Onlar insanlar kullanmak için kabul edilebilir önce kardiyak rejeneratif tıp roman tedavi stratejileri kapsamlı ve detaylı çalışmalar büyük preklinik hayvan modellerinde gerektirir. Burada, biz perkütan kontrast Ekokardiyografi güdümlü intramyocardial enjeksiyon tekniği Tavşanlarda, roman böyle tedavilerin etkinliğini test hipotez için değerli olan göstermek.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Perkütan kontrast Ekokardiyografi güdümlü Intramyocardial enjeksiyon ve hücre teslim büyük preklinik modeli
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Hücre ve gen tedavisi heyecan verici ve kalp yetmezliği ile kardiyak rejenerasyon ayarında amacıyla umut verici stratejileri düşük ejeksiyon fraksiyonu (HFrEF). Onlar kullanım için kabul ve insanlarda uygulanan önce geniş preklinik çalışmaları büyük hayvan modellerinde güvenlik, etkinlik ve bir kez Miyokardiyum teslim kaderi injectate (örneğin, kök hücre) değerlendirmek için gerekir. Küçük kemirgen modelleri (maliyet etkinliği, amenability genetik manipülasyon içinörneğin); avantaj sunar Ancak, bu modeller içerdiği sınırlamaları göz önüne alındığında, bu bulguların nadiren kliniğe çevirmek. Diğer taraftan, büyük hayvan tavşan gibi modellerinde avantajları (örneğin, insanlar ve diğer büyük hayvanlar ile karşılaştırıldığında benzer kardiyak Elektrofizyoloji), ederken iyi bir maliyet-etkin denge koruyarak. Burada, minimal invaziv, güvenli, iyi tolere ve injectates hücreleri de dahil olmak üzere, hedeflenen teslimat çok etkili bir perkütan kontrast Ekokardiyografi güdümlü intramyocardial enjeksiyon (ımı) teknik gerçekleştirme göstermek, bir tavşan modeli Miyokardiyum içinde birkaç adresleri girmiş. Bu tekniğin uygulanması için yaygın olarak kullanılan klinik Ekokardiyografi sistemin avantajı da aldık. Burada açıklanan protokol pratikte konulduktan sonra bir araştırmacı temel ultrason bilgisi olan bu çok yönlü ve minimal invaziv teknik deney, Hipotez testleri amaçlı, rutin kullanım için performans yetkili olacak tavşan modelindeki kardiyak rejeneratif therapeutics yeteneklerini. Tavşan anaesthetizing sonra yetkinlik elde sonra tüm prosedürü 25 dk içinde gerçekleştirilebilir.
Giriş
Hücre ve gen terapileri heyecan verici ve hiç HFrEF yaralı Miyokardiyum Yenileyici/onarmak için stratejiler geliştirmek. Bir kaç çalışmalar hücre teslim, ımı üstünlük intrakoroner veya intravenöz yol1,2 üzerinde tutarlı bir şekilde göstermiştir farklı yolların etkinliği (örneğin, hücre tutma oranı) karşılaştırıldığında var , 3 , 4 , 5. böylece, kök hücre tedavisi yaralı Miyokardiyum translasyonel modelleri üzerinde çalışmalar büyük bir kısmı injectate bir açık göğüs yordamı '6
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Burada açıklanan deneyleri etik University of Murcia, İspanya, araştırma Komitesi tarafından onaylanmış ve Avrupa Komisyonu yönergesi 2010/63/AB uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Açıklanan adımları çalışmalarının planının bir parçası olduğunu ve yalnızca bu kağıt için beraberindeki video çekimi amacıyla gerçekleştirilen değil standart çalışma protokolleri altında yapıldı.
1. hücre ve memeli ifade vektör hazırlanması
Not: Burada, biz kısa bir süre için bir protokolü hazırlama ve transfection hücre satır (insan embriyonik böbrek 293 (HEK-293)); tarif Ancak, uygun hücreye belirli protokolleri faiz hücre türü için en ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Perkütan kontrast Ekokardiyografi güdümlü ımı ını ile:
Yukarıda açıklanan iletişim kuralını kullanarak ve sonra iğne ucu en iyi konumlandırma Ekokardiyografi ve yerleştirme başlatıldı tarafından doğrulandı, transmural hyperechogenicity ını teslim sırasında gözlendi (% 10 PBS, v/v) (şekil 2E) , ımı (şekil 2F) hedef bölgesine de olarak kısa bir süre sonra.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Tavşan (bir büyük ölçekli preklinik hayvan modeli)17,18, Miyokardiyum içine kök hücrelerin tesliminde kullanımı yararlanan ederken kullanılabilecek bir minimal invaziv tekniği geliştirmek için birincil hedefi oldu bir nispeten ucuz görüntüleme sistemi birçok klinik kullanıma hazır ve araştırma merkezleri. Burada, biz, bir klinik Ekokardiyografi sistemi kullanarak göstermek ve ını, in situ izleme yetenekleri ve echogenic özellikleri, başarılı perkütan kon.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa gerek yok.
Teşekkürler
Yazarlar Sheila Monfort, Brenda Martínez, Carlos Micó, Alberto Muñoz ve Manuel Molina EGFP(+) HEK-293 hücreler sağlamak için veri ve Carlos Bueno toplanması sırasında sağlanan mükemmel destek için teşekkür ederiz. Bu eser kısmen tarafından desteklenmiştir: Fundación Séneca, Agencia de Ciencia y Tecnología, Región de Murcia, İspanya (JT) (izni numarası: 11935/PI/09); Red de Terapia Celular, ISCIII-Sub. Gral. Redes, VI PN de ben + D + ben 2008-2011 (vermek yok. RD12/0019/0001) (JMM), ortak finanse yapısal fon ile Avrupa Birliği'nin (FEDER,) (JMM); ve okuma Üniversitesi, Amerika Birleşik Devletleri (AG, GB) (Merkez fon). Fon çalışma tasarım, veri toplama ve analizi, yayı....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| HD11 XE Ultrason Sistemi | Philips | 10670267 | Ekokardiyografi sistemi. |
| S12-4 | Philips | B01YgG | 4-12 MHz faz dizisi dönüştürücü |
| Ultrason İletim Jeli (Aquasone) | Parket laboratories Inc | N 01-08 | |
| Vasovet 24G | Braun | REF 381212 | iğne üstü kateter |
| Omnifix-F 1 ml şırınga | Braun | 9161406V | |
| Imalgene (Ketamin) | Merial | RN 9767 | Veteriner reçetesi gereklidir |
| Domtor (Medetomidin) | Esteve | CN 570686.3 | Veteriner reçetesi gereklidir |
| Isıtma Yastığı | |||
| Faber-Castel TG1 | Faber-Castel | 16 33 99 | Hindistan (Çin) Mürekkep |
| Holter Syneflash | Ela medikal | SF0003044S | 24 saat Holter EKG sistemi. |
| Elektrotlar Mavi Sensör® | Ambu (NUMED) | VLC-00-S | Holter EKG elektrotları. |
| Mikrotom | Leica Biosystems | RM2155 | |
| Mikroskop | Olimpus | CO11 | |
| ABC Vektör Elit | Vektör Laboratuvarları | PK-6200 | Avidin Biyotin Kompleks Kiti. |
| Tavuk anti-GFP antikoru | Invitrogen | A10262 | Birincil antikor. |
| Biyotinile keçi anti-tavuk IgG Antikoru Vektör | Laboratuvarları | BA-9010 | İkincil Antikor. |
| 3,30-diaminobenzidin tetrahidroklorür (DAB) | DAKO (Agilent) | S3000 | |
| Floresan Mikroskobu | Carl Zeiss MicroImaging | Zeiss AX10 Axioskop | |
| Holter EKG | Elamedical | Syneflash SF0003044S | |
| Dulbecco' s modifiye Eagle ortamı (DMEM) | Fisher Scientific | 11965084 | |
| %10 fetal buzağı serumu (FCS) | Fisher Scientific | 11573397 | |
| %0.05 Tripsin-Etilendiamintetraasetik asit (EDTA) | Fisher Scientific | 25300054 | |
| Lipofectamine 2000 (Lipid transfeksiyon reaktifi) | Fisher Scientific | 11668019 | |
| Azaltılmış serum ortamı (Opti-MEM) | Fisher Scientific | ||
| Higromisin B | Calbiochem (MERCK) | 400051 | |
| Ksilen (histolojik) | Fisher Scientific | X3S-4 | |
| Hidrojen Peroksit Çözeltisi (H2O2) | Sigma | H1009 | |
| Pronase | Fisher Scientific | 53-702-250KU |
Kaynaklar
- Hou, D., et al. Radiolabeled cell distribution after intramyocardial, intracoronary, and interstitial retrograde coronary venous delivery: implications for current clinical trials. Circulation. 112, I150-I156 (2005).
- Freyman, T., et al.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
