Method Article

İpucu büyüyen bitki hücreleri son derece küçük alanlarda uzama yeteneğini çalışmaya mikrosıvısal cihazların geliştirme

DOI:

10.3791/57262

⸱

May 22nd, 2018

 ,  ,  , 
1Division of Biological Science, Graduate School of Science, Nagoya University, 2Institute of Transformative Bio-Molecules (ITbM), Nagoya University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

İpucu büyüyen bitki hücreleri polen tüpler, kök tüyleri, dahil olmak üzere, kapasitesini araştırmak ve protonemata son derece dar geçitlerden (~ 1 µm) uzamış, bir mikrosıvısal cihazda moss bir yöntem açıklanmaktadır.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Vivo, ipucu büyüyen bitki hücreleri fiziksel engeller bir dizi aşmak gerekir; Ancak, araştırmacılar bu kısıtlayıcı koşullarda hücresel davranış görselleştirmek için metodoloji eksikliği. Bu sorunu gidermek için biz bir poli-dimethylsiloxane (PDMS) substrat büyüme salonları dar, mikro fabrikasyon boşluklar (~ 1 µm) bir dizi içeren ipucu büyüyen bitki hücreleri için geliştirdik. Bu şeffaf malzeme ipucu uzama işlemlerde tek tek hücreler tarafından hızlandırılmış görüntüleme microgap penetrasyon sırasında izlemek için kullanıcı sağlar. Onlar microgap nüfuz olarak deneysel bu platformu kullanarak, biz polen tüpler morfolojik değişimler görülmektedir. Bu işlem sırasında fluorescently etiketli bir bitkisel çekirdek şeklinde dinamik değişiklikler ve sperm hücresi bir polen tüp ele geçirdi. Ayrıca, kök tüyleri ve yosun protonemata 1 µm Aralık nüfuz yeteneğini gösterdi. Bu vitro platform nasıl tek tek hücreleri yanıt fiziksel olarak kısıtlı alanlarda çalışmak için kullanılan ve anlayışlar ipucu-büyüme mekanizmaları içerebilir.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Polen taneleri üzerinde bir leke çimlenme sonra her tahıl sperm hücresi yumurta ve çift döllenme için ovule merkezi hücreye taşır tek bir polen tüp üretir. Polen tüpler tarzı uzamış ve sonunda birden çok kılavuz ipuçları onların yolu1boyunca algılama tarafından ovule ulaşmak. Uzama sırasında polen tüpler fiziksel engeller bir dizi karşılaşırsanız; verici parça hücreleri ile doldurulur ve polen tüpler onların hedef (Şekil 1A)2ulaşmak için ovule dakika micropylar açılışı girmeniz gerekir. Bu nedenle, polen tüpler çevreleri basınç stresten tolere ederken fiziksel engeller, nüfuz yeteneği olması gerekir. Kök tüyleri ortamında paketlenmiş toprak parçacıklar (Şekil 1B) şeklinde fiziksel engelleri dayanmak zorundadır ipucu büyüyen bitki hücre başka bir türüdür.

Turgor basıncı ve yeni başlayan plasmolysis Yöntem3,4 ve hücresel kuvvet mikroskobu kullanılarak ölçülebilir hücre apikal bölgede sertliği de dahil olmak üzere çeşitli mekanik özelliklerini polen tüpü incelenmiştir (CFM) 5 , 6, anılan sıraya göre. Ancak, bu yöntemlerin yalnız polen tüpler aracılığıyla onların büyüme yol üzerindeki fiziksel engeller elongating yeteneğine sahip olup olmadığını ortaya çıkarmak değil. İzlenen vivo içinde olmak polen tüpü uzaması sağlayan bir alternatif iki foton mikroskobu7tekniğidir. Ancak, bu yöntemle, bireysel polen tüpler morfolojik değişimler gözlemlemek zor öyle içten içe ovule doku. Ayrıca, toprakta kök saç büyüme x-ışını bilgisayarlı tomografi (BT) ve manyetik rezonans görüntüleme (MRG)8, kullanarak düşük çözünürlüklü de olsa görüntülenmeyecektir. Burada, bir hücrenin deformasyon işlemi geleneksel mikroskop yüksek çözünürlüklü görüntüleri elde etmek için kullanılan bir yöntem mevcut.

Burada açıklanan yöntemi genel amacı ipucu büyüyen bitki hücreleri polen tüpler, kök tüyleri, dahil olmak üzere, uzama kapasitesini görselleştirmek ve protonemata, son derece küçük alanlarda moss etmektir. Bu el yazması sunulan poli-dimethylsiloxane (PDMS) microdevices optik şeffaf ve hava geçirgen, biz canlı hücreler cihazın içinde kültür ve büyüme davranışları bir mikroskop altında gözlemlemek. Ayrıca mikro oluşturmak mümkündür ~ nanometre ölçek alanlarda kalıpları kullanımı ile yumuşak litografi tekniği9 . Bu özellikler bize ipucu büyüyen bitki hücreleri fiziksel olarak kapalı bir ortamda uzama yeteneğini çalışmaya olanak sağlar.

Bu çalışmada, 1 µm geniş boşluklar (yüksekliği 4 µm) mikrosıvısal cihazlarda inşa ve silindirik polen tüpü (yaklaşık 8 µm) çapından küçüktür bu yapay engelleri nüfuz yeteneği polen tüplerinin muayene etti. Bu deneysel platform polen tüpü yanıt-e doğru microgaps görselleştirmek ve hücrenin deformasyon işlemi izlemek belgili tanımlık yanıt, hızlandırılmış görüntülerini yakalamak bize sağlar. Ayrıca cihazın penetrasyon özelliği kök tüyleri ve yosun protonemata araştırmak için kullanılan microdevices geliştirdi. Birkaç microdevices bitki kök10,11,12,13 ve yosun protonemata14 büyüme yüksek çözünürlükte görselleştirme etkinleştirme tarihi bildirilmiştir. Bizim cihaz kök saç büyüme kanalları bir dizi dik bir kök büyüme odasına bağlı ve bireysel kök tüyleri (çapı yaklaşık 7 µm) geniş bir boşluk 1 µm ile sıvı kanallara yönlendirilir. Biz de yosun kültürlü protonemata (çapı yaklaşık 20 µm) Bu fiziksel engellerin yanıtlarını incelemek için microgaps içeren bir microdevice içinde. Önerilen mikrosıvısal dayalı yaklaşım çeşitli ipucu büyüyen bitki hücreleri aracılığıyla herhangi bir mevcut diğer yöntemle incelendiğinde çok küçük alanlarda uzamış yeteneği keşfetmek için bize izin verir.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. polen tüpler büyüyen incelemek için PDMS Microdevice imalatı ve yosun Protonemata

Not: Silikon gofret üzerinde PDMS kalıpları hazırlamak için bir maskless fotolitografi aleti kullanılmış. Sistemin çalışması ile ilgili detayları bu el yazması göz ardı edilir. Bir photomask kullanarak bir standart fotolitografi teknik9 bu el yazması açıklanan PDMS kalıpları oluşturmak için de kullanılabilir.

  1. 11 g ön polimer PDMS karışımı dökün (elastomer temel: Ajan 10:1 oranında kür) her 4 inçlik kalıp içine.
  2. Adım 1.1 vakum odasında 20 dakika için hazırlanan kalıp degas.
  3. Bir sigara konveksiyon fırın içinde 90 dk 65 ° C'de kür sonra PDMS katman kalıp kapalı soyma ve biyopsi yumruklar kullanarak sıvı kanallarına erişim delikler.
    Not: polen tüpü aygıt için deliğin boyutunu pistil çapını yansıtacak şekilde ayarlanması gerekir. Bu değer bu nedenle türler tarafından değişir. Bu deneyde, pistil alıcılar için 1 mm delik ve sıvı orta rezervuarlar için 1.5 mm delik yumruk attı. Yosun protonemata aygıt için 4 mm delik örnek rezervuar için kullanıldı.
  4. Plazma 50 için hava için PDMS katmanı ve bir cam alt çanak (3.5-5 cm çapında) maruz s.
  5. PDMS katman cam alt çanak ve 65 ° C ısıda 30 dk içinde tamamen mikrosıvısal ağ oturumunu kapatma imzalamaya bir sigara konveksiyon fırın için basın.

2. kök tüyleri için PDMS Microdevice imalatı

  1. 1.1-1.3 kök ve kök saç microdevices için iki PDMS katman hazırlamak için kalıpları kullanarak adımları yineleyin.
    Not: Biz kök microdevice sıvı orta rezervuar 2 mm delik kullandık.
  2. Plazma 50 için hava ile her iki PDMS katmanı açığa s.
  3. Özel yapım bir masaüstü aligner kullanarak bir stereomicroscope altında iki PDMS katmanları birleştirin.
    Not: Bu PDMS katmanlardaki mikro birbirine yüz gerekir. Montaj önce her iki katmanı hizalama izleri aynı olmasına dikkat edin.
  4. 30 dk içinde tamamen mikrosıvısal ağ oturumunu kapatma imzalamaya bir sigara konveksiyon fırın için 65 ° C'de ısı.
  5. Kapak notu inşa microdevice çıkarın ve cihazın 5 cm çapında bir cam alt yemek üzerine yerleştirin.

3. Hazırlık In Vitro hücre kültür orta polen tüpler (Torenia fournieri)

  1. 15 ve basınçlı kap daha önce açıklandığı gibi değiştirilmiş Nitsch'ın orta orta 121 ° C'de 20 min için hazır olun.
    Not: NH4modifed Nitsch'ın orta bileşimi olduğunu KNO3 (125 mg/L)3 (80 mg/L), Ca (NO3)2‧4H2O (500 mg/L), MgSO4‧7H2O (125 mg/L), KH2PO4 (125 mg/L ), MnSO4‧4H2O (3 mg/L), ZnSO4‧7H2O (0,5 mg/L), H3BO3 (10 mg/L), CuSO4‧5H2O (0.025 mg/L) Na2MoO4‧2H2O (0.025 mg/L) sukroz (50.000 mg/L) ve kazein (500 mg/L). Hazır orta 4 ° C'de en az 4 ay depolanabilir.
  2. % 26 (w/v) Polietilen glikol autoclaved deiyonize su kullanarak hazırlamak ve çözüm 0.3 µm gözenek filtre ile filtre.
    Not: Hazırlanan orta 4 ° C'de 1 ay boyunca saklanır.
  3. Adım 3.1 ve 3.2 1:1 (v/v) oranında hazırlanan reaktifler karıştırın.
    Not: Bu orta her kullanım için taze hazırlanmalıdır.

4. kök tüyleri (Arabidopsis thaliana) için hazırlık In Vitro hücre kültür orta

  1. %0.215 (w/v) Murashige & Skoog orta, % 0.05 (w/v) MES, %1 (w/v) sükroz ve %1 (w/v) agar deiyonize su çözeltisi hazırlamak. Otoklav 20 dk için 121 ° C'de çözüm.

5. Hazırlık In Vitro hücre kültür orta olarak Moss Protonemata (Physcomitrella patens)

  1. Yosun protonemata BCDAT orta16 bir petri içinde önceden kuluçkaya.
    Not: BCDAT orta kompozisyon ise 1 mM MgSO4, 10 mM KNO3, 45 µM FeSO4, 1.8 mM KH2PO4 (pH) 6.5 KOH ile düzeltilmiş, trace öğe çözüm (0,22 µM CuSO4, 0,19 µM ZnSO4, 10 µM H3BO 3, 0,1 µM Na2MoO4, 2 µM MnCl2, 0,23 µM CoCl2ve 0.17 µM KI), 1 mM CaCl2ve 5 mM diammonium (+)-tartarat.
  2. Kültür microdevice BCDATG orta olarak moss.
    Not: %0,5 (w/v) glikoz ile BCDAT orta BCDATG ortamdır. Hazır orta 4 ° C'de 1 ay boyunca saklanır.

6. T. fournieri polen tüplerinin Microdevice in Vitro Culturing

  1. 20 dakikadır degas ve polen tüpü microdevice bir vakum odasında yerleştirin.
  2. Microdevice vakum odasından kaldırın ve bir micropipette ile çok iyi bir ipucu kullanarak pistil giriş büyüme orta tanıtmak. Üst kısımları için kalan wells ile aynı orta doldurun. Tüm mikro mikro içinde oluşturulan vakum tarafından orta ile doldurulur kadar birkaç dakika bekleyin.
  3. Bazı ıslak kağıt havlu çanak nem korumak için cam alt çanak yerleştirin.
  4. Polen taneleri vahşi türünden aktarım T. fournieri 'mavi ve beyaz' çiçek diseksiyon iğne kullanarak onun stigma için.
    Not: Biz de bu transgenik T. fournieri ile deney ( RPS5Ap::H2B-tdTomato hattı17) 'mor taç' çiçek, polen fluorescently etiketli sperm hücresi ve bitkisel çekirdek içeren tüpler.
  5. Kesim tozlanan stil (1 cm uzunluğunda) bir bıçak kullanarak.
  6. Kesim tarzı cihazın giriş Şekil 2' de gösterildiği gibi yerleştirin.
  7. Çanak üzerinde bir kapak koyun ve bant ile kapatın.
  8. Aygıt için 5-6 h 28 ° C'de bir kuluçka karanlıkta yerleştirin.

7. A. thaliana kök kıllar Microdevice in Vitro Culturing

Not: Adımları 7.1-7,9 (7,3 ve 7,5 dışında) bir laminar akış mahallede gerçekleştirilmesi gerekiyor.

  1. A. thaliana Columbia (Col-0) tohumlarından sterilize ve transgenik (floresan nükleer işaretçiyi içeren) UBQ10pro::H2B-kes satır 5 min için steril sıvı (%5 (v/v) ev çamaşır suyu ve %0.02 (v/v) Triton X-100) içinde ıslatarak.
  2. İyice sterilize tohum autoclaved su ile durulayın.
  3. Durulanır tohumları suda 4 ° C'de 2 gün boyunca karanlıkta saklayın.
  4. UV ışığı altında microdevice gecede sterilize.
  5. 20 dakikadır degas ve microdevice bir vakum odasında yerleştirin.
  6. Büyüme orta wells için yapılan bir micropipette kullanarak aygıtı tanıtmak. Orta ile tüm mikro vakum doldurur kadar birkaç dakika bekleyin.
  7. Autoclaved ıslak kağıt havlu çanak nem korumak için cam alt çanak yerleştirin.
  8. Steril bir tohum cihazın giriş aktarın.
  9. Çanak üzerinde bir kapak koyun ve bant ile kapatın.
  10. Cihazın bir kuluçka 22 ° c sürekli beyaz ışık altında dikey olarak yerleştirin.
  11. Kök saç büyüme kuluçka 4-10 gün sonra kontrol edin. Parlak alan ve floresan görüntüleri ters bir mikroskop kullanarak elde edilir.

8. P. patens (moss) mikrosıvısal cihazın Protonemata in Vitro Culturing

Not: Adımları 8.2-8,6 (8.3 dışında) bir laminar akış mahallede gerçekleştirilmesi gerekiyor.

  1. P. patens gerilme Gransden 200418 25 ° C'de sürekli beyaz ışık altında bir hafta bir petri selofan kaplı BCDAT orta preculture
  2. Microdevice gecede bir laminar akış başlıklı UV ışık altında sterilize.
  3. 20 dakikadır degas ve microdevice bir vakum odasında yerleştirin.
  4. Büyüme orta bir micropipette kullanarak wells tanıtmak. Orta ile tüm mikro vakum doldurur kadar birkaç dakika bekleyin.
  5. Autoclaved su çanak nem korumak için microdevice çevreleyen çanak içine ekleyin.
  6. Yosun protonemata doku küçük bir parça microdevice koya aktarmak ve sürekli beyaz ışık altında 25 ° C'de bir kuluçka doku kültür.
  7. Yosun protonemata büyüme kuluçka 2-3 hafta sonra kontrol edin. Parlak alan görüntü bir mikroskop kullanarak elde.

9. T. fournieri polen tüpü büyüme hızlandırılmış görüntüleme

  1. Microdevice görüntü edinme donanım ile donatılmış bir ters floresans mikroskobu yerleştirin (Örn., CCD kamera) ve yazılım. Microgap yerleri bulabilirsiniz.
    Not: görüntü alma yazılımı, biz ticari bir ürün (Tablo reçetesi) kullanılır. Açık kaynak mikroskopi µManager gibi aynı zamanda kullanılabilir çevrimiçi (https://micro-manager.org/wiki/Micro-Manager) yazılımdır. Bunun bir mikroskop kondansatör yüksek çözünürlüklü görüntüler elde etmek için mikroskobunun yüklemeniz önerilir.
  2. Parlak alan her 10 çekim s mikroskop görüntü alma yazılımı kullanarak.
  3. Fluorescently etiketli sperm hücresi ve polen tüpü RPS5Ap::H2B-tdTomato satırının bitkisel çekirdeğinde gözlemlemek için numune 561 nm lazer ile ışınlatayım ve bant optik filtre kullanın (578/105 nm).
    Not: her ne kadar polen tüpü büyüme hızlandırılmış görüntülerini sık sık ele geçirildi, görüntüleme büyüme etkilemeye görünmedi. Ancak, her zaman lazer yoğunluğu, çekim hızı ve hızlandırılmış aralığı fototoksisite ve fluorophore photobleaching en aza indirmek için en aza indirmek için tavsiye edilir.
  4. Parlaklık ve kontrast görüntülerin ve ImageJ yazılımı (https://imagej.nih.gov/ij/) kullanarak bir video dosyasını hazırlamak.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Şekil 1' de gösterildiği gibi onların büyüme yolları içinde vivoboyunca fiziksel engeller bir dizi ipucu büyüyen bitki hücreleri karşılaşma. Bu çalışmada sunulan mikrosıvısal vitro hücre kültür platformlar muayene etkin ipucu büyüyen bitki hücreleri (polen tüpler, kök tüyleri ve yosun protonemata) arasındaki 1 µm yapay geçitlerden (Şekil 3, üç tür süreç Şekil 4,

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Protokol birkaç kritik adımda tam olarak yukarıda sunulan sonuçlar elde etmek için takip edilmesi gerekiyor. İlk olarak, katman ve cam alt çanak PDMS yüzeyler her ikisi de plazma ile yapıştırma önce yeterli süreyi için tedavi edilmelidir. Aksi takdirde, ipucu büyüyen hücreler microgaps geçiş yaparken PDMS katman yerel olarak cam yüzeyinden ayırmak. Başka bir önemli kök saç ve yosun protonemata protokol microdevice sterilizasyon adımdır. Normalde, kök tüyleri ve yosun protonemata hücreleri birkaç hafta içinde microdevice ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar onlar rakip hiçbir mali çıkarları var bildirin.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Biz H. Tsutsui ve ö. Kurihara T. fournieriRPS5Ap::H2B-tdTomato hattı ve A. thaliana UBQ10pro::H2B-kes hattı, sırasıyla gibi transgenik bitkiler ile bize verdiğiniz için teşekkür ederiz. Bu eser Enstitüsü, dönüştürücü biyo-moleküller tarafından Nagoya Üniversitesi ve Japonya gelişmiş bitki bilim ağ destek verdi. Bu eser için mali destek sağlanan hibe tarafından Japonya bilim ve teknoloji Ajansı (ERATO proje vermek yok. T.H. için JPMJER1004), yenilikçi alanlar ('ları üzerinde bilimsel araştırma için bir Grant-in-Aid JP16H06465 ve JP16H06464 T.H. için) ve Japonya toplum için zorlu araştırmacı araştırma (hibe No 26600061 için N.Y. ve grant NOS 25650075 ve 15 K 14542 YS için) promosyon bilim (JSP'ler) Grants-in-Aid.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
PDMSDow Corning A.Ş.Sylgard184
Murashige & Skoog MediumWako Saf Kimyasal392-00591
MESDojindo345-01625
SükrozWako Saf Kimyasal196-00015
50 mm cam tabanlı çanakMatsunami CamD210402
35 mm cam tabanlı çanakIwaki 3971-035
Cerrahi bıçakTüyNo.11
biyopsi yumruklarıHarrisUni-Core
Jel yükleme ipuçlarıBio-Bik124-R-204
Ters MikroskopOlympusIX83
CSU-W1Yokogawa ElectricBu özelleştirilmiş mikroskop
için katalog numarası mevcut değildirMetaMorph görüntüleme yazılımıMoleküler Cihazlar

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Higashiyama, T., Takeuchi, H. The Mechanism and Key Molecules Involved in Pollen Tube Guidance. Annu. Rev. Plant. Biol. 66, 393-413 (2015).
  2. Vogler, H., Shamsudhin, N., Nelson, B. J., Grossniklaus, U. Measuring cytomechanical forces on growing pollen tubes. Pollen Tip Growth. Obermeyer, G., Feijó, J. , Springer. 65-85 (2017).
  3. Kehr, J., Wagner, C., Willmitzer, L., Fisahn, J. Effect of modified carbon allocation on turgor, osmolality, sugar and potassium content and membrane potential in the epidermis of transgenic potato (Solanum tuberosum L.) plants. J. Exp. Bot. 50 (334), 565-571 (1999).
  4. Benkert, R., Obermeyer, G., Bentrup, F. W. The turgor pressure of growing lily pollen tubes. Protoplasma. 198, 1-8 (1997).
  5. Vogler, H., et al. The pollen tube: a soft shell with a hard core. Plant J. 73 (4), 617-627 (2013).
  6. Shamsudhin, N., et al. Massively parallelized pollen tube guidance and mechanical measurements on a Lab-on-a-Chip platform. PloS one. 11 (12), e0168138(2016).
  7. Cheung, A. Y., Boavida, L. C., Aggarwal, M., Wu, H. M., Feijó, J. A. The pollen tube journey in the pistil and imaging the in vivo process by two-photon microscopy. J Exp Bot. 61 (7), 1907-1915 (2010).
  8. Metzner, R., et al. Direct comparison of MRI and X-ray CT technologies for 3D imaging of root systems in soil: Potential and challenges for root trait quantification. Plant Methods. 11 (1), 1-11 (2015).
  9. Xia, Y., Whitesides, G. M. Soft Lithography. Angew Chemie Int Ed. 37 (5), 550-575 (1998).
  10. Massalha, H., Korenblum, E., Malitsky, S., Shapiro, O. H., Aharoni, A. Live imaging of root-bacteria interactions in a microfluidics setup. P Natl Acad Sci. 114 (17), 4549-4554 (2017).
  11. Grossmann, G., et al. Time-lapse Fluorescence Imaging of Arabidopsis Root Growth with Rapid Manipulation of The Root Environment Using the RootChip. J Vis Exp. (65), (2012).
  12. Busch, W., et al. A microfluidic device and computational platform for high-throughput live imaging of gene expression. Nature Methods. 9, 1101-1106 (2012).
  13. Parashar, A., Pandey, S. Plant-in-chip: Microfluidic system for studying root growth and pathogenic interactions in Arabidopsis. Appl. Phys. Lett. 98, 263703(2011).
  14. Bascom, C. S., Wu, S. -Z., Nelson, K., Oakey, J., Bezanilla, M. Long-Term Growth of Moss. in Microfluidic Devices Enables Subcellular Studies in Development. Plant Physiol. 172 (1), 28-37 (2016).
  15. Higashiyama, T., Kuroiwa, H., Kawano, S., Kuroiwa, T. Guidance in vitro of the pollen tube to the naked embryo sac of Torenia fournieri. Plant Cell. 10, 2019-2032 (1998).
  16. Nishiyama, T., Hiwatashi, Y., Sakakibara, K., Kato, M., Hasebe, M. Tagged mutagenesis and gene-trap in the moss, Physcomitrella patens by shuttle mutagenesis. DNA Res. 7, 9-17 (2000).
  17. Maruyama, D., et al. Independent Control by Each Female Gamete Prevents the Attraction of Multiple Pollen Tubes. Dev. Cell. 25 (3), 317-323 (2013).
  18. Rensing, S., et al. The Physcomitrella genome reveals evolutionary insights into the conquest of land by plants. Science. 319, 64-69 (2008).
  19. Yanagisawa, N., Sugimoto, N., Arata, H., Higashiyama, T., Sato, Y. Capability of tip-growing plant cells to penetrate into extremely narrow gaps. Sci. Rep. 7 (1), 1403(2017).
  20. Dolan, L., et al. Clonal relationships and cell patterning in the root epidermis of Arabidopsis. Development. 120, 2465-2474 (1994).
  21. Denais, C. M., et al. Nuclear envelope rupture and repair during cancer cell migration. Science. 352 (6283), 353-358 (2016).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Microfluidic DevicesTip Growing Plant CellsPollen TubesRoot HairsMoss ProtonemataPDMS SubstrateMicrogap PenetrationTime Lapse ImagingFluorescent LabelingCell Deformation

Related Articles