Yöntem makalesi

Örnekleme stratejileri ve Biobank doku örnekleri domuz Biyomedikal modellerinden işlenmesi

DOI:

10.3791/57276

⸱

6 Mart 2018

 , 
1Institute of Veterinary Pathology at the Centre for Clinical Veterinary Medicine, LMU Munich

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Pratik uygulaması ve yöntemleri performansını aşağı akım analizleri biobank projeleri geniş bir yelpazede için domuz hayvan modellerin temsilcisi doku örnekleri oluşturmada, volumetry, dahil olmak üzere içinde gösterilen sistematik rastgele örnekleme, ve doku örnekleri nitel ve nicel morfolojik ve moleküler analiz türleri için farklı işleme.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Translasyonel tıbbi araştırma, domuz modelleri giderek daha popüler hale gelmiştir. Bireysel hayvanların, özellikle genetiği değiştirilmiş domuz yüksek değer modelleri ve bu modellerin mevcut hayvanların genellikle sınırlı sayıda göz önüne alındığında, yeterince işlenmiş doku örnekleri (biobank) koleksiyonları kurulması için uygun bir Sonraki analizleri yöntemleri, örnekleme, zaman noktada belirtilmemiş analizleri de dahil olmak üzere geniş yelpazede translasyonel değer modelinin tam yararlanmak için anlamlı yaklaşımlar temsil eder. Domuz anatomisi özellikleri ile ilgili kuralların son temsilcisi, yüksek kaliteli örneklerinden farklı domuz organ ve dokulara standart üretimi için kurulmuştur. Bu kurallar sonuçları ve onların karşılaştırılabilir farklı çalışmalar ve Müfettişler arasında tekrarlanabilirlik için gerekli önkoşullar vardır. Organ ağırlıkları ve birimleri, oluşturulacak, belirlenmesi örnekleme yerlerin ve doku örnekleri sayıların yanı sıra yönlendirme, boyutu, işleme ve düzeltme yönergeleri, gibi temel veri kaydı ilgili faktörlerdir generalizability ve moleküler, nitel ve nicel morfolojik analiz için numune kullanılabilirliği belirleniyor. Burada, en önemli teknikler bir açıklayıcı, pratik, adım adım gösteri kuşak temsilcisi için domuz dokular çok amaçlı biobank örneği sunulmaktadır. Burada açıklanan yöntemleri belirlenmesi organ/doku birimleri ve yoğunlukları, parenkimal organları tarafından noktası-sayma, doku büzülme ölçüde belirlenmesi için bir sistematik rastgele örnekleme birimi ağırlıklı yordam uygulama içerir Histolojik örnekleri ve rastgele odaklı örnekleri nesil izotropik uniform rasgele (diploması) bölümleri "Orientator" ve "Isector" yöntemleri ve dikey üniforma tarafından üretilen gibi nicel stereological analizleri için gömme için ilgili rasgele (VUR) bölümleri.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1,2,3,4,5, domuz arasında birkaç avantajlı benzerlikler nedeniyle büyük hayvan modelleri gibi translasyonel tıpta, domuz kullanım için giderek daha yaygın ve insan anatomisi ve fizyolojisi ve kurulan moleküler biyolojik yöntemler nesil için izin durumu özel olarak tasarlanmış, domuz modelleri çok çeşitli hastalık koşulları1,4için genetik olarak değiştirilmiş.

Ancak, kemirgen modellerle karşılaştırıldığında, deneyler için herhangi bir zamanda sağlanan ilgili domuz manken hayvanların sayısı sınırlıdır. Bu domuz üretimi aralığı yaklaşık bir yıl ve domuz modelleri ve Hayvancılık üretimi için gerekli mali ve zaman yoğun çabaları kaynaklanmaktadır. Bu nedenle, bir domuz modeli yanı sıra bu domuzların oluşturulan örnekleri bireysel hayvanlar özellikle genetiği değiştirilmiş domuz modelleri ve/veya uzun vadeli deneysel sorunları (örneğin, geç komplikasyonlar çok değerli Kronik hastalıklar) yaşlı bireylerin2,6,7' incelenir.

Herhangi bir çalışma sırasında çalışma ilk deneysel tasarım zamanlanan değil ek Değerlendirmeler performansını daha sonra ilgili, olup çıkmak örneğin, farklı sorular daha önce doğan keşfetti adresine beklenmeyen bulgular. Böyle ek deneyleri için uygun örnekleri mevcut değilse, orantısız yüksek maliyet ve zaman yoğun harcamaları ek domuz ve doku örneği oluşturmak gerekli olabilir. Bu tür olasılıklar için hazırlıklı olmak, korunmuş yedekleme örnekleri farklı organ, doku veya biyo-sıvılar, nicelik ve nitelik uygun sonraki analizleri, geniş bir yelpazesi için biobank koleksiyon üretimi önemli bir kabul edilir 2,6,7yaklaşım. En iyi faydaları bir domuz hayvan modelden türeterek, yeterli biobank örnekleri kullanılabilirliğini de aynı örnek malzemeler bir çok organ düzeyi farklı analiz yöntemleri geniş bir yelpazede gerçekleştirmek için benzersiz imkanı sunuyor çok aynı bireysel hayvanlar, örneğin, dağıtım örnekleri için farklı çalışma gruplarının bilim adamları tarafından bir araştırma ağ2,6,7' düzenledi. Ayrıca, biobanking '' ileri '' örnekleme stratejisinde de hayvanların bir çalışmada gerekli sayıda bir azalma katkıda bulunur. Domuz modeli biobanking avantajları son zamanlarda bir çok organ, multiomics çalışma, organ inceleyerek gösterilmiştir çapraz konuşma Münih Geçireceğimi domuz Biobank üzerinden örnekler kullanarak uzun vadeli diyabet, genetiği değiştirilmiş bir domuz modeli 2.

Biobank örnekleri genel olarak güvenilirlik ve daha sonra gerçekleştirilen analizleri sonuçlarının interpretability kurmak için uymanız gerekir bazı zorunlu gereksinimleri bulunmaktadır. Örnekleri tekrarlanarak üretilen gerekir ve temsilcisi, Yani, yeterince olmaları gerekir doku/organ örnekleri7den alınmıştır baktılar morfolojik ve moleküler özelliklerini yansıtan. Aşağı akım analiz türleri geniş bir yelpazesi için uygun olmak, örnekleri gerekir yeterli miktarlarda alınır ve (zaman ve sıcaklık şartları da dahil olmak üzere) taleplerini açıklayıcı dahil olmak üzere farklı analitik yöntemleri göre işlenen cryohistology, parafin ve plastik Histoloji, immünhistokimya, in situ hibridizasyon, ultrastructural elektron Mikroskopik analizler ve klinik laboratuvar tanı analizleri, de moleküler gibi histopatolojik analizleri DNA, RNA, proteinler ve metabolitleri analizleri.

Randomize bölüm numaraları, birimler, uzunlukları veya farklı doku yapılarının yüzey alanları gibi farklı nicel morfolojik parametrelerin geniş değerlendirilmesi için nicel stereological analizleri tarafından izin vermek için uçak Histolojik örnekleri ilgili organ/dokuların7,8,9,10,11hazırlıklı olması gerekiyor. Nicel morfolojik çalışmalarda, doku, organ veya organ yuvası, Toplam hacim kesin olarak belirlenmesi (Yani, başvuru alanı) örnekleri alınmıştır en önemlisi önemli7,9 ' dur , baktılar parametreleri ilgili organ, doku veya organizma içinde mutlak miktarlarını hesaplamak için 12 . Sonunda, belirlenecek ve hesap13alınan gömme ile ilgili doku büzülme histolojik kesitler hazırlanması sırasında etkisi vardır. Bu nedenle, nicel stereological, özellikle önceki çalışmalar arşivlenmiş örnekleri (Sabit doku örnekleri, katıştırılmış doku blokları, histolojik kesitler, vb) bazen ciddi sınırlı veya hatta imkansız12analizlerdir, Hayır yeterli örnekleme tasarımları numaraları ve mevcut bireysel örnekleri miktarda yetersiz ise temsilcisi örnekleri, emri için uygulandıysa özellikle volumetry ilgili organ/dokuların, gerçekleştirilmedi veya varsa işlenmesi örnekleri, ilgi nicel morfolojik parametre tahmini ile uyumlu değil. Manifold mümkün etkileyen faktörler nedeniyle ayrı nicel morfolojik parametrelerinin analizler için arşiv-örnek malzemelerin uygunluğu tümden yanıtlanamaz, ancak tek tek her durum dikkatli değerlendirilmesi bağlıdır.

Böylece, konum, boyut, sayısı, işleme, süsleme yön ve örnekleri yönünü potansiyel olarak sonraki analizleri sonuçlarını etkileyecek gibi bu faktörlerin büyük önem taşıyan şeyler ve herhangi bir çalışmada deneysel tasarımında dikkate alınmalıdır. Bu yönleriyle ve domuz anatomi, kapsamlı, ayrıntılı, büyük ölçekli örnekleme yönergeleri adapte domuz hayvan modelleri son zamanlarda kurulmuş, özel özellikleri ile ilgili olarak standart, tekrarlanabilir için sağlam bir başvuru sağlayan ve 50'den fazla farklı domuz organ ve dokulara6,7yedek, yeterince işlenmiş, yüksek kaliteli örneklerinin verimli üretimi.

Metodolojik açıklamaları ve mevcut makalede gösterilen video öğretici detaylı, açıklayıcı, anlaşılır, adım-tarafından adım talimatları için pratik teknikler için volumetry, performansını sağlamak domuz dokuların örnekleme ve organ ve doku örnekleri farklı akış aşağı analiz yöntemleri için işlenmesi. Seçme teknikleri organ/doku birimleri ve Arşimet ve Cavalieri9ilkelerine dayanan yoğunlukları belirlenmesi için yöntemleri dahil, üç boyutlu büzülme doku boyutlarının belirlenmesi de dahil olmak üzere ilgili Histolojik inceleme için işleme sırasında farklı gömme medya14 içinde katıştırma, uygulanabilir hacim ağırlıklı sistematik rastgele örnekleme uygulanması için örneklenen doku örneklerin işleme yaklaşımları farklı sonraki analizleri7,8,9,15ve nesil uygun şekilde odaklı ve olası nicel stereological analizleri7,8için örnekleri işlenebilir, 9,10,11. Domuz biobank projeleri uygulama onların yanında, kanıtlanmış yöntemleri genellikle nicel histo-Morfolojik özellikleri organ/dokuların inceleyerek tüm çalışmalar için uygundur. Ayrıca, sistematik rastgele örnekleme tasarımlar kuşak temsilcisi örnekleri bereket değişiklikler, örneğin, RNA'ların, proteinler veya metabolitleri içinde algılamak için moleküler analiz yöntemleri kullanarak deneyler için özellikle yararlıdır çeşitli organ ve dokulara.

Pratik performanslarını Protokolü bölümünde anlatılan sonraki paragraflar bu yöntemler kısa bir giriş sağlar.

Organ/doku birimleri belirlenmesi
Bu faktörler gösterebilir organ ağırlık ve birimleri belirlenmesidir dosyasında çeşitli deneysel ayarları, önemli değişiklikler, potansiyel olarak deneysel olarak ilgili faktörler ilgi bileşen incelenir. Bir organ/doku hacmi de genellikle mutlak nicel parametreleri, (örneğin, toplam telefon numarası), stereologically tahmini sayısal ses yoğunluğu (örneğin, birim birim başına hücre sayısı üzerinden hesaplamak için gereklidir doku)7,12. Bilgisayarlı Tomografi gibi karmaşık teknik ekipman kullanma teknikleri dışında temelde bir organ veya doku mutlak hacmi belirlemek için yaygın olarak kullanılan üç pratik yöntem vardır. Bir organ hacmi "Arşimet, Yaniilkesine göre su veya tamamen sular altında zaman yapı tarafından zorla göç ettirilmiş salin ses düzeyini ölçme doğrudan hacimsel ölçü" tarafından belirlenebilir. Ancak, onlar çok büyük hacimsel/ölçme şişeler gerektiren bu yana nispeten büyük domuz organları için bu yaklaşımlar pratik ve tutarsızlık, eğilimli vardır. Daha rahat bir organ/doku hacmi verimli bir şekilde "batma yöntem"7,12 kullanarak belirlenebilir, ağırlık ve yoğunluk7,12,16, hesaplanabilir ,16 (iletişim kuralı adım 1.1.). Organ/doku birimleri de "Cavalieri prensibi" üzerine (1598-1647) göre volumetry yaklaşımları kullanarak tahmin edilebilir. Basitçe, Cavalieri İlkesi devletler, iki nesne için zemin düzlemini paralel uçaklarda kesitli, ve bölümler profilleri iki nesne karşılık gelen edersen taban düzlemi uzaklıklar aynı alanlarda, iki nesne var aynı birim var. Böylece, keyfi olarak şekillendirilmiş nesneleri hacmi paralel, aynı derecede uzak bölüm uçaklar ve bölüm uçaklar arasındaki mesafe bölüm profil alanlarının ürün olarak tahmin edilebilir. Bu aşağıdaki benzetmeyle anlaşılır: aynı sikke aynı sayıda oluşan iki yığınlarını yerleştirilir yan yana birbiri verimli sikke yığını ve diğer silindir şeklinde yığılmış paralar bakıcıyla bir yığın düşünün paralar ile Merkezi kapalı yığın sikke (şekil 3A) konumlandırılmış. Her iki para yığınları şekilleri farklı olmasına rağmen onların birimler alanları, karşılık gelen her iki yığınları düzeylerindeki sikkelerin beri aynıdır (Yani, profilleri paralel bölümlerin alanlarında kesilmiş her iki para eşit uzaklıkta yığınlarda aracılığıyla zemin) aynıdır. Domuz organ ve dokulara Cavalieri ilke7,12,15 kullanarak hacimli tahmini 1.2. adımda anlatılan.

Histolojik katıştırma için ilgili doku büzülme ölçüde belirlenmesi
Analizler çeşitli kantitatif morfolojik parametreleri histolojik dokusu bölümlerde ölçülen belirlenecek ve göz önünde doku histolojisi için işleme sırasında meydana gelen doku gömme ile ilgili büzülme etkisi var. Katıştırma ilgili doku büzülme ölçüde değişken olabilir ve hem doku, işleme ve gömme orta8,13,17,18,19üzerinde bağlıdır. Genel olarak, tüm üç boyutlu uzay ve bu nedenle, tüm boyutlu parametreleri nicel stereological analizleri8 tahmini etkiler katıştırma güvenlikle ilgili değişiklikler (Yani, çoğunlukla büzülme) doku örneği hacminin ortaya . Temel olarak, gömme ile ilgili doku büzülme, doğrusal doku büzülme faktörü (fS) ifade edilen ölçüde adım 1.3 gösterildiği gibi tahmin edilebilir. ve14(büzülme duyarlı) kantitatif morfolojik parametreleri düzeltilmesi için kullanılan.

Organ/dokuların sistematik rastgele örnekleme birimi ağırlıklı
Domuz organ/doku örnekleri biobank topluluğu kurulması için birim ağırlıklı sistematik rastgele örnekleme yaklaşımlar gibi 2. adımda açıklanan pratik, zaman kazandıran ve verimli teknikleri nesil temsilcisi olduğu kanıtlanmıştır, çok amaçlı doku7,8,9,15örnekler.

Nesil izotropik Uniform rasgele bölümleri ve dikey Uniform rasgele bölümleri nicel stereological analizleri için
Biobank doku örnekleri farklı nicel stereological analiz yöntemleri yeterince hazırlıklı bir numune belirlenemedi parametreleri maksimum tahmini için geniş bir yelpazesi için uygun olması gerekir. Neredeyse tüm nicel stereological parametreleri "izotropik (bağımsız) tek tip rasgele (diploması) bölümler"8,9kullanılarak belirlenebilir. Doktora diploması bölümlerde, doku örneği bölüm boyutunda üç boyutlu yönünü randomize. Bu doku örneği bölüm uçak konumuna göreceli konumunu randomizasyon tarafından "Isector" yöntemi11 (iletişim kuralı adım 3.1) veya göreli olarak bölüm uçak yönünü randomizasyon uygulandığı haliyle elde edilebilir "Orientator" yöntemi10 (iletişim kuralı adım 3.2) olduğu gibi doku örneği. Cilt - ya da mukoza numune doğal olarak mevcut veya tanımlanmış ve düzgün tanımlanabilir dikey eksen, "dikey tek tip rasgele (VUR) bölümler" hazırlanması görüntüleme gibi doku örneklerinde (iletişim kuralı adım 3.3.) kesinlikle kesitli boyutunda içinde onların dikey eksen avantajlı8,20' dir. İçin tam bir söylem diploması/VUR örnekleme teorik temelleri ve potansiyel aşağı akım nicel stereological analizleri ile kapsamlı bir tartışma baktılar okuyucu niceliksel stereology hayatta ders kitapları için denir Bilimler8,9.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm yöntem tanımlamak burada ölü hayvanlardan elde edilen doku örnekleri kullanmak ve tamamen hayvan refahı Alman yasal düzenlemelere uygun.

1. Volumetry

  1. Doku/Organ yoğunlukları belirlenmesi için batma tekniği (Resim 1 ve Şekil 2) 7 , 12 , 16
    1. Malzemeleri hazırlamak: neşter bıçaklar, kağıt havlu, iyi forseps, standart laboratuvar ölçekleri, cam veya plastik şişeler, % 0,9 serum ve kendini inşa numune sahipleri (şekil 2A).
    2. Doku bir parça tüketim (en büyük boyutu: 2 x 2 x 2 cm3) özellikle ilgi organ yuvası üzerinden/doku, organ dan. Ölçülen totohipofiz veya epifiz bezi gibi küçük organları vardır.
      Dikkat: örnek boyutu özellikle kabı (Adım 1.1.5 ve devamı) ve örnek tam su kabı 1.1.7. adımda iç duvarları ile bağlantı kurmadan izin vermek için dolum seviyesi iç çapı daha küçük olduğundan emin olun.
    3. Dikkatli bir şekilde aşırı kan/doku sıvısı kaldırmak için kağıt havlu ile örnek temizle.
    4. Örnek bir hassas ölçekte tartmak ve örnek (mS) ağırlığı kaydetmek. Küçük doku örnekleri yakın mg (şekil 1A) ağırlığını belirlemek.
    5. Oda sıcaklığında % 0,9 serum ölçeği ile dolu bir ölçek yerleştirin. Tamamen bir batma sonraki adımda doku örneğinin taşmadan izin vermek için kabı, doldurmayın.
      Uyarı: uygun boyutu ve ağırlığı ölçülecek doku sample(s) ve etkili Ölçüm Aralığı ölçek kabı boyutu kullanın. En çok 2 x 2 x 2 cm3daha büyük örnekleri için 50-100 mL kabı boyutunu yaklaşık 100 mg 500 g için ölçüm ölçek ile birlikte uygun ise küçük örnekleri için hassas teraziler ile ile birlikte 5-10 mL biriminin şişeler kullanın Ölçüm aralıkları arasında yaklaşık 0.1 mg ve 20 g.
    6. İşaretli konuma (oklar şekil 1B, şekil 2Bve şekil 2C)serum örnek sahibi (Yani, ince tel yeterince sert bir döngü veya buna benzer, şekil 2A) daldırın. O zaman, (Dara) sıfır olarak ölçek görüntüsünü araştırma.
    7. Dikkatle doku örneği örnek sahibine iliştirin ve örnek kutusunda işaretli pozisyon (oklar şekil 1B, şekil 2Bve şekil 2C)ulaşılana kadar tamamen serum örneğinde daldırın.
      Dikkat: Batık örnek ve örnek sahibi iç duvarları veya alt kabı veya serum yüzeyi ile temas olması gerekir.
    8. Örnek sahibi ve batık örnek o konumda tutarken, doku örneği tarafından zorla göç ettirilmiş saline ağırlık atıfta ölçekte (mL) görüntülenen ağırlığı kaydetmek (1 C şekil, şekil 2B, ve Şekil 2C).
    9. Oda sıcaklığında (20 ° C) tuz yoğunluğu ve m L(VS) örnek hacmi hesaplamak (ρtuzlu = 1.0048 g/cm³) VS olarak mL= / ρtuzlu [g/g/cm³] (Şekil 1).
    10. (ρörnek) doku örneğineait ağırlığı (Yani, kitle) örnek (mS) ve hacmi (VS) yoğunluğunu hesaplamak: ρörnek = mS /VS[g/cm³] (şekil 1).
    11. Totoölçülen organları için ölçüm üç kez tekrarlayın ve tek ölçüm değerleri üzerinden ortalama organ yoğunluğu hesaplayın. Büyük organ/dokular için aynı organ/doku/organ yerde tekrarlanan ölçümleri farklı örnekleri ile gerçekleştirmek ve tek ölçümleri üzerinden ortalama yoğunluğu buna göre hesaplar.
    12. Ağırlık ve yoğunluk (şekil 1) organ/doku/organ bölme hacmi hesaplamak.
  2. Cavalieri yönteminin domuz Organ birimleri tespiti için uygulama 7
    1. Malzemeleri hazırlamak: cetvel, kumpas, bıçak, makas, pens, su geçirmez kalem, plastik asetat, tarayıcı, fotoğraf kamera ve çapraz Izgaralar üzerinde plastik asetat basılmış.
    2. Tüm organ/doku (kesme Bankası) düz bir yüzeye yerleştirin ve uzunluğu (m) organ (şekil 3B, şekil 5A) boyuna ekseni boyunca ölçün.
    3. Tam organ/doku eşit uzaklıkta paralel dilimler halinde (şekil 3 c, şekil 5B) boyuna organ eksenine dik kesin. İki bölümleri (Yani, parça aralığı/bölüm kalınlığı genellikle yaklaşık 1 cm) doku/organ plaka yeterli sayıda almak için yeterince küçük arasındaki mesafe d seçin. Rastgele ilk bölümü organ kenar boşluğundan 0 ile parça aralığı arasında bir mesafe içinde konumlandırın. Dilimleme iken, görsel olarak kabaca Tekdüzen kalınlığı yaklaşık döşeme paralel organ/doku elde etmek için her bölüm uçak yönünü ve pozisyon yargıç.
      Not: Doku/organ plaka gereken sayıda şekli ve muayene organ/doku boyutunu bağlıdır. Küçük organ veya örnekleri ≤5 mm ince plaka içinde kesitli gerekse kesit önce Ağar örnekleri gömmek (bkz. Adım 1.3.3.) ve agar gömülü örneği Dilimleme için teknik bir aygıtı kullanın. Ampirik olarak tavsiye parça aralıkları en domuz organ ve dokulara için hem de örnekleri dilimleme aygıtlar için ek malzeme "Doku örnekleme kılavuzları için domuz Biyomedikal modelleri"7gösterilir.
    4. Tüm organ/doku döşeme aşağı bakacak şekilde kesme üsteki (Yani, sürekli olarak sağ veya sol kısım uçak her organ levhanın, şekil 3D, şekil 5Cüzerinde) aynı yüzey üzerine yerleştirin ve döşeme (n) saymak.
    5. Doku plaka bölüm profilleri aşağıdaki yaklaşımlardan biri tarafından elde edilir:
      1. Dikkatle doku plaka üzerinde uygun şekilde etiketli plastik asetat, kendi üst ve alt bölüm yüzeyler yönünü koruyarak yer. Su geçirmez kalem (şekil 3E1-2) kullanarak plastik asetat doku kanlar anahatları takip et.
      2. Kamerayı dikey bölüm yüzeyler (şekil 3F) yukarıda doku plaka fotoğrafik görüntüleri al. Kalibrasyon için doku plaka yanındaki boyut cetvel yerleştirin.
      3. Düz Yataklı Tarayıcı doku kanlar onların üst ve alt bölüm yüzeyler (şekil 3 g) yönünü koruyarak inceden inceye gözden geçirmek. Kalibrasyon için doku plaka yanındaki boyut cetvel yerleştirin.
    6. Tüm doku levhalar (izlenen, fotoğrafı çekilen veya taranmış) bölüm profilleri alanlarında aşağıdaki yaklaşımlardan biri tarafından tedbir:
      1. Yer paylaşımı veya izlenen organ levha profilleri ile uygun ölçekli bir üst üste, bir plastik şeffaflık ve tüm haçlar profil alanı (3E rakam3-4; karşılaştırmak-e doğru isabet sayısı eşit aralıklı haçlar kalibre edilmiş ızgara basılır Şekil 5 d). Bölümü profil alanı her organ levhanın haçlar profil alanına göre bir haç'a karşılık gelen alan isabet sayısını çarparak hesaplar.
        Not: yeterince hassas cilt almak için tahmin ediyor, bitişik haçlar arasında yeterince küçük bir mesafe ile çapraz bir tablo seçin, böylece ortalama en az 100 kesişsin çalışmanın muayene her durumda bir organ plaka bölüm yüzeylerin vuracaktır . Ampirik olarak tavsiye çapraz kılavuz boyutları en domuz organ ve dokulara için ek malzeme "Doku örnekleme kılavuzları için domuz Biyomedikal modelleri"7gösterilir.
      2. Alanlarını ölçmek fotoğraflar/tarama dijital resimlerdeki doku döşeme, kullanarak uygun ticari olarak kullanılabilir veya freeware morfometri yumuşak - ve donanım uygulamaları (şekil 3 H), bir ticari görüntü analiz sistemi gibi21, ya da ImageJ22.
        Dikkat: Not bir doku levha (ilk veya son) doğal yüzeyi sırasıyla dinlenme tarayıcınıza yerleştirilir, fotoğraf makinesi doğal yüzeyi ile karşı karşıya. Bu nedenle, taranan görüntü, fotoğraf resim bu levhanın, bir bölümü yüzey göstermez. Bu nedenle, hiçbir bölüm alan profili bu doku levha (şekil 3I) taranan resim/fotoğraf görüntü ölçülür. Ayrıca Not aşırı projeksiyon, taranmış resimleri ve fotoğrafları organ/doku döşeme, Yanimevcut sadece gerçek bölümünde profilleri, but levha bölüm yüzey (şekil 12 yatan görüntü dokusunda alanlarını ölçmek G-H).
    7. Ürün, tüm ilgili bölüm profil alanları tüm doku plaka vaka başına toplamı olarak tahmin edilen organ birim hesaplamak (Yani, sürekli olarak sağa veya sola, sırasıyla, her organ üst veya alt bölüm yüzeyi levha ve plaka (Yani, dikey organ eksen (l) ve plaka sayısı ölçülen uzunluğu sayının)15ortalama kalınlığı.
  3. Üç boyutlu katıştırma ilgili doku büzülme ölçüde belirlenmesi sırasında histoloji için doku örnekleri işleme
    1. Malzemeleri hazırlamak: Microtome bıçaklar, forseps, agar, metal döküm kalıpları, dijital tarayıcı ve büyüklük cetvel (örneğin, grafik kağıdı).
    2. Taze, uçak bölümü yüzeyden sabit doku örneği kesti.
      Not: Eğer kolayca örnekleri kullanarak deforme (yumuşak) dokular (yağ dokusu, jelatinimsi doku), embed sabit doku örneği agar parça (şekil 4A) önce içinde.
    3. Örnek agar içinde katıştırmak için:
      1. Karıştırmak gibi uygun bir su hacmi ile Mikrobiyoloji kültür ortam için kullanılan standart agar toz (yaklaşık 0.5-1 g agar/10 mL su) bir cam ölçek. Karışımı ilave edin ve 3-5 s. karışımı ilave edin ve 3-5 s için tekrar Çıban getirmek için kaynar kadar 700 W mikrodalga fırında ısı.
      2. İsteğe bağlı olarak, örneğin, siyah mürekkep ile sıvı agar agar doku örneği için kontrastı arttırmak için boya (sıcak sıvı agar için 10 mL 1 mL mürekkep ekleyin ve karistirin).
      3. Sıcak agar (örneğin, gömme, şekil 10A-Dparafin için kullanılan bir metal kalıp) bir döküm kalıp içine dökün ve sıcak agar sabit doku örneğinde daldırın. Katılaşma kadar serin, kalıp çıkarmak ve bir microtome ya da jilet kullanarak katıştırılmış dokuyla agar blok kesme agar izin.
        Dikkat: sıcak sıvı agar taşıma sırasında koruyucu gözlük ve eldiven giymek. Formaldehit çözüm bir egzoz altında sabit işlem doku örnekleri hood ve koruyucu gözlük ve laboratuvar eldiven giymek.
    4. Örnek bölüm yüzeyi ile birlikte bir büyüklük cetvel flatbed tarayıcı üzerinde aşağı bakacak şekilde yerleştirin ve (şekil 4AB) bölümünde yüzey inceden inceye gözden geçirmek.
    5. Bölüm yüzeyinde sabit doku örneğinin (f) adım 1.2.6 içinde (şekil 4B) açıklanan teknikleri kullanarak dijital tarama alanı belirleyin.
    6. Epoksi (örneğin, Epon) veya glycolmethacrylate/methylmethacrylate (GMA/MMA)23, aşağıdaki standart protokolleri23,24,25 (gibi plastik gömme ortamda örnek katıştırma Şekil 4 c). Önceki adımda (1.3.4) taranan sabit örnek bölüm yüzeyinde plastik gömülü örnek korunur emin olun.
      Not: örnek bölüm yüzeyine yönünü örnek işleme sırasında korumak için sürekli olarak örnek ile hedeflenen bölümde yüzeyi aşağı doğru gömme kaset veya döküm kalıp bakacak yerleştirin veya amaçlanan bir bölüm yüzey (veya örnek karşı tarafında) mürekkep.
    7. Sabit doku örneği (Adım 1.3.2) özgün bölüm yüzeyine karşılık gelen plastik bloğundan histolojik bir bölüm kullanarak kesmek bir microtome (şekil 4 d), bir cam slayt (şekil 4 d) bölümüne bağlayabilir ve düzenli olarak (leke örneğin, Hematoksilen ve Eozin leke, H & E)24,25.
      Dikkat: sabit doku örneği özgün bölüm yüzeyine olarak aynı düzlemde yaklaşık bir histolojik bölüm almak için dikkatle plastik blok pozisyon microtome Mount kesit önce ayarlayın.
    8. Bölüm (şekil 4E) tarama ve slayt lekeli bölümü ile birlikte bir büyüklük cetvel flatbed tarayıcı üzerinde aşağıya doğru bakacak şekilde yerleştirin.
    9. 1.2.6 (şekil 4F) adımda açıklanan teknikleri kullanarak dijital tarama içinde plastik gömülü doku örneği (Ae) bölümünde alanı belirleyin.
    10. Ortalama katıştırma ilgili doku büzülme (için ilgili doku ve gömme orta) bölüm profillerin doku örneklerinin ölçülen alanlardan önce ve sonra orta katıştırma plastik gömme hesaplayın. Doğrusal büzülme faktörünü fs n doku örnekleri bölümü profilleri alanlarında sayının kare kökü olarak orta (e) ve alanları katıştırma plastik gömme sonra hesaplanır Bölüm profillerin orta (f) (şekil 4 g) katıştırma plastik gömme önce aynı doku örnekleri14.

2. cilt ağırlıklı sistematik rastgele örnekleme sayma ve doku Subsamples farklı akış aşağı analiz türleri7 için işleme Puan

  1. Malzemeleri hazırlamak: cetvel, kumpas, bıçak, makas, pens, su geçirmez kalem noktası/çapraz baskılı plastik asetat ve rasgele sayı tablolar üzerinde Izgaralar.
    Not: Izgaralar (5 – 60 mm) çapraz kopyası şablonları için "Doku örnekleme kılavuzları için domuz Biyomedikal modelleri"7ek malzeme temin edilmektedir.
  2. Organ/doku (kesme Bankası) düz bir yüzeye yerleştirin ve onun boyuna ekseni (şekil 5A, şekil 6A) organ (l) uzunluğu ölçmek.
  3. Tam organ/doku eşit uzaklıkta paralel dilimler halinde kendi boyuna ekseni (şekil 5B) dik kesin. D arasında iki bölümü (Yani, parça aralığı/bölüm kalınlığı, genellikle yaklaşık 1 cm) doku/organ dilimleri yeterli bir dizi elde etmek için küçük bir mesafe seçin. Rastgele ilk bölümü organ kenar boşluğundan 0 ile parça aralığı arasında bir mesafe içinde konumlandırın. Dilimleme iken, görsel olarak kabaca Tekdüzen kalınlığı yaklaşık paralel organ/doku plaka elde etmek için her bölüm uçak yönünü ve pozisyon yargıç.
    Not: Doku/organ plaka gereken sayıda muayene organ/doku ve örneklenen doku sayısı boyutuna bağlıdır. Küçük organ veya örnekleri ≤5 mm ince plaka içinde kesitli gerekse kesit önce Ağar örnekleri gömmek (bkz. Adım 1.3.3.) ve agar gömülü örneği Dilimleme için teknik cihazlar kullanın. Ampirik olarak tavsiye parça aralıkları en domuz organ ve dokulara için hem de aygıt Dilimleme için örnekler "Doku örnekleme kılavuzları için domuz Biyomedikal modelleri"7ek malzeme gösterilir.
  4. Tüm organ/doku plaka aynı yüzey kesme Bankası (şekil 6B) aşağı bakacak şekilde yerleştirin.
  5. Doku plaka uygun ölçekli bir çapraz Izgara'yla en dıştaki yerleştirerek plastik bir şeffaflık baskılı kaplaması (şekil 5C-D, 6B rakam) doku dışarı rasgele bir nokta üzerinde grid üst çapraz yaptı.
    Not: çalışma muayene her durumda da, en az iki katı kadar haçlar-ecek vurmak zorunda örnekleri sayısı örnek için doku bölme bölüm surface(s) bitişik haçlar arasında yeterince küçük bir mesafe ile çapraz bir tablo seçin Bu doku yuvası alınması. Ampirik olarak tavsiye çapraz kılavuz boyutları en domuz organ ve dokulara için ek malzeme "Doku örnekleme kılavuzları için domuz Biyomedikal modelleri"7gösterilir.
  6. Mark ve sayısı haçlar doku (tatmak için sırasıyla, doku alt bölme) isabet. Sürekli olarak sayım ve her satır satır, soldan sağa ve üzerinden ilgili haçlar ardışık numaralandırma tarafından tüm doku döşeme içinde tatmak için örneğin, doku yuvası isabet haçlar numaralandırma Tekdüzen bir modu uygulama alt veya, haçlar sonra saat 12 yönünde, olarak pozisyon exemplarily 5E rakamolarak gösterdiği yakın çapraz başlayarak saat yönünde, diğerinde bir doku levha numaralandırma tarafından örneğin, dön.
  7. Haçlar örneklenen (n) olmak doku/doku yuvası isabet sayısını sistematik örnekleme aralığı (i) elde etmek için oluşturulacak örnekleri sayıya bölme.
  8. İlk örnekleme konum rasgele sayı x 1 vearalığını seçerek belirleyin. Bunun için bir rasgele sayı tablosunu kullanırsınız. Mark ilk örnekleme konumu (x) ve her bir sonraki x + ı, x + 2ben, x + 3i, vb, plastik şeffaflık tatmak için doku/doku yuvası isabet çapraz su geçirmez kalem (şekil 5F) kullanarak.
    Not: Rasgele sayı tabloları kolayca ve hızlı bir şekilde online bir rasgele sayı Oluşturucu kullanarak oluşturulabilir.
  9. Biraz plastik şeffaflık yetiştirme ve cımbız (şekil 5G, şekil 6E bir çift kullanarak doku levha yüzeyinde küçük bir temiz, boş konfeti kağıt parçası yerleştirerek işaretli için karşılık gelen Mekanlar haçlar doku etiket ).
  10. Numune doku (şekil 5 H, şekil 6F, şekil 7A) örneklenmiş yerlerden tüketim ve daha fazla onlar sonraki analizleri (şekil 6G, şekil 7A-B), belirtildiği gibi farklı türleri için daha alt bölümlere ayırma Tablo 1.
  11. Örnekleme sonra plastik asetat ile sıcak su ve sabun, Kuru, temiz ve bunları yeniden kullanabilir.

3. nesil izotropik Uniform rasgele (diploması) bölümleri ve nicel Stereological analizleri için dikey tek tip rasgele (VUR) bölümleri

  1. "Isector" tekniği
    1. Malzemeleri hazırlamak: jilet ya da microtome bıçaklar, agar, küresel döküm kalıpları (pudra terdarikçilerin elde edilebilir pralin için kalıp dökümörneğin,), foldback kelepçeler ve forseps.
    2. Bir sistematik olarak rasgele örnek yeterli büyüklükte parça (1 x 1 x 1 cm3) sabit, doku bir küresel döküm kalıp içine koyun, foldback kelepçeler tarafından bir arada tutmak ve kalıp sıcak sıvı agar (şekil 8A-E) ile doldurun.
    3. Agar küre (şekil 8F) döküm kalıp agar katılaşma sonra kaldırın.
    4. Agar küre rulo ile katıştırılmış doku örneği masada durdurmak ve rasgele bir konumda bölüm.
      Not: Elde edilen Bölüm uçak bir doktora diploması (şekil 8F-G) bölümdür.
    5. GMA/MMA gibi plastik reçine doku örneği g├╢m├╝lecek devam diploması Bölüm yönünü koruyarak uçak (1.3.5 bakın).
  2. "Orientator" tekniği
    1. Malzemeler hazırlamak: jilet ya da microtome bıçaklar, agar, forseps, rastgele sayı tablo (s), parmak equiangular ve Kosinüs ağırlıklı çevrelerin.
      Not: Kopya şablonları, çemberin içinde önceki yayınları8,26sağlanmıştır.
    2. Örnek sabit doku (veya sabit doku agar gömülü) equiangular bir daire bir Yazdır üzerinde bir kenar ile paralel olarak 0 – 180 koyun ° yön (Þekil 9A, şekil 10E).
    3. Rastgele açı rasgele sayı tablosunu kullanarak belirleyin. Örnek dayanıyor equiangular dairenin ölçekte karşılık gelen Mark bul. Bu işaretleri kullanılarak bir bölüm örneği üzerinden (veya katıştırılmış doku örneği çevreleyen agar), equiangular daire ölçek üzerinde belirtilen Rastgele açı yönüne paralel ve dikey kadar odaklı bölüm uçak ile kesme örnek (şekil 9B-C, şekil 10F) yüzeyine dinleniyor.
    4. Doku blok (Şekil 9 d, şekil 10 H) 1-1 yönüne paralel yerleştirilen dinlenme yüzey kenarıyla kosinüs ağırlıklı daire üzerinde olumsuz bakan önceki adımda oluşturulan bölüm yüzeyine yerleştirin.
    5. 3.2.3 adımı yineleyin ve yeni bir bölüm örneği üzerinden rastgele sayı tablosunu (şekil 9E-F, 10I rakam-J) kullanarak rasgele bir açıyla kesmek.
      Not: Elde edilen Bölüm uçak bir doktora diploması bölümdür.
    6. Uygunsa, doktora diploması bölüm profili gömme ile ilgili doku büzülme (şekil 9G-J) belirlenmesi için sabit doku örneğinin alan 1.3 adımda anlatıldığı gibi olmadığını ve doku örneği plastik katıştırmak için çalışıp GMA/MMA gibi reçine.
  3. Dikey tek tip rasgele (VUR) bölümleri nesil
    1. Malzemeleri hazırlamak: jilet ya da microtome bıçaklar, agar, forseps, rastgele sayı tablo (s) ve baskı equiangular çevrelerin.
      Not: Kopya şablonları, çemberin içinde önceki yayınları8,26sağlanmıştır.
    2. Dikey eksen her zaman sırasında sonraki adımlar örnek/bölümlerde algılanabilmesini sabit doku örneği içinde tanımlayın.
      Not: Genellikle, doku örneği doğal yüzeye dikey ekseni dikey eksen olarak seçilir.
    3. Uygunsa, örnek agar (şekil 11B) iliştir.
      Not: Agar-gömme önce VUR - veya doktora diploması-kesit sabit örnek genellikle küçük, ince, kırılgan ya da yazılım örnekleri için tavsiye. Ayrıca agar katıştırma örneklerinin sonraki örnek plastik reçine ortamda katıştırma sırasında VUR kesitli örneği konumlandırma kolaylaştırmak için kullanın.
    4. Örnek equiangular bir daire, bir baskı üzerinde uygun tablo/kağıt tablosu (şekil 11C) uçak için odaklı dikey eksen yerleştirin.
    5. Örnek (rasgele bir sayı tablosunu kullanarak kararlı) rastgele bir açıyla bölüm uçakla ortogonal tabloya kes ve VUR bölüm uçağa (Şekil 11 d) almak için dikey eksenine paralel.
    6. Uygunsa, doktora diploması bölüm profil adım 1.3 (karşılaştırmak-e doğru şekil 9G-J) açıklandığı gibi katıştırma ilgili doku büzülme tespiti için sabit doku örneğinin alan olmadığını ve doku örneği katıştırmak için çalışıp çalışmadığını plastik reçine GMA/MMA gibi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Doku/organ yoğunluk tayini için batma tekniği

Şekil 12A -B yoğunluk temsilcisi olarak belirlenmesi ve 1.1 (Resim 1, Resim 2). adımda anlatılan batma tekniği kullanarak bir domuz böbrek hacmi gösterir. Yoğunluk ölçümleri ek domuz organ ve dokuların daha temsilcisi sonuçları Tablo 2' de sunulmaktadır. Başvuru yo...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Biobank domuz hayvan modelleri örnek koleksiyonlardan nesil organ/doku birimleri, temsilcisi, gereksiz doku örnekleri geniş bir yelpazesi için uygun tekrarlanabilir nesil belirlenmesi için güçlü teknikleri ve protokolleri gerektirir farklı analiz yöntemleri ve nicel stereological analizleri için örnek bölümleri yönünü randomizasyon için. Mevcut makalesinde açıklanan yöntemleri domuz organ ve dokulara boyutları için uyarlanmış ve etkili bir şekilde bu talepleri2,7...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ifşa gerek yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazar Lisa Pichl mükemmel teknik destek için teşekkür ederiz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
AgarCarl Roth GmbH, AlmanyaAgar (toz), Kat.: 5210.3Yaklaşık 1 g agarı 10 ml soğuk suda bir cam veya plastik beherde çözün, mikrodalga fırında 700 W'ta ısıtın, çözeltiyi iki kez iyice karıştırarak kaynatın. Hala sıcakken kalıba dökün ve katılaşmasına izin verin. Dikkat: Sıcak sıvı agar ile çalışırken koruyucu gözlük ve eldiven kullanın.
KaliperHornbach Baumarkt GmbH, Bornheim, AlmanyaSchieblehre Chrom/Vernickelt 120 mm Kat.: 3664902Her türlü kumpas (mekanik veya elektronik) de işe yarayacaktır.
Döküm kalıpları (metal)Engelbrecht Medizin & Labortechnik, Edermü nde, AlmanyaEinbettschä lchen aus Edelstahl, 14 x 24 x 5 mm, Kat.: 14302bParafin gömme için kullanılan diğer her türlü metal döküm kalıbı da işe yarayacaktır.
Çapraz ızgaraların kopya şablonları (5 mm - 6 cm)n.a.n.a.Çapraz ızgaraların (5 mm - 6 cm) kopya şablonları, Albl et al.  ek veri dosyasında verilmiştir. Toksikol Pathol. 44, 414-420, doi: 10.1177/0192623316631023 (2016)
Eşkenar ve kosinüs ağırlıklı dairelerin kopya şablonların.a.n.a.Eşkenarve kosinüs ağırlıklı dairelerin kopya şablonları Nyengaard & Gundersen. Eur Respir Rev. 15, 107-114, doi: 10.1183/09059180.00010101 (2006) ve Gundersen ve ark. Toksikolojik Patologlar için Stereolojik İlkeler ve Örnekleme Prosedürleri. İçinde: Haschek ve Rousseaux&akut; Toksikolojik Patoloji El Kitabı. 3. baskı, 215-286, ISBN: 9780124157590 (2013).
Katlanır kelepçeler (YIHAI bağlayıcı klipsler, 15 mm ve 19 mm)Ningbo Tianhong Kırtasiye Co ltd., ÇinY10006 ve Y10005Diğer herhangi bir standart ofis katlanır kelepçesi de işe yarayacaktır.
Forseps (anatomik)NeoLab Migge GmbH, Heidelberg, AlmanyaneoLab Standard -Pinzette 130 mm, anatomisch, rund, Cat.: 1-1811Her türlü anatomik forseps yapacaktır.
Formaldehit çözeltisi %4SAV-Liquid Produktion GmbH, Flintsbach, AlmanyaFormaldehit %37/40, Kat.: 1000411525005Konsantre çözeltiden %4'e kadar seyreltin. Nötr pH'a tamponlayın. Uygun göz, el ve solunum koruması kullanın. Formaldehit çözeltisine sabitlenmiş doku örneklerini bir egzoz başlığı altında işleyin ve koruyucu gözlük ve laboratuvar eldivenleri giyin.
Grafik kağıdı (kalibrasyon için)Bü romarkt Bö ttcher AG, Jena, Almanya. www.bueromarkt-ag.dePenig Milimetre Kağıdı A4, Kat.: 2514Her türlü grafik kağıdı (milimetre cinsinden ölçeklendirilmiş) yeterli olacaktır.
Laboratuvar beherleri (5ml, 10 ml, 50 ml, 100 ml)NeoLab Migge GmbH, Heidelberg, AlmanyaBecherglas SIMAX® , niedrige Form, Borosilikatglas 3.3 Kat.: E-1031, E-1032, E-1035, E-10365 – 100 ml hacimli her türlü cam veya plastik beher yeterli olacaktır.
Laboratuvar terazi(ler)Mettler Toledo GmbH, Gieß en, AlmanyaPM6000Sırasıyla 0,1 mg ila yaklaşık 20 g arasında, 100 mg ila yaklaşık 500 g arasında ölçüm aralıklarına sahip herhangi bir standart laboratuvar terazisi
ttingen, AlmanyaBP61S
Mikrotom bıçaklarıEngelbrecht Medizin & Labortechnik, Edermü nde, AlmanyaFEATHER Microtome blasdes S35, Cat.:14700Her türlü tek kullanımlık mikrotom bıçağı işe yarayacaktır.
Morfometri/planimetri yazılımı/sistemiUlusal Sağlık Enstitüsü (NIH)ImageJhttps://www. imagej.nih.gov/ij/'dan (1997) indirin.
Zeiss-Kontron, Eching, AlmanyaVideoplanTM görüntü analiz sistemiStokta
Fotoğraf makinesiNikonD40Tripoda monte edilebilen her türlü dijital fotoğraf makinesi işinizi görecektir.
Plastik asetatlarAvery Zweckform GmbH, Oberlaindern, AlmanyaLazer Tepegöz-Folie DINA4 Cat.:  3562Herhangi bir (lazer) yazdırılabilir plastik şeffaflık yeterli olacaktır.
Rastgele sayı tabloların.a.n.a.Rastgelesayı tabloları, aşağıdakiler gibi rastgele sayı üreteçleri kullanılarak (tanımlanmış sayıda rastgele sayılarla ve belirli aralıklar içinde) kolayca oluşturulabilir: https://www.random.org/
Tıraş bıçaklarıPlano GmbH, Wetzlar, AlmanyaT5016Her türlü tıraş bıçağı işinizi görecektir.
CetvelBü romarkt Bö ttcher AG, Jena, Almanya. www.bueromarkt-ag.deOfis Noktası Lineal 30 cm, Kunststoff, şeffaf, Kat.: ln30Her türlü cm-mm ölçekli cetvel de işe yarayacaktır.
Tuzlu su (%0,9)Carl Roth GmbH, AlmanyaNatriumchlorid, >%99 Kat.: 0601.1% 0.9 tuzlu su hazırlamak için, 9 g NaCl'yi 20 ° C'de 1000 ml damıtılmış suda çözün.
Neşter bıçaklarıAesculap AG & Co KG, Tuttlingen, AlmanyaBRAUN Cerrahi bıçaklar N° 22Her türlü neşter bıçağı işe yarayacaktır.
TarayıcıHewlett-Packardhp scanjet 7400c150-600 dpi arası çözünürlüklerde tarama yapabilen her türlü standart ofis tarayıcısı yeterli olacaktır.
Dilimleme cihazların.a.n.a.Kendikendine yapılan dilimleme cihazları için örnekler Knust, et al. Anatomik kayıtta bulunabilir. 292, 113-122, doi: 10.1002/ar.20747 (2009) ve Albl ve ark.  Toxicol Pathol. 44, 414-420, doi: 10.1177/0192623316631023 (2016).
Küresel döküm kalıpları (örneğin, 25,5 mm çapında)Pralinen-Zutaten.de, Windach, AlmanyaPralinen-Hohlkugeln Vollmilch, 25,5 mmKüresel döküm kalıpları kendi kendine inşa edilebilir veya diğer şekerleme tedarikçilerinden (pralin için) elde edilebilir. Burada belirtilen döküm kalıpları aslında içi boş pralin gövdelerinin paketi/sargısıdır (önce pralinleri yiyin ve ardından paketi i-sektör bölümlerinin oluşturulması için kullanın)
İnce telBasteln & Hobi Schobes, Straß furth, Almanya. www,bastel-welt.deMessingdraht (0,3 mm) Kat.: 216464742Başka herhangi bir ince tel de işe yarayacaktır.
Kağıt mendilNeoLab Migge GmbH, Heidelberg, AlmanyaDeclcate Task Wipes-White, Cat.: 1-5305Diğer her türlü laboratuvar kağıt mendili de işe yarayacaktır.
Su geçirmez kalemStaedler Mars GmbH & Co KG, Nü rnberg, GrmanyLumocolor permanent 313, 0.4 mm, S, siyah, Cat.: 313-2Başka herhangi bir su geçirmez kalem de işe yarayacaktır.
Sartorius AG, Göyok

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Aigner, B., et al. Transgenic pigs as models for translational biomedical research. J Mol. Med. 88, 653-664 (2010).
  2. Blutke, A., et al. The Munich MIDY Pig Biobank: A unique resource for studying organ crosstalk in diabetes. Mol Metab. 6, 931-940 (2017).
  3. Klymiuk, N., et al. Dystrophin-deficient pigs provide new insights into the hierarchy of physiological derangements of dystrophic muscle. Hum Mol Genet. 22, 4368-4382 (2013).
  4. Klymiuk, N., Seeliger, F., Bohlooly, Y. M., Blutke, A., Rudmann, D. G., Wolf, E. Tailored pig models for preclinical efficacy and safety testing of targeted therapies. Toxicol Pathol. 44, 346-357 (2016).
  5. Renner, S., et al. Permanent neonatal diabetes in INSC94Y transgenic pigs. Diabetes. 62, 1505-1511 (2013).
  6. Abbott, A. Inside the first pig biobank. Nature. 519, 397-398 (2015).
  7. Albl, B., et al. Tissue sampling guides for porcine biomedical models. Toxicol Pathol. 44, 414-420 (2016).
  8. Gundersen, H. J. G., Mirabile, R., Brown, D., Boyce, R. W. Stereological principles and sampling procedures for toxicologic pathologists. Haschek and Rousseaux's Handbook of Toxicologic Pathology. Haschek, W. , 3rd ed, Academic Press. London. 215-286 (2013).
  9. Howard, C. V., Reed, M. G. Unbiased Stereology: Three-Dimensional Measurement in Microscopy. , 2nd ed, Garland science/Bios Scientific Publishers. Oxford. 1-277 (2005).
  10. Mattfeldt, T., Mall, G., Gharehbaghi, H., Moller, P. Estimation of surface area and length with the orientator. J Microsc. 159, 301-317 (1990).
  11. Nyengaard, J. R., Gundersen, H. J. G. The isector: A simple and direct method for generating isotropic, uniform random sections from small specimens. J Microsc. 165, 427-431 (1992).
  12. Tschanz, S., Schneider, J. P., Knudsen, L. Design-based stereology: Planning, volumetry and sampling are crucial steps for a successful study. Ann Anat. 196, 3-11 (2014).
  13. Dorph-Petersen, K. A., Nyengaard, J. R., Gundersen, H. J. Tissue shrinkage and unbiased stereological estimation of particle number and size. J Microsc. 204, 232-246 (2001).
  14. Mattfeldt, T. Stereologische Methoden in der Pathologie [Stereologic methods in pathology]. Normale und pathologische Anatomie. Doerr, W., Leonhardt, H. , Georg Thieme Verlag. Stuttgart-New York. (1990).
  15. Gundersen, H. J., Jensen, E. B. The efficiency of systematic sampling in stereology and its prediction. J Microsc. 147, 229-263 (1987).
  16. Scherle, W. A simple method for volumetry of organs in quantitative stereology. Mikroskopie. 26, 57-60 (1970).
  17. Nielsen, K. K., Andersen, C. B., Kromann-Andersen, B. A comparison between the effects of paraffin and plastic embedding of the normal and obstructed minipig detrusor muscle using the optical disector. J Urol. 154, 2170-2173 (1995).
  18. Schneider, J. P., Ochs, M. Alterations of mouse lung tissue dimensions during processing for morphometry: a comparison of methods. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 306, L341-L350 (2014).
  19. von Bartheld, C. S. Distribution of particles in the z-axis of tissue sections: Relevance for counting methods. NeuroQuantology. 10, 66-75 (2012).
  20. Baddeley, A. J., Gundersen, H. J., Cruz-Orive, L. M. Estimation of surface area from vertical sections. J microsc. 142, 259-276 (1986).
  21. Blutke, A., Schneider, M. R., Wolf, E., Wanke, R. Growth hormone (GH)-transgenic insulin-like growth factor 1 (IGF1)-deficient mice allow dissociation of excess GH and IGF1 effects on glomerular and tubular growth. Physiol Rep. 4, e12709(2016).
  22. Rasband, W. S. ImageJ. , U.S. National Institutes of Health. Bethesda, Maryland, USA. Available from: http://rsb.info.nih.gov/ij (1997).
  23. Hermanns, W., Liebig, K., Schulz, L. C. Postembedding immunohistochemical demonstration of antigen in experimental polyarthritis using plastic embedded whole joints. Histochemistry. 73, 439-446 (1981).
  24. Böck, P. Romeis Mikroskopische Technik. , Urban und Schwarzenberg. München, Wien, Baltimore. 17. Auflage 1-697 (1989).
  25. Suvarna, K. S., Layton, C., Bancroft, J. D. Bancroft's theory and practice of histological techniques. Suvarna, K. S., Layton, C., Bancroft, J. D. , Churchill Livingstone. 1-654 (2013).
  26. Knust, J., Ochs, M., Gundersen, H. J., Nyengaard, J. R. Stereological estimates of alveolar number and size and capillary length and surface area in mice lungs. Anat Rec (Hoboken). 292, 113-122 (2009).
  27. Nyengaard, J. R., Gundersen, H. J. G. Sampling for stereology in lungs. Eur Respir Rev. 15, 107-114 (2006).
  28. Junatas, K. L., et al. Stereological analysis of size and density of hepatocytes in the porcine liver. J Anat. 230, 575-588 (2017).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Domuz Dokusu rneklemesiBiyobanka Spesimen lemeDald rma Tekni iOryantat r Y ntemizotropik Uniform Rastgele KesitlerDoku Yo unlu u BelirlemeHacim A rl kl rneklemeStereolojik AnalizOrgan Hacmi l mRastgele Kesit Olu turma

İlgili makaleler