Tükürük bezi hypofunction otoimmün hastalığı ve radyasyon terapisi sık bir sonucudur. Bu hastalıkların fare modellerinde Tükürük bezi ile tekrarlanabilir değerlendirilmesi teknik bir sorundur. Burada, tükürük üretim farelerde doğru ve tekrarlanabilir ölçüm için basit bir yöntem açıklanmıştır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Tükürük bezi işlevi farelerde ölçülmesi için bir yöntem
Bu makalede
Özet
Özet
Sjoegren Sendromu, ekzokrin bezleri etkileyen otoimmün bir hastalığı olan hastalarda Tükürük bezi iltihabı geliştirmek ve tükürük üretimi azalttı. Benzer şekilde, tükürük üretim ciddi baş ve boyun kanserlerinin için radyasyon tedavisi alan hastalarda güvenilir değil. Kemirgen modelleri, bu klinik durumlar ve taklit etmek için geliştirilen hastalık patogenezinde anlamayı kolaylaştırmak ve yeni tedavi stratejilerinin geliştirilmesi için izin verir. Bu nedenle, doğru tekrarlanarak ve art arda Tükürük bezi işlevi hayvan modellerinde ölçmek için kritik yeteneğidir. Literatürde daha önce açıklanan yordamları hakkında oluşturmak, bu kriterleri karşılayan ve tükürük bezi işlevi farelerde değerlendirmek için kullanılan bir yöntem geliştirilmiştir. Ek bir avantaj bu yeni yöntemin bu kolayca hakim ve küçük arası operatör varyasyon vardır olduğunu. Tükürük bezi işlevi miktar (ağırlık veya hacim) veya tükürük Pilokarpin stimülasyon üretti oranını (mL/dk) olarak değerlendirilir. Toplanan tükürük analizleri protein içeriği, immünglobulin konsantrasyonları ve diğer biomolecules için iyi bir kaynaktır.
Giriş
Tükürük bezlerinin tükürük yanıt olarak nörolojik ve mekanik uyaranlara1çeşitli üretmek. Uyaranlara için bezi adrenergic ve kolinerjik reseptörler sempatik ve parasempatik sinir sistemi aracılığıyla taşınır. Pilokarpin muscarinic reseptörleri üzerinde ağırlıklı olarak davranır kolinerjik, para sempatomimetik bir ajandır. Tükürük bezi bu muscarinic asetilkolin reseptörü M31üzerinde hareket ederek tükürük üretimini neden olmaktadır. Tükürük üretim Pilokarpin yönetim takip tükürük bezleri uyarmaya tepki yeteneğini bir göstergesidir ve tükürük bezi işlevi bir ölçüsü olarak yaygın olarak kullanılır.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Aşağıda açıklanan protokol kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi tarafından kabul edildi ve ulusal sağlık Enstitüleri tarafından kurulan etik kuralları izler. Bu raporda sunulan tüm veri 10-12 hafta-in yaş vardı kadın fare kullanarak oluşturulan. Fareler aşağıdaki suşları kullanılmıştır: C57BL/6, BALB/c, DBA1, 129S ve (B6XA/J) F1. Bütün fareler bariyer kafeslerde (kafes başına 5 hayvanlar) patojen-Alerjik spesifik koşullar içerisinde yer alan ve yem ve su ad libitum sağlanan.
1. hazırlık
- Pilokarpin hidroklorür stok çözeltisi hazırlamak için bahçedeki 10 mg tartmak ve 1.776 mL steril izotonik salin 5.63 mg/mL stok çözeltisi ve....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Deneysel fare modeli sistemlerinde yeteneği tükürük Pilokarpin stimülasyon yanıt üretmek için Tükürük bezi işlevi bir göstergesi olarak kullanılır. Tükürük üretim 11-hafta-yaşlı C57BL/6 dişi farelerde çubukla yöntemi tarafından ölçüldü. Şekil 1A', sonuçları tükürük (mg) artan doz Pilokarpin takip toplanan tutar ifade edilir. Doz 1 mg/kg vücut ağırlığı bazı fareler (istemsiz sallayarak ve titreyerek) sıkıntı sergilenmesi başladı. Bu nedenle daha yüksek doz Pil.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Tükürük üretim karmaşık bir süreçtir ve birçok faktör tarafından etkilenir. Bu nedenle, Tükürük bezi işlevi laboratuvar hayvanlarda ölçme bir meydan okuma olabilir. Tükürük bezi fonksiyonunu kullanabilirsiniz aynı hayvan tekrarlanan ölçüler hastalığın başlangıcı kurmak için veya tedavi aşağıdaki kurtarma göstermek için gerekli olan bir ek mücadeledir.
Bu raporda açıklanan çubukla yöntem teknik olarak verileri göstermek için birden çok seçenek ile gerçekleştirmek basittir. Elde edilen sonuçlar .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar hiçbir ifşa etmek çıkar çatışması var.
Teşekkürler
Çalışma Ulusal Sağlık enstitüleri, Ulusal Enstitüsü diş ve Fasiyal araştırma (DE025030) bir hibe tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Tükürük toplama kimyasalları< / güçlü > | |||
| Pilokarpin hidroklorür | Alfa Aesar, Tewksbury, MA, ABD | B21410 | Steril izotonik salin içinde seyreltin. 100X stokun tek kullanımlık alikotlarını -80oC |
| Name< | strong>Company | >Katalog Numarası | Comments |
| Anestezi Karışımı solüsyonu | Steril bir şişede 1 mL ketamin hidroklorür + 0.5 mL ksilazin + 8.5 mL steril izotonik salin karıştırın. 3 ay boyunca kullanılabilir. | ||
| Zetamin (Ketamin hidroklorür) | Vet One, Boise, Idaho, ABD | C3N VT1 | Stok 100 mg/mL'dir |
| Anased (Xylazine) | Med-Vet International, Mettawa, IL, ABD | RXANASED-20 | Stok 20 mg / mL |
| İzotonik steril salin | Vet One, Boise, Idaho, ABD | 501032 | Seyreltici olarak kullanılır |
| Suni gözyaşı (kayganlaştırıcı oftalmik merhem) | Henry Schien, Dublin, OH, ABD | 48272 | İşlem sırasında gözlerin kurumasını önlemek için kullanılır |
| Name< / strong> | Company< / strong> | Katalog Numarası< / strong> | Comments< / strong> |
| Tükürük toplama malzemeleri< / strong> | |||
| SalivaBio Çocuk sürüntüsü | Salimetrics, LLC Carlsbad, CA, ABD | N/A | Ayrı ayrı sarılmış swablar |
| 50 mL polipropilen tüpler | VWR, Radnor, PA, ABD | 89004-364 | Tüpün alt 1 cm'sini kesin. Kesilen kenarın pürüzsüz olduğundan emin olun. |
| Mikrosantrifüj tüpleri 0.6 mL | VWR, Radnor, PA, ABD | 87003-290 | Isıtılmış 18 gauge iğnelerle tüpün dibinde delikler açın |
| Mikrosantrifüj tüpleri 2 mL | VWR, Radnor, PA, ABD | 87003-298 | |
| Kalıcı olarak takılmış iğneli İnsülin Şırıngaları | Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, ABD | 324702 | |
| 18 gauge düzenli konik iğneler | Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, ABD | 305195 | |
| Steril neşter bıçağı #11 | Integra York Inc PA, ABD | 4-311 | |
| Mikrodiseksiyon forseps | Roboz, Gaithersburg, MD, ABD | RS-5139 | Tırtıklı açısal 0,8 mm uç, 4" uzunluk |
| Etiket bandı | Santa Cruz Biyoteknoloji, Dallas, TX, ABD | SC-224487 | |
| 3 kanallı zamanlayıcı | Amazon.com, Seattle, WA, ABD | B06W2KCYVN | |
| Analitik Terazi | Mettler Toledo, Columbus OH, ABD | ||
| strong>Name | >Company | Katalog Numarası | Comments |
| >Tükürük disfonksiyonunu indüklemek için kimyasallar / reaktifler< / güçlü> | |||
| LPS | Invivogen, San Deigo, CA, ABD | tlrl-b5lps | Endotoksin içermeyen suda çözün ve stok çözeltisini 5 mg / mL'de saklayın. steril HBSS 100 ug / mL içinde seyreltin - 100 uL / moue ip enjekte edin |
| Imject Şap adjuvanı | Thermo Scientific | 77161 | Steril tuzlu su içinde 1: 1 oranında seyreltin. İntraperitoral olarak 0.1 mL / fare enjekte edin |
| Tavşan anti-Ro52 antiserumu | Laboratuvarda | Rekombinant fare Ro52 ile tavşanların aşılanması | |
| Name< / strong> | Company< / strong> | Katalog Numarası< / strong> | Yorumlar< / strong |
| >Kimyasallar / Tükürük analizleri için kitler< / strong> | |||
| Tükürük lizozim tahmini< / güçlü > | |||
| EnzChek Lizozim Test Kiti | Moleküler Problar, Eugene, OR, ABD | E-22013 | Üreticinin talimatlarına göre kullanılır |
| Name< / strong>< | strong>Company< / strong> | Katalog Numarası< / strong> | Comments< / strong> |
| Tükürük IgA tahmini ELISA | |||
| Mouse IgA Southern | Biotech, Birmingham, AL, ABD | 0106-01 | Sandviç için standartlar ELISA - aralık 30 ng/mL ila 0,5 ng/mL |
| Keçi anti-fare IgA etiketsiz | Southern Biotech, Birmingham, AL, ABD | 1040-01 | Bikarbonat tamponunda 1 ug / mL'de kaplayın |
| Keçi anti-fare IgA HRP | Southern Biotech, Birmingham, AL, ABD | 1040-05 | 1:4000 seyreltme |
| TMB substratında | Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, ABD | 555214 | Üreticinin talimatlarına göre kullanılır |
| Immulon 4HBX Microtiter 96 kuyulu plakalar | Thermo Scientific, Rochester, NY, ABD | 3855 | |
| Name< | strong>Company | Katalog Numarası | Comments |
| Tükürük proteini tahmini | |||
| Bio-Rad Protein Tahlili Boya Reaktif Konsantresi | BioRad, Herkül, CA, ABD | 5000006 | Üreticinin talimatlarına göre protein tahmini için |
Kaynaklar
- Proctor, G. B. The physiology of salivary secretion. Periodontol 2000. 70 (1), 11-25 (2016).
- Fox, R. I. Sjögren's syndrome. Lancet. 366 (9482), 321-331 (2005).
- Eisbruch, A., Kim, H. M., Terrell, J. E., Marsh, L. H., Dawson, L. A., Ship, J. A.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
