Method Article

Bleomycin ile fareler Airways önceden Merkezi Klima Orthotopic akciğer kanseri hücre Engraftment verimliliğini artırır

DOI:

10.3791/56650

⸱

June 28th, 2018

 ,  , 
1Department of Pathology, Yale University School of Medicine, 2Department of Medical Oncology, Yale University School of Medicine

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Biz önceden airways yaralanma ile Klima tarafından fare ciğerlerine akciğer kanser hücrelerinin orthotopic engraftment önemli ölçüde geliştirmek için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yaklaşım aynı zamanda akciğer microenvironment, metastatik yayılması, akciğer kanseri komorbiditeler içinde stromal etkileşimleri çalışmaya uygulanabilir ve daha verimli bir şekilde hasta oluşturmak için xenografts türetilmiş.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Akciğer kanseri biyolojik olarak heterojen bir ölümcül tedavi ateşe dayanıklı hastalıktır. Anlama ve etkili bir şekilde göğüs maligniteler tam klinik spektrumu için çeşitli insan akciğer kanseri alt türlerini ve aşamaları özetlemek ek hayvan modelleri ihtiyaç vardır. Homogreft veya xenograft modelleri çok yönlü ve tumorigenic kapasite vivo içindefare ya da insan kökenli malign hücreler kullanarak, miktar etkinleştirin. Ancak, önceden açıklanan yöntemleri akciğer kanseri hücre engraftment, farelerin orthotopic nakli hücrelerin ciğerlerine verimsizlik nedeniyle kanadı gibi fizyolojik olmayan sitelerdeki gerçekleştirilmiş. Bu çalışmada, orthotopic akciğer kanseri hücre engraftment fibrozis inducing Ajan bleomycin ile fareler airways önceden Klima tarafından geliştirmek için bir yöntem açıklanmaktadır. Bir prototip deney olarak, biz bu yaklaşım tümör hücreleri ya fare veya insan kaynakları, fareler çeşitli suşları aldığınız akciğer adenokarsinom alt türündeki engraft uygulanır. Biz airways bleomycin önce tümör hücre enjeksiyon ile ağır yaralı tümör hücreleri 0-17 engraftment artırır göstermek % 71-%100. Önemli ölçüde, bu yöntem Gelişmiş akciğer tümörü insidansı ve sonraki akıbet farklı modeller ve fare suşları kullanarak. Buna ek olarak, engrafted akciğer kanser hücrelerini akciğerlerden ilgili uzak organlara yaymak. Böylece, kurmak ve yeni orthotopic modelleri akciğer kanseri hücreleri veya biospecimen miktarda sınırlama ile korumak ve kantitatif akciğer kanser hücrelerini fizyolojik ilgili ayarları tumorigenic kapasitesini değerlendirmek için kullanılabilir bir protokol sağlar .

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Akciğer kanseri olduğu önde gelen kanser nedeni ile ilgili ölümlerin dünya çapında1. Akciğer kanseri olan hastalarda sonunda metastaz yenik uzak organlara, özellikle merkezi sinir sistemi, karaciğer, böbrek üstü bezleri ve kemikler2,3,4. Torasik maligniteler geleneksel olarak küçük hücreli akciğer kanseri (SCLC) veya küçük hücreli dışı akciğer kanseri (NSCLC)5sınıflandırılmış. NSCLC en sık malignite tanısı ve akciğer adenokarsinom (LUAD) ve akciğer Skuamöz Hücre Karsinomu (LUSC)6dahil olmak üzere farklı h....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm deneyler kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) Yale Üniversitesi'nde iletişim kuralları uyarınca gerçekleştirilmiştir.

1. set Up / reaktifleri hazırlanması.

  1. Bleomycin
    Dikkat: genel olarak uyumlu sistem (GHS üzerinde) sınıflandırma ve etiketleme, kimyasal bağlı olarak, bleomycin bir GHS08 sa˜l ' sınıflandırılır.
    1. Bleomycin bir kimyasal başlıklı hazırlayın. 15 U 5 mL steril fosfat tamponlu tuz (PBS) de resuspend.
    2. Aliquot 100-200 µL çözüm cam içine tüp ve bunları daha sonra kullanmak için-20 ° C'de dondurmak. Düzgün tüpleri resuspension tarihi ile etiketleyin. Bu tarihten itibar....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

LUAD kanser hücre engraftment ciğerlerine farelerin verimliliğini artırmak için ilk orthotopic tümör hücre enjeksiyon (Şekil 1) tarafından takip bleomycin kullanarak airways ön koşulları bir protokol geliştirdi. Biz bile immün korele fareler yönetilen zaman bleomycin geçici fibrozis gün kaybı hava yolu mimarisi ve artmış kollajen birikimi (Şekil 2) tarafından kanıtlanan 14 tarafından indüklenen doğruladı. Bu farelerde brüt fibroz.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Akciğer kanseri ve diğer kronik hastalıklar akciğer36arasında çarpıcı klinik paralellikler belgelenmiştir. Özellikle, idiyopatik pulmoner fibrozis (IPF) olan hastalarda gelişen akciğer kanseri için artan bir tercih var ve bu ilişki geçmiş37,38sigara bağımsızdır. IPF ilerici imha akciğer mimarisi ve bozulmuş solunum işlevini, ECM39birikimi ile karakterizedir. Ayrıca, cerrahi rezeksiyon bir zavallı sonucu

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarının bildirin.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışmada Ulusal Kanser Enstitüsü (R01CA166376 ve R01CA191489 D.X. Nguyen için) ve Savunma Bakanlığı (W81XWH-16-1-0227 D.X. Nguyen için) gelen hibe tarafından finanse edildi.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
BleomisinSigmaB5507-15UNDİKKAT Sağlık tehlikesi GHS08
Exel Kateter 24GFisher1484121İğneyi çıkarın. İntratrakeal enjeksiyon için
Ketamin (Ketaset inl 100 mg / mL C3N 10 mL)Butler Schein56344Fareleri uyuşturmak için
XylazineButler Schein33198Fareleri uyuşturmak için
Ketoprofen, 5.000 mgCayman Chemical10006661Analjezik
Puralube Veteriner Oftalmik MerhemBUTLER HAYVAN SAĞLIĞI ŞİRKETİ LLC8897Anestezi altındayken göz kuruluğunu önlemek için
D-Luciferin tozuPerkin Elmer Sağlık Bilimleri A.Ş.122799Lüminesan görüntüleme için. 15 mg / mL'lik bir çalışma konsantrasyonu için tozu PBS ile sulandırın. Işıktan Koruyun
Kemirgen Entübasyon standıBraintree ScientificRIS-100İntratrakeal enjeksiyon için önerilen stand
MI-150 AYDINLATICI 150W MI-150DOLAN-JENNER INDUSTRIESMI-150 / EEG2823MSoluk borusunu aydınlatmak ve görselleştirmek için
Graefe Forseps, 2.75 (7 cm) uzunluğunda serratRobozRS-5111İntratrakeal enjeksiyon için
Şırınga Luer-Lok Steril 5mlBD / Fisher309646
Saten Pürüzsüz by Conair Çift Folyo Islak/Kuru Şarj Edilebilir Tıraş MakinesiConair-Fareleritıraş etmek için
Bonn Makas, 3,5" düz 15 mm keskin/keskin kesin kesim bıçaklarıRobozRS-5840SC
15 mL konik tüpBD / Fisher352097
1.5 mL santrifüj tüpleriABD SCIENTIFIC INC1615-5500
Flakon Sintilasyonu 7 mL Borosilikat Cam GPIFisher701350
Filtre pipet uçları (200 μ L)ABD SCIENTIFIC INC1120-8710
Fosfat Tamponlu Tuzlu Yaşam Teknolojileri14190-144
%0.25 Tripsin-EDTAYaşam Teknolojileri25200-056
DMEM yüksek glikozYaşam Teknolojileri11965-092
RPMI Orta 1640Yaşam Teknolojileri11875-093
Fetal sığır serumu USDAYaşam Teknolojileri10437-028
Penisilin-StreptomisinYaşam Teknolojileri15140-122
Amfoterisin BSigmaA2942-20ML
Tripan Mavi Leke %0.4YaşamTeknolojileri15250-061
Kontes Otomatik Hücre SayacıYaşam TeknolojileriAMQAX1000
Şişesi T/C 75cm sq eğimli boyun, mavi şapkaFisher / Corning 353135
IVIS Spektrumu Ksenojen BiyolüminesansPerkin Elmer Sağlık Bilimleri A.Ş. 124262 in vivo biyolüminesans görüntüleme için
Canlı görüntü yazılımıPerkin Elmer Sağlık Bilimleri A.Ş. 128113 in vivo biyolüminesans analizi
XGI-8 Gaz Anestezi SistemiPerkin Elmer Sağlık Bilimleri A.Ş118918İzofluran anestezisi için
BD Ultra-Fine II Kısa İğne İnsülin Şırıngası 1 cc. 31 G x 8 mm (5/16 inç)BD / FisherBD328418Retro-orbital lusiferin enjeksiyonu için
Şırınga 1mlBD / Fisher14-823-434İntraperitoneal enjeksiyonlar için
26 G x 1/2 inç iğneBD / Fisher305111İntraperitoneal enjeksiyonlar için
%4 ParaformaldehitVWR43368-9MDİKKAT Sağlık tehlikesi GHS07, GHS08. Dokuyu sabitlemek için
Pipet-Lite Pipet, Unv. SL-200XLS+METTLER-TOLEDO INTERNATIONAL
Mayer's HematoksilenELEKTRON MİKROSKOPİSİ BİLİMLERİ517-28-2
Eozin Y lekesi %57'de %0,25 (a/h)Fisher67-63-0
Masson Trikrom Leke KitiIMEB IncK7228Kollajeni görselleştirmek için masson trikrom lekesi için
Superfrost plus cam slaytlarFisher
6 oyuklu plakaCorningC3516
Evrensel Mikoplazma Tespit KitiATCC30-1012K
OCT Gömme bileşiğiELEKTRON MİKROSKOPİSİ BİLİMLERİ62550-12Donmuş bölümler için doku gömmek için
Leica CM3050 S Araştırma KriyostatıLeicaCM3050 SBoyama analizi
için dokuyu kesit almakKeyence Hepsi Bir Arada Floresan MikroskobuKeyenceBZ-X700
ImageJABD Ulusal Sağlık EnstitüleriIJ1.46http://rsbweb.nih.gov/ij/ download.html
Mac OS X için Prism 7.0GraphPad Software, Inc.-
Atimik (Crl:NU(NCr)-Foxn1nu) farelerCharles RiverNIH-553
NSG (NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ) farelerJackson Laboratories5557
B6129SF1/J farelerJackson Laboratories101043
NIH-H2030 hücreleriATCCCRL-5914
368T1Monte Winslow (Standford Üniversitesi)-
PC9 hücreleriNguyen DX et al. Cell. 2009; 138:51;
BrM3 hücreleriNguyen DX ve ark. Hücre. 2009; 138:51; 62-
, . 17014411 1255015 tarafından cömertçe sağlanır 62-H2030

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics, 2015. CA-Cancer J Clin. 65, 5-29 (2015).
  2. Gaspar, L. E. Brain metastases in lung cancer. Expert Rev Anticanc. 4, 259-270 (2004).
  3. Hess, K. R., et al. Metastatic patterns in a....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Orthotopic Lung CancerBleomycin Pre ConditioningTumor Cell EngraftmentLung Adenocarcinoma ModelIntratracheal InjectionBioluminescence ImagingMouse Strain VariabilityMetastasis DetectionFibrosis InductionXenograft Tumor Models

Related Articles