak izin verdiğiniz için teşekkür ederim.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Spargue-Dawley sıçanCharles River LaboratoriesECS malzemeleri
Bir nabız jeneratörüUgo Bsile, Comerio, İtalya57800ECS
MilliQ su arıtma sistemiEMD MilliporeZ00Q0VWWHücre altı fraksiyonasyon malzemeleri
sağlar SükrozEm bilimiSX 1075-3Hücre altı fraksiyonasyon malzemeleri
Na4O7P2SIGMA-ALDRICH221368Hücre altı fraksiyonasyon malzemeleri
Etilendiamintetraasetik asit (EDTA)SIGMA-ALDRICHE9884Hücre altı fraksiyonasyon malzemeleri
HEPESSIGMA-ALDRICHH0527Hücre altı fraksiyonasyon malzemeleri
Okadaik asitTOCRIS1136Hücre altı fraksiyonasyon malzemeleri
Halt Proteaz İnhibitörüThermo Scientific78429Hücre altı fraksiyonasyon malzemeleri
NaVO3SIGMA-ALDRICH72060Hücre altı fraksiyonasyon malzemeleri
EMD Millipore Sterito Steril Vakumlu Şişe Üstü FiltrelerFisher ScientificSCGPS05REHücre altı fraksiyonasyon malzemeleri
İris MakasWPI (Dünya Hassasiyeti Aletler)500216-GHücre altı fraksiyonasyon malzemeleri
30 mm doku kültürü kabıFisher Scientific08-772BHücre altı fraksiyonasyon malzemeleri
Cam homojenizatör ve teflon havaneliVWR89026-384Hücre altı fraksiyonasyon malzemeleri
1.7 mL mikrosantrifüj tüpüDENVILLE SCIENTIFIC INC. C2170 (1001002)Hücre altı fraksiyonasyon malzemeleri
Sorvall Legend XT / XF Santrifüj Thermo Fisher75004521Hücre altı fraksiyonasyon malzemeleri
Pierce BCA Protein Test Reaktifi A, 500 mLThermo Fisher# 23228Western blot malzemeleri
Pierce BCA Protein Test Reaktifi B, 25 mLThermo Fisher# 1859078Western blot malzemeleri
SDS-poliakrilamid jel (SDS-PAGE)BIO-RAD#4561086SWestern blot malzemeleri
Koşu TamponLaboratuvardaWestern blot malzemeleri. 
MiniPrekast Jeller için Mini-PROTEAN Tetra Dikey Elektroforez Hücresi, 4 jelliBIO-RAD#1658004Western blot malzemeleri
Polivinil diflorür (PVDF) membranı MiliporeIPVH00010Western blot malzemeleri
Transfer TamponuLaboratuvardaWestern blot malzemeleri. 
Tris-baseFisher ScientificBP152-1Western blot malzemeleri
GlycineFisher ScientificBP381-5Western blot malzemeleri
Sodyum dodesil sülfatSIGMA-ALDRICH436143Western blot malzemeleri
Metanol ve nbsp;Fisher ScientificA454-4Western blot,
PSD izolasyonu içinTriton X-100Fisher ScientificBP151-500
Mini Trans-Blot Modülü BIO-RAD#1703935Western blot malzemeleri
Yağsız hazır kuru sütÇok değerliWestern blot malzemeleri
Çok amaçlı döndürücü Thermo ScientificModel-2314Western blot,
Hyblot CL Otoradyografi FilmiDENVILLE SCIENTIFIC INC. E3018 (1001365)Western blot malzemeleri
Geliştirilmiş kemifloresan substrat & nbsp;Thermo Scientific32106Western blot
bir Konica SRX-101A film işlemcisiKONICA MINOLTASRX-101AWestern blot malzemeleri
Antikorun adı
PSD-95Hücre Sinyali#2507Antikor seyreltmesi = 1:500 - 1.000, zaman = 9 - 12 saat, Reaksiyon Sıcaklığı = 4 & derece; C, Konukçu Tür = Tavşan
SinaptofizinHücre Sinyali#4329Antikor seyreltmesi = 1:500 - 1.000, zaman = 9 - 12 saat, Reaksiyon Sıcaklığı = 4 ° C, Konukçu Tür = Tavşan
alfa-TubulinSantacruzSC-5286Antikor seyreltmesi = 1:500 - 1.000, zaman = 9 - 12 saat, Reaksiyon Sıcaklığı = 4 ° C, Konakçı Tür = Fare
GluN2BNeuromab75-097Antikor seyreltmesi = 1:500 - 1.000, zaman = 9 - 12 saat, Reaksiyon Sıcaklığı = 4 ° C, Konakçı Tür = Fare
GluA2Sigma-aldrichSab 4501295Antikor seyreltmesi = 1:500 - 1.000, zaman = 9 - 12 saat, Reaksiyon Sıcaklığı = 4 &derece; C, Konukçu Tür = Tavşan
STEPSantacruzSC-23892Antikor seyreltmesi = 1:200 - 500, zaman = 9 - 12 saat, Reaksiyon Sıcaklığı = 4 ° C, Konukçu Tür = Fare
Peroxidas AffiniPure Eşek Anti-Fare IgG (H+L)Jackson ImmunoReserch laboratuvarı715-035-150Antikor seyreltmesi = 1:2.000-5.000, zaman = 1 saat, Reaksiyon Sıcaklığı = RT, Konukçu Tür = Eşek
Peroxidas AffiniPure Donkey Anti-Tavşan IgG (H+L)Jackson ImmunoReserch laboratuvarı711-035-152Antikor seyreltmesi = 1:2.000-5.000, zaman = 1 saat, Reaksiyon Sıcaklığı = RT, Konukçu Tür = Eşek
, yapılmıştır yapılan deterjan malzemeleri , sağlar

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Dierckx, B., Heijnen, W. T., van den Broek, W. W., Birkenhager, T. K. Efficacy of electroconvulsive therapy in bipolar versus unipolar major depression: a meta-analysis. Bipolar Disord. 14 (2), 146-150 (2012).
  2. McClintock, S. M., et al.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Electroconvulsive SeizurePostsynaptic DensityHippocampal FractionationWestern BlottingSynaptic Protein AnalysisGluN2B ExpressionPSD95 DetectionSmall scale FractionationHippocampus IsolationSeizure Induction

Related Articles