Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Rejeneratif tedavisi ile Suprachoroidal hücre otogrefti içinde Kuru yaşa bağlı makula dejenerasyonu: ön Vivo içinde rapor

9.9K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/56469

⸱

12 Şubat 2018

 ,  ,  ,  , 
1Low Vision Research Centre of Milan, 2Department of Ophthalmology, A. Fiorini Hospital, Sapienza University of Rome, 3Glaucoma and Low Vision Study Center, Department of General Surgery and Organ Transplants, University of Bologna, 4Department of Sense Organs, Faculty of Medicine and Odontology, Sapienza University of Rome

Bu makalede

Özet

Bu çalışmada yağ kaynaklı kök stromal vasküler kesir bulunan hücreleri ve trombosit açısından zengin plazma Limoli retina restorasyon tekniği ile elde edilen trombosit suprachoroidal greft görme keskinliği artırabilirsiniz olup olmadığını değerlendirmek için hedeftir ve Kuru yaşa bağlı makula dejenerasyonu tarafından etkilenen gözde retina hassasiyeti yanıt.

Özet

İnceleyerek bu çalışma olup olmadığını suprachoroidal greft Otolog hücrelerin en iyi düzeltilmiş görme keskinliği (BCVA) artırabilir ve microperimetry (MY) tarafından etkilenen gözünde yanıt zamanla yaşa bağlı makula dejenerasyonu (AMD) kuru hedefleniyor üretim ve büyüme faktörlerinin çevreleyen doku üzerinde (GDS) salgılanması. Hastalar her çalışma grubu için rastgele. Tüm hastalar BCVA 1 çözünürlük (logMAR) en az açısını logaritması daha büyük veya eşit ve kuru AMD ile tanısı konuldu. Bir suprachoroidal Otolog greft Limoli retina restorasyon tekniği (LRRT) tarafından 11 hastalardan 11 gözleri dahil Grup A gerçekleştirilmiştir. Teknik adipositler, stromal vasküler kesir ve trombosit trombosit açısından zengin plazma suprachoroidal uzayda üzerinden elde edilen yağ kaynaklı kök hücre implantasyonu tarafından gerçekleştirildi. Tersi durumda, Grup B 14 hastaların 14 gözleri de dahil olmak üzere, bir kontrol grubu kullanıldı. Her bir hasta için tanı confocal tarama lazer ophthalmoscope ve spektral etki alanı optik Koherens tomografi (SD-Ekim) tarafından doğrulandı. Grup A, BCVA geliştirilmiş 0.581-0.504 tarafından 90 gün ve 0,376 logMAR 180 gün (+32.20%) postoperatively. 11.44 dB 12.59 DB tarafından Ayrıca benim test arttı 180 gün. Koroid aşılı farklı hücre türleri sürekli GF salgı choroidal akışı sağlamak başardık. Sonuç olarak, görsel keskinlik (VA) aşılı grubunda artırabilir sonuçlar gösterir 6 ay sonra kontrol grubunda daha fazla.

Giriş

Hücre tedavisi yaralı alanındaki birden çok kronik hastalıkların tedavisi için kök/progenitor hücreler sistemik veya yerel enjeksiyon oluşan, son on yılda1' yakın ilgi çekmiş olmalı. 1990'lardan beri büyüme faktörleri (GDS) retinal Atrofi2içindeki potansiyel terapötik rolü için incelenmiştir. Aslında, birçok insan hücreleri engellemek veya yavaş apoptosis, Yani, programlanmış ölüm hücreleri3edebiliyoruz belirli proteinler GFs üretebilir.

Kuru yaşa bağlı makula dejenerasyonu (AMD) nerede kademeli ve geri dönüşü olmayan hücre ölümü photoreceptor katman ve sonuç olarak, Merkez görsel işlev4kaybı yaralanma içerir atrofik bir retina hastalığı olduğu bilinmektedir. AMD önde gelen körlük kişilerde 55 yaşını doldurmuş gelişmiş ülkeler ve hesapları tarihi için etkili bir tedavi eksikliği tüm makula dejenerasyonlar % 80'i için nedenidir.

Çeşitli çalışmalarda çeşitli kaynaklardan içinden Otolog GFs elde edilebilir olduğunu göstermiştir. Bunlar farklı hücre tipleri, yörüngesel fat, trombosit açısından zengin plazma (PRP) türetilmiş trombosit ve yağ elde edilen kök hücreler (ADSCs) stromal vasküler kesir (SVF) yağ dokusunun5 dahil elde adipose stromal hücre de dahil olmak üzere oluşturan ,6,7. Retina neuroenhancement ve Filatov, Meduri, Pelaez tarafından yürütülen araştırmaya geçerli GF kümesi sağlar ve Limoli Otolog yağ nakli (AFT) etkili8,9,10olduğunu göstermiştir.

Ayrıca, bir önceki çalışma electroretinogram (ERG) veri, önemli gelişmeler gösterdi yazı suprachoroidal Otolog greft, Kuru göz AMD etkilenen11' kaydetti. Suprachoroidal uzayda cerrahi olarak aşılı doku retina hücreleri, onların apoptosis6,7,12geciktirerek parakrin salgılanmasını modülasyonlu. Dış nükleer tabaka kalınlığı göz önüne alındığında, eskiden şiling şimdi pigs retina histolojik muayene GFs retina üzerinde trofik etkisi göstermiştir. Bu nedenle, GFs doğrudan veya dolaylı kullanımı potansiyel terapötik moleküler indükleyicileri ve inhibitörleri6,7,12arasında dengeli bir ilişki üzerinden yararlar sağlayabilirler.

Bu yöntemin amacı adipositler, ADSCs SVF ve PRP suprachoroidal greft en iyi artırabilirsiniz olup olmadığını değerlendirmek için görme keskinliği (BCVA) ve microperimetry (MY) yanıtları kuru AMD etkilenen gözde düzeltilmiş var. Bu çalışma otogrefti atıf edebiyat6,7,12,13göre onun GF üretim temelinde tedavi edici etkisini göstermek amaçlamaktadır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Çalışma Protokolü düşük Vision Academy Etik Komitesi tarafından kabul edildi ve tüm konular Helsinki Bildirisi'ne uygun olarak yazılı izni imzaladı. Bu araştırma etik onay Loughborough ve Sheffield üniversitelerde--dan aldı.

Not: Suprachoroidal Otolog greft Limoli retina restorasyon tekniği (LRRT) tarafından almak için Kuru yaşa bağlı makula dejenerasyonu hastaların içerme ve dışlama kriterleri Tablo 1' de anlatılan.

1. kuru yaşa bağlı makula dejenerasyonu hastaların tanı

  1. Tanı confocal tarama lazer ophthalmoscope, SD-Ekim ve MY tespit.
  2. Her grubun BCVA uzak ve yakın mesafe için değerlendirin. Ölçü VA yakın görüş (yakın çekim) puan (Puan) için. Zaman 0 BCVA (T0), 90 (T90), ölçü ve 180 gün (T180) erken tedavi diabetik retinopati çalışma için logMAR 4 metre (EDTRS) çizelgeleri karşılaştırıldı.
  3. Kayıt elektrik scotopic, mesopic ve photopic hücre aktivitesi veya klinik Elektrofizyoloji, vizyon (ISCEV)11için uluslararası toplum tarafından 2009 yılında belirlenen standartlara göre flash ERG.

2. anesthetization

Not: Topikal anestezi anestezi ve sedasyon alt-bilir'ın infiltrasyonu tarafından güçlendirilmiş, anestezi sırasında LRRT altın standart 's. Belirli durumlarda, genel anestezi tercih edilmektedir.

  1. Kornea edinin ve topikal yerel anestezi uygulayarak Konjonktival anestezi dropwise 15-20 dk lidocaine % 4 ve ropivacaine % 1 ile ameliyat öncesi telkin.
  2. Tarafından doğrudan içine alt Konjonktival infiltrasyon anestezi enjekte ve subtenon'ın alanlarda.
  3. Yerel infiltrasyon karın bölgesinde yağ dokusu elde edilir önce hem alt Konjonktival ve alt-bilir'ın alanlarda, 12 mm den limbus kullanın. Lokal anestezi carbocaine veya 1200 IU epinefrin ile karışık marcain evlat.
  4. Düzgün tekrarlanan küçük boli aracılığıyla bir narkotik analjezik olarak fentanil kullanarak gerçekleştirilen anestezi ile ameliyat sırasındaki sedasyon sağlar. Doz fentanil 0.025 mg bolus başına midazolam 1 mg ile genellikle olduğunu.

3. Limoli retina restorasyon tekniği hazırlık

Not: Bu teknik bir değişken tarafından orbital Otolog yağ içinde subscleral alanı1,6,7,12nakledilen Pelaez'ın müdahale temsil eder. Cerrahi olarak aşılı hücreleri çevreleyen doku, koroid ve retina18,19,20,21,22 Nörotrofik ve angiotrophic özellikleri ile birçok GFs üretebilir ,23,24,25. LRRT, aşılı Otolog hücrelerin ve koroid arasındaki mesafe ile derin sclerectomy azalır ve SAP ve koroid arasında temas bölgesinin parakrin Otolog hücre salgı choroidal akışı9içine tanıtmak için genişletilir, 10,14.

  1. Her göz ile hücresel aşılama koroid ve sklera, Limoli retina restorasyon tekniği (LRRT)15,16,17adlı bir yordam arasında ameliyattan önce uygun dezenfeksiyonu gerçekleştirin.
  2. Coleman vd ve karın yağ, sovrachoroidal alanı15,16,17SVF gelen Lawrence'nın tekniği (şekil 1) elde edilen ADSCs, greft.
  3. PRP jel aşağıdaki adımlarda size elde infiltrat adipose Transpediküler ile Trombosit elde.
  4. Kan6,12 santrifüj kapasitesi ve trombosit açısından zengin plazma (PRP) toplamak. Trombosit degranulation için uyarıcı GF yayın adipose Transpediküler6,12' neden olur.

4. teknik özellikleri ve strateji

Not: Yağ dokusu toplanır ve hastalar, karın subkutan katmandan Lawrence ve Coleman tekniği17göre (Tablo reçetesi) saf.

  1. El ile hasat 10 mL yağ dokusu 3 mm künt kanül kullanarak her hastanın karın subkutan katmanından bir kilitleme şırıngaya, Lawrence ve Coleman tekniği17 göre (şekil 2A/2B) bağlı.
  2. Santrifüjü 1.500 x g 20 ° c (Şekil 2C) de 5 min için tarafından kan, yağ, yağ ve sıvı yağ dokusunun saf SVF ayırın. SVF ADSCs17ve çok zengin biri.
  3. İnsan periferik kan 8 mL PRP hazırlık için ayrı bir tüp ve 22 G iğne ile toplamak.
  4. 20 ° C'de (Şekil 2D) 1.500 x g, 5 min için toplanan kan santrifüj kapasitesi. LRRT, Otolog yağ dokuları, artan choroidal perfüzyon yanadır, ADSC yayılması daha iyi yaşama ve daha kapsamlı bir modülasyon sadece yağ7tarafındansalgılanan bu faktörlerin eyleminin ardından gelen değişiklikleri sonucu, 11,17.
  5. Yörünge yağlardan elde edilen greft karşılamak ve bu cep kalan hacmi ADSCs SVF ve PRP, Lawrence göre elde edilen karışımı ile doyurmak için suprachoroidal cep (daha fazla ayrıntı adım 4'te, belirli 4.4 ve 4.5) kurmak ve Coleman tekniği17.

5. Suprachoroidal otogrefti tarafından LRRT (Limoli retina restorasyon tekniği): cerrahi müdahale ve teknik detayları

  1. İnferior temporal limbus yakınındaki 6-0 ipek sütür ile sklera demir.
  2. 5,5" Westcott Tenetomy eğri makas kullanarak inferior temporal limbus açık 11 mm, subconjunctival ve subtenonian alan.
  3. Limoli-Basile Konjonktival Retraktörü scleral cerrahi alan yapmak bu alana yerleştirin.
  4. 5 mm Hilal bıçak açılı eğim kullanarak, bir kapak 8 mm'den limbus, sklera tarafında önceden kesilmiş. Kapak menteşe her zaman Radyal ve cerrah soluna.
  5. Limbus, 8 mm, inferior temporal çeyreğinde bir derin scleral 5 mm yan tarafından Radyal menteşe kullanarak bir Hilal bıçak, açılı eğim kadar aç kapıyı. Koroid kayrak rengini görüntülemek üzere bir yeterli derinlikte sclerectomy yerine getirir.
  6. Sonraki suprachoroidal otogrefti kan dolaşımını kolaylaştırmak için kapak, distal kısmında küçük bir operculum kaldırarak bir boşluk oluşturun.
  7. Oftamolojik Forseps ile bir boşluk inferior oblik kas yukarıda yörüngesel fat ayıklamak. Ayıklanan yağ yeterince onun implantasyon sonra hayatta kalmak izin vermek için skarların emin olun.
  8. Yavaşça choroidal yatak ve choroidal 6/0 polyglactin fiber kapıyı proksimal kenarında dikiş Otolog yağ kapağı yerleştirin.
  9. Sıkıştırma şişman Transpediküler veya onun besin damarları önlemek için scleral flep dikiş.
  10. Şişman Transpediküler stroma PRP jel (elde edilen aralıklarla kan malzemenin, bileşen ve trombosit degranulation26ayrılması tarafından) 1 mL ile sızmak 30 G açılı (30 °) kanül kullanarak.
  11. Konjonktiva kenarlarında dikiş için hazırlayın. Ardından, Konjonktival Retraktörü kaldırın.
  12. 6/0 polyglactin fiber kullanarak konjonktiva, dikiş.
  13. Kapatmadan önce flep, koroid ve choroidal otogrefti arasındaki subscleral boşluğa Otolog yağ greft ile küçük bir esnek plastik tüp eklemek için bir boşluk bırakın.
  14. Otolog yağ greft, koroid ve scleral flep arasında kalan boşluk 0,5 ile emdirmek SVF (ADSCs zengin), cc scleral cebine eklenen adım 3.2, bir küçük esnek plastik tüp tarafından önceden hazırlanmış.
  15. Kalıntı alanı doyurarak sonra dikiş kapatın.
  16. Ameliyattan sonra 500 mg azitromisin ile Antibiyotik tedavisinin üç gün yönetmek. Ayrıca, bir antibiyotik ve steroid kombinasyonu ile kloramfenikol ve betametazon, gibi yaklaşık 15-20 gün-damla tedavisi sağlar.
    Not: yağ hücreleri, ADSCs SVF ve PRP oluşan bir otogrefti şimdi26elde. Otolog hücrelerin parakrin salgılanmasını choroidal akış içine uyarmak için derin sclerectomy aşılı Otolog hücrelerin ve koroid arasındaki mesafeyi azaltın. Aynı amaç için SAP ve koroid arasında temas alanı genişletin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Burada sunulan yordamını kullanarak iki grup BCVA 1 çözünürlük (logMAR), en küçük açı logaritması daha büyük veya eşit olan kuru AMD etkilenen hastalar çalışmaya alındı. Grup A, B 14 14 hastanın gözünde de dahil olmak üzere, grup ise 11 hasta, alınan suprachoroidal Otolog greft Limoli retina restorasyon tekniği (LRRT) tarafından 11 gözleri de dahil olmak üzere, bir kontrol grubu kullanıldı.

Öğrenci t-Testi ve chi kare testi, sır...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bu çalışmanın temel amacı adipositler, ADSCs SVF ve PRP suprachoroidal greft VA ve kuru AMD etkilenen gözde retina duyarlılık zamanla artırabilirsiniz olup olmadığını değerlendirmek için yapıldı. Başka bir ana hedefi birkaç preklinik çalışmalarda GF tabanlı terapisi çeşitli hastalıklarda hasta bakımı için yararlı olabilir düşündürmektedir beri son edebiyat dayalı bu hücreler, olası tedavi edici etkileri göstermekti.

Aslında, bazı çalışmalar Otolog İnsan İndüklenmiş pluripotent kök hücreler (IP...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

ARVO 2015 3-7 Mayıs-Denver, CO - ABD sundu.

Teşekkürler

Yazarlar hiçbir katkıda bulunanlar var.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Künt kanül, 3 mm. Akıl hocası, Santa Barbara, CA.
Luer-LokTM şırınga. BD Biyobilimleri, Franklin Lakes, NJ.
Regen-BCT tüpü. RegenKit; RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
Santrifüj  RegenPRP Centri. RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
BD Venflon Pro Safety 22G x 1.00 inç (0.9 mm x 25 mm). BD Biyobilimleri, Franklin Lakes, NJ.
SPSS İstatistik Sürüm 19.0IBM Corp., Armonk, NY, ABD.
Konfokal taramalı lazer oftalmoskop & nbsp;Nidek Inc, Fremont, CANidek F10 
Cirrus 5000 Spektral Alan-Optik Koherens TomografiCarl Zeiss Meditec AG, Jena, Almanya  SD-OKT 
Maia 100809 Mikroperimetri CenterVue S.p.A., Padua, İtalya
Oküler elektrofizyoloji elektromedikal sistemi,C.S.O., S.r.l., Scandicci, İtalya  ERG için Retimax 

Kaynaklar

  1. Daftarian, N., Kiani, S., Zahabi, A. Regenerative therapy for retinal disorders. J. Ophthalmic Vis. Res. 5, 250-264 (2010).
  2. Thanos, C., Emerich, D. Delivery of neurotrophic factors and therapeutic proteins for retinal diseases. Expert. Opin. Biol. Ther. 5, 1443-1452 (2005).
  3. Cao, W., et al. In vivo protection of photoreceptors from light damage by pigment epithelium-derived factor. Inv. Ophthalmol. Vis. Sci. 42, 1646-1652 (2001).
  4. Bhutto, I., Lutty, G. Understanding age-related macular degeneration (AMD): Relationships between the photoreceptor/retinal pigment epithelium/Bruch's membrane/choriocapillaris complex. Mol. Aspects Med. 33 (4), 295-317 (2012).
  5. McHarg, S., Brace, N., Bishop, P. N., Clark, S. J. Enrichment of Bruch's membrane from human donor eyes. J. Vis. Exp. (105), (2015).
  6. Kevy, S. V., et al. Preparation of growth factor enriched autologous platelet gel. Transactions of the Society for Biomaterials 27th Annual Meeting. , St. Paul, Minnesota, USA. April 24-29 (2001).
  7. Schaffler, A., Buchler, C. Concise review: adipose tissue-derived stromal cells-basic and clinical implications for novel cell-based therapies. Stem Cells. 25, 818-882 (2007).
  8. Filatov, V. P. Tissue therapy. Med. Gen. Fr. 11, 3-5 (1951).
  9. Pelaez, O. Retinitis pigmentosa. Cuban experience. , Editorial Cientifico Técnica. La Habana, Cuba. (1997).
  10. Meduri, R., et al. Effect of basic fibroblast growth factor on the retinal degeneration of B6(A)- Rperd12/J (retinitis pigmentosa) mouse: a morphologic and ultrastructure study. ARVO 2007 Annual Meeting. , Fort Lauderdale. May 6-10 (2007).
  11. Limoli, P. G., Vingolo, E. M., Morales, M. U., Nebbioso, M., Limoli, C. Preliminary Study on Electrophysiological Changes After Cellular Autograft in Age-Related Macular Degeneration. Medicine. 93 (29), 355(2014).
  12. Tischler, M. Platelet rich plasma: The use of autologous growth factors to enhance bone and soft tissue grafts. N. Y. State Dent. J. 68, 22(2002).
  13. Zuk, P. A., et al. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. Mol. Biol. Cell. 13 (12), 4279-4295 (2002).
  14. Lin, K. J., et al. Topical administration of orbital fat-derived stem cells promotes corneal tissue regeneration. Stem Cell Res. Ther. 4 (3), 72(2013).
  15. Limoli, P. The retinal cell-neurorigeneration. Principles, applications and perspectives. The growth factors. , FGE Reg. Canelli (AT). 159-206 (2014).
  16. Coleman, W. P., et al. Guidelines of care for liposuction. J. Am. Acad. Dermatol. 45, 438-447 (2001).
  17. Lawrence, N., Coleman, W. P. Liposuction. J. Am. Acad. Dermatol. 47, 105-108 (2002).
  18. Kamao, H., et al. Characterization of human induced pluripotent stem cell-derived retinal pigment epithelium cell sheets aiming for clinical application. Stem Cell Reports. 23 (2), 205-218 (2014).
  19. Dang, Y., Zhang, C., Zhu, Y. Stem cell therapies for age-related macular degeneration: the past, present, and future. Clin. Interv. Aging. 10, 255-264 (2015).
  20. Nebbioso, M., Livani, M. L., Steigerwalt, R. D., Panetta, V., Rispoli, E. Retina in rheumatic diseases: Standard full field and multifocal electroretinography in hydroxychloroquine. Clin. Exp. Optom. 94 (3), 276-283 (2011).
  21. Wang, P., Mariman, E., Renes, J., Keijer, J. The secretory function of adipocytes in the physiology of white adipose tissue. J. Cell. Physiol. 216, 3-13 (2008).
  22. Chen, G., et al. VEGF-Mediated Proliferation of Human Adipose Tissue-Derived Stem Cells. PloS One. 8, 73673(2013).
  23. Bagchi, M., et al. Vascular endothelial growth factor is important for brown adipose tissue development and maintenance. FASEB J. 27, 3257-3271 (2013).
  24. Carron, J. A., et al. Cultured human retinal pigment epithelial cells differentially express thrombospondin-1, -2, -3,and -4. Int. J. Biochem. Cell. Biol. 32, 1137-1142 (2000).
  25. Kim, S. Y., et al. Expression of pigment epithelium-derived factor (PEDF) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in sickle cell retina and choroid. Exp. Eye Res. 77, 433-445 (2003).
  26. Limoli, P. G., Limoli, C., Vingolo, E. M., Scalinci, S. Z., Nebbioso, M. Cell surgery and growth factors in dry age-related macular degeneration: visual prognosis and morphological study. Oncotarget. 7 (30), 46913-46923 (2016).
  27. Ueki, Y., Reh, T. A. EGF stimulates Müller glial proliferation via a BMP-dependent mechanism. Glia. 61, 778-789 (2013).
  28. Kozlowski, M. R. RPE cell senescence: A key contributor to age-related macular degeneration. Med. Hypotheses. 78, 505-510 (2012).
  29. Schneider, A., et al. The hematopoietic factor G-CSF is a neuronal ligand that counteracts programmed cell death and drives neurogenesis. J. Clin. Invest. 115, 2083-2098 (2015).
  30. Yin, Y., et al. Oncomodulin is a macrophage-derived signal for axon regeneration in retinal ganglion cells. Nat. Neurosci. 9, 843-852 (2006).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Suprakoroidal GreftOtolog HücrelerKuru AMDLimoli Retinal Restorasyon TekniğiStromal Vasküler FraksiyonTrombosit Zengini PlazmaAdipoz Kaynaklı Kök HücrelerKonfokal Tarama Lazer OftalmoskopSpektral Alan-OCTMikroperimetre Testi
Rejeneratif tedavisi ile Suprachoroidal hücre otogrefti içinde Kuru yaşa bağlı makula dejenerasyonu: ön Vivo içinde rapor
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.