Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Perkütan kontrast Ekokardiyografi güdümlü Intramyocardial enjeksiyon ve hücre teslim büyük preklinik modeli

11K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/56699

⸱

21 Ocak 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Institute for Cardiovascular and Metabolic Research, School of Biological Sciences, University of Reading, 2Departamento de Medicina y Cirugía Animal, Facultad de Veterinaria, Universidad de Murcia, 3Institute of Virology and Immunology (IVI), 4Departamento de Anatomía y Anatomía Comparada, Facultad de Veterinaria, Universidad de Murcia, 5Unidad de Trasplante Hematopoyético y Terapia Celular, Departamento de Hematología, Hospital Universitario Virgen de la Arrixaca, IMIB, Universidad de Murcia

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Onlar insanlar kullanmak için kabul edilebilir önce kardiyak rejeneratif tıp roman tedavi stratejileri kapsamlı ve detaylı çalışmalar büyük preklinik hayvan modellerinde gerektirir. Burada, biz perkütan kontrast Ekokardiyografi güdümlü intramyocardial enjeksiyon tekniği Tavşanlarda, roman böyle tedavilerin etkinliğini test hipotez için değerli olan göstermek.

Özet

Hücre ve gen tedavisi heyecan verici ve kalp yetmezliği ile kardiyak rejenerasyon ayarında amacıyla umut verici stratejileri düşük ejeksiyon fraksiyonu (HFrEF). Onlar kullanım için kabul ve insanlarda uygulanan önce geniş preklinik çalışmaları büyük hayvan modellerinde güvenlik, etkinlik ve bir kez Miyokardiyum teslim kaderi injectate (örneğin, kök hücre) değerlendirmek için gerekir. Küçük kemirgen modelleri (maliyet etkinliği, amenability genetik manipülasyon içinörneğin); avantaj sunar Ancak, bu modeller içerdiği sınırlamaları göz önüne alındığında, bu bulguların nadiren kliniğe çevirmek. Diğer taraftan, büyük hayvan tavşan gibi modellerinde avantajları (örneğin, insanlar ve diğer büyük hayvanlar ile karşılaştırıldığında benzer kardiyak Elektrofizyoloji), ederken iyi bir maliyet-etkin denge koruyarak. Burada, minimal invaziv, güvenli, iyi tolere ve injectates hücreleri de dahil olmak üzere, hedeflenen teslimat çok etkili bir perkütan kontrast Ekokardiyografi güdümlü intramyocardial enjeksiyon (ımı) teknik gerçekleştirme göstermek, bir tavşan modeli Miyokardiyum içinde birkaç adresleri girmiş. Bu tekniğin uygulanması için yaygın olarak kullanılan klinik Ekokardiyografi sistemin avantajı da aldık. Burada açıklanan protokol pratikte konulduktan sonra bir araştırmacı temel ultrason bilgisi olan bu çok yönlü ve minimal invaziv teknik deney, Hipotez testleri amaçlı, rutin kullanım için performans yetkili olacak tavşan modelindeki kardiyak rejeneratif therapeutics yeteneklerini. Tavşan anaesthetizing sonra yetkinlik elde sonra tüm prosedürü 25 dk içinde gerçekleştirilebilir.

Giriş

Hücre ve gen terapileri heyecan verici ve hiç HFrEF yaralı Miyokardiyum Yenileyici/onarmak için stratejiler geliştirmek. Bir kaç çalışmalar hücre teslim, ımı üstünlük intrakoroner veya intravenöz yol1,2 üzerinde tutarlı bir şekilde göstermiştir farklı yolların etkinliği (örneğin, hücre tutma oranı) karşılaştırıldığında var , 3 , 4 , 5. böylece, kök hücre tedavisi yaralı Miyokardiyum translasyonel modelleri üzerinde çalışmalar büyük bir kısmı injectate bir açık göğüs yordamı '6,7 doğrudan görünümü altında gerçekleştirilen ımı üzerinden teslim şaşırtıcı değildir . Ancak, bu yaklaşım peri-usul mortalite (genellikle altında bildirilen)8risk taşıdığını yordam invaziv yapısı dahil olmak üzere bazı sınırlamaları vardır. Buna ek olarak, doğrudan görünümü altında bir ımı ventrikül boşluğuna içine yanlışlıkla enjeksiyon için olasılığı ortadan kaldırmaz. Klinik pratikte bir ımı açık göğüs cerrahisi sırasında olabilir uygun bir yöntem'tedavi hücre dır, örneğin, sırasında koroner arter bypass greft cerrahisi (CABG); Ancak, bu yaklaşım içinde küresel kardiyomiyopati (örneğin, HFrEF Antrasiklin kaynaklı kardiyomiyopati (AICM) ikincil) iskemik olmayan menşe hücre teslimat için uygun olmayabilir.

Hiç şüphe yok ki bu iskemik kalp hastalığı (IHD) olduğunu HFrEF en sık nedeni olduğunu (~ % 66)9,10; ancak, Sigara iskemik kardiyomiyopati, AICM, dahil olmak üzere hala hasta HFrEF (% 33)9 ile önemli bir bölümünü etkiler . Nitekim, klinik Onkoloji son gelişmeler kanser ABD tek başına11, 10 milyondan fazla ölüm tahminler Avrupa'daki kanser hastaları12 geliştirilmiş yaşama doğru genel bir eğilim ile tutarlı benzer bir sayının ile sonuçlandı ,13. Böylece, kök hücre nakli olmayan iskemik kardiyomiyopati, hem de kök hücre teslimat etkili ve minimal invaziv bir rotanın trialing için son derece önemlidir gibi yeni tedaviler faydaları keşfetmek, verilen hastaların sayısının artması rastlantısal antikanser ilaçlar için ikinci tarafından etkilenen.

Not, Hipotez testleri kullanarak kök hücre tedavisi yaralı Miyokardiyum sık onarım/yeniden amaçlayan çalışmalar küçük kemirgen (örneğin, fare ve sıçanlar) kullanımını gerektirir. Bu modeller genellikle genellikle bazı içerdiği ilişkili sınırlamaları (örneğin, yankı)14olan doğrusal dizi dönüştürücüler ile donatılmış miyokard fonksiyon değerlendirilmesi için pahalı yüksek frekans ultrason sistemleri gerektirir. Ancak, tavşanlar, büyük preklinik modeli temsil gibi diğer modeller HFrEF kök hücre tedavilerin Hipotez testleri için bazı avantajları var. Böylece, sıçanlar ve fareler aksine, tavşan bir Ca+ 2 taşıma sistemi ve insan ve (diğer büyük hayvanlarörneğin, köpek ve domuz)15,16,17 benzer hücresel Elektrofizyoloji korumak ,18,19. Diğer bir avantajı, kardiyak ultrason görüntüleme nispeten ucuz kullanarak ve yaygın olarak kullanılan klinik Ekokardiyografi sistemleri gibi nispeten yüksek frekans faz dizi güç çeviriciler, örneğin, 12 MHz ile donatılmış için onların amenability olduğunu Bu sık kullanılan yenidoğan ve pediatrik Kardiyoloji. Bu sistemlerin en modern teknoloji ile mükemmel Ekokardiyografik görüntülemede izin ve harmonik20düşsel üstünlük yararlanmak. Ayrıca, potansiyel kardiyak rejeneratif terapileri (örneğin, kök hücre tedavisi), onların Emanet, etkinlik, cardiomyogenic potansiyel yanı sıra bir kez injectate kaderi değerlendirilmesi geniş Hipotez testleri teslim içine Miyokardiyum, zorunlu önce insan kullanım için kabul edilebilir ve onlar tavşan17,19gibi büyük preklinik hayvan modelleri kullanılmasını gerektirir. Burada, kök hücre nakli tabanlı tedavisi olmayan iskemik kardiyomiyopati20 için amaçlayan bir klinik Ekokardiyografi sistemi kullanarak perkütan kontrast-Ekokardiyografi destekli ımı ile hücre teslimat için minimal invaziv tekniği tarif . Ayrıca, injectate tavşan kalbinde bir ultrason kontrast Ajan ve in situ izleyici olarak çini mürekkebi (ını, Çin mürekkep olarak da bilinir) faydaları açıklar.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Burada açıklanan deneyleri etik University of Murcia, İspanya, araştırma Komitesi tarafından onaylanmış ve Avrupa Komisyonu yönergesi 2010/63/AB uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Açıklanan adımları çalışmalarının planının bir parçası olduğunu ve yalnızca bu kağıt için beraberindeki video çekimi amacıyla gerçekleştirilen değil standart çalışma protokolleri altında yapıldı.

1. hücre ve memeli ifade vektör hazırlanması

Not: Burada, biz kısa bir süre için bir protokolü hazırlama ve transfection hücre satır (insan embriyonik böbrek 293 (HEK-293)); tarif Ancak, uygun hücreye belirli protokolleri faiz hücre türü için en iyi duruma getirilmiş (örneğin, kök hücre) olmalıdır.

  1. Korumak yüksek glikoz Dulbecco hücrelerde HEK-293'ın modifiye takıma % 10 fetal buzağı serum (FCS), % 1 sodyum pyruvate, 2 mM glutamin, % 1 penisilin/streptomisin ve oksijen bir atmosferde % 5 içeren 37 ° C'de inkübe kartal orta (DMEM) CO2 . Bir kez bir oranı 1:3 split alt Konfluent hücrelerdir.
  2. Yıkama bir kez steril fosfat ile serum fizyolojik (PBS) arabelleğe alınmış sonra medya, aspirating tarafından hücreleri bölme başlatmak, aşırı PBS kaldırmak ve sonra 2.5 mL tripsin-Ethylenediaminetetraacetic asit (EDTA) (5 dk, 37 ° C) x 0,5 ile kuluçkaya.
    1. DMEM medya (yukarıda açıklandığı gibi takıma) bir birim eklemek reaksiyonu durdurmak ve sonra hücreleri yavaş yavaş ve nazikçe yukarı ve aşağı ile elektronik bir pipet alıyorum tarafından ayırmak için.
  3. Ardından, hücre süspansiyon (örneğin, 15-50 mL konik santrifüj tüpü) uygun bir kaba aktarın. Bir salıncak kova (100 x g) santrifüj kapasitesi, süpernatant atmak ve Pelet steril PBS ile iki kez yıkayın.
  4. Taze DMEM medya ve tohum bir uygun hücre yoğunluğu (örneğin, 1 x 106 hücrelerde bir 75 cm2 şişe), pelet taze kültür şişeler veya yerel laboratuvar uygulamaları göre büyük yemekler resuspend.
    1. Varolan ortam yerine taze medya ile 2 günde.
      Not: İfade vektör pIRES1hyg türetilmiş ve üreticinin yönergelerine göre yukarıda açıklanan21kullanılır. p(EGFP) IRES1hyg EGFP cDNA gibi bir BamHI + NotI pEGFP-N1 BamHI ekler + NotI pIRES1hyg21sindirilmiş subcloning tarafından oluşturuldu.
  5. 1 gün önce transfection, tohum HEK-293 0.5 x 12 veya 24 iyi doku kültürü plakaları 105 hücreleri/cm2 yoğunluğu, hücreleri.
  6. Transfection günü, DNA-lipid transfection reaktif kompleksleri ayrı 1.5 mL microcentrifuge tüpler (1 tüp/de) hazırlayın.
    1. Başlatmak indirimli serum orta 250 µL her tüpün içine ekleyerek ve 4 µg DNA ekleyin (karışımı yavaşça).
    2. Daha sonra 250 µL 10 µL lipid transfection reaktif önceden hazırlanmış bir karışımı ve düşük serum orta, 250 µL her tüpün ekler (tekrar yavaşça karıştırın).
    3. Son olarak, DNA lipid transfection reaktif kompleksleri için 4 h, hücrelerle HEK-293 kuluçka tarafından transfections ile devam (yukarıdaki adım 1.1) açıklandığı gibi takıma DMEM orta yerine ve başka bir 48 h. gerçekleştir ilaç seçimi istikrarlı kuluçkaya transfectants ile 100 µg/mL hygromycin d.
  7. HEK-293 hücreleri (yukarıdaki adım 1.2) açıklandığı gibi tripsin ile bağlantısını kesin. Steril PBS hücrelerde yıkadıktan sonra 5 x 106/mL son hücre konsantrasyonu elde etmek için bir uygun araç içinde (örneğin, % 10 v/v ını PBS), resuspend.

2. tavşan hazırlanması

Not: Tavşan ve dönüştürücü ımı için konumlandırma morfoloji ve hayvan kalp fonksiyonu değerlendirmek için en uygun değildir. Böylece, deneysel tasarım tarafından tanımlanan bir tam Ekokardiyografik inceleme20 ımı (aşağıya bakın) önce ve sonraki zaman noktalarda gerçekleştirmek için tavsiye edilir. Bu bir enjeksiyon almak ve ayrıca etkileri ımı kalp işlevindeki değerlendirmek temel anatomik ve fonksiyonel özellikleri kalbin hayvan olarak değerlendirmek amacı olacak.

  1. Kardiyovasküler görüntüleme için kör bir moda ve Amerikan Koleji veteriner iç hastalıkları ve Amerikan Derneği Ekokardiyografi/Avrupa Birliği Ekokardiyografi Komitesi yönergeleri izleyerek bu sınavın gerçekleştirmek 22 , 23 , 24.
  2. Aynı anda 1-kurşun Elektrokardiyogram (EKG) izleme bütün Ekokardiyografik çalışma boyunca elde etmek.
  3. Ketamin ile tavşan anestezi 10 mg/kg, medetomidine 200 µg/kg ile kas içi (sohbet) enjeksiyon kombine.
  4. Anestezi düzeyi 10-20 dk sonra Yönetim anestezi takip doğrulayın.
  5. Saç kesme makinesi kullanarak göğüs saç yaygın kaldırın (örneğin, alt xiphoid bölgesine boyun altında) (şekil 1A).
  6. 1-2 cm2 iç yüzüne doğru forelimb (mediocubital bölgesi) ve her iki arka bacaklarda (mediotibial bölgesi) ek bölgeler tıraş (şekil 1B).
  7. Kalp ritmi (şekil 1 c) işlemi sırasında zaman uyumlu olarak izlemek için bacaklarda traş bölgeler üzerindeki yapışkanlı ECG elektrotlar yer.
  8. Hayvan termal battaniye, dekübitus sırtüstü pozisyonda tabloya (şekil 1 c) bağlı cerrahi bant kullanarak uzanmış bacaklarda yerleştirin.
    1. Kulaklar geriye doğru tavşan ve bu prosedür boyunca hayvan Toraks doğru konumlandırma korumak için yardımcı olur bu yana, onun forelimbs düşük bir pozisyonda baş/arka arkasında fleksiyondayken emin olun.
  9. Hayvan kendiliğinden yüz maskesi tüm prosedürü (% 100, 2-3 L/dakika) boyunca tarafından oksijen yönetme ederken nefes sağlar.

figure-protocol-1
Şekil 1. Tavşan hazırlanması için ımı. (A)klip saç Toraks; (B) küçük saç bacaklarda; (C) elektrotlar iliştirin ve termal battaniye üzerinde uzanmış bacaklar ile tavşan getirin. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

3. perkütan kontrast Ekokardiyografi güdümlü ımı teknikte tavşan

  1. Temiz ve dezenfekte klorheksidin tabanlı bir çözümü ile Toraks cilt.
    1. Tüm prosedürü boyunca bir aseptik teknik göre geçerli en iyi yöntem kullanın.
    2. Mümkün olduğunda ve eğer makul uygulanabilir, dahil, ancak bunlarla sınırlı olmamak, önlük, eldiven, cerrahi yara perdeler, steril malzeme tablo gibi steril bir ultrason için giyinme gibi steril malzeme kullanımı tamamen steril bir yordamı gerçekleştirmek dönüştürücü kapak ve steril ultrason jeli. Bu minimumda patojenler ımı alma hayvan tanıtmaktan riski azaltacak ve klinik ortamda (örneğin, kardiyak ponksiyon sırasında) standart bir uygulamadır.
      Not: Her zaman hayvan araştırma yerel kurum için ilgili yerel ve ulusal düzenlemelere ve ülke uygulama doğrultusunda devam etmek için önerilir.
  2. Ultrason iletim jel göğüs ve/veya dönüştürücü ve deneyci'nın boynuna dönüştürücü kablosu ile geçerlidir, bir kez anatomi görselleştirmek için ve için ımı planlamak için yararlıdır hayvan kalbi hızlı penceresi tarama gerçekleştirin.
  3. Dönüştürücü el ile 4th-6inci interkostal boşluk, 2-3 cm uzakta bir açı of insidansı doğru parasternal satırıyla yerleştirmekte ~ 90 ° ile ilgili torasik duvarın (şekil 2A) sağ tarafında.
  4. Dönüştürücü interkostal boşluk yanı sıra hastanın ve değiştirilmiş kısa eksen görünümü papiler kaslar düzeyinde en iyi duruma getirmek için dorsoventral açı göreli konumunu ayarlamak. Bu görünümde sağ ventrikül (RV), sol ventrikül (LV), interventricular septum (serum), posterior duvar (PW), hem de anterolateral (AL) ve posteromedial (PM) meme basinin Papiller kaslar (2B rakam) tanımlayın.
    1. Geniş bir görüş alanı (örneğin, düğme, arama) sistemindeki uygun denetimi kullanarak derinlik önemli ölçüde artırarak var.
    2. Bu görünüm, hem de uygun endocardial ve epicardial kontür farklılaşma simetrik bir görüntü elde etmek için özellikle dikkat ve gerekiyorsa (örneğin, kazanç) görüntü optimizasyon denetimler arasında ayarlayın.
  5. En iyi Ekokardiyografik görünümü (şekil 2B) alındığında, ımı (aşağıya bakın) ikinci bir işleç gerçekleştirir iken yordamı, geri kalan tüm bu pozisyonu koruyun.
    1. Dönüştürücü tutarak iken, her zaman ileri, böylece sonraki adımda (şekil 2A, C) iğne ile onun hizalama izin bakmalıdır dönüştürücü yönlendirme işareti gizlemek kaçının.
  6. 24-G iğne 1 mL şırınga bağlı bir dönüştürücü ile ilgili olarak simetrik bir yansıtma pozisyonda sol hemithorax cilt yakın iğne yerleştirin. Sonra el ile hizalamak dönüştürücü yönlendirme işareti bir açıyla iğneyle ~ 90° (şekil 2C) ve yavaş yavaş deri yoluyla ve göğüs boşluğu içine iğne ilerlemek.
    Not: Bu pozisyon ve yönlendirme perkütan iğne ekleme (2D rakam, E), ultrason demetinin bir düzlemde iğne görselleştirme kolaylaştırır böylece gerçek zamanlı izleme izin ve gerektiğinde, düzeltilmesi İğneyi Miyokardiyum (Şekil 2 G, H) hedef bölgenin göreli konumu.
  7. Hedef konumda ucu ile yavaş yavaş injectate teslim (ilâ enjeksiyon site başına 0.25 mL) 10-30 s (yavaş yavaş ve nazikçe iğneyi enjeksiyon sırasında Miyokardiyum kapsamını artırmak için geri çeker tedavi ederkenşekil 2E), içinde.
    1. INI kullanmak % 10 (v/v) PBS içinde tekniği ve in situ izleyici olarak standardizasyon Miyokardiyum içerisindeki tüm dört ımı sitelerin başarılı hedefleme onaylamak olarak yetkinlik, de elde ederken brüt patoloji ve histopatoloji (bkz: tarafından seyreltilmiş Temsilcisi sonuçları). Yetkinlik elde sonra ını uygun ticari ultrason kontrast Aracısı tarafından istenirse yerine.
      Not: Teslimat % 10 (v/v) ını PBS içinde olan veya olmayan hücreleri transmural hyperechogenicity (Yani, yankı parlak görünüm) Miyokardiyum sonuçlarında içine enjeksiyon (şekil 2E, F) hedef sitede seyreltilmiş. İğne epicardium ile ilk kişiden bile sık sık gözlenen geçici yavaşlama veya ivme ile Prematüre Ventriküler kasılma (izoleörneğin, couplets ve üçüz) ilişkili nabız gibi sırasında ve/veya kısa bir süre sonra ımı. Ancak, hiçbir hayati aritmiler geliştirilmiştir ve akut yan etkiler nadiren gözlenen ımı enjeksiyon yeri kadar 0.25 mL (1,25 x 106 hücreler) injectate kullanarak (bkz: Temsilcisi sonuçları ve tartışma).
  8. İnce değişiklikleri her (üç sol ventrikül duvar (LVFW) ve IVs birinde ücretsiz) dört hedef ımı siteler için 0.25 mL enjeksiyonlari tamamlamak için gereken iğneyi açı of insidansı gerçekleştirin.
  9. Perkütan kontrast Ekokardiyografi güdümlü ımı yordamı tamamladıktan sonra kalp ritmi (örneğin, seri ECG izleme ve/veya 24 saat Holter ECG yoluyla) değerlendirmek ve yokluğu doğrulamak için seri halinde pencere Ekokardiyografik taramalar komplikasyonlar, hayvan tam anestezi ve sadece sonra transfer bir ışık-siklet odasına kurtarılır kadar.
    1. Burada, 24 saat Holter ECG kalp ritmi 24 h için ımı ını ile etkilerini izlemek için kullanın. Bunun için biz bir grup normal fenotip (Normal grup) ile 6 tavşan ve doksorubisin (bir Kardiyotoksik Antrasiklin ilaç kanser; tedavisinde yaygın olarak kullanılan, intravenöz yönetimini alınan 6 tavşan bir grup göre DOX grubu) adlı bir doz 2 mg/kg/hafta 8 hafta ve daha sonra her iki birlik için ımı ile ını aldı.

figure-protocol-2
Resim 2 . Perkütan kontrast Ekokardiyografi güdümlü intramyocardial enjeksiyon in tavşan. Dönüştürücü bir açıyla doğru hemithorax içinde(a)yerleşimini ~ 90 °. (B) temsilcisi görünümünün resmi bir parasternal kısa eksen (PSSX) kalbin tavşan Papiller kaslar düzeyde. (C) hizalama iğne bir açıyla ~ 90 ° dönüştürücü yönlendirme işareti göre. Kalp (iğne ultrason ışın düzlemde kolayca görselleştirildiği Not) PSSX görünümünde hedef sitede iğne (D) konumu. (E ve F) hyperechogenicity intramyocardial enjeksiyon üzerine hedef sitede gösteri çini mürekkebi (ok uçları vurgulamak transmural hyperechogenicity) ile. (G) LV odası iğneyi yanlışlıkla konumunu (ok uçları vurgulamak İğne mili). (H) Repositioning LV ücretsiz duvara iğne (ok uçları vurgulamak İğne mili). RV sağ ventrikül; = LV sol ventrikül; = Serum interventricular septum; = PW = posterior duvar; AL anterolateral Papiller kas; = PM posteromedial Papiller kas =. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

4. mesaj ımı analizleri

  1. Histopatolojik analiz kalp doku örnekleri tavşan gerçekleştirin.
    1. Doku 24 h için % 10 formaldehit, aşağıdaki gibi etanol konsantrasyonları artan su kaybı ardından fix:
      • 1 x % 70 (60 dk)





Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Perkütan kontrast Ekokardiyografi güdümlü ımı ını ile:

Yukarıda açıklanan iletişim kuralını kullanarak ve sonra iğne ucu en iyi konumlandırma Ekokardiyografi ve yerleştirme başlatıldı tarafından doğrulandı, transmural hyperechogenicity ını teslim sırasında gözlendi (% 10 PBS, v/v) (şekil 2E) , ımı (şekil 2F) hedef bölgesine de olarak kısa bir süre sonra...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Tavşan (bir büyük ölçekli preklinik hayvan modeli)17,18, Miyokardiyum içine kök hücrelerin tesliminde kullanımı yararlanan ederken kullanılabilecek bir minimal invaziv tekniği geliştirmek için birincil hedefi oldu bir nispeten ucuz görüntüleme sistemi birçok klinik kullanıma hazır ve araştırma merkezleri. Burada, biz, bir klinik Ekokardiyografi sistemi kullanarak göstermek ve ını, in situ izleme yetenekleri ve echogenic özellikleri, başarılı perkütan kon...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar ifşa gerek yok.

Teşekkürler

Yazarlar Sheila Monfort, Brenda Martínez, Carlos Micó, Alberto Muñoz ve Manuel Molina EGFP(+) HEK-293 hücreler sağlamak için veri ve Carlos Bueno toplanması sırasında sağlanan mükemmel destek için teşekkür ederiz. Bu eser kısmen tarafından desteklenmiştir: Fundación Séneca, Agencia de Ciencia y Tecnología, Región de Murcia, İspanya (JT) (izni numarası: 11935/PI/09); Red de Terapia Celular, ISCIII-Sub. Gral. Redes, VI PN de ben + D + ben 2008-2011 (vermek yok. RD12/0019/0001) (JMM), ortak finanse yapısal fon ile Avrupa Birliği'nin (FEDER,) (JMM); ve okuma Üniversitesi, Amerika Birleşik Devletleri (AG, GB) (Merkez fon). Fon çalışma tasarım, veri toplama ve analizi, yayımlamaya karar veya el yazması hazırlanması herhangi bir rolü yoktu.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
HD11 XE Ultrason SistemiPhilips10670267Ekokardiyografi sistemi.
S12-4PhilipsB01YgG4-12 MHz faz dizisi dönüştürücü
Ultrason İletim Jeli (Aquasone)Parket laboratories IncN 01-08
Vasovet 24GBraunREF 381212  iğne üstü kateter
Omnifix-F 1 ml şırıngaBraun9161406V
Imalgene (Ketamin)MerialRN 9767Veteriner reçetesi gereklidir
Domtor (Medetomidin)EsteveCN 570686.3Veteriner reçetesi gereklidir
Isıtma Yastığı
Faber-Castel TG1Faber-Castel16 33 99Hindistan (Çin) Mürekkep
Holter SyneflashEla medikalSF0003044S24 saat Holter EKG sistemi.
Elektrotlar Mavi Sensör®Ambu (NUMED)VLC-00-SHolter EKG elektrotları.
MikrotomLeica BiosystemsRM2155
MikroskopOlimpusCO11
ABC Vektör ElitVektör LaboratuvarlarıPK-6200Avidin Biyotin Kompleks Kiti.
Tavuk anti-GFP antikoruInvitrogenA10262Birincil antikor.
Biyotinile keçi anti-tavuk IgG Antikoru VektörLaboratuvarlarıBA-9010İkincil Antikor.
3,30-diaminobenzidin tetrahidroklorür (DAB)DAKO (Agilent)S3000
Floresan MikroskobuCarl Zeiss
MicroImaging		Zeiss AX10 Axioskop
Holter EKGElamedicalSyneflash SF0003044S
Dulbecco' s modifiye Eagle ortamı (DMEM) Fisher Scientific11965084
%10 fetal buzağı serumu (FCS)Fisher Scientific11573397
%0.05 Tripsin-Etilendiamintetraasetik asit (EDTA)Fisher Scientific25300054
Lipofectamine 2000 (Lipid transfeksiyon reaktifi)Fisher Scientific11668019
Azaltılmış serum ortamı (Opti-MEM)Fisher Scientific
Higromisin BCalbiochem (MERCK)400051
Ksilen (histolojik)Fisher ScientificX3S-4
Hidrojen Peroksit Çözeltisi (H2O2)SigmaH1009
PronaseFisher Scientific53-702-250KU
31985070

Kaynaklar

  1. Hou, D., et al. Radiolabeled cell distribution after intramyocardial, intracoronary, and interstitial retrograde coronary venous delivery: implications for current clinical trials. Circulation. 112, I150-I156 (2005).
  2. Freyman, T., et al. A quantitative, randomized study evaluating three methods of mesenchymal stem cell delivery following myocardial infarction. Eur Heart J. 27, 1114-1122 (2006).
  3. Perin, E. C., et al. Comparison of intracoronary and transendocardial delivery of allogeneic mesenchymal cells in a canine model of acute myocardial infarction. J Mol Cell Cardiol. 44, 486-495 (2008).
  4. Dib, N., Khawaja, H., Varner, S., McCarthy, M., Campbell, A. Cell therapy for cardiovascular disease: a comparison of methods of delivery. J Cardiovasc Transl Res. 4, 177-181 (2011).
  5. Li, S. H., et al. Tracking cardiac engraftment and distribution of implanted bone marrow cells: Comparing intra-aortic, intravenous, and intramyocardial delivery. J Thorac Cardiovasc Surg. 137, e1221 1225-1233 (2009).
  6. Shiba, Y., et al. Human ES-cell-derived cardiomyocytes electrically couple and suppress arrhythmias in injured hearts. Nature. 489, 322-325 (2012).
  7. Chong, J. J., et al. Human embryonic-stem-cell-derived cardiomyocytes regenerate non-human primate hearts. Nature. 510, 273-277 (2014).
  8. Lu, C., et al. Autologous bone marrow cell transplantation improves left ventricular function in rabbit hearts with cardiomyopathy via myocardial regeneration-unrelated mechanisms. Heart vessels. 21, 180-187 (2006).
  9. McMurray, J. J., et al. ESC guidelines for the diagnosis and treatment of acute and chronic heart failure 2012: The Task Force for the Diagnosis and Treatment of Acute and Chronic Heart Failure 2012 of the European Society of Cardiology. Developed in collaboration with the Heart Failure Association (HFA) of the ESC . Eur J Heart Fail. 14, 803-869 (2012).
  10. Sueta, C. A. The life cycle of the heart failure patient. Curr Cardiol Rev. 11, 2-3 (2015).
  11. Carver, J. R., et al. American Society of Clinical Oncology clinical evidence review on the ongoing care of adult cancer survivors: cardiac and pulmonary late effects. J Clin Oncol. 25, 3991-4008 (2007).
  12. Verdecchia, A., et al. Recent cancer survival in Europe: a 2000-02 period analysis of EUROCARE-4 data. Lancet Oncol. 8, 784-796 (2007).
  13. De Angelis, R., et al. Cancer survival in Europe 1999-2007 by country and age: results of EUROCARE--5-a population-based study. Lancet Oncol. 15, 23-34 (2014).
  14. Abu-Zidan, F. M., Hefny, A. F., Corr, P. Clinical ultrasound physics. J Emerg Trauma Shock. 4, 501-503 (2011).
  15. Del, M. F., Mynett, J. R., Sugden, P. H., Poole-Wilson, P. A., Harding, S. E. Subcellular mechanism of the species difference in the contractile response of ventricular myocytes to endothelin-1. Cardioscience. 4, 185-191 (1993).
  16. Pogwizd, S. M., Bers, D. M. Rabbit models of heart disease. Drug Discov Today Dis Mod. 5, 185-193 (2008).
  17. Gandolfi, F., et al. Large animal models for cardiac stem cell therapies. Theriogenology. 75, 1416-1425 (2011).
  18. Harding, J., Roberts, R. M., Mirochnitchenko, O. Large animal models for stem cell therapy. Stem Cell Res Ther. 4, 23(2013).
  19. Chong, J. J., Murry, C. E. Cardiac regeneration using pluripotent stem cells--progression to large animal models. Stem Cell Res. 13, 654-665 (2014).
  20. Talavera, J., et al. An Upgrade on the Rabbit Model of Anthracycline-Induced Cardiomyopathy: Shorter Protocol, Reduced Mortality, and Higher Incidence of Overt Dilated Cardiomyopathy. BioMed Res Int. 2015, 465342(2015).
  21. Bueno, C., et al. Human adult periodontal ligament-derived cells integrate and differentiate after implantation into the adult mammalian brain. Cell Transplant. 22, 2017-2028 (2013).
  22. Sahn, D. J., DeMaria, A., Kisslo, J., Weyman, A. Recommendations regarding quantitation in M-mode echocardiography: results of a survey of echocardiographic measurements. Circulation. 58, 1072-1083 (1978).
  23. Thomas, W. P., et al. Recommendations for standards in transthoracic two-dimensional echocardiography in the dog and cat. Echocardiography Committee of the Specialty of Cardiology, American College of Veterinary Internal Medicine. J Vet Intern Med. 7, 247-252 (1993).
  24. Lang, R. M., et al. Recommendations for cardiac chamber quantification by echocardiography in adults: an update from the American Society of Echocardiography and the European Association of Cardiovascular Imaging. Eur Heart J Cardiovasc Imaging. 16, 233-270 (2015).
  25. Feldman, A. T., Wolfe, D. Tissue processing and hematoxylin and eosin staining. Methods Mol Biol. 1180, 31-43 (2014).
  26. Howat, W. J., Wilson, B. A. Tissue fixation and the effect of molecular fixatives on downstream staining procedures. Methods. 70, 12-19 (2014).
  27. Cohen, A. H. Masson's trichrome stain in the evaluation of renal biopsies. An appraisal. Am J Clin Pathol. 65, 631-643 (1976).
  28. Corti, R., et al. Real time magnetic resonance guided endomyocardial local delivery. Heart. 91, 348-353 (2005).
  29. Springer, M. L., et al. Closed-chest cell injections into mouse myocardium guided by high-resolution echocardiography. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 289, H1307-H1314 (2005).
  30. Aoki, M., et al. Efficient in vivo gene transfer into the heart in the rat myocardial infarction model using the HVJ (Hemagglutinating Virus of Japan)--liposome method. J Mol Cell Cardiol. 29, 949-959 (1997).
  31. Guzman, R. J., Lemarchand, P., Crystal, R. G., Epstein, S. E., Finkel, T. Efficient gene transfer into myocardium by direct injection of adenovirus vectors. Circ Res. 73, 1202-1207 (1993).
  32. Magovern, C. J., et al. Direct in vivo gene transfer to canine myocardium using a replication-deficient adenovirus vector. Ann Thorac Surg. 62, 425-433 (1996).
  33. Suzuki, K., et al. Role of interleukin-1beta in acute inflammation and graft death after cell transplantation to the heart. Circulation. 110, II219-II224 (2004).
  34. Fukushima, S., et al. Direct intramyocardial but not intracoronary injection of bone marrow cells induces ventricular arrhythmias in a rat chronic ischemic heart failure model. Circulation. 115, 2254-2261 (2007).
  35. Miller, L. W., Taylor, D. A., Willerson, J. T. Stem Cell and Gene Therapy for Cardiovascular Disease. , Academic Press. 13-23 (2016).
  36. Fargas, A., Roma, J., Gratacos, M., Roig, M. Distribution and effects of a single intramuscular injection of India ink in mice. Ann Anat. 185, 183-187 (2003).
  37. Dib, N., et al. Recommendations for successful training on methods of delivery of biologics for cardiac regeneration: a report of the International Society for Cardiovascular Translational Research. JACC Cardiovasc Interv. 3, 265-275 (2010).
  38. Mu, Y., Cao, G., Zeng, Q., Li, Y. Transplantation of induced bone marrow mesenchymal stem cells improves the cardiac function of rabbits with dilated cardiomyopathy via upregulation of vascular endothelial growth factor and its receptors. Exp Biol Med (Maywood). 236, 1100-1107 (2011).
  39. Giraldo, A., et al. Percutaneous intramyocardial injection of amniotic membrane-derived mesenchymal stem cells improves ventricular function and survival in non-ischaemic cardiomyopathy in rabbits. Eur Heart J. 36, 149(2015).
  40. Giraldo, A., et al. Allogeneic amniotic membrane-derived mesenchymal stem cell therapy is cardioprotective, restores myocardial function, and improves survival in a model of anthracycline-induced cardiomyopathy. Eur J Heart Fail. 19, 594(2017).
  41. Prendiville, T. W., et al. Ultrasound-guided transthoracic intramyocardial injection in mice. J Vis Exp. , e51566(2014).
  42. Laakmann, S., et al. Minimally invasive closed-chest ultrasound-guided substance delivery into the pericardial space in mice. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 386, 227-238 (2013).
  43. Hasenfuss, G. Animal models of human cardiovascular disease, heart failure and hypertrophy. Cardiovasc Res. 39, 60-76 (1998).
  44. Ponikowski, P., et al. Depressed heart rate variability as an independent predictor of death in chronic congestive heart failure secondary to ischemic or idiopathic dilated cardiomyopathy. Am J Cardiol. 79, 1645-1650 (1997).
  45. Nolan, J., et al. Prospective study of heart rate variability and mortality in chronic heart failure: results of the United Kingdom heart failure evaluation and assessment of risk trial (UK-heart). Circulation. 98, 1510-1516 (1998).
  46. Galinier, M., et al. Depressed low frequency power of heart rate variability as an independent predictor of sudden death in chronic heart failure. Eur Heart J. 21, 475-482 (2000).
  47. Sheng, C. C., Zhou, L., Hao, J. Current stem cell delivery methods for myocardial repair. BioMed Res Int. 2013, 547902(2013).
  48. Kim, R. J., et al. The use of contrast-enhanced magnetic resonance imaging to identify reversible myocardial dysfunction. N Engl J Med. 343, 1445-1453 (2000).
  49. Perin, E. C., et al. Transendocardial, autologous bone marrow cell transplantation for severe, chronic ischemic heart failure. Circulation. 107, 2294-2302 (2003).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Perk tan EnjeksiyonTav an ModeliUltrason Rehberli iMiyokard Dokusuin M rekkebieGFP Pozitif H crelerHolter zleme
Perkütan kontrast Ekokardiyografi güdümlü Intramyocardial enjeksiyon ve hücre teslim büyük preklinik modeli
Bize ulaşın
Kütüphaneye tavsiye et

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Telif hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.