Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

İlk - ve geç-aşamalarında Organ oluşumu kuş modelindeki keşfetmek için iki adımlı yaklaşım: timus ve paratiroid bezleri Organogenesis paradigma

6.4K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/57114

⸱

17 Haziran 2018

 , 
1Instituto de Histologia e Biologia do Desenvolvimento, Faculdade de Medicina, Universidade de Lisboa

Bu makalede

Özet

Bu makalede klasik bıldırcın-tavuk chimera sistemin roman vitro ve ovo içinde deneysel prosedürler birleştirerek organ oluşumu, çalışma Güncellenme Zamanı bir yaklaşım sağlar.

Özet

Kuş embriyo deneysel bir model gelişim biyolojisi seminal buluşlar için son derece önemli olmuştur. Birkaç yaklaşım, bıldırcın-tavuk chimeras oluşumu ve chorioallantoic membran (ektopik doku tarihinden geriye son yüzyılda gelişimi sürdürmek için CAM) kullanımı arasında. Günümüzde, son vitro metodolojileri ile klasik bu tekniklerin birleşimi roman umutları daha fazla organ oluşumu keşfetmek için sunuyor.

Burada ilk - ve geç-aşamalarında organogenesis çalışmaya bir iki adım yaklaşım tarif. Kısaca, embriyonik bölge organ meşru bölge içeren bir organotypic sistemi (en fazla 48 s) içinde bıldırcın embriyo ve yetişkin vitro izole edilmiştir. Kültürlü doku daha sonra tavuk embriyo CAM aşılı. Ovo içinde gelişimi 10 gün sonra tam biçimli organları aşılı dokulardan elde edilir. Bu yöntem aynı zamanda vitro ve ovo içinde gelişimsel adımları boyunca doku genetik manipülasyon ve farmakolojik düzenli yönetim tarafından yolları sinyal modülasyonu sağlar. Ayrıca, onların (kullanarak kantitatif PCR (qPCR), microarrays, vb) gen ekspresyon profili ve Morfoloji (geleneksel Histoloji ve İmmünokimya ile değerlendirildi) çözümlemek için herhangi bir zaman penceresi, dokularda gelişen toplanabilir.

Açıklanan deneysel işlemin organ oluşumu tam olarak kurulan organogenesis erken dönemlerinde ve fonksiyonel organları kuş embriyo dışında takip için bir araç olarak kullanılabilir.

Giriş

Kuş embriyo seminal gelişim biyolojisi çalışmalarda yaygın olarak kullanılmaktadır. Kuş modelinin başlıca avantajları açmak için yumurta, embriyo ve embriyolardan gerçekleştirmesini nispeten kolay erişim imkanı bulunmaktadır. Bazı örnekler hücre kader1, uygulama2embriyo için belirli büyüme faktörlerinin ve CAM1,3ektopik hücresel yapılar büyüme çalışmak için klasik bıldırcın-tavuk chimera sistemi oluşturan, 4.

Organ oluşumu farklı aşamalarında yeni görüşler elde etmek için biz son zamanlarda embriyonik dokular5 vitro manipülasyon ile aşılama teknikleri birleştiren bir yöntem geliştirdik. Ayrımcılık ve keşif, her iki erken - ve geç-sık sık son derece dinamik ve karmaşık doku etkileşimleri2nedeniyle sınırlı dönemlerinde organogenesis, iki aşamalı yaklaşım sağlar. Ayrıca, uygun doku özgü işaretleri eksikliği sık genetik olarak değiştirilmiş kısıtlar hayvan modelleri6. Bu roman yöntemi iki aşamalı yaklaşım, büyük ölçüde bu tür sınırlamalar üstesinden gelir.

Erken aşamalarında organ oluşumu, ilk adım, eğitim için potansiyel organ rudiment oluşan bıldırcın embriyonik bölge izole ve 48 h bir vitro organotypic sisteminde büyüdü. Bu dönemde belirli sinyal yollar farmakolojik modülasyon kültür orta5,7' ye uyuşturucu ekleyerek gerçekleştirilir. Ayrıca, kültürlü doku vitro büyüme herhangi bir aşamada toplanan olabilir ve gen-ifade için probed (qPCR, microarrays, vbgibi yöntemleri kullanarak).

İkinci adımda, 48 h kültürlü dokulara sonra tavuk (c) embriyo (cE8) embriyonik gün (E) 8, CAM aşılı (Hamburger ve Hamilton (HH)-33-35 aşamalarında)8. CAM besin vasküler bir tedarikçi olarak davranır ve onun geliştirme ovo içinde daha uzun süreler için etkinleştirme aşılı dokulara gaz alışverişi1,3,4 sağlar. Tam biçimli organları içinde ovo geliştirme5,9,10,11 10 gün sonra elde edilebilir gibi bu deneysel adım özellikle de geç-aşamaları organogenesis, çalışmaya uygun . Morfolojik analiz kolayca uygun organ oluşumu onaylamak için geleneksel Histoloji tarafından gerçekleştirilir ve donör kökenli hücre species-specific antikorlar (yani, MAb bıldırcın Perinükleer (QCPN)) kullanarak immünhistokimya tarafından belirlenebilir. CAM kuluçka döneminde Greftler Ayrıca huzurunda farmakolojik ajanlar yetiştirilen ve herhangi bir organogenesis ilerlemesini değerlendirmek için geliştirme aşamasında toplanan.

Burada ayrıntılı olarak açıklanan iki aşamalı yaklaşım zaten Figueiredo vd. istihdam kuş paratiroid/timus ortak primordium geliştirme keşfetmek için 5 . Buna göre embriyonik topraklarının doğal özellikleri ve timus ve paratiroid bezleri içinde organogenesis ilgili gelişme aşamalarında aşağıda sunulacak.

Timus ve paratiroid bezleri epiteli, işlevsel olarak farklı olsa da, faringeal torbalar endoderm (PP)12türetmek. İçinde kuş, bu organların epiteli üçüncü ve dördüncü PP endoderm (3/4PP)12den, memelilerde timik epitel 3PP türeyen ve paratiroid bezleri epitel elde etmek 3PP ve 3/4PP fare ve insan kaynaklı, sırasıyla13,14.

Bu organların oluşumu en erken aşamalarında biridir ayrı timus ve paratiroid etki alanlarında ortak primordium ortaya çıkması. Tavuk, bu etki alanları, E4.515belirli moleküler imleçli in situ hibridizasyon tarafından belirlenebilir. Geliştirme devam ettikçe, bu organ esaslar kişiselleştirmek ve nöral crest kaynaklı hücreler tarafından ince bir mezenkimal kapsül (E5; onları çevreleyen iken yutak ayrı HH-stage 27). Daha sonra timik epitel (E6.5; hematopoetik progenitör hücreler tarafından kolonize HH-stage 30)12.

Klasik bıldırcın-tavuk çalışmalar1,12olduğu gibi iki aşamalı yaklaşım hematopoetik/lenfoid organlar, yani timus5oluşumunu incelemek özellikle yararlıdır. Bıldırcın, organ rudiment ile explant olarak aşılı hematopoetik progenitör hücre kolonizasyon önce tavuk embriyo chimeric timus bir bıldırcın timik epitel muadili infiltre tavuk kan yoluyla progenitör hücre ile oluşturulur. Bu yöntem, bu nedenle, kuş hemato/lenfoid sistemi geliştirilmesi hematopoetik hücrelerin katkısını keşfetmek için yararlı bir araçtır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Bu deneylerin hayvan bakımı ve Centro Académico de Medicina de etik kuralları izleyin Lisboa.

1. döllenmiş bıldırcın ve tavuk yumurtası kuluçka

  1. Japon bıldırcın (Coturnix coturnix japonica) ve tavuk (Gallus gallus) döllenmiş yumurta 3 ve 8 gün boyunca sırasıyla kuluçkaya.
    1. Hava yukarı bakacak şekilde 38 ° C'de oksijen bir kuluçka odası (yumurta künt son) ile yumurta yer
    2. Yaklaşık 20 bıldırcın yumurtası ve 40 tavuk yumurtası bu deney yapmak için kullanın.
      Not: Bu rakamlar bu yordamı ilk kez kurarken iki katına.

2. izolasyon timik ve paratiroid esaslar meşru topraklarının içeren bıldırcın embriyonik bölgesi

Not: yumurta gerçekleştirmek işleme yordamları steril koşullarda yatay laminar akış kukuIeta ve sterilize edilmiş aletler ve malzemeler kullanarak.

  1. Hakkında büyük borosilikat cam kase hazırlamak 3/4 soğuk fosfat tamponlu tuz çözeltisi (PBS) çözüm ile dolu.
  2. Bıldırcın yumurta kabuğu dokunarak ve dairesel bir açılış künt sonuna karşı tarafta eğri makasla kesme kuluçka 3 gün sonra açın. Dikkatle ve soğuk PBS ile dolu cam kase için embriyo transfer kabuk parçaları çıkarın.
  3. Bıldırcın (q) embriyo E3'te tutun (qE3) (HH-sahne alanı'na 21 tavuk karşılık gelen bıldırcın sahne) ince forseps yardımıyla. Bir kesim eğri makas kullanarak sarısı Zarflama vitelline membran olun. Çevresinde ve harici ekstra embriyonik damarları çevresi kesmeye devam.
  4. Transfer embriyo için küçük bir kase yaklaşık 3/4 ince forseps yardımıyla soğuk PBS ile dolu. Embriyo üzerinden kalan ekli sarısı iyice yıkayın.
  5. 100 mm cam Petri kabına siyah temel ile embriyo transfer için bir kepçe kullanın (bkz. Tablo reçetesi) 10 mL soğuk PBS içeren.
  6. Bir stereomicroscope altında Petri kabına yerleştirin.
    Not: Şu andan itibaren ilerici büyütme için bir stereomicroscope altında mikrocerrahi yordamları gerçekleştirin. Bir ışık kaynağı olarak LED ışıklar sınırlı ısı yükü dikkate alınarak stereomicroscope veya optik lifler dahil kullanmak için tavsiye edilir.
  7. Embriyo alt kısmında ince böcek pimleri ile plaka için basılı tutun. Ekstra embriyonik bölgesinde bir kare şekli oluşturan dört iğne yerleştirin.
  8. Sefalik bölge ekstra embriyonik zarı ince forseps yardımıyla çıkarın ve beşinci bir PIN oraya yerleştirin.
    Not: embriyo doğru konumlandırdıysanız, sonra ve vezikül, kalbini tüp ve 1st, 2ndve 3rd faringeal kemerler (PAs) görünür olmalıdır.
  9. Wecker göz makas kullanarak embriyonik bölgenin ilgi, yani,rd 3 ve 4th faringeal kemer bölgesi (3/4PAR), incelemek.
    1. Somite/nöral tüp ve PAs arasındaki embriyo eksenine boyuna ve paralel kesme başlatın.
    2. Ventrally konumlandırılmış kalbini tüp kesim tarafından kaldırın. Makas aynı konumda tutmak, Petri kabına embriyo kesme yönüne göre yeniden konumlandırmak için döndürün.
    3. 2nd ve 3rd PAs arasında ve 4th PA aşağıda kesmek
    4. 3/4PAR ince forseps yardımıyla üzerinden kalan membranlar bağlantısını kesin.
  10. İzole doku (3/4PAR) ve onlara bir cam tabak 3/4 2 mL steril plastik pipet kullanarak soğuk PBS ile dolu transfer Aspire edin.
    Not: Bundan sonra dokular yetişkin vitro -ebilmek var olmak ilâ 48 s veya hemen bir tavuk embriyo E8, CAM üzerine aşılı.
  11. İzole 3/4PAR buzda vitro tahlil hazırlanması sırasında içeren cam çanak tutmak.

3. Vitro Organotypic tahlil: timik ve paratiroid esaslar meşru topraklarının içeren embriyonik bölgesinin kültürü

  1. RPMI-%1640 10 FBS ve % 1 penisilin/streptomisin ile desteklenmiş orta ile kültür ortamı hazırlamak.
    Not:-Ebilmek üstelemek çözünür farmakolojik reaktifler ortamına (örneğin, LY-411.575 (Ly) ve di-benzazepine veya cyclopamine ve vismodegib, çentik ve yollar, sırasıyla sinyal Kirpi (Hh) inhibe. Bu tahlil 4PAR. cyclopamine 20 µM veya kullanın vismodegib 10 µM Hh 3/4PAR5' te sinyal etkisizleştirmek için / Ly 50-200 nM veya Di-benzazepine 5-15 µM çentik 3'te sinyal etkisizleştirmek için kullanın.
  2. 3/4PP explant 6-şey plaka vitro kültürü hazırlayın.
    1. 6-şey plaka bir kuyudan kültür orta 5 mL ile doldurulması. 24 mm Polikarbonat membran Ekle yerleştirin (bkz. Tablo reçetesi) üzerine ince forseps yardımıyla iyi.
    2. Stereomicroscope altında 3/4PAR explant cam yemek membran yüzeyine bir nakli kaşık (veya spatula) yardımı ile nazikçe kaydırarak aktarmak ve ince forseps. Explants ventral tarafı yukarı ve dorsal tarafta membran temas yerleştirin. Yedi explants membran Ekle başına ekleyin. 3.4 adıma geçin.
  3. Alternatif olarak, kültür membran filtreleri yüzen explants.
    1. 35 mm ile 5 mL kültür ortamının Petri kabına hazırlayın. İnce forseps, bir membran ( Tablo malzemelerigörmek) filtre ve hava ile temas halinde bir kuru yüzey tutun kayan nokta yardımıyla.
    2. Stereomicroscope altında 3/4PAR explant cam yemek membran filtre için nazik bir nakli kaşık (veya spatula) yardımı ile kaydırarak aktarmak ve ince forseps. Explants ventral tarafı yukarı ve dorsal tarafta membran temas yerleştirin. Membran filtre başına 8 adete kadar explants ekleyin.
  4. Dikkatlice adımları 3.2 ve %3.3 5 CO237 ° C'de oksijen bir kuluçka hazırlanan explants koyun.
  5. 48 h kuluçka süresinden sonra 6-şey plaka ve 35 mm Petri kabına kuluçka makinesi kaldırın.
    1. Kültürlü explants gelen 6-şey plaka membran Ekle toplamak.
      1. PBS oda sıcaklığında (RT) membran Ekle'nin üzerine ekleyin.
      2. Explants membran gelen güçlü bir 2 mL steril plastik pipet kullanarak temizlenerek bağlantısını kesin.
      3. Spatula ve ince forseps yardımıyla, kültürlü explants RT. adlı PBS ile dolu bir cam tabak 3/4 için transfer
    2. Benzer şekilde, kültürlü explants 35 mm Petri kabına kayan membran filtre toplamak.
      1. Membran filtre yeni 35 mm Petri kabına PBS RT., dolu ince forseps ile aktarmak
      2. Explants membran filtre üzerinden dinç pipetting 2 mL steril plastik pipet kullanarak bağlantısını kesin.
      3. Hiçbir explants kaldı teyit ona bağlı sonra ince forseps yardımıyla, explant-Alerjik membran filtre taburcu et.
      4. Bir spatula ve ince forseps ile explants RT. adlı PBS ile dolu bir cam tabak transfer
  6. Kültürlü explants bir reaktif toplam RNA izolasyonu için 1 ml bir spatula ile transfer edecek ve gen ekspresyonu çalışmaları için.
    Uyarı: Bu reaktif maruz ( Tablo malzemelerigörmek) bir ciddi sağlık tehlikesi olabilir. Uygun koruyucu gözlük, giyim ve eldiven giymek. İşleme yönergeleri izleyin ve üretici tarafından sağlanan güvenlik bilgi formları okuyun.
  7. Alternatif olarak, tavuk bebekleri E8, CAM üzerine kültürlü doku grefti. Adım 4'e izleyin.

4. CAM hazırlanması

  1. 8 gün embriyonik gelişim ile tavuk yumurtası kuluçka makinesi kaldırın.
    Not: Yumurta hava odası 38 ° C oksijen kuluçka, yukarı doğru bakan ile inkübe.
  2. Yumurta kabuğu parçaları hava odanın içine düşmesini önlemek için şeffaf plastik bant ile künt sonu kapak. Kabuk dokunun ve yumurta dairesel bir açılış eğri makasla kesme. Hava odası görünür olmalıdır.
  3. Dikkatli bir şekilde hava odası Beyaz zar ince forseps ile kaldırın. CAM sonra görünür ve ektopik doku nakli için erişilebilir.
    Not: PBS kayar ve explants saklanmalıdır PBS teşvik beri CAM, önce veya sonra nakli, hidrat için kullanmayın. Membran kurur, yumurta atmak.

5. CAM üzerine kültürlü Explants ve aşılama

  1. Küçük vasküler lezyonlar/yaralar cam bir tutucu bir microscalpel ile daha küçük damarları oluşturun.
    Not: Pasteur pipet ucu aşırı kanama durumunda capillarity tarafından kan kaldırmak için kullanın.
  2. Bir spatula ve ince forseps kültürlü explant CAM yaralı bölgeye aktarmak için kullanın.
  3. Bir filtre kağıt explant biraz daha geniş keser ve explant üst kısmında yerleştirir.
    Not: Filtre kağıdı gelişimi cam sonra explant konum izleme yardımcı olur. Gerekirse explant için günlük ilaç dağıtım ovo içinde geliştirme sırasında Ayrıca, sağlar (5.6 adımda anlatılan).
  4. Şeffaf plastik bant ile yumurta penceresini kapatın ve kömür kalem kullanarak tanımlar.
    Not: Plastik bant dehidratasyon kuluçka dönemi sırasında embriyo korur.
  5. Oksijen kuluçka 38 ° C'de 10 gün boyunca işlenmiş yumurta kuluçkaya Adım 6 izleyin.
  6. İsteğe bağlı adım: Kuluçka dönemi günlük ilaç idaresi.
    1. Filtre erişmek için kısmen plastik bandı kaldırın. Uyuşturucu çözüm, kağıdın üstüne damla damla, 100 µL ekleyin. Pencerenin yeniden mühürle ve yumurtayı geri oksijen kuluçka makinesi 38 ° C'de yer
      Not: Bu tahlil için Hh ovo içinde geliştirme5sırasında sinyal cyclopamine 20 µM doz yapılmasını engeller.

6. ektopik Organ oluşumu CAM Ovo içinde gelişimi 10 gün sonra

  1. 10 günden, kuluçka yumurta kuluçka makinesi kaldır ve dikkatle plastik bant tutar.
  2. Eğri makas ve transfer CAM elde edilen explant küçük bir bardak için filtre kağıdı ile yaklaşık 3/4 soğuk PBS ile dolu kase kullanarak filtre bölgenin etrafında CAM kesti.
  3. İnce forseps yardımıyla CAM elde edilen explant siyah Bankası PBS 10 mL içeren bir 100 mm Petri kabına aktarın. Filtre kağıdı ve membran Wecker göz makas ve ince forseps kullanarak fazlalığı yavaşça çıkarın.
  4. CAM explant sabitleştirici eriyik-e doğru nakletmek (% 3.7 PBS PFA) bir kepçe ile. Tavuk bebekleri embriyo boyun bölgesinde büyük makas yardımıyla kesin bir kesim yaparak yumurtadan kaldırmadan ötenazi.
  5. Organ oluşumu CAM elde edilen explants bölümlerini parafin geleneksel Histoloji ve immünhistokimya tarafından değerlendirmek.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Yukarıdaki Protokolü ayrıntıları araştırma, her iki erken - ve geç-dönemlerinde organogenesis, sık sık hücresel ve moleküler karmaşık etkileşimler tarafından sınırlı izin veren bir yöntem tarif etti.

Bu yöntem daha önce Figueiredo vd. istihdam edildi Çentik ve kuş paratiroid/timus ortak primordium geliştirilmesinde sinyal Hh rolü çözülmeye 5 .

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bu yöntemin başarısı için çok önemli bir yönü kalitesidir tavuk ve Bıldırcın yumurta. Göz önüne alarak uzun bir kuluçka dönemlerde, özellikle içinde ovo tahlil, kaliteli tavuk yumurta geliştirir canlılığı yordamının sonuna (%90) oranları. Bunu başarmak için yumurta farklı tedarikçilerden sınayın. Uzun süre unmanipulated yumurtaları kuluçkaya (ilâ 16-17 gün) ve gelişimlerini kontrol edin. Kaliteli toplu değerlendirilmesi için embriyo % 80'den fazla normal gelişim mevcut olmalıdır. Her kuluçka adım güvenilir güven...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar ifşa gerek yok.

Teşekkürler

Yazarlar António Cidadão, Isabel Alcobia ve Leonor Parreira Padma Akkapeddi video anlatım için için el yazması eleştirel okuma için minnettarız ve Instituto de Histologia e Histoloji hizmetinden Vitor Proa için Biologia yapın Desenvolvimento, Faculdade de Medicina de Lisboa, Universidade de Lisboa, teknik destek için. Unidade de audiovisuais (görsel-işitsel birimi), Faculdade de Paulo Caeiro ve Hugo Silva için özellikle borçlu olduğumuzu Medicina de Lisboa, Universidade de Lisboa olağanüstü bağlılıklarını bu video üretimi için. Lütfen Interaves ve video sistemi ile donatılmış bir stereoscope sağlamak için Leica Microsystems anıyoruz - Sociedade Agro-Pecuária, S.A bıldırcın ile katkıda bulunmak için yumurta döllenmiş. Bu eser Faculdade de tarafından desteklenen Medicina de Lisboa, Universidade de Lisboa (FMUL).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Tavuk döllenmiş yumurtaları (Gallus gallus)Pintobar, PortekizTavuk çiftliği 
Bıldırcın döllenmiş yumurtaları (Coturnix coturnix)Interaves, PortekizKuş çiftliği 
15 mL PP santrifüj tüpleriCorning430052
50 mL PP santrifüj tüpleriCorning430290
60 x 20 mm ateşe dayanıklı kaplarDuran grubu21 755 41
100 x 20 mm ateşe dayanıklı kaplarDuran grubu21 755 48
Polikarbonat Membran Insert Corning341224 mm transwell, 0,4 mm Gözenekli Polikarbonat Membran Ek 
Membran filtreMillipore DTTP013000,6 mm İzopor membran filtre
6 oyuklu kültür plakalarıNunc, Thermo Fisher Scientific140675
Petri kabı, 35 x 10 mmSigma-AldrichP5112 
Süpermarketten Pyrex kaseler 
Transfer pipetleriSamco Scientific, Thermo Fisher Scientific2041S2 mL plastik pipet
Cam pastör pipetinormax5426015
Whatman  kalitatif filtre kağıdıSigma-AldrichWHA1001090Filtre kağıdı
Süpermarketten şeffaf plastik bant 
Sitokeratin (pan; asidik ve bazik, tip I ve II sitokeratinler), klon Lu-5BMA BiyomedikallerT-1302
Siklopamin hidratSigma-AldrichC4116Hh sinyalinin farmakolojik inhibitörü
Fetal Sığır Serumuİnvitrojeni, Thermo Fisher Scientific StandartFBS
ParaformaldehitSigma-AldrichP6148
Penisilin-Streptomisinİnvitrojeni, Thermo Fisher Scientific15140-122
Fosfat Tamponlu Salin (PBS)GIBCO, Thermo Fisher Scientific10010023
QCPN antikoruGelişimsel Çalışmalar Hibridoma BankasıQCPN
RPMI 1640 Orta, GlutaMAX Takviyesi GIBCO, Thermo Fisher Scientific61870010
Bluesil RTV141A/B Silikon Elastomer 1.1Kg KitiELKEM/SilmidRH141001KGPetri kabı için arka tabanı hazırlamak için
Stemolekül LY411575Stemgent04-0054Çentik sinyalleme TRIzol Reaktifinin farmakolojik inhibitörü
Invitrogen, Thermo Fisher Scientific15596026Toplam RNA izolasyonu için reaktif
Dumont #5 ForsepsGüzel Bilim Araçları11251-30 İnce forseps
Ekstra ince Bonn makası, kavisliİnce Bilim Araçları14085-08Kavisli makas
Böcek iğneleri Güzel Bilim Araçları26001-30
Mikro spatula Güzel Bilim Araçları10087-12Transplantasyon kaşığı
Minutien PimleriGüzel Bilim Araçları26002-20Mikro Neşter
Moria Nikel Kaplama Pim TutucuGüzel Bilim Araçları26016-12Tutucu
Moria Delikli KaşıkGüzel Bilim Araçları10370-17Skimmer
Wecker Göz MakasıGüzel Bilim Araçları15010-11
KameraLeica Microsystems MC170 HD
StereoskopLeica Microsystems Leica M80
MikroskopLeica Microsystems DM2500
Serisi

Kaynaklar

  1. Le Douarin, N. M. The Nogent Institute-50 years of embryology. Int J Dev Biol. 49 (2-3), 85-103 (2005).
  2. Chuong, C. M., Wu, P., Plikus, M., Jiang, T. X., Bruce Widelitz, R. Engineering stem cells into organs: topobiological transformations demonstrated by beak, feather, and other ectodermal organ morphogenesis. Curr Top Dev Biol. 72, 237-274 (2006).
  3. Davey, M. G., Tickle, C. The chicken as a model for embryonic development. Cytogenet Genome Res. 117 (1-4), 231-239 (2007).
  4. Nowak-Sliwinska, P., Segura, T., Iruela-Arispe, M. L. The chicken chorioallantoic membrane model in biology, medicine and bioengineering. Angiogenesis. 17 (4), 779-804 (2014).
  5. Figueiredo, M., Silva, J. C., et al. Notch and Hedgehog in the thymus/parathyroid common primordium: Crosstalk in organ formation. Dev Biol. 418 (2), 268-282 (2016).
  6. National Research Council. Chapter 6 - Recent Advances in Developmental Biology. Scientific Frontiers in Developmental Toxicology and Risk Assessment. , The National Academies Press. Washington, DC. (2000).
  7. Moura, R. S., Coutinho-Borges, J. P., Pacheco, A. P., Damota, P. O., Correia-Pinto, J. FGF signalling pathway in the developing chick lung: expression and inhibition studies. PLoS One. 6 (3), e17660(2011).
  8. Hamburger, V., Hamilton, H. A series of normal stages in the development of the chick embryo. J. Morphol. 88, 49-92 (1951).
  9. Takahashi, Y., Bontoux, M., Le Douarin, N. M. Epithelio-mesenchymal interactions are critical for Quox 7 expression and membrane bone differentiation in the neural crest derived mandibular mesenchyme. EMBO J. 10 (9), 2387-2393 (1991).
  10. Maeda, Y., Noda, M. Coordinated development of embryonic long bone on chorioallantoic membrane in ovo prevents perichondrium-derived suppressive signals against cartilage growth. Bone. 32 (1), 27-34 (2003).
  11. Ishida, K., Mitsui, T. Generation of bioengineered feather buds on a reconstructed chick skin from dissociated epithelial and mesenchymal cells. Dev Growth Differ. 58 (3), 303-314 (2016).
  12. Le Douarin, N. M., Jotereau, F. Tracing of cells of the avian thymus trough embryonic life in interspecific chimeras. J. Exp. Med. 142, 17-40 (1975).
  13. Farley, A. M., et al. Dynamics of thymus organogenesis and colonization in early human development. Development. 140, 2015-2026 (2013).
  14. Gordon, J., Bennett, A. R., Blackburn, C. C., Manley, N. R. Gcm2 and Foxn1 mark early parathyroid- and thymus-specific domains in the developing third pharyngeal pouch. Mech Dev. 103, 141-143 (2001).
  15. Neves, H., Dupin, E., Parreira, L., Le Douarin, N. M. Modulation of Bmp4 signalling in the epithelial-mesenchymal interactions that take place in early thymus and parathyroid development in avian embryos. Dev Biol. 361 (2), 208-219 (2012).
  16. Jerome, L. A., Papaioannou, V. E. DiGeorge syndrome phenotype in mice mutant for the T-box gene, Tbx1. Nat Genet. 27 (3), 286-291 (2001).
  17. Nie, X., Brown, C. B., Wang, Q., Jiao, K. Inactivation of Bmp4 from the Tbx1 expression domain causes abnormal pharyngeal arch artery and cardiac outflow tract remodeling. Cells Tissues Organs. 193 (6), 393-403 (2011).
  18. Zou, D., Silvius, D., Davenport, J., Grifone, R., Maire, P., Xu, P. X. Patterning of the third pharyngeal pouch into thymus/parathyroid by Six and Eya1. Dev Biol. 293 (2), 499-512 (2006).
  19. Uematsu, E., et al. Use of in ovo. chorioallantoic membrane engraftment to culture testes from neonatal mice. Comp Med. 64 (4), 264-269 (2014).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

In Vitro KültürKoryoallantoik MembranFaringeal ArklarTimus GelişimiGen Ekspresyon AnaliziHistoloji İmmünohistokimyaFarmakolojik Modülasyon
İlk - ve geç-aşamalarında Organ oluşumu kuş modelindeki keşfetmek için iki adımlı yaklaşım: timus ve paratiroid bezleri Organogenesis paradigma
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.