İmalat işlemleri polymolecular derlemeler şelat manyetik olarak son derece duyarlı lanthanide iyon için sunulmaktadır. Manyetik yanıt ekstrüzyon nanopore membranlar yoluyla tarafından hazırlanmıştır derleme boyutu tarafından belirlenir. Derlemeler manyetik alignability ve yapısal değişiklikler sıcaklık kaynaklı birefringence ölçümleri, Nükleer manyetik rezonans ve küçük açı nötron saçılma için ücretsiz bir teknik tarafından izlenir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
İmalat işlemleri ve Birefringence ölçümler manyetik olarak duyarlı Lanthanide iyon şelat Fosfolipid Derlemeler tasarlama
Bu makalede
Özet
Özet
Bicelles lipid karışımları çok sayıda oluşmuş akort disk benzeri polymolecular derlemeler vardır. Uygulamalar nanoteknolojik gelişmeler optik aktif ve manyetik olarak değiştirilebilir jelleri oluşumu da dahil olmak üzere membran proteini yapısal çalışmalar Nükleer manyetik rezonans (NMR) arasında değişir. Bu tür teknolojiler derleme boyutu, manyetik yanıt ve termal direnci yüksek kontrol gerektirir. Karışımları 1,2-dimyristoyl -sn- glycero-3-phosphocholine (DMPC) ve onun lanthanide iyon Fosfolipid eşlenik, 1,2 şelat (Ln3 +)-dimyristoyl -sn- glycero-3-fosfo-etanolamin-diethylene triaminepentaacetate () DMPE-DTPA), manyetik olarak son derece duyarlı derlemeler gibi DMPC/DMPE-DTPA/Ln3 + içine monte (molar oranı 4:1:1) bicelles. Kolesterol (CHOI-OH) ve başka bir küme benzersiz FİZİKO-kimyasal özellikleri sunan birleştirmeler bilayer sonuçlarında steroid türevleri giriş. Verilen lipid kompozisyon için manyetik alignability bicelle boyutuyla orantılıdır. Ln3 + complexation büyüklüğü ve hizalama yönü açısından görülmemiş manyetik yanıt sonuçlanır. Disk benzeri yapıları termo-tersinir çöküşü içine veziküller Isıtma üzerine derlemeler boyutları ekstrüzyon tarafından tanımlanmış gözenek boyutları ile membran filtreleri ile terzilik sağlar. Manyetik olarak alignable bicelles 5 ° C, vezikül öncüleri tarafından tanımlanan derleme boyutları sonuçlanan soğutma tarafından yeniden oluşturulur. Burada, bu üretim yordamı açıkladı ve tüm derlemeler manyetik alignability birefringence ölçümleri 5,5 T manyetik alan altında tarafından sayılabilir. Fosfolipid bilayer kaynaklanan birefringence sinyal daha da bilayer içinde meydana gelen polymolecular değişiklikleri izleme sağlar. Bu basit tekniği yaygın olarak bicelles karakterize etmek için istihdam edilmektedir NMR deneyler için tamamlayıcı.
Giriş
Bicelles çok sayıda lipid karışımlar elde edilen disk benzeri polymolecular derlemeler vardır. 1 , 2 , 3 , 4 , 5 onlar membran biomolecules yapısal karakterizasyonu için NMR spektroskopisi tarafından yaygın olarak kullanılmaktadır. 6 , 7 ancak, son çabaları olası uygulama alanın genişletin hedefliyoruz. 5 , 8 , 9 en çok çalışılan bicelle sistem 1,2 karışımı....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. üretim yordamı için DMPC/DMPE-DTPA/Tm3 + (molar oranı 4:1:1) ve DMPC/Choi-OH/DMPE-DTPA/Tm3 + (molar oranı 16:4:5:5) polymolecular derlemeler
- Ön hazırlıklar
- Yıkama yıkama tarafından tüm Züccaciye Mağazaları bir kez etanol ile stabilize kloroform (> % 99 kloroform) ve sıkıştırılmış hava ile kuru.
- 2 ayrı 10 mg/mL stok çözümlerinde DMPC ve DMPE-DTPA etanol stabilize kloroform üretmek (> % 99 kloroform), bir 10 mM hisse senedi çözümde Choi-Oh etanol stabilize kloroform (> % 99 kloroform) ve TmCl3 ' te 10 mM stok çözeltisi metanol.
- 7.4 pH değeri, bir 50 mM fosfat tampon 0.121 g sodyum dihydrogen....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Bir sigara kalıptan çekilmiş DMPC/DMPE-DTPA/Tm3 + birefringence sinyal (molar oranı 4:1:1) örnek bir Isıtma ve soğutma döngüsü 5 ila 40 ° C ve 1 ° C/dk (şekil 6) oranında geri sırasında 5,5 T manyetik alan altında izlenir. Birefringence sonuçları 5 ° c değeri yüksek manyetik hizalamaları 1.5 x 10-5, iki kat daha güçlü bildirilen ekstrüzyon sistemleri gelince doğruladı. 6 , 7
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Derlemeler olduğunu Isabettini vd. fosfolipitler şelat manyetik olarak son derece duyarlı Ln3 + oluşturmak için yöntemleri değerlendirmek için nasıl birefringence ölçümleri SANS ile birlikte kullanılan ayrıntılı hesabını deneyler 23 önerilen imalat protokolleri de daha uzun DPPC ve DPPE-DTPA fosfolipitler oluşan derlemeler için veya onların bilayer kimyasal mühendislik steroid türevleri içerenler için geçerlidir. 11 , 12
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa gerek yok.
Teşekkürler
Yazarlar SMhardBi (proje numarası 200021_150088/1) finansmanı için İsviçre Ulusal Bilim Vakfı kabul etmiş oluyorsunuz. İsviçre spallation nötron kaynağı Hoşlandığımı, Paul Scherrer Instute, Villigen, İsviçre SANS deneyler yapıldı. Yazarlar sıcak Dr. Joachim Kohlbrecher SANS deneyleri ile onun rehberlik için teşekkür ederiz. Birefringence ölçüm Kur yüksek manyetik alanlar'ın altında yüksek-alan manyetik Laboratuvarı HFML, Nijmegen, Hollanda varolan kurulumundan ilham kaynağı oldu. Bruno Pfister birefringence Kur elektronik gelişmekte olan onun yardım için Jan Corsano ve Daniel iyi ve facile hizalama lazer izin çerçeveler oluşturmak için Kiechl ve Dr. Bernhard Koller de....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 1,2-dimiristoil-sn-glisero-3-fosfokolin (DMPC) | Avanti Polar Lipidler | 850345P | >99% |
| 1,2-dimyristoyl-sn-glisero-3-fosfo-etanolamin-dietilen triaminpentaasetat asit heksamonyum tuzu (DMPE-DTPA) | Avanti Polar Lipidler | 790535P | >99% |
| Thulium(III) klorür | Sigma-Aldrich | 439649 | susuz, toz, %99,9 eser metal bazlı |
| Disprosyum(III) klorür | Sigma-Aldrich | 325546 | susuz, toz, %99,9 eser metal bazlı |
| İterbiyum(III) klorür | Sigma-Aldrich | 439614 | susuz, toz, %99,9 eser metal bazlı |
| Kloroform | Sigma-Aldrich | 319988 | stabilizatör, ACS reaktifi vb. olarak etanol içerir; % 99.8 |
| Metanol | Sigma-Aldrich | 34860 | & ge; %99,9 |
| Kolesterol | Amresco | 433 | Ultra saf sınıf |
| D2O | ARMAR kimyasalları | 1410 | 99,8 atom %D |
| Ultra saf su | Millipore | Synergy pak2 (SYPK0SIX2), Millipack GP (MPGP02001) | |
| elektronik pH metre | Metrohm | 17440010 | |
| Whatmann Nuclepore 25 mm 100nm membran filtre | VWR | 515-2028 | |
| Whatmann Nuclepore 25 mm 200nm membran filtre | VWR | 515-2029 | |
| Whatmann Nuclepore 25 mm 400nm membran filtre | VWR | 515-2030 | |
| Whatmann Nuclepore 25 mm 800nm membran filtre | VWR | 515-2032 | |
| Whatmann Filtre kağıdı | VWR | 230600 | |
| 25 ml yuvarlak tabanlı şişe | VWR | 201-1352 | 14/23 NS |
| 3 ml cam çıtçıtlı bardak | VWR | 548-0554 | ND18, 18x30mm |
| 2.5 ml cam şırınga | Hamilton | ||
| Sodyum dihidrojen fosfat dihidrat | Merk | 1.06342 | Fosfat tamponu yapmak için kullanılan tuz |
| di-Sodyum hidrojen fosfat | Merk | 1.06586 | Fosfat tamponu yapmak için kullanılan tuz |
| Sıvı Azot | Karbagas- | ||
| Basınçlı Azot gazı | Carbagas-200 | bar şişe | |
| Lipid Ekstruder 10 ml | Lipex-Termovaril | ile tam donanımlı | |
| Yüksek basınçlı PVC tüp | GR NETUM-4 | MPa'dan fazla | |
| dayanmalıdır Serto adaptörleri | Sertot-Nitril | ||
| eldivenler | VWR-2 | ||
| ml cam pipetler | VWR | 612-1702 | 230 mm uzunluğunda |
| Diyot Lazer | Newport | LPM635-25C | |
| DSP Çift Fazlı Kilitli Amplifikatör | SRS | SR830 | |
| Fotodiyot Dedektörü | Silonex Inc. | SLSD-71N5 | 5mm2, Silikon, foto iletken |
| 5,5 T Kriyojenik Manyetik | Kriyojenik/Oerlikon | AG-12 bar O soğutmalı. RW4000/6000 kompresör, RGD 5/100 TA kriyo kafası | |
| İkinci dereceden alçak geçiren filtre | ev | yapımı-Doğrusal | güç kaynağı 24V DC, ikinci sıra, Sallen Anahtarı, kesme frekansı 360 Hz, +/- 12V, maksimum 10 mA |
| Fotoelastik modülatör | Hinds aletleri | PEM-90 | |
| Glan-Thompson Kalsit Polarizör | Newport | 10GT04 | 25,4 mm çap |
| Kuvars numune küveti | Hellma | 165-10-40 | sıcaklık kontrollü hücre, 0,8 ml, 10 mm yol uzunluğu |
| Sıcaklık probu | Termokontrol Tipi | K, 0,5 mm çap, Thermocoax | |
| Polarize olmayan aynalar | Newport | 50326-1002 | 25,4 mm |
| RS 232 kablolar | Ulusal Aletler | 189284-02 | Kompakt FieldPoint Kontrolörleri BNC 50 & Omega'nın önündeki RS-232 Bağlantı Noktasına Bağlantı için |
| ; Kablo ve konektörler | Ulusal Aletler | 763389-01 | |
| cFP-AI-110 | Ulusal Aletler | 777318-110 | için 8 Kanallı Analog Voltaj ve Akım |
| Giriş Modülü Ulusal Aletler | 778618-01 | Kompakt FieldPoint G/Ç | |
| cFP-CB-3 | Ulusal Cihazlara | 778618-03 | Termokuplları cFP-TC-120 Modülüne Bağlamak için Entegre İzotermal Konnektör Bloğu |
| cFP-TC-120 | Ulusal Aletler | 777318-120 | Kompakt FieldPoint için 8 Kanallı Termokupl Giriş Modülü |
| cFP-1804 | Ulusal Aletler | 779490-01 | NI Compact FieldPoint |
| LabView 2010 | Arabirim Ulusal | Aletler-Endüstriyel | |
| güç tedarik | Traco Power | TCL 060-124 | 100-240V AC |
| Su banyosu | Julabo | FP40-HE | soğutmalı/Isıtmalı Sirkülatör |
Kaynaklar
- Sanders, C. R., Hare, B. J., Howard, K. P., Prestegard, J. H. Magnetically-oriented phospholipid micelles as a tool for the study of membrane-associated molecules. Prog. Nucl. Magn. Reson. Spectrosc. 26, 421-444 (1994).
- Glover, K. J., et al. Structural evaluation of phospholipid bicelles for solution-state studies of membrane....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
