Method Article

Diseksiyon ve fare hipofiz bezi geliştirme koronal dilim hazırlık

DOI:

10.3791/56356

⸱

November 16th, 2017

 ,  ,  , 
1Department of Pathophysiology, Second Military Medical University, 2Department of Cell Biology, Second Military Medical University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Biz hipofiz bezleri teşrih ve fareler gelişmekte olan hipofiz koronal bölümleri hazırlamak için bir protokol mevcut.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Önemli bir endokrin organ homeostazı için gerekli hormonlar salgılayan hipofiz bezi veya hypophysis olduğunu. O oluşmak-in iki bezleri ile ayrı embriyonik kökenleri ve görev — nörohipofiz ve adenohipofiz. Küçük ve narin bir uzun oval şekli ile gelişmekte olan fare hipofiz bezi bulunmaktadır. Koronal bir bölümü adenohipofiz ve nörohipofiz fare hipofiz tek bir dilim içinde görüntülemek için tercih edilir.

Bu iletişim kuralı uygun hipofiz koronal bölümleri fareler gelişmekte olan iyi korunmuş doku mimarileri ile ulaşmak hedeftir. Bu protokol için ayrıntılı olarak incelemek ve hipofiz bezlerinin düzgün üzerinden fare geliştirme işlemek nasıl açıklar. İlk olarak, fare transcardial perfüzyon formaldehit diseksiyon önce tarafından sabitlenir. Daha sonra üç farklı diseksiyon teknikleri sağlam hipofiz bezlerin fareler yaş bağlı olarak elde etmek için uygulanır. Fetal farelerin embriyonik gün (E) 17,5-18,5 ve Yenidoğan Bebeklerin yukarı 4 gün olarak yaşları için ense kemiği, bezi ve trigeminal sinir de dahil olmak üzere tüm sella bölgeleri kesmiştim. Yavrular için bir bütün olarak trigeminal sinir ile bağlı yaşında doğum sonrası gün (P) 5-14, hipofiz bezleri disseke. 3 hafta boyunca fareler için hipofiz bezleri dikkatle ücretsiz çevre dokulardan disseke. Ayrıca nasıl koronal bölümleri tatmin elde etmek için simge çevre dokular kullanarak uygun yönde hipofiz bezleri katıştırmak için görüntüler. Bu yöntemleri fareler gelişmekte olan hipofiz bezlerinin histolojik ve gelişimsel özellikleri analiz yararlıdır.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Önemli bir endokrin organ homeostazı1,2için gerekli hormonlar salgılayan hipofiz bezi veya hypophysis olduğunu. Anatomik olarak, hipofiz bezi, nörohipofiz ve adenohipofiz oluşan bir '' iki-in-one'' yapısıdır. Bu parçaların farklı embriyonik kökenleri ve işlev farklı var. Nörohipofiz sinirsel ektoderm türetilmiştir ve oksitosin ve Antidiüretik hormon salgılar. Adenohipofiz Rathke'nın çantası kaynaklı ve dahil olmak üzere büyüme hormon, prolaktin, tiroid - uyarıcı hormon, folikül - uyarıcı hormon, Lüteinizan, adrenocorticotropic hormon, hormon serbest bırakmak için sorumludur ve melanosit - uyarıcı hormon

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

C57BL/6 fareler özel patojen-Alerjik durumlar yetiştirilmiş. Tüm hayvan deneysel hayvan bakım ve ikinci askeri Tıp Üniversitesi Etik Komitesi tarafından onaylanmış yönergelere uygun yöntemlerdir.

1. diseksiyon, Postnatal gelişmekte olan hipofiz bezi

  1. gerçekleştir anestezi: yenidoğan fareler (P0 - P5) hipotermi ikna etmek için ezilmiş buz koyun. 5 günden büyük fareler için %5 üretan (30 µL/g vücut ağırlığının) anestezi ikna etmek için intraperitoneally enjekte et. Kuyruk/Pinch ayak yanıt-e doğru değerlendirmek. Sadece fare için zararlı uyaranlara yanıt vermemesine neden olur sonra devam.
  2. Yavaşça forepaws taping tarafında....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu iletişim kuralı fareler gelişmekte olan hipofiz bezleri incelemek için bir yöntem sunuyor. Yenidoğan fare, hipofiz bezi, trigeminal sinir ve iç çamaşırım içeren tüm sella bölgelerin ense kemik kafatası tabanından dışarı disseke. Küçük ve narin hipofiz bezi (şekil 1A) işlemi sırasında olduğu gibi kaldı. 5 günden daha eski fareler için yanal trigeminal sinir bağlı hipofiz bezleri o zamanlar izole. Fare iyi korunmuş P7 izole hipofiz bezi (

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fare pituitaries geliştirmek için bu küçük ve kırılgan özellikleri ve benzersiz anatomik özellikleri6,8nedeniyle uygun koronal bölümler elde etmek teknik olarak zor oldu. Bazı araştırma grupları böylece embriyonik ve neonatal hipofiz11,12morfolojisi çözümlemek için orta-sagittal bölümleri seçti. Yine de hipofiz orta-sagittal bölümünü de anterior, orta gösterilen yeteneğine sahiptir ve bu üç LOB maksimum b.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ifşa gerek yok.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu eser hibe Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı Çin (31201086, 31470759 ve 31671219) ve Şangay doğal Bilim Vakfı (12ZR1436900) tarafından desteklenmiştir.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Araçlar / Ekipman< / güçlü >
Cerrahi makas-düzJinZhongJ21010diğer satıcılardan satın alınabilir
İnce makas strainghtJinZhongWA1010diğer satıcılardan satın alınabilir
Künt forsepsJinZhongJD1020diğer satıcılardan satın alınabilir
İnce forsepsHipofiziğnesinin izolasyonu içinRS-5015
Transkardiyal perfüzyon içinHongDa
Şırınga (1 mL)BD300841diğer satıcılardan satın alınabilir
Şırınga (10 mL)BDdiğer satıcılardan satın alınabilir
35 mmçanak Corning430165diğer satıcılardan satın alınabilir
Lens temizleme kağıdıShuangQuandiğer satıcılardan satın alınabilir
Anatomik mikroskopOLYMPUS SZX-ILLB2-200diğer satıcılardan satın alınabilir
Gömme kasetiThermo Fisher22-272423diğer satıcılardan satın alınabilir
Doku gömme konsol sistemiKEDEEKD-BM11diğer satıcılardan
MicrotomeThermo FisherHM315Rdiğer satıcılardan satın alınabilir
Superfrost-Plus slaytlarıThermo Fisher22-037-246diğer satıcılardan satın alınabilir
Kapak camıThermo Fisher12-543başka satıcılardan satın alınabilir
Floresan mikroskobuOLYMPUSBH2-RFCAdiğer satıcılardan satın alınabilir
İsimCompanyKatalog NumarasıComments
Reagents
ÜretanPBS içinBBI EB0448
NaClSigmaS9625
PBS için KClSigmaP9541
PBS içinNa2HPO4.12H2OSigma71650
K2HPO4SigmaPBS içinP2222
NaNO2Sigma237213
Heparin Sodyum EnjeksiyonuPerfüzyon tuzluSPHH31022051
Paraformaldehit (PFA)SigmaP6148
EtanolSCR10009218
H & için KsilenSCR10023418
ParafinThermo Fisher8330
HematoksilenSigmaH9627 H & için E boyama
Eosin YSigmaE4009 E boyama
tavşan anti büyüme hormonu (GH)İmmün boyamaUlusal Hormon
Hipofiz Programı
Tavşan anti-fare GFAP antikoruSigmaG9269immüno-boyama için
Keçi anti-tavşan IgG, HRPJackson111-035-003immüno-boyama için
TSA sistemiNEN Yaşam Bilimleri Ürünleriİmmün boyama içinNEL700
Streptavidin, Alexa Fluor 594Thermo FisherS32356immün boyama için
Anti-FITC Alexa Fluor 488Thermo FisherA11090immün boyama için
26G (0,45 mm) Dumont satın alınabilirsu için antikoru için

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Fauquier, T., Lacampagne, A., Travo, P., Bauer, K., Mollard, P. Hidden face of the anterior pituitary. Trends Endocrinol Metab. 13 (7), 304-309 (2002).
  2. Haedo, M. R., et al. Regulation of pituitary function by cytokines. Horm Res. 72 (5), 266-274 (2009).
  3. Zhu, X., Gleiberman, A. S.....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Pituitary Gland DissectionCoronal Section PreparationMouse Pituitary DevelopmentTissue Embedding TechniqueSellar Region IsolationTrigeminal Nerve OrientationParaffin Wax SectioningHistological Analysis MethodImmunolabeling CompatibilityDeveloping Mouse Pituitaries

Related Articles