Method Article

İnsan yağ dokusu mikrovasküler işlevini kullanarak Videomicroscopy değerlendirilmesi

DOI:

10.3791/56079

⸱

September 29th, 2017

 ,  ,  , 
1Department of Medicine and Whitaker Cardiovascular Institute, Boston University School of Medicine

* These authors contributed equally

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Videomicroscopy sistemleri izole yağ dokusu arteriyoller fizyolojik ve farmakolojik uyaranlara yanıt olarak fonksiyonel özelliklerini incelemek için kullanılır. Bu teknik obez insanlarda farklı yağ dokusu etki alanlarındaki mikrovasküler fenotipleri incelemek için kullanılabilir.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Obezite yakından metabolik ve kardiyovasküler hastalık gelişimine bağlı iken az bu süreçleri yöneten mekanizmaları hakkında bilinir. Özellikle merkez/visseral obezite işbirliğiyle yağlı doku serbest pro aterojenik arabulucu yerel ve sistemik patojenik vasküler değişiklikler tanıtmak ve kavramı o kardiyovasküler hastalık olabilir onaylanmadığına karar yağ doku disfonksiyon sonucu gelişmeye devam ediyor. Burada, analiz olduğu gibi küçük insan arteriyoller yaşayan insan denekler yağ deposundan kaldırıldı vazodilatör ve vasoconstrictor tepkilerin içerir videomicroscopy benzersiz bir yöntem açıklanmaktadır. Videomicroscopy farmakolojik veya fizyolojik uyaranlar vivo içinde koşulları taklit eden bir baskı sistemi kullanarak yanıt olarak izole yüzdeki fonksiyonel özelliklerini incelemek için kullanılır. Teknik patofizyolojisi ve vasküler disfonksiyon yağ dokusu ortamın içinde yerel olarak katkıda moleküler mekanizmalar anlamak için yararlı bir yaklaşımdır. Ayrıca, yağ dokusu microvasculature anormallikleri de sistemik hastalıklarla bağlantılı olmuştur. Biz depo özel vasküler yanıt obez bireylerde incelemek için bu tekniği uygulanır. Endotel bağımlı vazodilatasyon yüksek akış ve asetilkolin adipose arteriyoller (50-350 µm iç çapı, 2-3 mm uzunluğunda) aynı birey bariatrik cerrahi sırasında iki farklı yağ depoları izole olarak değerlendirildi. Visseral yağ arteriyoller subkutan perondan izole kaplar kıyasla Özürlüler endotel bağımlı vazodilatasyon sergi gösterdi. Bulgular visseral microenvironment klinik gözlem artan visseral obezite sistemik hastalik mekanizmaları için bağlama ile ilgili olabilecek vasküler endotel disfonksiyonu ile ilişkili olduğunu göstermektedir. Videomicroscopy tekniği farklı yağ depoları gelen vasküler fenotipleri incelemek gibi bulgular farklı derecelerde obezite ve metabolik fonksiyon bozukluğu olan bireyler arasında karşılaştırmak için kullanılabilir. Yöntem damar yanıtlarında boyuna yanıt-e doğru klinik müdahaleler incelemek için kullanılabilir.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Videomicroscopy küçük arteriyoller yaşayan insan denekler ex vivokaldırıldı vasomotor işlevini incelemek için kullanılan yararlı bir tekniktir. Bizim laboratuvar microvasculature çeşitli yağ microenvironments etkilerini karakterize etmek için farklı yağ dokusu bölmeleri gelen küçük yüzdeki dışarı dissekan odaklanmıştır. Bu teknik önemli bir avantajı kan damarları insan vücudundan kaldırıldı işlevsel kalır ve kolayca dakika ile biyopsi takip saat içinde incelenebilir var. Fizyolojik şartlarda taklit ve birçok vivo içinde özellikleri özetlemek mikro-cam Kanüller üzerinden intraluminal uzayda tutulan transmural basınç sabit. 1 , 2 Ayrıca, güvenilir videomicroscopy kurulum otomatik kenar algılama yazılımı ile endotel bağımlı ve - bağımsız vazodilatör ve vasoconstrictor kapasitesini izole hem nitel hem de nicel değerlendirmesi için sağlar. Gemi gerçek zamanlı, izin hızlı fizyolojik değerlendirme fiziksel ve farmakolojik uyaranlara yanıt olarak. 3 diğer mikrovasküler teknikleri de daha az zaman alıcı ve bir güç çevirici tarafından çeşitli agonistler yanıtlarını gerilim ölçmek eğilimindedir tel myography gibi mevcuttur.

Bizim laboratuvar videomicroscopy obezite ve vasküler disfonksiyon, damarlara farklı yağ dokusu etki alanları etkilerini odaklanan arasındaki ilişkiyi incelemek için başvurdu. İntra abdominal visseral yağ birikimi ile Merkezi obezite en yakın adipocytokine üretim, metabolik fonksiyon bozukluğu ve kardiyometabolik risk bağlantılı olmuştur. Bu yağ doku disfonksiyon aşırı üretim pro aterojenik sitokinler ve adipokine bozukluk olan kuvvetle bu işlemlerde karıştığı, ancak belirli yasal moleküller ve tedavi hedefleri büyük ölçüde kalır öne keşfedilmemiş. 4 Ayrıca, yerel yağ doku düzeyinde, kapiller rarefaction ve Engelli perfüzyon yağ dokusu pseudohypoxia ve metabolik bozukluk bağlantılı. Kardiyovasküler hastalık yağ doku disfonksiyon sonucu olabilir hipotez gelişmektedir. Pro aterojenik arabulucu yağ, özellikle orta/visseral obezite, büyük olasılıkla işbirliğiyle piyasaya teşvik endotel disfonksiyonu ve -ebilmek var olmak patojenik vasküler değişiklikler yerel olarak tezahür adipose damarlara ve kullanarak tespit Burada açıklanan yöntemi. 5

İzole yağ dokusu arteriyoller işlevsel değerlendirme patofizyolojisi ve insan obezite vasküler disfonksiyon katkıda moleküler mekanizmalar anlamak için yararlı bir yaklaşımdır. Yağ depo özel disfonksiyon katkıda mekanizmaları araştırmak için endotel bağımlı incelemek için yöntemler geliştirdik ve - microvasculature bağımsız vasodilatory yanıtları ve çeşitli düzenleyici ifade değerlendirmek obez bir konu bariatrik cerrahi anda elde eşleştirilmiş visseral ve subkutan (SC) yağ dokusu örnekleri aday.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

protokolü ve burada anlatılan örnekler Boston Üniversitesi okul tıp kurumsal inceleme kurulu'nin (IRB, iletişim kuralı #H-25644) kabul edildi ve Helsinki Deklarasyonu uygun olarak yapılmıştır. Tüm konularda yazılı Onam önce katılım sağlanan.

1. hazırlık çözümler ve mikro-cam Kanüller

  1. hazırla 4-2-hydrosyethyl-1-piperazineethanesulfonic asidik solüsyon (HEPES) çözüm. 1 L için 8.059 g NaCl, 0,298 g KCl, 0,296 g MgSO 4 dissolve • 7 H 2 O, 0.235 g CaCl 2 • 2 H 2 O, 0,16 g KH 2 PO 4, 0,01 g EDTA, 1.081 g D-glukoz ve 2.383 g HEPES asit 950 ml deiyonize su. Sesini için 1 L deiyonize su ile olun. PH 7.4 NaOH kullanarak için ayarlayın. HEPES tampon saklanabilir için 7 gün 4 ° C.
  2. 20 x Salt arabellek hisse senedi hazırlayın. 143,8 g NaCl, 7.0 g KCl, 5.9 g MgSO 4 ve 7.4 g CaCl 2 1 L için ekleyin • 2 H 2 O 900 mL distile su içine. •Ses yükseltme için 1 L deiyonize su ile olun. Saat 4'te hazır çözüm depolamak ° C.
  3. 20 x arabellek hisse senedi hazırlayın. 1 L için 26.8 g NaHCO 3 ve 0.2 g EDTA·2H 2 O 900 mL deiyonize su içine ekleyin. •Ses yükseltme için 1 L deiyonize su ile olun. Saat 4'te hazır çözüm depolamak ° C.
  4. Çözüm KREBS fizyolojik deneyler sırasında kullanılmak üzere hazırlayın. 1 L için 900 mL deiyonize su, 20 arabellek hisse senedi x 50 mL, 20 tuz tampon solüsyonu, 0,99 g D-glukoz ve 0,16 g KH 2 PO 4 x 50 mL ekleyin. PH HCl kullanarak 7.4 için ayarlayın. Tamponunun pH korumak için sürekli karıştırın ve kapak ile parafin veya sürekli kabarcık.
    1. Onay pH her 20 dk. KREBS çözüm taze olun günlük.
  5. Yapmak mikro-cam Kanüller 40-240 µm bir piyasada bulunan iğne/pipet çektirmenin kullanarak bir iç çapı ile. Cam Kanüller boyutunu izole kan damarları (50-350 µm) iç çapını boyutu tarafından belirlenir. Alternatif olarak, mikro-cam Kanüller önceden belirlenmiş büyüklükte satın.

2. Reaktifler hazırlanması

  1. hazırla asetilkolin (Ach, 10 -2 M, hisse senedi çözüm). 10 mL deiyonize su 18.29 g geçiyoruz. 1 mL aliquots hisse senedi çözüm (10 -2 M)-80 ° C'de depolayın Aşağıdaki çalışma konsantrasyonları elde etmek için seri olarak seyreltik deneme günü: 10 -5, 10 -6, 10 -7, 10 -8, 10 -9 M.
  2. (2 x 10 -2 M, hisse senedi çözüm) papaverin hazırlayın. 10 mL deiyonize su 0.07517 g geçiyoruz. 10 µL aliquots hisse senedi çözüm ve-80 mağazasında hazırlamak ° C. seri olarak sulandırmak 10 -4, 10 -5, 10 -6, 10 -7, 10 -8 M denemenin gün almak için.
  3. Endotelin-1 (ET-1, 2 x 10 -5 M, hisse senedi çözüm) hazırlayın. 50 µg endotelin-1 1 mL % 1'dağıtılması BSA/PBS. 1 mL aliquots hisse senedi çözüm (2 x 10 -5 M)-80 ° C'de depolayın 10 -10 M çalışma konsantrasyonu deney gününde elde etmek için seyreltik deneme günü.
  4. Ya-20 ° C'de reaktifler depolamak veya ile-80 ° C arasında derin dondurucu türüne bağlı olarak kullanılabilir, ama 6 aydan uzun olmayan.

3. Yağ dokusu toplama ve gemi hazırlık

  1. askere obez erkekler ve kadınlar (vücut kitle indeksi (VKİ) ≥ 35 kg/m², yaş ≥ 18 yaşındaki) bariatrik cerrahi programı, Boston Tıp Merkezi (BMC) kayıtlı. Toplam 40 konuların bu deneylerde katıldı.
  2. Toplamak subkutan ve viseral yağ doku örnekleri planlı bariatrik cerrahi sırasında operasyonu cerrah tarafından.
    1. Hasat subkutan yağ dokuları alt karın duvarından ve viseral sırasıyla büyük Omentumun, şişko. Tipik yağ dokusu örnek boyutu değişir doku 3-10 mg.
    2. Yer dokulara hemen soğuk HEPES tampon çözüm pH 7,4 ve mağaza 4 ° c ilâ 24 h için
      Not: Ayrıca, adipose arteriyoller yalın bireylerin de cerrahi fıtık onarım veya plastik cerrahi gibi diğer türleri sırasında elde edilebilir ve aynı zamanda biyopsi trans-Kutanöz karın yağ yastığı biyopsi ile subkutan depo dan olabilir < sup sınıf "xref" = > 6.
  3. Bir doku diseksiyon mikroskop, mikro-makas ve mikro-forseps kullanarak, dikkatle çevreleyen bağ dokusu ve yağ küçük adipose arteriyoller (50-350 µm intraluminal çapı, 2-3 mm uzunluğunda) kaldırın.
  4. Cam kapiller Pipetler cannulating önce küçük naylon veya ipek dikiş kullanarak arteriyoller bütün dallarda kapalı kravat. Arteriyol duvardaki bile ufak hasar önemli bir işlev değişikliğine neden olur bu yana dikkatle incelemek arteriyoller. Işık ve ısı olarak
    1. simge durumuna Küçült gemi maruz vazodilatasyon neden olabilir. Bazen arteriyoller venüller ayırt etmek zor olabilir bu yana, damarları boyutu ve düz kas tonu damarlarının ipuçları kesme tarafından tanımlayın. Arteriyoller genellikle daha küçük olan ve büyük sesi venüller için karşılaştırıldığında gösteren.
  5. Organ odası hazırlamak. Yavaş yavaş cam kapiller Pipetler ve kauçuk tüp 10 mL kullanarak KREBS solüsyonu ile doldurmak.
  6. Kez alıpkendi doldurulur ve cam kapiller Pipetler KREBS çözüm içinde organ odası sular altında arteriyoller güvenli Pipetler üzerinde güvenli bir şekilde cannulate ve her iki ucunda da arteriyol naylon ile kravat veya dikiş knot dikkatle ipek.
  7. Organ odası KREBS çözüm ile doldurmak 2 mL.
  8. Organ odası bir sahneye ters mikroskopla (büyütme 10 X / 0,25 amaç) güvenli ve video kamera.
  9. İçinde akış kenar algılama yazılımı 1 kHz örnekleme hızında gerçek zamanlı açın (1 kare/sn).
    10. Kabarcıklar deneysel hata tanıtmak gibi
  10. bir basınçlı boru dolu basınç rezervuar microbubbles ücretsiz KREBS çözüm bağlamak. Diğer basınçlı boru organ odasına bağlamak.
  11. Temiz boru ile basınç detektörler KREBS dolu çözüm basınç rezervuar bağlanmak.
  12. Kontrol bu iki rezervuarlar yüksekliğini düzenleyerek içi luminal akışı; Yani, ne zaman rezervuarlar içi luminal hiçbir akışı ortaya çıkar aynı yükseklikte yer alır.
    13. Tüm bu işlemler tamamlandıktan sonra
  13. dönüş sıcaklığı 37 korumak için blok ve yazılım programı Isıtma ° C. sürekli KREBS çözüm ile gemi sıvı ve % 5 CO 2, % 21 O 2 ve % 74'ü N gaz karışımı ile havalandırmak 2 bütün deneysel prosedür boyunca 7 , 8.
    14. İstenilen basınç insin ulaşmak için
  14. de izole kaplar Lümen yavaş yavaş artırın intraluminal basınç (5 mmHg, her 5 dk) yolu ile endotel tabakası zarar görmemesi için yavaş bir hızla böylece basınç kontrol ünitesi myo-arabirimi Masası ' nda.
    Not: basınç 60 mmHg ulaştığında, bir 20-30 dk denge süre gemi stabilize etmek gereklidir. Tüm vasküler işlevi çalışmaları 60 mmHg ve pH 7.4 37 ° C'de gerçekleştirilir. 7

4. Adipose mikrovasküler işlevi değerlendirilmesi

Not: genel olarak, yağ arteriyol endotel bağımlı vazodilatasyon yanıt olarak fizyolojik (akış kaynaklı) elicited ve farmakolojik uyaranlara (Ach kaynaklı).

  1. Akışı aracılı, endotel bağımlı vazodilatasyon
    1. basıncını, istirahat (Di) yağ arteriyol çapını kaydetmek. Bu dinlenme temel çapı adlandırılır.
    2. Kan damarlarının dinlenme temel çapı (Dp) ~ %55 1 µL endotelin-1 ekleyerek önceden daraltır (ET-1, 10 − 10 M) banyo ve etkisi 5 dk bekle. İstenen ~ %55 ulaşan devlet önceden dar kadar bu işlemi yineleyin.
    3. Ortalama intraluminal basınç değiştirmeden gemi arasında basınç farkı geliştirilebilir böylece öncesi daralma sürekli akışı yağ dokusu arteriyoller, eşit ve zıt yönde intraluminal uzaya ikna etmek 60 mmHg,.
      Not: bir rezervuar 10 cm yüksekliğinde hareket ederse, örneğin, diğeri 10 cm kadar basınç gradyanları değiştirebilir ve böylece intraluminal akış hızını değiştirmek için taşınması gerekiyor. Daha doğru akış hızı ölçümleri istenirse, deneysel set-up bir nicel debimetre sistemi uygulanabilir.
    4. Ölçmek akışı aracılı dilatasyon akışı indüksiyon başlanmasından sonra 3-5 dak. İntraluminal akışı (basınç gradyanları) düzeyde olabilir aralığın 0 - 100 cmH 2 O. artırmak her artış basınç geçişin Δ10 cmH 2 tarafından O en çok 100 cmH 2 O. her 5-6 min
      Not: lümen istikrarlı laminar akışı ikna etmek için her iki mikro cam kanül ucu boyutları çok arteriyoller iç çap yakın olmak gerekir; Aksi takdirde, türbülanslı akış içinde Lümen üretmek ve istenmeyen ölçüm hataları neden.
    5. Akış-aracılı dilatasyon değerlendirme, aynı yükseklikte (60 mmHg) basınç rezervuar iade.
    6. Sonra yıkama arteriyol ve odası hemen odasından çözüm kaldırarak ve taze KREBS çözüm ile değiştirin. Bu odanın içinde askıya alınmış arteriyol bozmak değil olarak dikkatle yapılır.
    7. 20-30 dk için 3 - 4 kez veya izole kap dinlenme temel çapı dönünceye kadar bu işlemi tekrarlayın.
  2. Asetilkolin-aracılı, endotel bağımlı, vazodilatasyon
    1. adipose arteriyol dinlenme temel çapı döndüğünde önceden sıkmak endotelin-1 (ET-1, 10 yönetmek gemi ~ %55 − 10 M) doğrudan Bath, 4.1.2 bölümünde yukarıda açıklandığı gibi.
    2. Öncesi daralma artan dozlarda (2 µL) sırayla bir reseptör aracılı, nitrik oksit agonist (Ach, 10 -9 10 -5 M için) doğrudan banyo için olan asetilkolin yönetmek. Değişikliği arterioler çapı 5 dk sonra her doz yönetim kaydetmek.
      3. Gemi yönetimi son Ach doz takip bir plato ulaşmıştır sonra
    3. gemi 3 - 4 kez KREBS çözüm ile yıkayın. 20-30 dk geminin yeniden elde etmek ve temel çapı istirahat için dönmek izin. KREBS çözüm her 15 dk. organ kamber pH korumaya yardımcı olmak için değiştirmek
  3. Kuluçkaya arteriyol ile N w - nitro - l-arginin metil ester (L-NAME, 10 -4 M), bir 30 dk, nitrik oksit sentaz inhibitörü ve sonra tekrar 4.2.1 ve göreli katkısını karakterize 4.2.2 nitrik oksit Ach-aracılı vazodilatasyon.
  4. Endotel bağımsız vazodilatasyon (vasküler düz kas fonksiyonu) ve gemi canlılığı papaverin (10 -8 10 -4 M için) doğrudan banyo için artan dozlarda sıralı bir yönetim tarafından değerlendirmek. Damar çapı değil dönmek veya aşması papaverin (Yani uygun vazodilatasyon) yanıt olarak dinlenme temel (Di) çapı, gemi uygun olmayan düşünün ve veri noktaları atın.

5. Veri analizi ve hesaplama

  1. Hesaplama vasküler reaktivite. Temel farklılıklar damar çapı hesabı ve aşağıdaki denklemi kullanarak hesaplamak için veri ifade için yüzde vazodilatasyon kullanın:
    % vazodilatasyon = (DT-Dp/Di-Dp) × 100
    DT verilen zamanda noktada (en yüksek derece kaydedilen çapı nerede çapı), Dp vazokonstriksiyona ajan (i.e. eklenmesinden sonra kaydedilen çapı olduğunu. ET-1 indüklenen daralma çapı), ve Di hemen vazokonstriksiyona ajan (dinlenme temel çapı) toplamadan önce kaydedilen çapı. 9
  2. vazodilatasyon ve vazokonstriksiyona duyarlılığı (doz-yanıt) için bir agonist Ach, papaverin veya ET-maksimal yanıt (EC 50) % 50'si aydınlığa çıkartıyor tarafından tanımlanan 1 konsantrasyon olarak tanımlamak bir sigmoidal parametre ve çizilen, daha önce açıklandığı gibi. 10
    Not: yağ yüzdeki vazodilatasyon arası gözlemci tekrarlanabilirlik çalışmalar vardır 0,99 yüksek bir korelasyon katsayısı (CC) (n = 10 gemi deneyler) bizim laboratuvar.

6. istatistiksel analiz

± SEM anlamına
  1. Express sürekli ölçümler Bunlar normal dağıldığı eğilimindedir. Vasküler reaktivite tarafından tekrarlanan ölçüler iki yönlü ANOVA adipose arteriyoller analiz.
  2. Alternatif olarak, arsa için doz-yanıt tedavi grupları arasında için toplu vazodilatasyon (AUC) eğri altındaki alan incelemenizi öneririz. Her durumda, P düşünün < 0,05 istatistiksel olarak anlamlı.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bizim laboratuvar videomicroscopy endotel bağımlı incelemek için kullanılan ve - bağımsız vazodilatasyon, aynı zamanda yağ dokusu arteriyoller vasocontractile fonksiyonu obez insanların subkutan ve viseral yağ izole. Karakteristik deneysel set-up şekil 1A' görüntülenir. Yağ dokusu arteriyoller iki cam kapiller Pipetler arasında askıya ve yerde dikiş içinde şekil 1Badımında gösterildiği gibi organ odası ile güvenli. 5.1 bölümünde ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Diseksiyon ve dokuları çevreleyen dan adipose arteriyoller yalıtım dikkat detay ve teknik iletişim kuralı ile zaman alıcı ve emek yoğun bir işlem olabilir. Mikrodiseksiyon yordam titiz beceri ve düz kas ve endotel olabilecek hasarları önlemek için özel diseksiyon mutfak eşyaları microvasculature katmanları hücre gerektirir. Arterioler duvardaki bile küçük yanlışlıkla delikler intraluminal basınçlandırma ve başarısız bir deney sonuçlarında engelleyebilirsiniz. Ayrıca, cannulation dikiş kullanan arteriyoller, gemi her ucun...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar hiçbir açıklamaları ya da rapor için çıkar çatışması var.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar gönüllü katılımlarını bu çalışmalar ve yağ doku biyopsisi sağlamak için Boston Tıp Merkezi cerrahi personel için teşekkür etmek istiyorum. Dr. Gökçe Ulusal Enstitüleri (NIH) sağlık hibe HL081587, HL114675 ve HL126141 tarafından desteklenir. Dr. Farb NIH tarafından desteklenmektedir K23 HL135394 verin.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Kimyasal Adı< / güçlü >
AsetilkolinSigma AldrichA6625
Kalsiyum klorür (CaCl2< / sub>)Sigma Aldrich223506
D - (+) - GlikozSigma AldrichG5767
Endotelin-1Sigma AldrichE7764
Etilen glikol-bis (2-aminoetileter) -N, N, N', N'-tetra asetik asit (EGTA)Sigma AldrichE3889
Etilen diamin tetra asetik asit (EDTA)Sigma AldrichE9884
HEPESSigma AldrichH3784
N < sub>w < / em >< / sub>-nito-L-arginin metil ester hidroklorürSigma AldrichN5751
Magnezyum sülfat (MgSO4)Sigma AldrichM7506
Potasyum klorür (KCL)Sigma AldrichP3911
Potasyum fosfat (KH2PO4)Sigma AldrichP5655
PapaverineSigma AldrichP3510
Sodyum bikarbonat (NaHCO 3Sigma AldrichS6014
Sodyum klorür (NaCl)Sigma AldrichS7653
Sodyum fosfat monobazik monohidrat (NaH2Po4)Sigma AldrichS9638
< güçlü > İsim< / güçlü > <güçlü > Şirket< / güçlü >< güçlü > Katalog Numarası< / güçlü >< güçlü > Yorumlar< >
Ekipman< / güçlü >
Forsepsİnce bilim araçları15000-08
Ters mikroskopZeiss Achromat
Laboratuvar borularıEuro-Pharm250100306F999
İğne / pippette çektirmeDavid kopf aletleri720
Oftalmik monofilament naylon sütürCerrahi uzmanlıklarA7756N
MakasFinescience araçları150000-08
Damar HaznesiDMTVAS v.2.1
)

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Schubert, R., Mulvany, M. J. The myogenic response: established facts and attractive hypotheses. Clin Sci (Lond). 96 (4), 313-326 (1999).
  2. Jadeja, R. N., Rachakonda, V., Bagi, Z., Khurana, S. Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography. J Vis Exp. (101), e50997(2015).
  3. Gutterman, D. D., et al. The Human Microcirculation: Regulation of Flow and Beyond. Circ Res. 118 (1), 157-172 (2016).
  4. Fuster, J. J., Ouchi, N., Gokce, N., Walsh, K. Obesity-Induced Changes in Adipose Tissue Microenvironment and Their Impact on Cardiovascular Disease. Circ Res. 118 (11), 1786-1807 (2016).
  5. Farb, M. G., et al. Reduced adipose tissue inflammation represents an intermediate cardiometabolic phenotype in obesity. J Am Coll Cardiol. 58 (3), 232-237 (2011).
  6. Farb, M. G., et al. WNT5A-JNK regulation of vascular insulin resistance in human obesity. Vasc Med. 21 (6), 489-496 (2016).
  7. Durand, M. J., Phillips, S. A., Widlansky, M. E., Otterson, M. F., Gutterman, D. D. The vascular renin-angiotensin system contributes to blunted vasodilation induced by transient high pressure in human adipose microvessels. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 307 (1), H25-H32 (2014).
  8. Farb, M. G., et al. Cyclooxygenase inhibition improves endothelial vasomotor dysfunction of visceral adipose arterioles in human obesity. Obesity (Silver Spring). 22 (2), 349-355 (2014).
  9. Park, S. Y., et al. Impact of age on the vasodilatory function of human skeletal muscle feed arteries. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 310 (2), H217-H225 (2016).
  10. Ives, S. J., et al. Human skeletal muscle feed arteries studied in vitro: the effect of temperature on alpha(1)-adrenergic responsiveness. Exp Physiol. 96 (9), 907-918 (2011).
  11. Grizelj, I., et al. Reduced flow-and acetylcholine-induced dilations in visceral compared to subcutaneous adipose arterioles in human morbid obesity. Microcirculation. 22 (1), 44-53 (2015).
  12. Farb, M. G., et al. Arteriolar function in visceral adipose tissue is impaired in human obesity. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (2), 467-473 (2012).
  13. Tanner, M. J., et al. Dynamin-Related Protein 1 Mediates Low Glucose-Induced Endothelial Dysfunction in Human Arterioles. Am J Physiol Heart Circ Physiol. , (2016).
  14. Ives, S. J., et al. alpha1-Adrenergic responsiveness in human skeletal muscle feed arteries: the impact of reducing extracellular pH. Exp Physiol. 98 (1), 256-267 (2013).
  15. Dharmashankar, K., et al. Nitric oxide synthase-dependent vasodilation of human subcutaneous arterioles correlates with noninvasive measurements of endothelial function. Am J Hypertens. 25 (5), 528-534 (2012).
  16. Truran, S., et al. Adipose and leptomeningeal arteriole endothelial dysfunction induced by beta-amyloid peptide: a practical human model to study Alzheimer's disease vasculopathy. J Neurosci Methods. 235, 123-129 (2014).
  17. Karki, S., et al. Forkhead box O-1 modulation improves endothelial insulin resistance in human obesity. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (6), 1498-1506 (2015).
  18. Shahid, M., Buys, E. S. Assessing murine resistance artery function using pressure myography. J Vis Exp. (76), (2013).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Adipose Tissue MicrovasculatureVideomicroscopy TechniqueEndothelium Dependent VasodilationFlow Mediated DilationAcetylcholine ResponseVisceral Adipose ArteriolesSubcutaneous Adipose ArteriolesOrgan Chamber SetupPressure Control SystemHuman Blood Vessel Analysis

Related Articles