Yöntem makalesi

Esenlik farelerde sistematik değerlendirilmesi için genel anestezi yordamları

DOI:

10.3791/57046

⸱

20 Mart 2018

 ,  ,  ,  ,  , 
1Institute of Animal Welfare, Animal Behavior and Laboratory Animal Science, Department of Veterinary Medicine, Freie Universität Berlin, 2Institute of Pharmacology and Toxicology, Department of Veterinary Medicine, Freie Universität Berlin, 3German Federal Institute for Risk Assessment (BfR), 4Unit of Physiology, Pathophysiology and Experimental Endocrinology, Department of Biomedical Sciences, University of Veterinary Medicine

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Biz refah farelerde genel anestezi kullanılarak işlemler sırasında değerlendirmek için bir iletişim kuralı geliştirilmiştir. Davranış parametreleri glukokortikoid metabolitleri analiz edildi yanı sıra refah düzeyini gösteren bir dizi. Protokol bilimsel, hayvan-merkezci bir şekilde önem derecesini tahmin etmek için genel bir yardım olarak hizmet verebilir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

İlke (değiştirme, azaltma, arıtma) geliştirilen 3R doğrultusunda Russel ve Burch, bilimsel araştırma seçimli-e doğru hayvan deneme mümkün olduğunda kullanmalısınız. Hayvan deney için hiçbir alternatif olduğunda kullanılan Laboratuvar hayvanlarının toplam sayısı değerli veri almak için gerekli en az olmalıdır. Ayrıca, ağrı, acı ve sıkıntı deneysel işlemin eşlik eden en aza indirmek için uygun arıtma tedbirleri uygulanmalıdır. Ağrı, acı ve sıkıntı derecesini sınıflandırmak için kullanılan olmayan-kurtarma, hafif, orta veya şiddetli (Avrupa Birliği yönetmeliği uyarınca 2010/63) kategorilerdir. Özel durumlarda hangi Kategoriler uygulamak belirlemek için bilimsel olarak ses araçları kullanmak çok önemli.

Burada sunulan iyi being değerlendirme protokolü genel anestezi sırasında kullanılan yordamlar için tasarlanmıştır. Protokol tavşan çukuru ve davranış refah göstergeleri olarak bina yuva gibi eve kafes etkinlik, fare yüz buruşturma ölçek ve lüks davranışları üzerinde duruluyor. Ayrıca ücretsiz keşif paradigma için özellik anksiyete ile ilgili davranışı kullanır. Fekal corticosterone metabolitleri akut stres belirtileri olarak 24 saat sonrası anestezik süre içinde ölçülür.

İletişim kuralı iyi olmak genel anestezi takip fareler üzerinde bilimsel olarak sağlam bilgi sağlar. Basitliği nedeniyle protokol kolayca adapte ve planlı bir çalışma entegre. Kategorilerine göre Avrupa Birliği yönetmeliği uyarınca 2010/63 tehlikede sınıflandırmak için bir ölçek sağlamasa da, araştırmacılar bilimsel olarak ses verileri kullanarak bir yordam önem derecesini tahmin yardımcı olabilir. Su kuyusu-varlık değerlendirilmesi bilimsel, hayvan-merkezci bir şekilde geliştirmek için bir yol sağlar.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

AB yönergesi 2010/631 Russel ve Burch2 tarafından geliştirilen 3R prensibi (yerine, azaltma, arıtma) hayvan deney gerekli olduğunda uygulanacak olması öngörülüyor. AB direktifi, nihai hedefi tüm hayvan aşama için ama şu an için bazı hayvan deneyleri hala insan ve hayvan sağlığını korumak araştırma yapmak üzere ihtiyaç vardır, Direktifin kabul eder. Böylece, bir hayvan deney alternatif herhangi bir yöntemle değiştirilemez, laboratuvar hayvanlarının yalnızca az sayıda güvenilir sonuçlar elde etmek için kullanılacak tek. Ayrıca, ağrı, acı ve sıkıntı deneysel prosedürler eşlik eden miktarı uygun arıtma yöntemlerle indirilmelidir. AB yönergesi 2010/63 bir yordam şiddeti prospektif kurtarma olmayan, hafif, orta veya şiddetli1sınıflandırılmış gerekir öngörülüyor. Önem derecesi sınıflandırma bir harf tarafından ayrı ayrı karar verdi gibi belirli bir yordamı şiddetini tahmin etmek için bilimsel olarak ses araçları olması önemlidir.

Skor yaprak3 Morton ve Griffith tarafından önerilen olarak normal durum, su kuyusu-varlık4üzerinde olumsuz etkileri de dahil olmak üzere herhangi bir sapma tespit gerekli bir araç vardır. Skor çarşaf geriye dönük olarak ağrı, acı, belirlemek için kullanılır ve sıkıntı neden tarafından bir deney ve odak üstünde görünür değişiklikleri (örneğin, vücut ağırlığı, kürk, yürüyüş) bireysel hayvanın fiziksel durumda. Rağmen ek VIII ve AB direktifi 2010/63 her önem Kategori örnekleri sağlar, veri tabanlı araştırmacılar hala eksikliği araçları bilimsel olarak kullanarak belirli bir yordamı önem derecesini tahmin etmek için.

Devamsızlığın göstergelerin olumsuz refahını gösterilen hayvan durumunu belirlemek için tek yol değildir; Göstergeler olumlu esenlik işaret varlığı da önemli5,6,7,8' dir. Örneğin, hayvan tavşan çukuru gibi lüks davranışları görüntülemek ve tüm önemli ihtiyaçlarını karşılandığında bina davranış iç içe. Su kuyusu-varlık azalır, lüks davranışları ilk5,7düşüş vardır. Su kuyusu-varlık değerlendirmede kullanılacak iletişim kurallarını göstergeleri fiziksel, fizyolojik/biyokimyasal ve psikolojik durumlarını hayvan için onların refahını detaylı ve kapsamlı bir şekilde9değerlendirmek için işaret içermelidir.

Arıtma bağlamı içinde bir protokol fareler10refahı üzerinde genel anestezi içeren bir yordam etkilerini değerlendirmek için ve bu gereksinimleri karşılamak için geliştirilmiştir. Aynı zamanda, belirli bir deney kolay entegrasyon iletişim kuralı etkinleştirmek için herhangi bir ek yük en aza indirmek için hedefi oldu. Protokol davranış, etkinlik, gıda alımı ve iç içe geçirme gibi eve kafes davranış ve özellik anksiyete ile ilgili davranışı burrowing dikkate alır. Buna ek olarak, bu fare yüz buruşturma ölçek (MGS) ve non-invaziv analizi corticosterone metabolitleri, dışkı içerir. Protokol Refah değerlendirilmesi bilimsel ve hayvan-merkezci bir şekilde kolaylaştırmak için ve önem derecesi sınıflandırılması destekler refahı üzerinde bilgi sağlamak için tasarlanmıştır. Skor sayfalarını ek olarak, bir yordam önem sınıflandırılması için yararlı bilgiler sağlayabilir. Protokol yapmak kolaydır ve kapsamlı ekipman gerektirmez gibi bu devam eden bir deney bir çalışmanın sonuçlarını etkileyen olmadan entegre edilebilir. Bu unutulmamalıdır bu hayvan araştırma: Raporlama, In Vivo deneyler (varış) kılavuz11 yaşında hayvan deneyleri, tasarım, analiz, iyileştirilmesi ve raporlama amacı ile ilgili tüm çalışmalarda dikkat edilmelidir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Çalışma Alman hayvan refah Yasası tarafından ortaya konan esaslarına göre gerçekleştirilmiş ve Berlin Devlet yetkilisi tarafından kabul edildi ("Landesamt für Gesundheit und Soziales", izni numarası: G0053/15).

Not: Ana amacı bu iletişim kuralı, glukokortikoid metabolitleri tekrarlanan Anestezi etkisini araştırmak için yapıldı. Bir örnek boyutu hesaplama kullanılmak üzere hayvan sayısını belirlemek için gerçekleştirildi: n ≥ 2 × (s/μ1- μ2)2 × (zα + zβ)2. µ1- μ2 hangi güç ve örnek boyutu hesaplamalar yapılır popülasyon ortalamaları arasındaki fark nedir (α = %5, β = %80); zα 1,96 ve zβ = = 0,84 çoğu standart normal dağılım quantil. Bu iletişim kuralı time line şekil 1 gösterir. Bir parametre iletişim kuralı Denetim düzeyi ile bir fark gösteriyorsa, hayvan yakından izlenmeli ve parametre daha uygun bir süre sonra ölçülmelidir. Özellik anksiyete ile ilgili davranışı arttırılırsa, örneğin, bu davranış daha bir hafta sonra zamanına kadar tam kurtarma belirlemenize yardımcı olması için test edilmelidir. Zaman puan ve bu iletişim kuralında tanımlanan dönemleri ile diğer yordamları kullanmak için adapte edilebilir. Zaman Puan değiştirirken, habituation dönemleri iletişim kuralında tanımlandığı gibi tutulmalıdır. Fareler'ın davranışlarını etkilemek faktörler azaltmak için daha fazla düzenleme gerektiren testleri farelerin normal bir davranış rahatsız etmeyin testlerden sonra yapılmalıdır. Şekil 2 bir Özet puanlama sayfasını kullanarak iletişim kuralının tüm testleri özetlenmiştir. Şekil 3 test sonuçlarını yorumlamak bakış Basitleştirilmiş ölçekler refah, notu sağlar.

1. habituating fareler deneyci tarafından işleme için

  1. Fareler başka bir tesis veya satıcı alındıktan sonra en az 2 hafta için hayvan tesisine alıştırmak izin.
  2. Fareler gruplar halinde ev ve standart koşullar altında (Oda sıcaklığı 22 ± 2 ° C; bağıl nem 55 ± % 10) 12:12 saat ışık: karanlık döngüsünü proje.
  3. Tüm grupları olarak standart zenginleştirme, tünel ve pamuk nestlets sağlamak ve yiyecek sağlamak ve ad libitumsu.
  4. Bütün fareler tünel ve/veya en az bir hafta12test önce işleme Kupası alıştırmak.
    Not: stres veya kaygı, hangi sırayla su kuyusu-varlık etkiler ve ayrıca bu protokolü12sonuçları üzerinde etkisi vardır fareler kadar kuyruk tarafından toplama tetikleyebilir.

2. davranışsal test Oda ve çizgisel hazırlanması

Not: test, ideal bir konuma sahip hayvanlar saklandığı Oda için ayrı bir oda sağlar. Yordamı yürütülen önce test Oda en az 60 dk ev onların kafes farelerde taşıma. Mümkünse, bu protokol aynı test odada nereye yordamı yürütülen tüm testler yapmak.

  1. Bir gözlem kafes tavşan çukuru davranış8 sınamak ve MGS13 ' te (şekil 4) kullanmak için fotoğraf çekmek için hazırlayın.
    1. Kullanım alanı yaklaşık 220 mm × 290 mm ve yükseklik 390 mm cam kutusunu kullanın.
    2. Bu kutuyu yere malzeme yatak takımları yaklaşık 0.5 cm ile kapak.
    3. Bir avuç yeni çevre tarafından neden sıkıntı azaltmak için yeni yatak malzemesi üstüne ev kafes malzemeden kullanılmış yatak dağılım.
    4. Besin, normal diyet ve su sağlanan aynı tür içerir.
      Not: Eğer mümkün, çünkü fareler malzeme yatak takımları ile su yuvarlak kase doldurmak olabilir su şişeleri, kullanın.
  2. Bir kafes hazırlamak (III yazın: 420 mm × 260 mm × 150 mm) kendisi için fareler yer alan tek tek 24 saat gözlem döneminin (şekil 5).
    Not: bireysel konut süresini en aza indirmek için davranış, eve kafes aktivite, gıda alımı ve fekal corticosterone metabolitleri (FCM) bu dönemde bina yuva için veri toplamak.
    1. Yeni kafes (yaklaşık 0.5 cm derin) ve dağılım bir avuç kullanılmış yatak malzemesi olmadan eve kafes yeni malzeme, üzerine gelen dışkı malzeme sıkıntı azaltmak için yatak takımları yer.
    2. Çevre zenginleştirme tek (bkz: tablo malzemelerin)14olarak tanımlanmış bir ağırlık, bir standart kare pamuk nestlet sağlar.
      Not: Ticari nestlets ağırlık farklılık gösterebilir. Bu nedenle, Deacon tarafından açıklanan nestlet ağırlığını değiştirilebilir ve 2.7 g14yerine 2.0 g kullandık.
    3. Kızılötesi sensör ev kafes etkinliği ölçmek için kullanırken Infrared duyumsal üstünde belgili tanımlık kafes monte ( malzemelerin tabloyabakın).
    4. Ad libitumsu ve yiyecek, normal diyet olarak sağlanan aynı tür sağlar.

3. fare yüz buruşturma ölçek

Not: MGS gözlem kafes üç saat noktalarda alınır için Fotoğraflar: (i) 2 gün önce kayıt temel MGS düzeyleri, (ii) 30 dakika sonra prosedür ve (iii) 150 dk sonra yordamı yordam. Su kuyusu-varlık Engelli olduğunu, MGS puanları artırmak. Eğer artan MGS puanları hala 150 dk sonra izlenmektedir, daha sonraki bir aşamada ek fotoğraf çekmek.

  1. Bir yüksek-tanım fotoğraf makinesi fotoğrafçılık için kullanın.
  2. Yavaşça fare gözlem kafesin içine aktarmak ve en az 30 dakika için yeni ortama alıştırmak için fareyi izin.
  3. Sürekli hakkında almak için her zaman 30-40 fotoğrafları gelin 1-2 dk içinde.
  4. Keskin ön veya yan fotoğrafları seçerek ve bulanık fotoğraflar veya fare ön veya yan görünüm daha başka açılardan göster Fotoğraf atarak tüm fotoğrafları sıralamak.
  5. Rastgele her zaman bir nokta, (Yani 2 gün önce yordamı, 30 dakika sonra prosedür ve prosedür sonra 150 dk) için her fare bir fotoğraf seçin.
  6. Vücut pozisyonu görünür13bile değil sadece fare başkanı görüntülemek amacıyla fotoğraf kırpma.
  7. Her fotoğraf için bir levha ile bir elektronik tablo dosyası oluşturup MGS her sayfasına beş yüz eylem birimleri dahil olmak üzere bir tablo ekleyin.
    Not: Dosyayı temel fotoğraf yanı sıra fotoğraf sonrası yordam içerir.
  8. Çarşafları sırasını rastgele.
  9. Daha önce Langford vd tarafından geliştirilen MGS kullanın ve onları 3 nokta bir ölçek kullanarak yüz eylem birimlerini Puan edinildi eğitilmiştir üç bağımsız kişiler için bir bilgisayar ekranında dosya mevcut (0 = yok, 1 = orta mevcut, 2 belli ki = mevcut).
    Not: Puanlama parametreleri13takip bağlıdır: Orbital sıkma ("sıkıca kapalı bir göz kapağı veya bir göz sıkmak ile yörünge alanın daralması"); burun çıkıntı ("uzantısı deri burun köprüsü üzerinde görünür yuvarlak"); yanak çıkıntı ("konveks görünümü yanak kas"); kulak pozisyon ("kulak") dışında çekti ve onların temel konumdan geri veya geri çizilmiş olması kulak ipuçları sayesinde bu formu dikey sırtlar featuring; Bıyık değişiklik ("bıyık onların taban çizgisinden hareketin getirin ya da geri, yüz veya ileri, karşı sanki diken; diken Bıyık da birlikte yığın ").
  10. (Uyarlama Langford vd aşağıdaki gibi puanları, analiz 13).
    1. MGS puanı üretmek için tüm yüz eylem birimler her fotoğraf için ortalama.
      Not: Eğer bir yüz eylem birim attı değil, kalan yüz eylem birimleri ortalama.
    2. Her fare için bir MGS fark puan elde etmek fotoğraf sonrası yordamı için ortalama temel fotoğraflardan için ortalama çıkarma.
    3. MGS fark puanları (ilgili örnekleri için parametrik olmayan test) kişiler arasındaki farkları sınayın.
      Not: önemli bir fark (p < 0,05) ise, tüm fotoğrafları puanları veya sadece bir kaç fotoğraf puanları kişiler arasında farklılık olup olmadığını belirlemek. İkinci doğruysa bu fotoğraflarını puanlama yineleyin. Aksi takdirde, kişilerin MGS eğitim yineleyin ve fotoğrafları tekrar Puan edinildi.
    4. Sonuçları tüm kişilerin önemli ölçüde farklı değildir Eğer ortalama MGS fark puanları her fare için farklı kralları elde.
    5. Parametrik olmayan istatistik test çalışma grupları arasında ortalama olarak MGS fark puanları karşılaştırmak için kullanın.

4. burrowing davranış8,15,16

  1. Burrows 140 ± 2 g gıda granül normalde standart opak plastik su şişesi (250 mL, 150 mm Uzunluk, 55 mm çap, şişe boyun 45 mm çapı)8diyet olarak sağlanan koyarak hazırlamak.
    Not: fare geniş tüpler tercih olarak, burrows 68 mm çapında Deacon16tarafından açıklandığı gibi kullanılabilir.
  2. Yerde yuva iklimlendirme için önceki yordamı 5 gün gıda granül ev kafeste dolu.
    Not: İçinde belgili tanımlık kafes düzenli gıda dağıtım ünitesi değil boşaltılması ama fareler kullanılan olarak da yiyecek parçaları ile dolu kalması gereken bu.
  3. Yürütmek testi iki kez, iki gün önce yordamı (temel); son 30 dk sonrası yordamı de gerçekleştirmek.
    1. MGS için fotoğraflar nerede çekildi gözlem kafes için en az 30 dk için alıştırmak fare izin.
    2. Gıda granül gözlem kafes arka duvarına paralel yer plastik su şişesi dolu.
    3. 2 h sonra yuva içinde kalan yemek parçaları (g) tartmak.
  4. İlk oranı (%) göre fareler tarafından yuva kaldırıldı gıda granül ağırlığını hesaplayın.

5. 24 saat gözlem süresi

Not: Fareler tek tek, 2.2 içinde açıklandığı gibi yerleştirilmiştir. (Şekil 5), bir 24 saat boyunca yiyecek ölçmek amacıyla alımı, eve kafes etkinlik, iç içe bina davranış ve FCM düzeyleri. 24 saat gözlem iki kez gerçekleşir: (i) 2 gün önce yordamı temel seviyeler (II) üzerinde işlem yapıldığı gün.

  1. Gıda alımı
    1. Fareler vücut ağırlığı (skor sayfası parçası) herhangi bir değişiklik değerlendirmek için (örneğin 2 gün öncesine anestezi, anestezi, 2 gün sonra anestezi ve haftalık anestezi sonra hemen önce), düzenli aralıklarla tartın.
      Not: Vücut ağırlığı gıda alımı vücut ağırlığının gram başına hesaplamak için gereklidir. Su alımı da 24 saat gözlem süresince ölçülebilir. Gıda alımı azalır, su kuyusu-varlık bozulmuş olabilir.
    2. Kafes (yaklaşık 100 gr) gıda birimi cinsinden sağlanan standart gıda diyet (gram) ilk ağırlığını belirlemek.
    3. Standart gıda diyet kilo 24 saat gözlem dönemin sonunda belirlemek.
    4. Kafes yan dikkatle gıda dökülme için gıda birimi altında inceden inceye gözden geçirmek ve gıda biriminde kalan yemek parçaları ağırlığını bulundu herhangi bir ek gıda parçaları ekleyin.
    5. Gıda alımı birim vücut ağırlığı başına hesaplayın.
  2. Eve kafes etkinliği
    Not: Kızılötesi sensör kullanımı için aşağıdaki talimatlara bakın ( malzemelerin tabloyabakın), ama eve kafes etkinlik-de var değerlendirildi ile alternatif programlar. Sapma eve kafes faaliyet denetimi düzeylerinden (örneğin hypoactivity, hiperaktivite) Engelli su kuyusu-varlık belirtisi olabilir.
    1. Programı başlatın.
    2. 1 dk bir örnek Aralık ve 24 saat darbeleri her dakika için 24 saat kaydedilir anlamı, bir satın alma saati seçin.
      Not: kayıt başladıktan sonra deneyci Oda birkaç kez girerse, yalnızca veri ne zaman fare rahatsız değildi dönemlere ait kullanın (Yani karanlık dönemde).
    3. 10-min aralığı impulslarinin toplamı.
    4. (Darbeleri × min) zaman eğri altındaki alan hesaplamak.
  3. Yuva bina davranışı
    Not: Karmaşık ve yüksek yuvalarını su kuyusu-varlık bir göstergesi olarak hizmet verebilir.
    1. Bir kare pamuk nestlet yerleştirin (bkz. Tablo reçetesi) kafesin ortasında tanımlanmış ağırlığı (örneğin 2.0 g).
    2. Deacon14 göre 5 puanlık bir ölçekteki (aşağıya bakın) üzerinde yuva ertesi sabah, yaklaşık 2 h ışığı yanar sonra puan. İlk nestlet ağırlığının en az % 5 herhangi bir dönen nestlet adet tartın. 14 aşağıdaki gibi yuva Puan edinildi
      1. Skor "1" Eğer sağlam nestlet % 90'ı atayın.
      2. % 50-90 olduğu gibi "2" puanı atayın.
      3. Ata nestlet % 50-90'ı parçalanmış "3" puanı.
      4. Atama "4" daha--dan %90 paramparça olmuş ama yuva ise düz ve onun çevresi % 50'den az kıvrılıp zaman fare vücut yüksekliği daha yüksek puan edinildi.
      5. Atama "5" daha fazla alırsanız daha % 90 nestlet paramparça olmuş ve yuva yüksek ise onun çevresi fazla % 50 yukarıya kıvrılmış bir fare vücut yüksekliği yüksek puan.
  4. Fekal Corticosterone metabolitleri
    Not: Denetim seviyesinden FCM artar akut stres seviyeleri 24-h postanesthetic döneminde yansıtır.
    1. 24 saat gözlem dönemin sonunda forseps kullanarak kafes tüm kuru dışkı parçaları toplamak ve ıslak granül idrar ile kontamine ortadan kaldırmak.
    2. FCM Palme vd göre ayıklamak 17, aşağıdaki gibi.
      1. 60-70 ° c sıcaklıkta kuru dışkı örnekleri
      2. Dışkı örnekleri bir harçla lunaparkçı.
      3. 0,05 g bir aliquot 1 mL % 80 metanol ile bir santrifüj tüpü 30 dk için çok bir vortex Tarih sallamak.
      4. 2500 x g 15dk için de örnekler santrifüj kapasitesi.
      5. 0.5 mL süpernatant başka bir santrifüj tüpüne pipet.
      6. Dışkı örnekleri (ve özleri)-18 ° c en azından depolamak
      7. FCM 5α-pregnane-3b,11b,21-triol-20-one enzim immunoassay (ÇED)18,19 veya başka bir tam olarak doğrulanmış ÇED kullanarak analiz.
    3. FCM konsantrasyonları temel FCM konsantrasyonları göre yüzde değişim hesaplayın.

6. ücretsiz keşif paradigma

  1. Raf ev kafesten alıp 24 saat gözlem dönemin sonunda bir masa yüzeyine yerleştirin.
  2. Bir gridded kafes (olmadan yiyecek ya da su şişeleri) içinde belgili tanımlık kafes kafes uzun kenarına 45 ° açılı yerleştirin.
    Not: fare için saklanacak bir yer olarak hizmet vermektedir, yuva yok etmez ama kafes çapraz üzerinde yuvası yerleştirin.
  3. Monitör veya video kaydı fareler için yaklaşık 1,5 m mesafeden 10 dak.
    1. Sayacı başlatmak.
    2. Ne zaman fare (ile tüm dört paws üstünde belgili tanımlık kafes tepe) kafes üst üzerine tırmanıyor ya da kafes üst (bir veya daha fazla pençeleri kafes katta) yaprak her zaman unutmayın.
      Not: Bazı fareler kafesi yukarı tırmanmak ve kafes kenarı boyunca yürümek için bırakın. Bazı fareler kafesi üstte de arka. Fareler hâlâ kafesin üstündeki olsaydı bu gibi durumlarda tedavi.
  4. Bert vd. aşağıdaki parametreleri değerlendirmek 20.
    1. Gecikme süresi (saniye cinsinden) ilk keşif için analiz.
    2. Keşifler sayısı analiz.
    3. Toplam süre (saniye) keşif analiz.
      Not: Yüksek oranda gecikme süreleri ilk keşif az sayıda keşifler ve düşük toplam süre keşif için daha yüksek bir özellik anksiyete düzeyleri belirtebilirsiniz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokol was orijinal gelişmiş-esenlik isoflurane anestezi bir deneyimi takip C57BL/6JRj farelerin değerlendirmek için (bir 45 dk anestezi oturum, n = 13 kadın) veya tekrarlanan isoflurane anestezi (altı 45 dk anestezi oturumlarıyla 3-4 gün n anestezi oturumları arasında 13 kadın =) refah kontrol fare ile karşılaştırıldığında (n = 6 kadın)10hangi anestezi aldı ama aynı önlemler göre test edildi,. Biz bir deneyimi isoflurane anestezi ve iyi tedavi edilmeyen kontr...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Protokol was orijinal gelişmiş-esenlik bir tek anestezi veya tekrarlanan isoflurane anestezi alınan C57BL/6JRj farelerin değerlendirmek için. Sonuçları esenlik değerlendirmek için hassas yöntemleri vardı bu testleri lüks davranışların yanı sıra diğer önlemler (örneğin ücretsiz keşif paradigma, MGS, tavşan çukuru gıda alımı) onaylayın. Tekrarlanan isoflurane anestezi özellik anksiyete ile ilgili davranışı, MGS ve tavşan çukuru davranış kısa vadeli etkileri nedeniyle. Ayrıca, tekrarlanan isoflurane anestezi gıda a...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ifşa gerek yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Sabine örnek derlemesiyle, Edith Klobetz-Rassam FCM, çözümlenmesi için yardım için Jacobs sayesinde PD Dr. med. veteriner. Habil. Roswitha istatistiksel analizi ile yardım için Merle ve Wiebke için el yazması yazım denetleme Gentner. Çalışma, Berlin-Brandenburg araştırma platformu BB3R (www.bb3r.de) bir parçasıdır ve Alman Federal Bakanlığı Eğitim ve araştırma tarafından finanse edildi (sayı vermek: 031A262A) (www.bmbf.de/en/index.html).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
IsofluranCP-Pharma Handelsgesellschaft mbH1214
InfraMot - Sensör ÜniteleriTSE Systems302015-SENS
InfraMot - Kontrol ÜniteleriTSE Systems302015-C/16
InfraMot - YazılımTSE Sistemleri302015-S
Nestlet NAncare - PlexxNES3600
Fotoğraf Makinesi EOS 350DCanon

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. 2010 EU. Directive 2010/63/EU. Official Journal of the European Union. , L276/33-L276/29 (2010).
  2. Russell, W. M. S., Burch, R. The principles of humane experimental technique. , London: Methuen. (1959).
  3. Morton, D. B., Griffiths, P. H. Guidelines on the recognition of pain, distress and discomfort in experimental animals and an hypothesis for assessment. Vet Rec. 116 (16), 431-436 (1985).
  4. Bugnon, P., Heimann, M., Thallmair, M. What the literature tells us about score sheet design. Lab Anim. 50 (6), 414-417 (2016).
  5. Boissy, A., et al. Assessment of positive emotions in animals to improve their welfare. Physiol Behav. 92 (3), 375-397 (2007).
  6. Arras, M., Rettich, A., Cinelli, P., Kasermann, H. P., Burki, K. Assessment of post-laparotomy pain in laboratory mice by telemetric recording of heart rate and heart rate variability. BMC Vet Res. 3, 16(2007).
  7. Jirkof, P. Burrowing and nest building behavior as indicators of well-being in mice. J Neurosci Methods. 234, 139-146 (2014).
  8. Jirkof, P., et al. Burrowing behavior as an indicator of post-laparotomy pain in mice. Front Behav Neurosci. 4, 165(2010).
  9. Hawkins, P., et al. A guide to defining and implementing protocols for the welfare assessment of laboratory animals: eleventh report of the BVAAWF/FRAME/RSPCA/UFAW Joint Working Group on Refinement. Lab Anim. 45 (1), 1-13 (2011).
  10. Hohlbaum, K., Bert, B., Dietze, S., Palme, R., Fink, H., Thöne-Reineke, C. Severity classification of repeated isoflurane anesthesia in C57BL/6JRj mice-Assessing the degree of distress. PLoS ONE. 12 (6), e0179588(2017).
  11. Kilkenny, C., Browne, W. J., Cuthill, I. C., Emerson, M., Altman, D. G. Improving bioscience research reporting: the ARRIVE guidelines for reporting animal research. PLoS Biol. 8 (6), e1000412(2010).
  12. Hurst, J. L., West, R. S. Taming anxiety in laboratory mice. Nat Methods. 7 (10), 825-826 (2010).
  13. Langford, D. J., et al. Coding of facial expressions of pain in the laboratory mouse. Nat Methods. 7 (6), 447-449 (2010).
  14. Deacon, R. M. Assessing nest building in mice. Nat Protoc. 1 (3), 1117-1119 (2006).
  15. Deacon, R. M., Raley, J. M., Perry, V. H., Rawlins, J. N. Burrowing into prion disease. Neuroreport. 12 (9), 2053-2057 (2001).
  16. Deacon, R. M. Burrowing in rodents: a sensitive method for detecting behavioral dysfunction. Nat Protoc. 1 (1), 118-121 (2006).
  17. Palme, R., Touma, C., Arias, N., Dominchin, M. F., Lepschy, M. Steroid extraction: get the best out of faecal samples. Wien Tierarz Monats. 100 (9-10), 238-246 (2013).
  18. Touma, C., Palme, R., Sachser, N. Analyzing corticosterone metabolites in fecal samples of mice: a noninvasive technique to monitor stress hormones. Horm Behav. 45 (1), 10-22 (2004).
  19. Touma, C., Sachser, N., Mostl, E., Palme, R. Effects of sex and time of day on metabolism and excretion of corticosterone in urine and feces of mice. Gen Comp Endocrinol. 130 (3), 267-278 (2003).
  20. Bert, B., Schmidt, N., Voigt, J. P., Fink, H., Rex, A. Evaluation of cage leaving behaviour in rats as a free choice paradigm. J Pharmacol Toxicol Methods. 68 (2), 240-249 (2013).
  21. Lister, R. G. Ethologically-based animal models of anxiety disorders. Pharmacol Ther. 46 (3), 321-340 (1990).
  22. Belzung, C., Berton, F. Further pharmacological validation of the BALB/c neophobia in the free exploratory paradigm as an animal model of trait anxiety. Behav Pharmacol. 8 (6-7), 541-548 (1997).
  23. Finlayson, K., Lampe, J. F., Hintze, S., Wurbel, H., Melotti, L. Facial indicators of positive emotions in rats. PLoS ONE. 11 (11), e0166446(2016).
  24. Miller, A., Kitson, G., Skalkoyannis, B., Leach, M. The effect of isoflurane anaesthesia and buprenorphine on the mouse grimace scale and behaviour in CBA and DBA/2 mice. Appl Anim Behav Sci. 172, 58-62 (2015).
  25. Miller, A. L., Golledge, H. D., Leach, M. C. The influence of isoflurane anaesthesia on the rat grimace scale. PLoS ONE. 11 (11), e0166652(2016).
  26. Deacon, R. Assessing burrowing, nest construction, and hoarding in mice. J Vis Exp. (59), e2607(2012).
  27. Felton, L. M., Cunningham, C., Rankine, E. L., Waters, S., Boche, D., Perry, V. H. MCP-1 and murine prion disease: separation of early behavioural dysfunction from overt clinical disease. Neurobiol Dis. 20 (2), 283-295 (2005).
  28. Deacon, R. M., Croucher, A., Rawlins, J. N. Hippocampal cytotoxic lesion effects on species-typical behaviours in mice. Behav Brain Res. 132 (2), 203-213 (2002).
  29. Filali, M., Lalonde, R., Rivest, S. Subchronic memantine administration on spatial learning, exploratory activity, and nest-building in an APP/PS1 mouse model of Alzheimer's disease. Neuropharmacology. 60 (6), 930-936 (2011).
  30. Guenther, K., Deacon, R. M., Perry, V. H., Rawlins, J. N. Early behavioural changes in scrapie-affected mice and the influence of dapsone. Eur J Neurosci. 14 (2), 401-409 (2001).
  31. Deacon, R. M., Reisel, D., Perry, V. H., Nicholas, J., Rawlins, P. Hippocampal scrapie infection impairs operant DRL performance in mice. Behav Brain Res. 157 (1), 99-105 (2005).
  32. Jirkof, P., et al. Assessment of postsurgical distress and pain in laboratory mice by nest complexity scoring. Lab Anim. 47 (3), 153-161 (2013).
  33. Atanasov, N. A., Sargent, J. L., Parmigiani, J. P., Palme, R., Diggs, H. E. Characterization of train-induced vibration and its effect on fecal corticosterone metabolites in mice. J Am Assoc Lab Anim Sci. 54 (6), 737-744 (2015).
  34. Voigt, C. C., et al. Hormonal stress response of laboratory mice to conventional and minimally invasive bleeding techniques. Anim Welf. 22 (4), 449-455 (2013).
  35. Walker, M. K., et al. A less stressful alternative to oral gavage for pharmacological and toxicological studies in mice. Toxicol Appl Pharmacol. 260 (1), 65-69 (2012).
  36. Miyashita, T., et al. Social stress increases biopyrrins, oxidative metabolites of bilirubin, in mouse urine. Biochem Biophys Res Commun. 349 (2), 775-780 (2006).
  37. Bains, R. S., et al. Analysis of individual mouse activity in group housed animals of different inbred strains using a novel automated home cage analysis system. Front Behav Neurosci. 10 (106), (2016).
  38. Saibaba, P., Sales, G. D., Stodulski, G., Hau, J. Behaviour of rats in their home cages: daytime variations and effects of routine husbandry procedures analysed by time sampling techniques. Lab Anim. 30 (1), 13-21 (1996).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Mouse Well Being AssessmentGeneral Anesthesia ProceduresMouse Grimace ScaleBurrowing Behavior AnalysisNest Building BehaviorHome Cage Activity MonitoringFecal Corticosterone MetabolitesFree Exploratory ParadigmAnimal Welfare AssessmentEU Directive 2010 63

İlgili makaleler