Bu iletişim kuralı bir vitro izole kaplumbağa kafa hazırlık onların göz hareketleri kinematik ölçmek için nasıl kullanılacağını açıklar. Kafatası beyin kaldırıldıktan sonra kranial sinirler rotasyonlar göz ve öğrenci boyutlarda değişiklikleri ölçmek için akımları ile uyarılmış.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Oküler kinematik Vitro uyarılması kaplumbağa kranial sinirler tarafından ölçülen
Bu makalede
Özet
Özet
Hayvan are euthanized sonra onların dokular ölmeye başlar. Kaplumbağaları özellikle sıcak kanlı omurgalılar için karşılaştırıldığında onların dokular, bir daha uzun yaşam süresi nedeniyle bir avantaj sunuyor. Bu nedenle, uzun bir süre sinir sinyalleri araştırmaya ve hakim olmak-in onların hedef eylemler için kaplumbağaları vitro deneyler yapılabilir. İzole bir baş hazırlık kullanarak, kaplumbağalar göz hareketleri kinematik şiddetindeydi ve onların modülasyon tarafından elektrikle ilgili sinyal kranial sinirler tarafından taşınan. Kranial sinirler dokunmadan beyin kafatasından kaldırdıktan sonra disseke kafa göz hareketleri ayarlamak için bir yalpa yerleştirildi. Cam elektrotlar kranial sinirler için bağlı (oculomotor, trochlear ve abducens) ve göz hareketleri yaratamayacak akımların ile uyarılmış. Kızılötesi bir video izleme sistemi ve gözlerin quantified rotasyonlar ile göz hareketleri izlenir. Geçerli genlikleri, frekansları, bir dizi ile bakliyat ve tren süreleri yanıt üzerindeki etkileri gözlemlemek için kullanıldı. Hazırlık beyinden ayrılır çünkü sinir merkezi olarak işlenmiş duyusal bilginin yokluğunda sinyal araştırmak için izole kas hedefe gidiş efferent yol incelenebilir.
Giriş
Gerekçe kaymak kırmızı kulaklı kaplumbağaların elektrofizyolojik deneylerde kullanmak için:
Kırmızı kulaklı kaymak kaplumbağaları (Trachemys scripta elegans), dünyanın en kötü istilacı türlerin1 biri olarak kabul edilir ve bir ekosistem dertte belirtebilirsiniz. Neden kaymak kırmızı kulaklı kaplumbağaların çok başarılı olduğunu neden kötü anlaşılmaktadır ama kısmen hoşgörülü fizyolojisi ve bulundurma hipoksik koşulları2,3altında,4 yaşayabilir gergin dokuların nedeniyle olabilir . Onları istimal o için deneme sayıları t....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Not: Kırmızı kulaklı kaymak kaplumbağalar, erkek ve kadın, bir satıcıdan satın alındı. Kaplumbağalar, sıcak bir hayvan paketi 250 W kızılötesi ışıkları altında sunning için tuğla Adaları ile donatılmış iki 60 litrelik küvetleri içeren yer. Çevre su sıcaklığı 22 ° C'de ile 14/10-h açık/koyu döngüsü devam edildi Işıklar 6: 00'de açık ve 8:00 de devre dışı. Filtreleme sistemleri ile donatılmış tankları haftalık temizlenmiştir ve kaplumbağalar ad libitum her geçen gün beslenen edildi. Kırmızı kulaklı kaymak bakım kaplumbağaları ve tüm aşağıdaki deneysel prosedürler açıklanan burada32,33 kurumsal hayvan ba....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Şekil 1 fotoğraf diseksiyon açıklayan bir videodan alınan görüntülerin gösterir. Görüntüler sinir kesme beyin üzerinden önce tipik mekanlar sunar.
Şekil 1: optik sinir (nII), oculomotor sinir (nIII), trochlear sinir (NIV) ve abducens sinir (in) konumları göstermek için fotoğraf diseksiyon videodan çekilen gör.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Kritik adımlar:
Bu iletişim kuralı içinde önemli adımlar şunlardır: 1) diseksiyon ve transected sinirler; canlılığı korumak için alınan bakım 2) boyutları kranial sinirler tutarlı yanıtlar sağlamak için emme elektrotlar tarafından eşleşen; ve 3) dönmenin gözün yeterli kalibrasyon sağlamak için yalpa kafasından yerleşimini.
Sorun giderme:
Diseksiyon zor olabilir, ama bir kaç kez tamamladıktan sonra adımları nispeten düz ön olmak gerekir. Bunun e.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa gerek yok.
Teşekkürler
Yazarlar Bayan Paulette McKenna ve sekreterlik desteği için bu çalışmada Lisa Pezzino ve Bay Phil Auerbach teknik destek için teşekkür ederiz. Yazarlar ayrıca Drs. Michael Ariel ve Michael S. Jones (Saint Louis Üniversitesi Tıp Fakültesi) izole vitro baş hazırlık için bize tanıtmak için teşekkür ederiz. Bu işbirliği destek için fon Biyoloji bölümü (Robert S. Chase Fonu), akademik araştırma komitesi ve Lafayette Koleji'nde sinirbilim programı tarafından sağlandı. Son olarak, bu eser 28 Eylül 2016 yılında vefat eden Bay Phil Auerbach adanmıştır; taramalı elektron mikroskobu hizmet dışı ve 5 eksenli sahne bu iletişim kuralını kullanmak için kullanışlılığı tanıdı....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Kırmızı kulaklı kaymak kaplumbağaları | Kons Scientific | Trachemys scripta elegans | Büyük boy (kabuk uzunluğu 15-20 cm) |
| Sodyum klorür | Sigma-Aldrich Co., LLC. | S5886 | |
| Potasyum klorür | Sigma-Aldrich Co., LLC. | P5405 | |
| Magnezyum korit | Sigma-Aldrich Co., LLC. | M7304 | |
| Sodyum bikarbonat | Sigma-Aldrich Co., LLC. | S5761 | |
| Dekstroz | Sigma-Aldrich Co., LLC. | C5767 | |
| Konsantre hidroklorik asit | Sigma-Aldrich Co., LLC. | H7020 | |
| Kalsiyum klorür | Sigma-Aldrich Co., LLC. | C7902 | |
| pH metre | Oakton | pH 6+ | |
| Emme stimülasyon elektrodu | A-M Sistemleri | 573000 | Bipolar emme elektrodu. 573000 ifadesinin 573050 ile değiştirildiğini unutmayın. |
| Kılcal cam | A-M sistemleri | 626000 | Mikrofilamentsiz tek namlulu borosilikat kılcal cam, uzunluk 10 cm, dış çap 1.0 mm, iç çap 0.50 mm |
| Alternatif emme stimülasyon elektrodu | A-M Sistemleri | 573050 | Bipolar emme elektrodu. Daha büyük çaplı kılcal cam gerektirir: 627000, dış çap 1,2 mm, iç çap 0,68 mm |
| Stereoskop | Lieca | GZ7 | Büyütme aralığı, 10x – 70x |
| Fiber optik ışık kaynağı | Amscope | HL250-A | 150W Fiber optik mikroskop aydınlatıcı ışık kutusu |
| Rongeurs | Carolina Biyolojik Tedarik Şirketi | 625654 | paslanmaz çelik, düz yay, 5.25" |
| Künt diseksiyon probu | Carolina Biyolojik Tedarik Şirketi | 627405 | Huber alışveriş merkezi probu, çift uçlu prob ve arayıcı, 6 " |
| Microscissors | Carolina Biyolojik Tedarik Şirketi | 623555 | Iris mikrodiseksiyon makası, paslanmaz çelik, 0.5" bıçaklar, 4.75 "uzunluğunda |
| İnce forseps | Sigma-Aldrich Co. LLC. | F6521 | Kuyumcu forseps, dumont No. 5, inox alaşımı, 4.25 " |
| Kavisli forseps | Sigma-Aldrich Co., LLC. | Z168696 | Orta uç, kavisli forseps, paslanmaz çelik, 4" |
| Neşter sapı | Sigma-Aldrich Co. LLC. | S2896 | Neşter kolları, No. 3, paslanmaz çelik |
| Neşter bıçağı | Sigma-Aldrich Co. LLC. | S2771 | Neşter bıçakları, No. 11, çelik |
| Giyotin | Harvard Aparatı | 73-1918 | Kleine giyotin tipi 7575 |
| Spatula | Sigma | Z648299 | Mikro kaşık ve spatula tartı seti. Küçük spatula kullanın: 5.9" uzun x 0,07" Kare uçlu çap kolu: 0.17 " x 1,3 inç uzun, diğer uç tur: 0.17" x 1,27 inç uzun |
| kanca | Autozone | 98069 | SureBilt kanca ve pena seti. Hayvanların ağzının yaralanmasını önlemek için kancanın keskin noktalarını köreltmek için öğütücü kullanın. |
| %95/5 O2/CO2 | Airgas, Inc. | X02OX95C2003102 | %5 Karbondioksit dengesi oksijen sertifikalı standart gaz karışımı, boyut 200 Silindir, CGA-296 |
| Regülatör | Airgas, Inc. | Y11244D296-AG | İğne çıkışlı tek kademeli pirinç 0-100 psi analitik silindir regülatörü CGA-296. 3/8 ", iç çap, regülatöre bağlı vinil hava yolu borusundan 3/16 ", iç çap, hava taşı veya cam pastör pipetine giden havayolu bağlantısına gitmek için pirinç ayarlanabilir hava yolu boru vanası kullanın. |
| Ayarlanabilir hava yolu boru vanası | Doktorlar Foster ve Smith | CD-12061 | Pirinç vana |
| Sert masa | Bilinmiyor | Bilinmiyor | Sağlam bir masanın üzerine yerleştirilmiş otomatik klav kapısı. Dokuz adet 5 inç çapındaki tenis topu, masanın üst yüzeyindeki titreşimleri izole eder. |
| 5" tenis topu | Petco Hayvan Malzemeleri A.Ş. | 712868 | Petco Jumbo Pet Tenis Topu: Toplar dilimlenmez ve otoklav kapısının alt kısmında bulunan entegre bir çerçeve içinde tutulur. |
| Alternatif titreşim izolasyon tablosu | Newport Corporation | INT1-36-6-N | Sert titreşim kontrol sistemi, bütünlük 1: Yüzey boyutları, 3 'x 6'Gimbal |
| ISI, International Scientific Instruments, Inc. | SUPER III-A Tarama EM | 5 eksenli ösantrik aşamadan Aşama: X, Y ve Z doğrusal hareketleri, ± 20 mm, 0,1 mm hassasiyet; Rotasyonlar, dikey, ± 10& derece ve yatay, ± 12.5&4;, 1.25° ile; kesinlik. Not: hizmetten çıkarma cihazından. | |
| Gimbal için mandren | Bilinmeyen | Bilinmeyen | bir mikrotomdan elde edilen mandren, Tarama EM aşaması |
| Alternatif gimbal | ThorLabs, Inc. | MBT602/M ile GN2/M | Çift eksenli açıölçer (GN2/M), kelebek vida ayarlayıcılı 3 eksenli mikroblok aşamasına monte edilmiştir (MBT602/M): kaplumbağa kafasını açıölçerin üst yüzeyinden 12,7 mm yukarıda (dönme noktasına olan mesafe) gözle tutmak için bir ayna tasarlayınVideo |
| tabanlı göz izleme sistemi | Arrington Research, Inc. | ViewPoint EyeTracker, PC-60 | İzleme yöntemi: Karanlık göz bebeği ile kızılötesi video; Siyah beyaz kamera (Ürün BC02): 30 Hz, 640 x 480; Sistem gereksinimleri: Windows 2000, XP, 7, 8, 8.1, 10; Görme aralığı: Yatay +/- 44 derece; dikey +/- 20&�; Doğruluk ~ 0.5& derece;; Uzamsal çözünürlük ~ 0.15& derece;; Öğrenci boyutu çözünürlüğü ~ 0.03 mm; Göz verileri: X, Y bakış konumu, göz bebeği yüksekliği ve genişliği, burulma, delta süresi, toplam süre ve ilgi alanları (ROI); Gerçek zamanlı iletişim (Ürün 0022): Veri dosyasındaki kodları işaretlemek için sekiz TTL giriş kanalına sahip 4 Kanallı Analog Çıkış |
| Çok konumlu manyetik taban | Liman Taşımacılığı Araçları | Pittsburg, ürün #5645 | Manyetik tutucu 12 inç'e kadar ulaşır ve 45 lbs manyetik çekme üretir. Kamerayı konumlandırmak için kullanın. Kameraları monte etmek için makinenin ucuna delikler geçirin. |
| Mikromanipülatör | Kopf | 900 | Emme elektrodunun montajı için 5 eksen manipülasyonu: X, Y, Z doğrusal hareket, 2 eksen dönüş |
| Bom üzerinde diseksiyon kapsamı | Lieca | GZ6 | Büyütme aralığı, 6.7x – 40x |
| Sinir/kas stimülatörü | Astro-Med Çim Telefaktör | Çimi S88 | Çift darbe voltaj stimülatörü: izole edilmemiş sabit voltaj darbeleri (10 mv ila 150 V) oluşturmak için bağımsız olarak çalıştırılabilen veya senkronize edilebilen iki çıkış kanalı. Bakliyatlar tek olabilir (10 μ sn - 10 sn), tekrarlayan (0,01 Hz - 1 KHz) ve trenler (1 ms - 10 s) ve TTL girişleri ve çıkışı ile senkronize. TTL çıkışlarını bir DB25 konnektörünün çıkış kanalları üzerinden ViewPoint EyeTracker'ın TTL giriş kanallarına gönderin. Not: Astro-Med Grass Telefactor artık faaliyette değil. |
| Akım izolasyon cihazı | Astro-Med Grass Telefactor | PSIU6 | Akım uyaran izolasyon ünitesi: S88 tarafından sabit akımların preparasyona güvenli bir şekilde iletilmesini sağlar. PSIU6, bir BNC kablosuyla S88'in çıkış kanallarından birine bağlanır. PSIU6 üzerindeki çarpan anahtarları, S88'in 0.1 ve mikro arasında değişen çok çeşitli akım genlikleri üretmesini sağlar; A'dan 15 mA'ya kadar. |
| İzolasyonlu alternatif sinir/kas stimülatörü | A-M Systems | 2100 | İzole Nabız Stimülatörü: Ünite, sabit akımlar üretmek için dahili izolatöre sahiptir. |
Kaynaklar
- Kikillus, K. H., Hare, K. M., Hartley, S. Minimizing false-negatives when predicting the potential distribution of an invasive species: A bioclimatic envelope for the red-eared slider at global and regional scales. Anim Conserv. 13, 5-15 (2010).
- Lutz, P. L., Rosenthal, M., Sick, T. J. Living without oxygen: turtle brain as a model of anaerobic metabolism. Mol Physiol. 8, 411-42....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
