Yöntem makalesi

Minimal invaziv transvers aort daralma farelerde sol ventrikül hipertrofisi indüksiyon için tekniği

DOI:

10.3791/56231

⸱

25 Eylül 2017

 ,  ,  ,  , 
1Institute of Veterinary Physiology and Zurich Center for Integrative Human Physiology (ZIHP), University of Zurich, 2Laboratoire d'Innovation Thérapeutique, UMR7200, Université de Strasbourg - CNRS, 3Department of Cardiology, Canton Hospital Lucerne

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu iletişim kuralının amacı adım adım tarif etmektir minimal invaziv transvers aort daralma (TAC) farelerde tekniği. Entübasyon ve yaygın olarak kullanılan standart prosedür için zorunlu olan havalandırma ortadan kaldırılması, minimal invaziv TAC operatif prosedür basitleştirir ve hayvan koymak zorlanma azaltır.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Transvers aort daralma (TAC) farelerde en sık kullanılan cerrahi teknikler basınç aşırı kaynaklı deneysel incelenmesi için kalp yetmezliği için sol ventrikül hipertrofisi (SVH) ve ilerlemesi biridir. Bildirilen araştırmalar çoğunluğu olarak, bu yordamı entübasyon ve havalandırma zorlu ve zaman alıcı işler ve hayvan için cerrahi yükü ekler hayvan ile gerçekleştirilir. Bu iletişim kuralının amacı olmadan entübasyon minimal invaziv TAC basitleştirilmiş bir teknik ve havalandırma farelerin tarif etmektir. Tekniğin önemli adımlar, amacıyla düşük mortalite ve SVH inducing içinde yüksek verim elde etmek için vurgulanmaktadır.

Erkek C57BL/6 fare (10 haftalık, 25-30 g, n = 60) ketamin ve xylazine karışımı tek bir mayi enjeksiyon ile anestezi. Bir nefes kendiliğinden hayvan 3-4 mm üst kısmi yöntemdir takip 6/0 ipek sütür ligasyonu yardım deliğinden dişli bir parçasını aort altında geçti ve körelmenin 27 lik bir iğne üzerinde bağlı. Sham işletilen hayvan aynı cerrahi hazırlık yapıldı ama aort daralma olmadan. SVH inducing içinde yordam etkinliğini kalp/beden ağırlık oranı önemli bir artış tarafından belgelendirilmiştir. Bu oran, 3, 7, 14 ve 28 gün ameliyat sonrası elde edilir (n = 6-10 her grup ve her zaman puan). Bizim tekniği kullanarak, 28 gün boyunca 7 gün üzerinden sahte hayvanlara göre Tac SVH görülmektedir. Operatif ve geç (28 gün içinde) Scotlan %1,7 çok düşük her ikisi de vardır.

Sonuç olarak, minimal invaziv TAC farelerde bizim düşük maliyetli tekniği çok düşük operatif ve ameliyat sonrası Scotlan taşır ve SVH inducing çok etkilidir. Operatif prosedür basitleştirir ve hayvan koymak zorlanma azaltır. Kolayca bu protokol için açıklanan kritik adımları izleyerek gerçekleştirilebilir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Son yıl içinde kalp yetmezliği çalışmanın içinde gerçekleştirilmiştir canlı hayvan modelleri1. Kalp yetmezliği büyük hayvan modellerle karşılaştırıldığında, küçük hayvan modelleri çok sayıda potansiyel avantajları vardır. Konut ve bakım daha düşük maliyetlerle, küçük hayvan modelleri daha az karmaşık gerekli İmkanlar2nedeniyle daha fazla araştırmacılar için erişilebilir.

Fare kalp yetmezliği modelleri çoğu fare modelleri aynı avantajları sunmaktadır. Ayrıca için indirimli konut maliyeti3, fare modelleri ilgili transgenik ve nakavt (KO) suşlar kullanılabilirliğini yarar. Hücre türüne özgü, indüklenebilir KO veya transgenik stratejileri olasılığı fare kalp yetmezliği patogenezi okumaya ve yeni tedavi rejimleri3tanımlamak denemek için paha biçilmez bir araç olun.

Fare arasında kalp yetmezliği modellerinin4kullanılmakta, hangi ilk Rockman5 tarafından tanımlanmıştır aort enine daralma (TAC) basınç aşırı kaynaklı sol ventrikül hipertrofisi (SVH)1 üretmek için tercih edilen bir modeldir , 3. bu modelin en büyük avantajı stratifikasyon SVH2izin yeteneğidir, ventrikül yaptı, ancak yanıt TAC olarak remodeling farklı fare suşları arasında değişkendir. Özellikle, C57BL/6 fare hızlı LV genişleme diğer suşların4,6,7ile ortaya çıkmaz TAC sonra geliştirmek.

TAC nedenleri ile elde hipertansiyon ani başlangıçlı bir hızla SVH4gelişimi oransal nişan farmakolojik veya moleküler müdahalelerin etkinliğini incelemek için izin yaklaşık % 50 artış LV kütle 2 hafta içinde. TAC tarafından şiddetli hipertansiyon akut indüksiyon tam olarak ilerici sol ventrikül hipertrofisi çoğaltmak ve remodeling aortik stenoz veya arteriyel hipertansiyon klinik ortamda gözlenen. Yine de, bu modeli tanımlamak ve kalp yetmezliği4roman tedavi hedeflerini değiştirmek için birçok müfettişler tarafından kullanılır.

TAC farelerde gerçekleştirme SVH ve sonraki kalp yetmezliği2ikna etmek için kullanılan diğer teknikleri istenenden daha fazla cerrahi uzmanlık gerektirir. Çoğu yazarlar entübasyonda ve bu yordamı daha zorlu ve zaman alıcı yapar ve hayvan için cerrahi yük ekler hayvan2,8, havalandırma tarafından bu yordamı gerçekleştirin. Sadece birkaç müfettişler yaptıkları çalışmada cerrahi işlem9,10,11kısa başvuru ile minimal invaziv TAC kullanmışlardır.

Bu iletişim kuralının amacı adım adım tarif etmektir kritik yordamının aşamalarını vurgulayarak farelerde minimal invaziv transvers aort daralma Basitleştirilmiş ve kullanıcı dostu tekniği. Anahtar adımları takip ederek, bir kolayca bu teknik gerçekleştirebilirsiniz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

erkek C57BL/6J fareler (10 hafta, 25-30g, n = 60) Bu protokol için kullanılır. Hayvanlar Fransızca Bakanlığı tarım ve yüksek öğretim ve araştırma tarafından formüle yönergelere uygun olarak insana ilişkin bakım almak ve tüm yordamları 24 Kasım 1986 uygun olarak Avrupa Topluluğu Konsey Yönergesi gerçekleştirilir () 86/609/EEC) ve Fransız yasaları. Protokol tarafından kabul edildi " bölgesel Etik Komitesi hayvan deney CREMEAS için " (#2016092816207606).

1. cerrahi için hazırlık

  1. gıda (için ayrıntıları bakın malzemeler tablo) ile standart kafeslerde 12 h/12 h açık/koyu döngüsü üzerinde hayvan tesiste geldikten sonra bir hafta için fareler korumak ve su kullanılabilir reklam libitum.
  2. İşlem gününde fareler bireysel kafeslerde anestezi, indüksiyon öncesinde birkaç dakika hayvan için herhangi bir ek stres önlemek için yerleştirin. Ameliyattan önce gün tüm cerrahi aletler sterilize.
  3. İçi peritoneally ketamin (51.4 mg/kg) ve serum fizyolojik çözümde seyreltilmiş xylazine (3.3 mg/kg) karışımı tek bir doz enjekte (% 0.9 NaCl).
  4. Ayak geri çekilme refleks yokluğunda tarafından anestezi derinliği emin olun.
  5. Boyun ve göğüs hayvan satın alabileceğiniz bir ustura ile tıraş ve traş alanının % 70 alkol ile dezenfekte.
  6. Hayvan sırtüstü bir temiz cork çalışma defterinde yerleştirin ve pençeleri yapışkan bant ile düzeltmek.

2. Ameliyat

  1. steril cerrahi tekniğin yordamlarda kullanılan. Kendiliğinden nefes içinde hayvan, göğüs kemiği ( şekil 1) göstermek supra sternal çentik orta göğüs bir 11-bıçak bıçak ile bir boyuna servikal Ensizyon 10 mm gerçekleştirmek.
  2. Tiroid iğne bağı 4/0 monofilament polipropilen kalış dikiş Crile ahşap ile ileterek geri çekmek ve bu çalışma pedi için bant.
  3. Açık açık önceden trakeal kasları Trakea ortaya çıkarmak için mikro-cerrahi Forseps ile ayırın.
  4. Slayt hafifçe yumuşak uçlu kavisli Mikro cerrahi forseps kapalı jaws ile trakea ve göğüs kemiği arkasında.
  5. Tarafından dikkatle açılış ve kapanış düz uçlu eğri mikrocerrahi forseps çene altında önceden trakeal kasları ve plevra uzaklaşmaya göğüs kemiği arkasında bir künt diseksiyon gerçekleştirmek.
  6. Sağ supra-klavikular kasları düz uçlu düz Mikro cerrahi Forseps ile tutun ve hayvan göğsü yavaşça çekin.
  7. Kemik nipper göğüs kemiğinin altında alt çene slayt ve bir 3-4 mm üst kısmi yöntemdir ( Şekil 2) gerçekleştirin. Doğrudan alt kısmında biraz sola doğru mini yöntemdir.
  8. 7/0 monofilament polipropilen kalış dikiş üzerinden içinde için dışında bir mikro-cerrahi iğne bağı kullanarak mini yöntemdir her tarafında ikinci interkostal uzayda geçmektedir. İnterkostal ve internal torasik damarları veya plevra için yaralanmayı önlemek için costo sternal açı yakın kal.
  9. 7/0 monofilament polipropilen kalış dikiş her tarafında kullanarak göğüs kenarları yaymak ve bunları düzeltmek için çalışma pedi yapışkan bant ile.
  10. Yavaşça hareket bir kenara önceden trakeal kaslar, mediastinal yağlı ve yumuşak uçlu timus kullanarak eğri aort düşük güç büyütme (2-3 X) altında görselleştirmek için mikrocerrahi forseps ( şekil 3). Değil dokunma veya pnömotoraks gelişimini önlemek için parietal plevra zarar belirli kendine iyi bak.
  11. Aort altında yumuşak doku forseps ( şekil 4 A) bağlayarak açığa ve yavaşça onun jaws yayıldı. Aort altında yumuşak doku tünelde ikinci bağlama Forseps ile hafifçe açılış ve kapanış jaws yumuşak doku olarak hazırlayın.
  12. 6/0 ipek ip göz sol aort altında tutulan ligasyon yardım ( şekil 4 B) boyunca dişli bir parçasını geçmek ve sağ el kökeni arasında düzenlenen forseps bağlayarak geri almak Şu innominate ve sol ortak Karotid arter ( şekil 5).
  13. 5 mm uzunluğa 27'lik iğne kesmek ve Crile iğne bağı ile basarak her iki ucu künt. Düz uçlu düz Mikro cerrahi Forseps ile aort ( şekil 6) yanında körelmenin 27'lik iğne yerleştirin ve dikiş iğne ve aort damarı şu innominate ve sol ortak karotis arasında rahatça etrafında kravat iki bağlama forseps ( Şekil 7) kullanarak arterler. Rahatça dikişi bağlamak için bir ilk çift düğüm dört ek düğüm tarafından takip gerçekleştirin. Tüm deniz mili düz olduğundan emin olun.
  14. Sonra tüp ligasyonu, hızlı bir şekilde ama nazikçe 0.4 mm çap daralma elde etmek için iğne ve tekrarlanabilir enine 65-%70 aort daralma kaldırmak.
    15. Hemostazın aort sternal kenarları ve önceden trakeal kaslar etrafında yumuşak doku
  15. denetleyin. Her yerde kan sızmaya görülmektedir tekrar Emilebilen Kan durdurucu sargı gazlı bez koyun. 7/0 monofilament polipropilen kal sternal kenarları yaymak için kullanılan dikiş kaldır.
  16. Geçmek bir basit 6/0 monofilament polipropilen sütür ile bir mikro-cerrahi iğne bağı dışında için sol ikinci interkostal boşluk içinde ve o andan itibaren içinde için değil ikinci interkostal boşluk dışında. İnterkostal ve internal torasik damarları veya plevra için yaralanmayı önlemek için costo sternal açı yakın kal.
  17. Birlikte iğne bağı Crile ahşap ile 6/0 monofilament polipropilen sütür bağlayarak göğüs kenarları getirmek.
  18. Deri dikiş bir katmanda bir Crile ahşap ile iğne bağı çalıştıran bir 5/0 monofilament polipropilen ile yakın.
  19. Sham yordamı aynı daralma işlemi ama dikiş aort çevresinde ipe.

3. Ameliyat sonrası kurtarma

  1. hayvanlar çok yakından izlemek. fare için bireysel bir kafes aktarım ve yüzükoyun sígara yerleştirin.
  2. İzin ver bir ısınma ışık altında kadar tamamen kurtarmak için fareyi uyanık (az 1 anestezi inducing sonra h).
  3. Ameliyat sonrası analjezi için 0,1 mg/kg buprenorfin intraperitoneally enjekte. gösterildiği gibi ilk üç gün boyunca yineleyin Subkutan Enjeksiyon 0.1 mg/kg buprenorfin her 8 h.
  4. (Maksimum kafes 3 fare) ve en az 2 fareler kafesi başına standart kafeslerde işletilen fareler yer.

4. Kalp hasat

  1. fare ketamin bir çözüm ile analiz günü, ötenazi 300 mg/kg ve xylazine 20 mg/kg mayi enjeksiyonla serum içinde.
  2. İnferior vena kava kandan ilk hasat ve aynı hattı üzerinden 5 mL serum fizyolojik 2.6 mm EDTA çözeltisi enjekte.
  3. Kalp hasat, Kulakçık kaldırmak ve kalp (sol ve sağ ventrikül Kulakçık olmadan) ağırlık.
  4. Sola doğru ventr ayırmak.icle sol ventrikül bölümüne kalan septum ile. Her iki doku örnekleri tartmak ve onları sıvı azot içinde dondurma.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Operatif ve geç kalma


<<

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu iletişim kuralının amacı farelerde minimal invaziv transvers aort daralma için cerrahi teknik bir adım adım örnek sunmaktır. Transvers aort daralma farelerde ayrıntılı teknik açıklama diğer yazarlar2,8tarafından bildirilmiştir. Ancak, bu müfettişler ameliyat entübasyon ve havalandırma hayvanların aşağıdaki. Entübasyon-havalandırma ek bir adım kullanımı karmaşıklık ve tüm prosedürü süresini artırır ve genel stres hayvan maruz kalmaktadır. Bu nedenlerden dolayı ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar hiçbir ifşa etmek çıkar çatışması var.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu eser RT. için İsviçre kardiyovasküler Vakfı'nın hibe (N ° 32016) tarafından desteklenmiştir

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Cerrahi mikroskopOlympusSZX2-TR30
RazorRowentaNomad TN3650FO
Sütürler: < / güçlü >
Polipropilen 7/0EthiconBV-1X
Polipropilen 6/0BBraunC0862061
İpek 6/0 ligatür FST18020-60
Polipropilen 4/0Ethicon8683
Polipropilen 5/0EthiconZ303
< güçlü > İlaçlar: < / güçlü >
KetaminMerialImalg & egrave; ne 1000, LBM154AD
KsilazinBayerRompun 2%, KP09PPC
BuprenorfinCevaVeterjezik, 072013
Enstrümanlar: 
Kemik penseleriİnce Cerrahi Aletler16101-10
Ligasyon yardımıİnce Cerrahi Aletler18062-12
Forseps bağlamaİnce Cerrahi Aletler18026-10
İğne tutucu Crile-Woodİnce Cerrahi Aletler12003-15
Mikrocerrahi forseps İnce Cerrahi Aletler11003-12
Mikrocerrahi forseps İnce Cerrahi Aletler11002-12
Doku forsepsİnce Cerrahi Aletler11021-12
Mikrocerrahi iğne tutucuİnce Cerrahi Aletler12076-12
Mikrocerrahi makasİnce Cerrahi Aletler91501-09
Mayonez makasİnce Cerrahi Aletler14511-15
11 bıçaklı bıçakİnce Cerrahi Araçlar10011-00<
güçlü>RNA ekstraksiyonu ve qPCR:
TriReagentEuromedexTR-118-200
Rneasy Mini kitiQiagen74704
Qubit Florimetrik RNA testiFisher Scientific10034622
RNA 6000 Nano kitiAgilent5067-1511
Yüksek Kapasiteli cDNA kitiFisher Scientific10400745
Taqman MasterMix Fisher Scientific10157154
Taqman BNP primerleriFisher ScientificMm01255770_g1
Taqman ANP primerleriFisher ScientificMm01255747_g1 
Taqman ACE astarlarıFisher ScientificMm00802048_m1
Taqman Col1a1 astarları Fisher ScientificMm00801666_g1
Taqman TGFb primerleriFisher ScientificMm01178820_m1
Taqman Gapdh primerleriFisher ScientificMm99999915_g1
ABIPrism  ThermocyclerApplied Biosystems7000
Yazılım: < / güçlü>
GraphPad PrizmaGraphPadPrism 7
Hayvan yemi< / güçlü>
yetişkin sıçanlar/fareler için tam diyetGüvenliUB220610R

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Molinari, F., Malara, N., Mollace, V., Rosano, G., Ferraro, E. Animal models of cardiac cachexia. Int. J. Cardiol. 219 (15), 105-110 (2016).
  2. Tarnavski, O. Mouse surgical models in cardiovascular research. Methods. Mol. Biol. 573, 115-137 (2009).
  3. Verma, S. K., Krishnamurthy, P., Kishore, R., et al. Transverse aortic constriction: a model to study heart failure in small animals. Manual of Research Techniques in Cardiovascular Medicine. Ardehali, H. , Wiley, J., & Sons. 164-169 (2014).
  4. Patten, R. D., Hall-Porter, M. R. Small animal models of heart failure. Development of novel therapies, past and present. Circ. Heart Fail. 2 (2), 138-144 (2009).
  5. Rockman, H. A., et al. Segregation of atrial-specific and inducible expression of an atrial natriuretic factor transgene in an in vivo murine model of cardiac hypertrophy. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 88 (18), Erratum in: Proc. Natl. Acad. Sci. USA Page 9907 8277-8281 (1991).
  6. Barrick, C. J., Rojas, M., Schoonhoven, R., Smyth, S. S., Threadgill, D. W. Cardiac response to pressure overload in 129S1/SvImJ and C57BL/6J mice: temporal- and background-dependent development of concentric left ventricular hypertrophy. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 292 (5), 2119-2130 (2007).
  7. Deschepper, C. F., Olson, J. L., Otis, M., Gallo-Payet, N. Characterization of blood pressure and morphological traits in cardiovascular-related organs in 13 different inbred mouse strains. J. Appl. Physiol. 97 (1), 369-376 (2004).
  8. Almeida, A. C., van Oort, R. J., Wehrens, X. H. T. Transverse aortic constriction in mice. J. Vis. Exp. (38), April 21 (2010).
  9. Hu, P., Zhang, D., Swenson, L., Chakrabarti, G., Abel, E. D., Litwin, S. E. Minimally invasive aortic banding in mice: effects of altered cardiomyocyte insulin signaling during pressure overload. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 285 (3), 1261-1269 (2003).
  10. Faerber, G., et al. Induction of heart failure by minimally invasive aortic constriction in mice: Reduced peroxisome proliferator-activated receptor ϒ coactivator levels and mitochondrial dysfunction. J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 141 (2), 492-500 (2011).
  11. Andersen, N. M., Tang, R., Li, L., Javan, H., Zhang, X. Q., Selzman, C. H. IKK-β inhibition prevents adaptive left ventricular hypertrophy. J. Surg. Res. 178 (1), 105-109 (2012).
  12. Nemska, S., Monassier, L., Gassmann, M., Frossard, N., Tavakoli, R. Kinetic mRNA profiling in a rat model of left ventricular hypertrophy reveals early expression of chemokines and their receptors. PLoS ONE. 11 (8), 0161273(2016).
  13. Liao, Y., et al. Echocardiographic assessment of LV hypertrophy and function in aortic-banded mice: necropsy validation. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 282 (5), 1703-1708 (2002).
  14. Stansfield, W. E., et al. Characterization of a model to independently study regression of ventricular hypertrophy. J. Surg. Res. 142 (2), 387-393 (2007).
  15. Beetz, N., et al. Ablation of biglycan attenuates cardiac hypertrophy and fibrosis after left ventricular pressure overload. J. Mol. Cell. Cardiol. 101, December 145-155 (2016).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Minimal nvaziv TACFare ModeliParsiyel SternotomiAort Ark KonstriksiyonuKalp A rl OranSham OperasyonKetamin Ksilazin AnestezisiLigasyon Yard mc Teknikleri

İlgili makaleler