Yöntem makalesi

Yüksek işlem hacmi sterilizasyon Arabidopsis tohum için standart yöntem

DOI:

10.3791/56587

⸱

17 Ekim 2017

 ,  ,  ,  , 
1Arabidopsis Biological Resource Center, Center for Applied Plant Sciences, The Ohio State University, 2Department of Molecular Genetics, Center for Applied Plant Sciences, The Ohio State University

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışmanın amacı çamaşır suyu ve klor gazı sterilizasyon steril ortam üzerinde yetiştirilen bir aralığı Arabidopsis genotip tohum çimlenmesi üzerindeki etkilerini belirlemek için yapıldı. En iyi duruma getirilmiş sterilizasyon protokolleri tatmin edici tohum hayatta kalma sağlarken mikrobiyal kirleticiler gelişimini engellemek için geliştirilmiştir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Arabidopsis thaliana (Arabidopsis) fidan sık sık steril ortamda yetişkin olmak gerekir. Bu mikrobiyal kirleticiler tohum yüzeyinde mevcut gelişimini önlemek için önceden tohum sterilizasyon gerektirir. Şu anda, Arabidopsis tohum sterilize labs arasında biraz farklılık ve değil standart koşullarda iki ayrı sterilizasyon teknikleri kullanarak, genellikle yalnızca kısmen etkili sterilizasyon veya aşırı tohum mortalite kaynaklanan. Bu yöntemlerin çoğu Ayrıca çok sayıda farklı genotip tohum hatları kolayca ölçeklenebilir değildir. Teknolojileri Arabidopsis yüksek üretilen iş analizi için çoğalırlar devam ederken, çok sayıda farklı genotip tohumları sterilizasyon için standart teknikleri bu tür deneyler yürütmek için gerekli hale gelmektedir. Birkaç Arabidopsis satır yanıt iki farklı sterilizasyon teknikleri için tohum çimlenme oranı ve mikroplar ve diğer patojenleri ile tohum bulaşma düzeyine göre değerlendirilmiştir. Tedaviler ajanlar ve maruz kalma, Arabidopsis tohum sterilizasyon için en uygun koşulları belirlemek için kombine kez sterilize farklı konsantrasyonlarda dahil. En iyi duruma getirilmiş iletişim kuralları için iki farklı sterilizasyon yöntemleri geliştirilmiştir: çamaşır suyu (sıvı fazlı) ve her iki kaynaklanan yüksek tohum çimlenme oranları ve en az mikrobiyal kirlenme klor (Cl2) gaz (buharı fazlı). Bu iletişim kurallarının yardımcı programı hem vahşi türü ve mutasyona uğramış tohum çimlenme potansiyelleri bir dizi test aracılığıyla betimlenir. Bizim sonuçlar sterilizasyon zararlı etkileri ile optimum çimlenme potansiyeli daha düşük tohum için gözlendi, ancak tohum etkili olmadan aşırı tohum ölüm, iki yöntemden herhangi birini kullanarak sterilize olduğunu gösterir. Buna ek olarak, bir denklem araştırmacılar standart klor gazı sterilizasyon şartları hava geçirmez farklı boyutlarda kapsayıcılarına etkinleştirmek için geliştirilmiştir. Burada açıklanan protokollere izin ver kolay, etkili ve ekonomik tohum sterilizasyon çok sayıda Arabidopsis satırları için.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Arabidopsis thaliana (Arabidopsis) bitki Biyoloji1,2,3temel ve uygulamalı araştırma için ana model organizmadır. Ise Arabidopsis büyüme için standart koşullar iyi kurulmuş4olabilirdi, tohum sterilizasyon tohum canlılığı üzerinde etkisini titizlikle test edilmemiştir. Plakalar veya kutulara katı ortam rutin Arabidopsis fidan ateş ve kök fenotipleri gözlenmesi, erken yavru bir popülasyondaki homozigoz ölümcül mutantlar tanımlaması gibi birçok deneysel uygulamalar için büyüme kolaylaştırmak için kullanılır aşamaları, yalıtım patojen ücretsiz doku, fide doku, transformants veya ilaca dirençli bitkiler seçimi ve değerlendirmesi çimlenme1,2,3,4 büyük miktarda koleksiyonu . Bir serada yetiştirilen bitkiler tohum hasat veya büyüme odası zaman zaman mikroorganizmalar ve toz ile kirlenmiş. Arabidopsis fidan steril ortam türleri farklı büyüme önceki tohum sterilizasyon gibi mantar ve bakteri tohum yüzeyinde mevcut mikrobiyal kirleticiler kaldırmak için gerektirir. Bir etkili tohum sterilizasyon rejim kullanımı yüksek çimlenme, minimum kirlenme ve güçlü bitki büyüme dengesi için önemlidir.

Arabidopsis tohum sterilizasyon için kullanılan iki en yaygın yöntem ticari çamaşır suyu (sıvı fazlı) ve klor gazı (buharı fazlı) temel alır. Çeşitli prosedürler her iki sıvı fazlı sterilizasyon1,4,5,6,7,8,9 için istihdam edilmiştir , Arabidopsis 10 ve buharı fazlı sterilizasyon8,10,11,12,13,14,15 tohum ,16. Ancak, bu yordamları kullanılan genotip tohum sterilizasyon yerine getirmeye etkili olmuştur iken, tohumlar üzerinde farklı sterilizasyon tedavilerin farklı genotip etkisi ayrıntılı bir analizini bildirilmemiştir. Bu nedenle, bu sterilizasyon işlemleri en iyi duruma getirme etkin sterilizasyon yüksek çimlenme oranı ile birleştirilmiştir koşulları tanımlamak için gereklidir.

Arabidopsis biyolojik kaynak merkezi (ABRC) benzersiz bir) dahili olarak uygulanan kalite kontrol prosedürlerinin toplama ve b) take avantajı ve kullanıcı geribildirim yanıt olarak farklı genotip çeşitli tohum canlılığı sınamak için konumlandırılmış tohum çimlenme hakkında. Tohum çimlenme Arabidopsis aralığı genotip, çeşitli sterilizasyon yöntemleri etkilerini belirlemek için hedefleri burada sunulan deneyler idi. En az patojen bulaşma koruyarak yüksek tohum çimlenme fiyatlarına neden en iyi duruma getirilmiş sterilizasyon işlemleri çamaşır suyu ve klor gazı sterilizasyon için sunulmaktadır.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. 1 x Murashige ve Skoog (MS) orta hazırlanması

  1. ekleyin 4,31 g MS Bazal tuz karışımı, 10 g Sükroz ve 0.5 g 2-(N-Morpholino) ethanesulfonic asit (MES) 0, 8 L distile su ve çözülmeye heyecan içeren bir ölçek için. Kontrol edin ve pH 1 M potasyum hidroksit (KOH) kullanarak 5,7 için ayarlayın. 1 yapmak için distile su ekleyin L.
  2. Medya iki 1 L şişe 500 mL bölün. Agar 5 g için her şişe ekleyin. Kapak serbest bırak.
  3. Otoklav 121 ° c, 15 şişe manyetik heyecan barda PSI 20 dk için.
  4. Isıyla sonra düşük hızda karıştırın tabakta şişe yerleştirin ve 45-50 ° C'ye kadar (şişe çıplak elle tutulabilen) soğutmak MS orta sağlar.
  5. Bu adımından başlayarak, laminar akış kukuIeta steril koşullarda tüm adımları uygulayın. 500 µL Ekle Gamborg ' s vitamini her şişe ve vitamini çözüm olarak dağıtabilmenizi MS orta heyecan için çözüm.
  6. Yeterli medya kalıplara yaklaşık yarım plaka derinliği karşılamak için dök.
  7. İzin plakaları agar kuvvetlendirmek izin vermek 1 h için oda sıcaklığında soğumaya.
    Not: hemen kullanılmak üzere tabaklar, Plastik poşete ve 4 ° C'de (buzdolabı sıcaklığı) depolamak. Kapalı plakaları, kutuları veya katılaşmış agar tüplerini 4 ° c hava geçirmez bir kap içinde birkaç hafta saklanabilir.

2. Sterilizasyon Arabidopsis tohum çamaşır suyu ile

  1. hazırla MS plakaları Protokolü'nün 1 kısmı uyarınca. Otoklav MS Media aynı anda distile su 100 mL. Bu daha sonra durulama suyu olarak ve tohumlar askıya kaplama yardım etmek için kullanın.
    Not: arzu edilirse, %0,8 agar karışım (w/v) (örneğin phytagar) da bu adımda autoclaved olabilir. Agar karışım için distile su kaplama sırasında yedek olabilir (Adım 2.5.3.). Agar karışım ilave viskozite alanı tohumlar plaka veya bitki üzerinde satırları gerekirse kolaylaştırır.
  2. Hazırla % 50 (v/v) tohumları sterilizasyon için kullanılmak üzere çözüm çamaşır suyu. Çamaşır suyu sulandırmak için 100 mL distile su 100 mL çamaşır suyu ekleyin. 50 µL ara 20 deterjan, çamaşır suyu çözüm.
    Not:-Ebilmek var olmak stok hazır çamaşır suyu çözüm için yukarı bir ay için sadece steril koşullarda açıldığında sürece.
  3. Aliquot 100 tohum içine 1.5 mL microcentrifuge tüp.
  4. % 50 çamaşır suyu çözüm kullanarak tohum sterilize.
    1. Bir laminar akış başlık, tohum içeren microcentrifuge tüp 500 µL % 50 çamaşır suyu çözüm ekleyin. Tohumlar çamaşır suyu çözümde askıya için tüp alt dokunun.
      Not: Alternatif olarak, bir rotator veya platform Çalkalayıcı askıya tohumlar tutmak için kullanılabilir.
  5. Çamaşır suyu çözüm tüp durulayın.
    1. 10 dakika sonra bir pipet veya sonunda bir pipet ucu ile donatılmış bir aspiratör kullanarak microcentrifuge tüp çamaşır suyu çözüm kaldırmak.
    2. Ekle 500 µL steril distile su tüp. Tüp kapatın ve karıştırmak için tersine çevirin. Tohumları tüp altına yerleşmek için izin verir. Tohum dikkatle tüp altına yerleşmiş bir kez çamaşır suyu çözüm pipetting tarafından çıkarın. Bu işlem 6 kez durulama işlemi yineleyin.
    3. Tohum askıya için tüp autoclaved distile su 1 mL ekleyin.
  6. Sterilize tohumlar MS plakaları üzerinde plaka.
    1. Bir laminar akış başlık, hisse senedi adı ve geçerli tarihi ile MS plaka alt etiket.
    2. Tohum microcentrifuge tüp MS plaka üzerine dökün. Tohum steril, tek kullanımlık inoculating döngü veya steril pipet ucu kullanarak MS plaka çevresinde yayıldı.
      Not: Eğer tohum satırları ekili olabilir için bir pipet ile 200 µL bahşiş tohumlar istenen pozisyonlarda ayrı ayrı yerleştirmek için kullanılabilir. Tohum akışını artırmak için 3-5 mm tarafından makas kullanarak sonuna pipet ucu kesilmiş olabilir. Herhangi bir yanlış yerleştirilmiş tohum veya kümeleri tohum sonra yeniden konumlandırılmış veya tek kullanımlık steril bir inoculating döngü kullanarak ayrılmış.
    3. Yer arka MS plaka laminar akış Hood yarısı kapalı kapak ile. MS plaka buharlaşır aşırı su izin.
    4. Kapağı MS tabağa yerleştirin. Mühür plaka gözenekli kağıt cerrahi ile sarma tarafından MS plaka bant (Tablo reçetesi görmek).

3. Sterilizasyon Arabidopsis tohum klor gazı ile

  1. hazırla MS plakaları Protokolü'nün 1 kısmı uyarınca. Otoklav MS Media aynı anda distile su 100 mL; Bu daha sonra tohum kaplama yardım askıya yardımcı olmak için kullanılacaktır.
    Not: arzu edilirse, %0,8 agar karışım (w/v) (örneğin phytagar) da bu adımda autoclaved olabilir. Agar karışım için distile su kaplama sırasında yedek olabilir (Adım 3.6.2.). Agar karışım ilave viskozite alanı tohumlar plaka veya bitki üzerinde satırları gerekirse kolaylaştırır.
  2. Sterilizasyon işlemine geçmeden önce çamaşır suyu ve hidroklorik asit (HCl) klor gazı üretmek için gerekli miktarlarını hesaplamak.
    1. Sterilizasyon için gerekli % 6,1 Cl 2 üretmek için gerekli HCl miktarını hesaplamak.
    2. Aşağıdaki formülü kullanın:
      figure-protocol-1
      ile sterilizasyon konteyner hacmi olarak 7000 mL ve %6.1 Cl 2; olarak HCl hacminin 3 mL olmak hesaplanır.
      Not: ek tablo 1 konteyner ve % Cl 2 farklı birimler için hesaplama gerçekleştirmek için programlanmış bir elektronik tablodan sağlanan.
  3. Aliquot 100 tohum 0.5 mL microcentrifuge tüp içine. Her şişe için Kapaklar kapatın, şişeleri plastik bir rafa yerleştirin ve bir kenara koyun.
    Not: uygun şartlarda depolandıkları sürece tohum zaman bu noktada uzun süre saklanabilir. Saklama koşulları protokol bölümünde 3.3.2 Rivero ve arkadaşları 4 tarafından bulunabilir. 96-şey plaka biçim-ebilmek da var olmak kullanılmış.
  4. Klor gazı sterilizasyon gerçekleştirmek gerekli malzemeleri hazırlayın.
    1. Elde çamaşır suyu ve HCl depolama konumlarından.
    2. Büyük parafin bir şerit film (Tablo reçetesi görmek) 3.5.3. adımda kullanmak için kesim. sterilizasyon konteyner mühür için.
    3. Hangi sterilizasyon gerçekleşecek bir duman başlık içinde Kapaklı plastik kap yerleştirin. Tohum şişeleri üzerinde Kapakları açın ve tüm tohum raf plastik konteyner yerleştirin.
  5. Klor gazı sterilizasyon oda sıcaklığında gerçekleştirmek.
    Dikkat: çamaşır suyu ve asit ile ayrı ayrı çalışır. Dökülen riskini azaltmak için kapağını her iki şişe bırakmayın. Uygun kişisel koruyucu ekipman (PPE) eldiven ve önlük dahil olmak üzere kullanın. Çamaşır suyu ya da asit eldiveni sıçramalarına, eldiven diğer malzemeler tutmadan önce değiştirin. Her zaman eldiven duman başlıklı çamaşır suyu ya da asit kirlenme durumunda kaldırın.
    1. 250 mL kabı kapsayıcı içinde yerleştirin ve çamaşır suyu 100 mL ekleyin.
      Not: Tepki HCl ve çamaşır suyu arasında en az 22 birimleri fazla çamaşır suyu gerektirir. Reaksiyon HCl tüketmek ve Cl 2 gaz su ve Sodyum Klorür (NaCl) yan serbest bırakarak çamaşır suyu. Çamaşır suyu büyük bir fazlalığı kullanarak ek HCl d tüketimi sağlarSodyum bikarbonat (NaHCO 3) azaltır havalandırma dönemi zamanlayıcısını ihtiyaç bertarafı için çözüm nötralize etmek.
      Uyarı: En az iki kez toplam sıvı hacmini çamaşır suyu + HCl kabı olmalıdır. Bu zarar tohumlar, giyim çamaşır suyu veya maruz tenini yakabilecek kabı sonraki adımı sırasında kaçan su sıçramalarına engeller.
    2. Ekle 3 mL HCl çamaşır suyu içeren kabı.
      Dikkat: İlk tepki kabarcıklar, özellikle de gaz konsantrasyonları 6.1 daha yüksek üretecek. Uzun kollu önlük için bu adım gereklidir.
    3. Sterilizasyon konteyner kapatın ve hemen parafin film ile mühür.
    4. İzlemek sterilizasyon konteyner gaz birikimi sağlamak için sterilizasyon zaman sırasında; klor gazı birikimi bir soluk sarı sis kapsayıcı içinde olarak görünür olmalıdır.
      Dikkat: Sterilizasyon konteyner içinde basınç kapağı yendiniz değil emin olmak için düzenli olarak kontrol edin veya film alkol. Kapağı atından geldi veya parafin film gevşek geldi, kapağını kapatın ve dikkatle kapsayıcı ek katmanı parafin film ile sarın.
    5. Sonra 1 h-sterilizasyon konteyner parafin film kaldırma ve köşelerinden kapağını açarak dönemini, aç. 3 h reaksiyon tamamlayıp klor gazı ortadan kaldırmak havalandırma kapsayıcı izin.
    6. Microcentrifuge tüpler tohum rafa Kapaklar kapatın.
      Not: Steril tohumları kuru durumda depolandıkları sürece kaplama, zamana kadar saklanabilir.
    7. Tohum rafa kaldırmak ve laminar akış mahallede yerleştirin.
    8. Klor gazı reaksiyon
      1. eklemek 1.5 g NaHCO 3 toz yavaş yavaş çamaşır suyu/HCl solüsyon içeren kabı için etkisiz hale getirmek ve çözüm NaHCO 3 çözülmeye bir cam çubuk ile karıştırın. Karbondioksit (CO 2) gaz kabarcıkları oluşturan durduruldu kadar NaHCO 3 eklemeye devam.
        Uyarı: yavaş yavaş su sıçramalarına engellemek için ekleyin. Eldiven ve önlük gibi uygun KKE kullanın.
      2. PH şeritler ya da bir pH metre kullanarak çözüm pH test. Gerektiği kadar çözüm pH nötr ise ek NaHCO 3 ekleyin (pH 7,0). Bu noktada çözüm duman hood kaldırıldı olabilir ve tüm uygulanabilir elden çıkarma kurallarına göre bertaraf.
        Dikkat: Herhangi bir koku elden çıkarma sırasında fark varsa, o zaman çözüm hemen duman hood için döndürülmelidir.
  6. Sterilize tohumlar MS plakaları üzerinde plaka.
    1. Bir laminar akış başlık, hisse senedi adı ve geçerli tarihi ile MS plaka alt etiket.
    2. Ekle 500 µL tohumlar askıya almak için her microcentrifuge Tube steril distile su. Tohum MS plaka üzerine dökün ve tohumlar eşit olarak steril, tek kullanımlık inoculating döngü veya steril pipet ucu kullanarak plaka çevresinde yayıldı.
    3. Yer arka MS plaka laminar akış Hood yarısı kapalı kapak ile. MS plaka buharlaşır aşırı su izin.
    4. Kapağı MS tabağa yerleştirin. Gözenekli kağıt cerrahi bant ile plaka sarma tarafından MS plaka mühür.

4. Arabidopsis büyüme MS plakaları

  1. 4 ˚C ve ortam nemi üç gündür üst kapağı ile tabak yerleştirin.
    Not: Bu işlem stratifikasyon denir ve bireysel tohumların çimlenme eşitlemek için hizmet vermektedir.
  2. Plakaları büyüme ortamına transfer.
    1. 23 ° C sıcaklığında saklayın ve 120-150 µmol/m 2 s 16 h ışık / 8 saat karanlık ışık şiddeti photoperiod. Yer kaplamalar üst kapaklı grow ortamına düz kökleri orta büyümek bu yüzden.
  3. İzin plakaları fidan büyümek için 8 gün.
    Not: Bir 8 günlük büyüyen süre geç tohum çimlenme takımıdır sağlar. Tabak attı 8 gün er eğer tüm tohumlar germinated.
  4. Çimlenme gore puan edinildi.
    1. Kaydı bu germinated ve bu değil germinated tohum sayısı. Germinated tohum sayısına bölünmesi ile çimlenme oranı hesaplamak tohum plaka üzerinde toplam sayısıyla.
      Not: Radicle tohum kat dışında öngörülen ve iki cotyledons görülebilir zaman çimlenme sayılır.
    2. Ayrıca sterilizasyon şartları etkinliğini belirlemek için kalıp tarafından etkilenen tohum saymak.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bir açık alan, sera veya büyüme odasından toplanan Arabidopsis tohum bazen1,4mantar ve bakteri gibi çeşitli mikroorganizmalar tarafından kirlenmiş. Böylece, özellikle tohum arzı sınırlı olduğunda tohum steril ortamda takımıdır plakaları, kontaminasyon nedeniyle özellikle zor olabilir. Bunların sonuçlarını aşağıda sunulmuştur, çamaşır suyu ve klor gazı sterilizasyon için en iyi duruma getirilmiş iletişim kuralı bu sorunu en aza indirir ve yüksek üretilen işi uygulamalar için gereken tohum canlılığı korur.

Çamaşır suyu sterilizasyon Arabidopsis Col-0 tohumların çimlenmesi üzerine etkileri

Çamaşır suyu için tohum sterilizasyon çok sayıda bitki türleri içinde en sık kullanılan ajandır. Sterilizasyon ajanı ve maruz kalma süresi en iyi konsantrasyon türler arasında değişir. Bir dizi Protokolü Arabidopsis tohumlar1,4,5,6,7,8,9 sterilizasyon için çamaşır suyu kullanma istihdam edilmiştir , 10. çamaşır suyu ile beş farklı pozlama süresi dönemleri test edildi ve sonuçları dört farklı konsantrasyonları sunulmaktadır şekil 1. Tedaviler Columbia vahşi-tipi (Col-0) tohumları için uygulandı. Çamaşır suyu toplama Col-0 tohumların çimlenmesi üzerindeki etkisini çeşitli sterilizasyon saate bağlı olarak çamaşır suyu toplama ve sterilizasyon saat arasında önemli bir etkileşim gösterildiği şekilde (şekil 1, P < 0,001, ANOVA-Varyans analizi).

Deneylerden sterilizasyon kez 5 ila 10 dk arasında eşit yüksek çimlenme oranı Col-0 tohum (şekil 1) tedavileri tüm çamaşır suyu konsantrasyonları ile sonuçlandı. Yüksek çimlenme oranları da her sterilizasyon zaman için % 40 ve % 50 konsantrasyonları ev çamaşır suyu için tespit edildi. 10 dakika uzun süre önemli bir sonuçlandı için Tedaviler % 80 ve % 100 çamaşır suyu ile azaltmak içinde daha kısa iliklerine Times'a göre çimlenme oranı (P < 0,01, ANOVA). % 80 ve 0 20 dk tedavisi çamaşır suyu için Ayrıca, çimlenme önemli ölçüde karşılık gelen % 40 ve % 50 çamaşır suyu tedavileri karşılaştırıldığında azalma (P < 0,001, ANOVA).

Tohum ağartma ve yüksek çamaşır suyu konsantrasyonları 15 dakika veya daha uzun kullanırken kuruyup çeşitli düzeyleri görüntülenir. Ek olarak nispeten yüksek (2) tohum mortalite, germinated tohum kez büyüme kusurları, cotyledons ve hypocotyls açılmak ve uzamış, bir başarısızlık yansıyan gösterdi bu koşullarda sterilize gelişimsel durması sonucu. En tedaviler (20 dışarı-in 14) tamamen edildi kalıp-genel kalıp düzeyi ortalama %0,21 ± 0,003 (Tablo 1) kaynaklanan Alerjik,.

Çünkü yüksek çimlenme yüzdesi iyi yüzey patojen büyüme inhibisyonu ile kombine tedavi ile % 50 çamaşır suyu ve 10 dk sırılsıklam bir zaman en iyi sterilizasyon rejimi seçildi. Bu tedavi aşağıda açıklandığı gibi çamaşır suyu sterilizasyon farklı mutant satırlarındaki etkisini test etmek için seçilmiş.

Klor gazı sterilizasyon Col-0 tohumların çimlenmesi üzerine etkileri

Klor gazı sterilizasyon şartları en iyi duruma getirmek için klor gazı üç farklı konsantrasyonlarda Col-0 tohum iki süreler (Tablo 2) için sterilize etmek için kullanılmıştır. Gaz toplama göre konsantre HCl hacmi ve aşağıdaki denklemi kullanarak sterilizasyon konteyner hacmi da hesaplanır:

figure-results-1

Bu denklem varsayarak 12.3 M HCl, 23 ° C sıcaklık ve standart atmosfer basıncı 101.3 kPa, ideal gaz Yasası kullanılarak türetilmiştir.

Klor gazı konsantrasyonu Col-0 tohumların çimlenmesi üzerindeki etkisini sterilizasyon zaman zaman ve konsantrasyon faktörler arasında önemli bir etkileşim tarafından belirtildiği şekilde bağlı gösterilmiştir (şekil 2A, P < 0,01, ANOVA) . Klor gazı konsantrasyonu 1 h sterilizasyon için tabi Col-0 tohumların çimlenme üzerinde önemli bir etkisi vardı. Bu sterilizasyon zamanla tüm klor gazı konsantrasyonları benzer şekilde çimlenme, % 85 üzerinde yüksek düzeyde terfi (P > 0,05, ANOVA). Öte yandan, klor gazı, iki alt gaz konsantrasyonları ile karşılaştırıldığında en yoğun çimlenme oranı önemli bir azalma 3 h-uzun sterilizasyon sonuçlandı (P <

<<>

<<>

figure-results-2
<<

figure-results-3
<

figure-results-4
<

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ne zaman Arabidopsis tohum steril ortamda büyüyen, sterilizasyon çeşit uygulanması gerekir. Çamaşır suyu ve klor gazı sterilizasyon uygulamaları benzer çimlenme oranı ve kalıp büyüme inhibisyon içinde neden. Ben de sterilizasyon yöntemi ile yüksek çimlenme potansiyel tohum çimlenme fiyatına belirgin bir şekilde azaltılmasına neden olur; Ancak, çamaşır suyu sterilizasyon önemli sigara da olsa, çimlenme oranı artış gaz sterilizasyon için (şekil 3A) karşılaştırıldığında daha düşük çimlenme potansiyeli (20-%70), küçük, nedeniyle hatları için önerilir.

40-%100 10 dakikaya kadar için çamaşır suyu konsantrasyonları ile Arabidopsis tohum sterilize tatmin edici çimlenme yüzdeleri ve etkili kalıp bastırma sağlar. Her ne kadar % 40 daha az çamaşır suyu konsantrasyonu sağlamak yeterli sterilizasyon % 40 bir konsantrasyon veya daha yüksek garanti etkili sterilizasyon bile ağır kirlenmiş tohum birçok kullanarak çoğu tohum birçok için. Sterilizasyon 10 dk çamaşır suyu konsantrasyonlarının eşit kullanırken aşmayacak şekilde önemli veya yüksek tohum mortalite ve fide geliştirme hataları önlemek için % 80 daha yüksek.

Arabidopsis tohumları % 6,1 veya %16,5 1s sonuçlarında yüksek çimlenme oranları ve yeterli kalıp ortadan kaldırılması için klor gazı konsantrasyonları ile tedavi. Düşük klor gazı konsantrasyonu (% 2.1) süresi sterilizasyon 3 h artırarak başarıyla kullanılabilir.

Birkaç satır sterilize edilecek gerektiğinde, bir çözümde sıvı sterilizasyon % 50 çamaşır suyu 10 min için önerilir. Kadar satır hızlı ve kolay bir daha az manipülasyon ile sterilize beri için daha fazla sayıda satır gaz sterilizasyon %6.1 1 h için bir gaz konsantrasyon ile daha iyi bir seçenektir.

Bizim sonuçlar farklı genotip tohumları çok sayıda ve daha düşük çimlenme potansiyel ile tohum sterilizasyon için standart koşullar sağlar. Tek sınırlama bu sterilizasyon tekniklerin onlar tohum çimlenme oranı nedeniyle geniş tohum mortalite % 20 daha az için uygulanamaz olduğunu. Sonication17sterilizasyon yokluğu çimlenme oranını artırmak için gibi alternatif yöntemler bu gibi durumlarda yararlı olabilir.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ifşa gerek yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Gauri Datta deneysel malzeme hazırlama konusunda ona yardım için teşekkür etmek istiyorum. Ayrıca el yazması eleştiri için Bettina Wittler ve James Mann için sana şükrediyoruz. Bu eser NSF hibe DBI-1049341 ve MCB-1143813 tarafından desteklenmiştir.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
0.65 mL Mikrosantrifüj tüpleriGeneMateC-3260-5Sterilizasyon yapmak için Arabidopsis thaliana tohumlarının yerleştirildiği
1.7 mL Mikrosantrifüj tüpüyapmak için Arabidopsis thaliana tohumlarının yerleştirildiğiGeneMateC-3262-1
7 L plastik kapSistema1016265438Gaz sterilizasyonunun yapıldığı konteyner
Klorgazı oluşturma sürecinde kullanılanSigma-Aldrich320331
Tek kullanımlık steril aşılama döngüsüFisher Scientific22-363-603Döngüsü, Arabidopsis tohumlarını MS plakalarına yaymak veya konumlandırmak için kullanılır
Gamborg' s vitamin çözeltisiSigma-AldrichG1019MS ortamı yapımında kullanılan vitamin çözeltisi
Ev tipi çamaşır suyuCloroxRegular-BleachKlor gazı ve sıvı sterilizasyon oluşturma işleminde kullanılan kimyasal
MES hidratSigma-AldrichM2933MS ortamı yapımında kullanılan kimyasal
Mikro gözenekli cerrahi bant3M1530-1MS plakalarını kapatmak için kullanılan mikro gözenekli cerrahi kağıt bant
Murashige ve Skoog bazal tuz karışımı (MS)Sigma-AldrichM5524MS ortamı yapımında kullanılan kimyasal
Parafilm MBemis Company#PM996Sterilizasyon kabını kapatmak için kullanılan pararafin filmi
Petri kabı 100 X 15 mm Fisher ScientificFB0875713Arabidopsis thaliana pH indikatör şeritlerinin yetiştirilmesi amacıyla MS ortamının döküldüğü Petri
kaplarıWhatman2613991Nötralize klor ve sodyum bikarbonat çözeltisinin pH'ını kontrol etmek için kullanılır
PhytoagarFisher Scientific50-255-212Tohum kaplama sürecinde Arabidopsis tohumlarının süspansiyonuna yardımcı olmak için kullanılır
Sodyum bikarbonatSigma-AldrichS5761Klor gazı reaksiyonunu nötralize etme işleminde kullanılan kimyasal
SükrozSigma-AldrichS0389MS ortamı yapma sürecinde kullanılan kimyasal
Tween 20Fisher BioReagentsBP337-100Sıvı sterilizasyon sürecinde kullanılan kimyasal
Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.org CS70000(Col-0)Arabidopsis yabani tip tohumlar 
Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_037606CArabidopsis tohumları Grup 1
Arabidopsis thaliana tohumları; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.org1'in bir parçası olarak testte kullanılan Arabidopsis tohumları SALK_041402C Arabidopsis
thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.org SALK_059101CGrup 1 Arabidopsis thaliana tohumları ABRC'nin bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis tohumları
; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgGrupbir parçası olarak testte kullanılan Arabidopsis tohumları
; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgtohumlarının bir parçası olarak testte kullanılan Arabidopsis tohumları
ABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_072240CGrup 1'in bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis
tohumları Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_081989CGrup 1'in bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis tohumları
Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgGrup1'in bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis tohumları
Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_085049CArabidopsis tohumları Grup 1
Arabidopsis thaliana tohumları; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgGrup 1'in bir parçası olarak testte kullanılan Arabidopsis tohumları SALK_089717C Arabidopsis
thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.org SALK_107354CGrup 1'in bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis tohumları
Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_110111CGrup 1 Arabidopsis thaliana tohumları ABRC'nin bir parçası olarak testte kullanılan Arabidopsis tohumları
; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgGrup 1'in bir parçası olarak testte kullanılan Arabidopsis
tohumları SALK_111322C Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.org SALK_113109CGrup 1'in bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis
tohumları Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_114702CGrup 1'in bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis tohumları
Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_114872CGrup 1'in bir parçası olarak testte kullanılan Arabidopsis tohumları
Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_115657CArabidopsis tohumları Grup 1'in bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis
tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgGrup 1'in bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis tohumlarıSALK_116803C
Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_039445CGrup 2 Arabidopsis thaliana tohumları ABRC'nin bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis tohumları; Grup 2 Arabidopsis
parçası olarak testlerde kullanılan SALK_039782C www.arabidopsis.orgsipariş
Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgGruptohumlarının bir parçası olarak testte kullanılan Arabidopsis tohumları
ABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_045828CGrup 2'nin bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis
tohumları Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_048556CGrup 2'nin bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis
tohumları Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgGrup 2'ninbir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis tohumları
Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_049725Cbir parçası olarak testlerde kullanılır
; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgGrup 2'ninbir parçası olarak testte kullanılan Arabidopsis tohumları SALK_080816C Arabidopsis
thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.org SALK_081176CGrup 2 Arabidopsis thaliana tohumları ABRC'nin bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis tohumları
; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_081770Cbir parçası olarak testte kullanılan Arabidopsis tohumları
ABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgtohumlarının bir parçası olarak testte kullanılan Arabidopsis tohumları
ABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_082289C Grup 2'ninbir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis
tohumları Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.org SALK_082702CGrup 2'nin bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis tohumları
Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR www.arabidopsis.org aracılığıyla siparişSALK_083630CGrup 2'nin bir parçası olarak testte kullanılan Arabidopsis tohumları
Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_084635CArabidopsis tohumları Grup 2 Arabidopsis thaliana tohumları ABRC'nin bir parçası olarak testlerde kullanılır
; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgGrup 2'nin bir parçası olarak testte kullanılan Arabidopsis tohumlarıSALK_085337C
Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.org SALK_085656CGrup 2 Arabidopsis thaliana tohumları ABRC'nin bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis
tohumları; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgGrup2 Arabidopsis thaliana tohumlarının bir parçası olarak testte kullanılan SALK_093049C Arabidopsis
tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla siparişSALK_103332C www.arabidopsis.orgtohumlarının bir parçası olarak testte kullanılan Arabidopsis
tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.org SALK_105336CGrup 2'nin bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis
tohumları Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_105704CGrup 2'nin bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis
tohumları Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş verin www.arabidopsis.orgGrup2'nin bir parçası olarak testte kullanılan Arabidopsis tohumları
Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_109575CArabidopsis tohumları Grup 2
Arabidopsis thaliana tohumları; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgGrup 2'nin bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis tohumları SALK_110580C Arabidopsis
thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.org SALK_110617CGrup 2 Arabidopsis thaliana tohumları ABRC'nin bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis tohumları; Grup 2 Arabidopsis
thaliana tohumlarısipariş; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgtohumlarının bir parçası olarak testte kullanılan Arabidopsis tohumları
ABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_112097C Grup 2'ninbir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis
tohumları Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_113339CGrup 2'nin bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis tohumları
Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgGrup2'nin bir parçası olarak testte kullanılan Arabidopsis tohumları
Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_019535CABRC'nin bir parçası olarak testlerde kullanılır
; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgGrup 3'ün bir parçası olarak testte kullanılan Arabidopsis tohumları SALK_026478C Arabidopsis
thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.org SALK_046565CGrup 3'ün bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis
tohumları Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_049258CGrup 3 Arabidopsis thaliana tohumlarının bir parçası olarak testte kullanılan Arabidopsis
tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_049339C Arabidopsis thaliana tohumlarının bir parçası olarak testte kullanılan Arabidopsis
tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgGrup 3'ün bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis
tohumları Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_081292CGrup 3'ün bir parçası olarak testte kullanılan Arabidopsis tohumları
Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgGrup 3'ünbir parçası olarak testte kullanılan Arabidopsis tohumları
Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_083488CArabidopsis tohumları Grup 3 Arabidopsis thaliana tohumları ABRC'nin bir parçası olarak testlerde kullanılır
; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.org3'ünbir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis tohumları SALK_110573C Arabidopsis
thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.org SALK_112793CGrup 3'ün bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis tohumları
Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_113658Cbir parçası olarak testte kullanılan Arabidopsis
tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgGrup 3'ün bir parçası olarak testte kullanılan Arabidopsis tohumlarıSALK_113904C
Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_114673C Grup 3'ünbir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis tohumları
Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_114709CGrup 3'ün bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis tohumları
Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR www.arabidopsis.org aracılığıyla siparişverin SALK_115455CGrup 3'ün bir parçası olarak testte kullanılan Arabidopsis tohumları
Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_013186CArabidopsis tohumları Grup 4
Arabidopsis thaliana tohumları; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgGrup 4'ünbir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis tohumları SALK_018261C Arabidopsis
thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.org SALK_062509CGrup 4 Arabidopsis thaliana tohumları ABRC'nin bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis
tohumları; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_080639C Grup4 Arabidopsis thaliana tohumlarının bir parçası olarak testte kullanılan Arabidopsis tohumları
ABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.org SALK_088586Cthaliana4'ün bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis
tohumları Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_096651C Grup 4'ünbir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis
tohumları Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_106900CGrup 4'ün bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis tohumları
Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgGrup4'ün bir parçası olarak testte kullanılan Arabidopsis tohumları
Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_111051CArabidopsis tohumları Grup 4
Arabidopsis thaliana tohumları; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgbir parçası olarak testte kullanılan SALK_111245C Arabidopsis
tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.org SALK_113223CGrup 4 Arabidopsis thaliana tohumları ABRC'nin bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis tohumları
; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_121391CArabidopsis
tohumları Grup 4 Arabidopsis thaliana tohumlarının; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgGrup 4'ünbir parçası olarak testte kullanılan Arabidopsis
tohumları SALK_125097C Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR www.arabidopsis.org aracılığıyla siparişSALK_201905C Grup 4'ünbir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis
tohumları Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_210001CArabidopsis tohumları Grup 4'ün bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis
tohumları Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_000662CGrup 5'in bir parçası olarak testte kullanılan Arabidopsis tohumları
Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_029335CABRC'nin bir parçası olarak testlerde kullanılır
; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgGrup 5'in bir parçası olarak testte kullanılan Arabidopsis tohumları SALK_047760C Arabidopsis
thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.org SALK_071275CGrup 5'in bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis tohumları
Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_080530CArabidopsis
tohumları Grup 5 Arabidopsis thaliana tohumlarının; TAIR aracılığıyla siparişSALK_103881CGrup 5 Arabidopsis thaliana tohumlarının bir parçası olarak testte kullanılan Arabidopsis
tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_110864CGrup 5'in bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis
tohumları Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_120294CGrup 5'in bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis tohumları
Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş verin Grup5'in bir parçası olarak testte kullanılan Arabidopsis tohumlarıSALK_124390C
Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_132808CArabidopsis tohumları Grup 5
Arabidopsis thaliana tohumları; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgGrup 5'in bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis tohumları
Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.org SALK_139519CGrup 5'in bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis
tohumları Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_140643CArabidopsis tohumları Grup 5
Arabidopsis thaliana tohumlarının; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_142288CArabidopsis thaliana tohumlarının bir parçası olarak testte kullanılan Arabidopsis
tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.org SALK_143304CGrup 5'in bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis
tohumları Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_147597CGrup 5'in bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis tohumları
Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgGrup5'in bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis tohumları
Arabidopsis thaliana tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.orgSALK_081081CArabidopsis tohumları Grup 5 ve 1'in bir parçası olarak testte kullanılan Arabidopsis
tohumlarıABRC; TAIR aracılığıyla sipariş www.arabidopsis.org5 ve 2'nin bir parçası olarak testlerde kullanılan Arabidopsis tohumlarıSALK_107487C
tüp Sterilizasyon Tüpkonsantre HCl Kimyasalı ABRC'nin bir parçası olarak testlerde kullanılır Grup 1 Arabidopsis thaliana tohumları ABRC'nin SALK_063470C Grup 1 Arabidopsis thaliana SALK_072048C SALK_084124C ABRC'nin bir parçası olarak testlerde kullanılır thaliana tohumlarının bir aracılığıyla 2 Arabidopsis thaliana SALK_043037C SALK_049514C Arabidopsis tohumları Grup 2 Arabidopsis thaliana tohumları ABRC'nin Grup 2 Arabidopsis thaliana tohumlarının Grup 2 Arabidopsis thaliana SALK_082262C Grup 2 Arabidopsis thaliana SALK_106388C ABRC'nin bir parçası olarak testlerde kullanılır ABRC'nin bir parçası olarak testte kullanılan SALK_111584C www.arabidopsis.org SALK_111424C aracılığıyla Grup 2 Arabidopsis thaliana SALK_115837C Arabidopsis tohumları Grup 3 Arabidopsis thaliana tohumları SALK_056307C SALK_081597C Grup Grup 3 Arabidopsis thaliana tohumlarının ABRC'nin bir parçası olarak testlerde kullanılır Arabidopsis tohumları Grup SALK_110131C ABRC'nin bir parçası olarak testlerde kullanılır Grup 4 Arabidopsis thaliana tohumlarının bir parçası olarak testlerde kullanılır Arabidopsis tohumları Grup 5 Arabidopsis thaliana tohumları bir parçası olarak testlerde kullanılan tohumlar www.arabidopsis.org www.arabidopsis.org ABRC'nin bir parçası olarak testlerde kullanılırSALK_137036C bir parçası olarak testlerde kullanılır SALK_209076C Grup

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Weigel, D., Glazebrook, J. Arabidopsis: a laboratory manual. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, N.Y. (2002).
  2. Koornneef, M., Meinke, D. The development of Arabidopsis as a model plant. Plant J. 61 (6), 909-921 (2010).
  3. The Arabidopsis Genome Initiative. Analysis of the genome sequence of the flowering plant Arabidopsis thaliana. Nature. 408 (6814), 796-815 (2000).
  4. Rivero, L., et al. Handling Arabidopsis plants: growth, preservation of seeds, transformation, and genetic crosses. Methods Mol Biol. 1062, 3-25 (2014).
  5. Yamada, K., et al. Empirical analysis of transcriptional activity in the Arabidopsis genome. Science. 302 (5646), 842-846 (2003).
  6. Alonso, J. M., Stepanova, A. N. Arabidopsis transformation with large bacterial artificial chromosomes. Methods Mol Biol. 1062, 271-283 (2014).
  7. Savage, L. J., Imre, K. M., Hall, D. A., Last, R. L. Analysis of essential Arabidopsis nuclear genes encoding plastid-targeted proteins. PLoS One. 8 (9), e73291(2013).
  8. Podar, D. Plant growth and cultivation. Methods Mol Biol. 953, 23-45 (2013).
  9. Xu, W., et al. An improved agar-plate method for studying root growth and response of Arabidopsis thaliana. Sci Rep. 3, 1273(2013).
  10. Clough, S. J., Bent, A. F. Floral dip: a simplified method for Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana. Plant J. 16, (1998).
  11. Cederholm, H. M., Benfey, P. N. Distinct sensitivities to phosphate deprivation suggest that RGF peptides play disparate roles in Arabidopsis thaliana root development. New Phytol. 207 (3), 683-691 (2015).
  12. Ye, G. N., et al. Arabidopsis ovule is the target for Agrobacterium in planta vacuum infiltration transformation. Plant J. 19 (3), 249-257 (1999).
  13. Kuromori, T., et al. A collection of 11 800 single-copy Ds transposon insertion lines in Arabidopsis. Plant J. 37 (6), 897-905 (2004).
  14. Fiers, M., et al. The 14-amino acid CLV3, CLE19, and CLE40 peptides trigger consumption of the root meristem in Arabidopsis through a CLAVATA2-dependent pathway. Plant Cell. 17 (9), 2542-2553 (2005).
  15. Stepanova, A. N., Alonso, J. M. PCR-based screening for insertional mutants. Methods Mol Biol. 323, 163-172 (2006).
  16. O'Malley, R. C., Alonso, J. M., Kim, C. J., Leisse, T. J., Ecker, J. R. An adapter ligation-mediated PCR method for high-throughput mapping of T-DNA inserts in the Arabidopsis genome. Nat Protoc. 2 (11), 2910-2917 (2007).
  17. López-Ribera, I., Vicient, C. M. Use of ultrasonication to increase germination rates of Arabidopsis seeds. Plant Methods. 13 (31), (2017).

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Arabidopsis Seed SterilizationBleach SolutionChlorine GasSeed Germination RateMicrobial ContaminationLaminar Flow HoodFume HoodSterile Distilled WaterMS PlateSeed Stratification

İlgili makaleler