Yöntem makalesi

Doğal olarak kadın Suriye hamster davranışları ödüllendirme sırasında hücre dışı nörotransmitter ölçüm Vivo içinde değişimler

DOI:

10.3791/56135

⸱

12 Eylül 2017

 ,  ,  ,  , 
1Department of Neuroscience, University of Minnesota, 2Department of Biomedical Engineering, University of Minnesota, 3Institute for Translational Neuroscience, University of Minnesota

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu kağıt dopamin ve Glutamat yüksek zamansal çözünürlük ile serbest bırakılması sırasında doğal tatmin edici davranışlara ölçmek için karbon fiber elektrotlar ve enzimatik Biyoalgılayıcı teknoloji kullanarak sabit potansiyel amperometric kayıtları kullanımı detayları kadın hamster.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nörotransmitter yayın bir hızlı zaman ölçeğinde ölçmek için yeteneği belirli davranışları veya manipülasyonlar bağlanacak şekilde neurotransmission şekillerinin sağlar; temel mekanizmaları ve devre elucidating güçlü bir araç. Microdialysis tekniği beyin ilgi hemen hemen her analit ölçmek için yıllardır kullanılan iken, bu teknik de geçici çözüm sınırlıdır. Alternatif olarak, hızlı tarama çevrimsel voltammetry geçici kesin ve son derece hassas biri; Ancak, teknik olarak zor bu yöntem ilgi analitin electroactivity üzerinde kullandığından, nonelectroactive maddeler (örneğin, nörotransmitter Glutamat) algılamak imkanı ortadan kaldırmıştır. Bu kağıt sabit potansiyel amperometry ve electroactive ve nonelectroactive nörotransmitter zamansal hassasiyetle ölçmek için enzimatik biosensing bir araya getiren bir anahtar teslim sistemi ayrıntıları. Bu iki güçlü teknikleri eşleştirme tonik ve phasic neurotransmission ölçüm için göreli kolaylıkla sağlar ve aynı anda birden fazla nörotransmitter kayıt izin verir. Bu yazının amacı görüntüleme nihai hedefi ile kadın hamster içinde doğal olarak tatmin edici davranış (Yani, cinsel davranış) kullanarak dopamin ve Glutamat neurotransmission in vivo ölçme işlemi göstermektir Teknik fizibilite diğer davranışları ve deneysel paradigmalar incelenmesi için bu testin.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nörotransmitter yayın davranıyor uyanık hayvanlarda ölçmek için yeteneği belirli davranışlar mekanizmaları ve her ikisi de temel devresi araştırmak için güçlü aracı neurotransmission bir kayma ve temporal desenleri ile bağlamak araştırmacılar doğal izin verir ve gerçek zamanlı olarak operant davranışları. Tarihsel olarak, microdialysis beyin1ekstraselüler ortamında hem elektrikle reaktif ve tepkisiz maddeler ölçmek için istihdam edilmiştir. Bu teknik ekstraselüler sıvı, benzer iyonik kompozisyon sulu bir çözüm, sürekli bir akış küçük bir şaft bir semipermeable hollow fiber membran2/ yapılan bir ucu ile oluşan bir microdi....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

burada açıklanan tüm yordamlar kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) Minnesota Üniversitesi tarafından onaylanmıştır ve uygun bakım ve kullanım laboratuvar hayvanları Guide olarak vardır 13 .

1. hayvanlar ve Cannulation cerrahi

  1. elde edilir Suriye hamster yaş yaklaşık 55 gün bir ortak hayvan tedarikçiden.
    Not: hayvan yaş nedeniyle çeşitli deneysel paradigmaların kısıtlamalarını değişir, cinsel davranış için tüm yaklaşık aynı yaşta cinsel olgun hayvanlar elde etmek önemli olsa.
  2. Ev hayvanlarda kontrollü bir sıcaklık (22 ° C) ve (14 10 h ışıklar, 13:00 h ile karanlık ardından h ....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Elektrokimyasal ve davranışsal yukarıda açıklanan metodoloji kodlama kullanarak, bu lab tonik ve dopamin ve Glutamat phasic dalgalanmalar cinsel davranış vivo kayıtları sırasında karakterize etmek başladı. Bu metodoloji geçici hassas şekilde nedeniyle, daha doğrusu cinsel davranış sırasında neurotransmission karakterize olabilir; aynı zamanda yayın şekillerindeki belirli değişiklikler karşılık gelen tonik değişiklikleri için karşılık gelen geçici dalgalanmalar ve çiftleşme nöbetl.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nispeten basit olsa da, bazı sorunlar bu tekniği istihdam ortaya çıkabilir. İlk olarak, sondalar stereotaksik yerleşimini kesin olmalıdır: sonda çevreleyen ekstraselüler ortamın daha geniş bir yarıçap örnekleri microdialysis bu teknik yalnızca doğrudan temas gelir bir nörotransmitter ölçüm verir sonda ile. İkinci olarak, kablo, küçük genişliği nedeniyle karbon fiber kayıt durumunda kırılması meydana gelebilir ve sonda kasıtlı bakımı ile eklenmesi gerekir. Sonda garantili-süre içinde 3-hafta kullanılırsa glutamatergic biy.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ifşa gerek yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar lisans Daniel Korus onun yardım Matlab kodu çalıştırmak için ve lisans Alex Boettcher davranışsal deney çalışan onun yardım için teşekkür etmek istiyorum. Bu proje NSF IOS 1256799 R.L.M. için ve ulusal sağlık Enstitüleri Ödülü numarası T32DA007234 altında ilaç kötüye Ulusal Enstitüsü tarafından desteklenmektedir.

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
NembutalMeşe İlaç A.Ş.76478-501-50Pentobarbital sodyum enjeksiyonu, USP. Bu laboratuvarda 8.5 mg/100 g vücut ağırlığı kullanılarak intraperotineal olarak enjekte edilmiştir.
Loxicom analjezik Norbrook Laboratuvarları 6451603670NSAID, postoperatif ağrı kontrolü için kullanılan aninflamatuar ve analjeziktir. Jenerik: meloksikam. 
Enroflox antibiyotik&Norbrook Laboratuvarları 5552915411Ameliyat sonrası enfeksiyonun önlenmesi için florokinolon antibiyotik. Jenerik: Enrofloksasin.
Beuthanasia-D Merck Hayvan Sağlığı00061047305Pentobarbital Sodyum, Fenitoin Sodyum ötenazi ajanı.
Kemik vidalarıPinnacle Technologies, Inc.8111-161/8" kemik vidası (Pkg. 16) kafatası kapağını kafatasına takmak için kullanılır.
Diş akrilik (Bosworth Duz-All)Bosworth 166261C Kendiliğinden kürlenen diş akriliği, kanülü ve kafa montajını kafatasına yapıştırmak için bir kafatası başlığının yapımında kullanılır.
Donanım biyosensör kurulumu Pinnacle Teknolojileri A.Ş.8400-K2Pinnacle, fareler için bağlı biyosensör sistemimizin yeni kullanıcıları için eksiksiz donanım kitleri sunar. Kitler arasında bir komütatör, ön amplifikatör ve veri koşullandırma ve toplama sistemi
Temel video bilgisayar paketiPinnacle Technologies, Inc. bulunur.9000-K1Temel bilgisayar paketi, geniş sabit disk depolama alanına sahip önceden yapılandırılmış bir bilgisayar, yüksek çözünürlüklü bir monitör, klavye ve fare, kesintisiz güç kaynağı ve gerekli tüm kabloları içerir.
Video EQ700 EverFocus kamera ve nbsp; paketPinnacle Technologies, Inc.  9000-K10 Bağımsız IR kaynağına sahip EQ700 gece görüş özellikli kutu kamera, Pinnacle video bilgisayar paketinin bir parçası olarak elde edildi. Dome kamera (9000-K9) ve HD kamera (9000-K11) seçenekleri de mevcuttur.
Sirenia Satın Alma yazılımıPinnacle Technologies, Inc.Ücretsiz--pinnaclet.comSirenia'dan indirilebilir  Edinim, herhangi bir Pinnacle donanım sisteminden veri kaydetmek için tek bir platform sağlar. Yazılım, tüm veri akışlarının senkronizasyonu, kullanıcı tarafından yapılandırılabilir ayarlar, veri konsolidasyonu ve çoklu dışa aktarma seçeneklerine sahiptir. Ek olarak, yazılım biyosensör kayıtları için temel inceleme ve analiz modüllerini içerir. Sirenia  Veri toplama ve inceleme için ideal olan ücretsiz LL'si bir arada yazılım sunar.
Bağlı sıçan  in vitro  kalibrasyon kitiPinnacle Technologies, Inc.7000-K2-T-BAS Bir biyosensör tarafından ölçülen akım değişikliklerini analit konsantrasyonundaki gerçek değişikliklerle ilişkilendirmek için, hayvana implantasyondan önce biyosensörün kalibre edilmesi gerekir. Süreç aynı zamanda sensörlerin bütünlüğünü ve seçiciliğini de doğrular.  Kalibrasyon kiti 20 mL ceketli beher (#7058), 1/2" x 1/8" manyetik karıştırma çubuğu (#7059), dik açılı kelepçe (#7056), 2 uçlu tek ayarlı kelepçe (#7055), 4 kanallı kalibrasyon preamplifer (#7053) ve kalibrasyon tutucu (#7051) içerir.
Karıştırma plakası Corning6795-410DCorning dijital Karıştırıcı, 5 "x 7", 120 VAC, glutamat biyosensörlerinin in vitro< / em> kalibrasyonu sırasında ceketli beherde manyetik karıştırıcıyı döndürmek için kullanılır.
Kapalı döngü sirkülasyon yapabilen su banyosuPolyScience8006A11BPolyScience 8006A11B 6L Standart Dijital Isıtmalı Sirkülasyon Banyosu, ceketli beheri fizyolojik sıcaklığa ısıtmak için plastik boru ile 120VAC su banyosu kullanıldı.
BASi sıçan kanülleri ile karbon fiber sensörPinnacle Technology, Inc.7002-CFSDopamin nörotransmisyonunu kaydetmek için kullanılan karbon fiber elektrot.
Ag / AgCl referans elektroduPinnacle Technology, Inc.7065Karbon fiber kayıtlar için gereklidir.
Glutamat biyosensörleri Pinnacle Teknoloji, Inc.7001 Glutamaterjik nörotransmisyonu kaydetmek için kullanılan enzimatik biyosensör probu.
BASi kılavuz kanülleriPinnacle Technologies, Inc.7030 Probu yönlendirmek için beynin ilgilenilen bölgesine implante edilen kanülleri yönlendirin.
Fareler için BASi kanül plastik başlık Pinnacle Teknolojileri A.Ş.7011 Başa montaj, probu stabilize eder ve potansiyostata bağlanır.

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chefer, V. I., Thompson, A. C., Zapata, A., Shippenberg, T. S. Overview of brain microdialysis. Curr Protoc Neurosci. , Chapter 7, Unit 7.1.1-7.1.28 (2009).
  2. Chaurasia, C. S., et al. AAPS-FDA Workshop white paper: Microdialysis principles, application and regulatory perspectives. Pharm Res. 24 (5), 1014-1025 (2007).
  3. Lindsay, S....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

H zl Taramal Siklik VoltammetriSabit Potansiyelli AmperometreEnzimatik Biyosens rlemeN rotransmitter Sal n m l mIn Vivo N rotransmisyonDopamin Glutamat TespitiCinsel Davran AnaliziNucleus Accumbens CoreDavran sal N robilim Teknikleri

İlgili makaleler