Örnekleme stratejileri ve Biobank doku örnekleri domuz Biyomedikal modellerinden işlenmesi

Özet

Pratik uygulaması ve yöntemleri performansını aşağı akım analizleri biobank projeleri geniş bir yelpazede için domuz hayvan modellerin temsilcisi doku örnekleri oluşturmada, volumetry, dahil olmak üzere içinde gösterilen sistematik rastgele örnekleme, ve doku örnekleri nitel ve nicel morfolojik ve moleküler analiz türleri için farklı işleme.

Özet

Translasyonel tıbbi araştırma, domuz modelleri giderek daha popüler hale gelmiştir. Bireysel hayvanların, özellikle genetiği değiştirilmiş domuz yüksek değer modelleri ve bu modellerin mevcut hayvanların genellikle sınırlı sayıda göz önüne alındığında, yeterince işlenmiş doku örnekleri (biobank) koleksiyonları kurulması için uygun bir Sonraki analizleri yöntemleri, örnekleme, zaman noktada belirtilmemiş analizleri de dahil olmak üzere geniş yelpazede translasyonel değer modelinin tam yararlanmak için anlamlı yaklaşımlar temsil eder. Domuz anatomisi özellikleri ile ilgili kuralların son temsilcisi, yüksek kaliteli örneklerinden farklı domuz organ ve dokulara standart üretimi için kurulmuştur. Bu kurallar sonuçları ve onların karşılaştırılabilir farklı çalışmalar ve Müfettişler arasında tekrarlanabilirlik için gerekli önkoşullar vardır. Organ ağırlıkları ve birimleri, oluşturulacak, belirlenmesi örnekleme yerlerin ve doku örnekleri sayıların yanı sıra yönlendirme, boyutu, işleme ve düzeltme yönergeleri, gibi temel veri kaydı ilgili faktörlerdir generalizability ve moleküler, nitel ve nicel morfolojik analiz için numune kullanılabilirliği belirleniyor. Burada, en önemli teknikler bir açıklayıcı, pratik, adım adım gösteri kuşak temsilcisi için domuz dokular çok amaçlı biobank örneği sunulmaktadır. Burada açıklanan yöntemleri belirlenmesi organ/doku birimleri ve yoğunlukları, parenkimal organları tarafından noktası-sayma, doku büzülme ölçüde belirlenmesi için bir sistematik rastgele örnekleme birimi ağırlıklı yordam uygulama içerir Histolojik örnekleri ve rastgele odaklı örnekleri nesil izotropik uniform rasgele (diploması) bölümleri "Orientator" ve "Isector" yöntemleri ve dikey üniforma tarafından üretilen gibi nicel stereological analizleri için gömme için ilgili rasgele (VUR) bölümleri.

Giriş

^1,2,3,4,5, domuz arasında birkaç avantajlı benzerlikler nedeniyle büyük hayvan modelleri gibi translasyonel tıpta, domuz kullanım için giderek daha yaygın ve insan anatomisi ve fizyolojisi ve kurulan moleküler biyolojik yöntemler nesil için izin durumu özel olarak tasarlanmış, domuz modelleri çok çeşitli hastalık koşulları^1,4için genetik olarak değiştirilmiş.

Ancak, kemirgen modellerle karşılaştırıldığında, deneyler için ....

Protokol

Tüm yöntem tanımlamak burada ölü hayvanlardan elde edilen doku örnekleri kullanmak ve tamamen hayvan refahı Alman yasal düzenlemelere uygun.

1. Volumetry

1. Doku/Organ yoğunlukları belirlenmesi için batma tekniği (Resim 1 ve Şekil 2) ^{7 , 12 , 16}
   1. Malzemeleri hazırlamak: neşter bıçaklar, kağıt havlu, iyi forseps, standart laboratuvar ölçekleri, cam veya plastik şişeler, % 0,9 serum ve kendini inşa numune sahipleri (

Sonuçlar

Doku/organ yoğunluk tayini için batma tekniği

Şekil 12A -B yoğunluk temsilcisi olarak belirlenmesi ve 1.1 (Resim 1, Resim 2). adımda anlatılan batma tekniği kullanarak bir domuz böbrek hacmi gösterir. Yoğunluk ölçümleri ek domuz organ ve dokuların daha temsilcisi sonuçları Tablo 2' de sunulmaktadır. Başvuru yo.......

Tartışma

Biobank domuz hayvan modelleri örnek koleksiyonlardan nesil organ/doku birimleri, temsilcisi, gereksiz doku örnekleri geniş bir yelpazesi için uygun tekrarlanabilir nesil belirlenmesi için güçlü teknikleri ve protokolleri gerektirir farklı analiz yöntemleri ve nicel stereological analizleri için örnek bölümleri yönünü randomizasyon için. Mevcut makalesinde açıklanan yöntemleri domuz organ ve dokulara boyutları için uyarlanmış ve etkili bir şekilde bu talepleri^2,7.......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Agar	Carl Roth GmbH, Almanya	Agar (toz), Kat.: 5210.3	Yaklaşık 1 g agarı 10 ml soğuk suda bir cam veya plastik beherde çözün, mikrodalga fırında 700 W'ta ısıtın, çözeltiyi iki kez iyice karıştırarak kaynatın. Hala sıcakken kalıba dökün ve katılaşmasına izin verin. Dikkat: Sıcak sıvı agar ile çalışırken koruyucu gözlük ve eldiven kullanın.
Kaliper	Hornbach Baumarkt GmbH, Bornheim, Almanya	Schieblehre Chrom/Vernickelt 120 mm Kat.: 3664902	Her türlü kumpas (mekanik veya elektronik) de işe yarayacaktır.
Döküm kalıpları (metal)	Engelbrecht Medizin & Labortechnik, Edermü nde, Almanya	Einbettschä lchen aus Edelstahl, 14 x 24 x 5 mm, Kat.: 14302b	Parafin gömme için kullanılan diğer her türlü metal döküm kalıbı da işe yarayacaktır.
Çapraz ızgaraların kopya şablonları (5 mm - 6 cm)	n.a.n.a	.	Çapraz ızgaraların (5 mm - 6 cm) kopya şablonları, Albl et al.  ek veri dosyasında verilmiştir. Toksikol Pathol. 44, 414-420, doi: 10.1177/0192623316631023 (2016)
Eşkenar ve kosinüs ağırlıklı dairelerin kopya şablonları	n.a.n.a.Eşkenar		ve kosinüs ağırlıklı dairelerin kopya şablonları Nyengaard & Gundersen. Eur Respir Rev. 15, 107-114, doi: 10.1183/09059180.00010101 (2006) ve Gundersen ve ark. Toksikolojik Patologlar için Stereolojik İlkeler ve Örnekleme Prosedürleri. İçinde: Haschek ve Rousseaux&akut; Toksikolojik Patoloji El Kitabı. 3. baskı, 215-286, ISBN: 9780124157590 (2013).
Katlanır kelepçeler (YIHAI bağlayıcı klipsler, 15 mm ve 19 mm)	Ningbo Tianhong Kırtasiye Co ltd., Çin	Y10006 ve Y10005	Diğer herhangi bir standart ofis katlanır kelepçesi de işe yarayacaktır.
Forseps (anatomik)	NeoLab Migge GmbH, Heidelberg, Almanya	neoLab Standard -Pinzette 130 mm, anatomisch, rund, Cat.: 1-1811	Her türlü anatomik forseps yapacaktır.
Formaldehit çözeltisi %4	SAV-Liquid Produktion GmbH, Flintsbach, Almanya	Formaldehit %37/40, Kat.: 1000411525005	Konsantre çözeltiden %4'e kadar seyreltin. Nötr pH'a tamponlayın. Uygun göz, el ve solunum koruması kullanın. Formaldehit çözeltisine sabitlenmiş doku örneklerini bir egzoz başlığı altında işleyin ve koruyucu gözlük ve laboratuvar eldivenleri giyin.
Grafik kağıdı (kalibrasyon için)	Bü romarkt Bö ttcher AG, Jena, Almanya. www.bueromarkt-ag.de	Penig Milimetre Kağıdı A4, Kat.: 2514	Her türlü grafik kağıdı (milimetre cinsinden ölçeklendirilmiş) yeterli olacaktır.
Laboratuvar beherleri (5ml, 10 ml, 50 ml, 100 ml)	NeoLab Migge GmbH, Heidelberg, Almanya	Becherglas SIMAX® , niedrige Form, Borosilikatglas 3.3 Kat.: E-1031, E-1032, E-1035, E-1036	5 – 100 ml hacimli her türlü cam veya plastik beher yeterli olacaktır.
Laboratuvar terazi(ler)	Mettler Toledo GmbH, Gieß en, Almanya	PM6000	Sırasıyla 0,1 mg ila yaklaşık 20 g arasında, 100 mg ila yaklaşık 500 g arasında ölçüm aralıklarına sahip herhangi bir standart laboratuvar terazisi
	ttingen, Almanya	BP61S
Mikrotom bıçakları	Engelbrecht Medizin & Labortechnik, Edermü nde, Almanya	FEATHER Microtome blasdes S35, Cat.:14700	Her türlü tek kullanımlık mikrotom bıçağı işe yarayacaktır.
Morfometri/planimetri yazılımı/sistemi	Ulusal Sağlık Enstitüsü (NIH)	ImageJ	https://www. imagej.nih.gov/ij/'dan (1997) indirin.
Zeiss-Kontron, Eching, Almanya	VideoplanTM görüntü analiz sistemi	Stokta
Fotoğraf makinesi	Nikon	D40	Tripoda monte edilebilen her türlü dijital fotoğraf makinesi işinizi görecektir.
Plastik asetatlar	Avery Zweckform GmbH, Oberlaindern, Almanya	Lazer Tepegöz-Folie DINA4 Cat.:  3562	Herhangi bir (lazer) yazdırılabilir plastik şeffaflık yeterli olacaktır.
Rastgele sayı tabloları	n.a.n.a.Rastgele	sayı tabloları, aşağıdakiler gibi rastgele sayı üreteçleri kullanılarak (tanımlanmış sayıda rastgele sayılarla ve belirli aralıklar içinde) kolayca oluşturulabilir: https://www.random.org/
Tıraş bıçakları	Plano GmbH, Wetzlar, Almanya	T5016	Her türlü tıraş bıçağı işinizi görecektir.
Cetvel	Bü romarkt Bö ttcher AG, Jena, Almanya. www.bueromarkt-ag.de	Ofis Noktası Lineal 30 cm, Kunststoff, şeffaf, Kat.: ln30	Her türlü cm-mm ölçekli cetvel de işe yarayacaktır.
Tuzlu su (%0,9)	Carl Roth GmbH, Almanya	Natriumchlorid, >%99 Kat.: 0601.1	% 0.9 tuzlu su hazırlamak için, 9 g NaCl'yi 20 ° C'de 1000 ml damıtılmış suda çözün.
Neşter bıçakları	Aesculap AG & Co KG, Tuttlingen, Almanya	BRAUN Cerrahi bıçaklar N° 22	Her türlü neşter bıçağı işe yarayacaktır.
Tarayıcı	Hewlett-Packard	hp scanjet 7400c	150-600 dpi arası çözünürlüklerde tarama yapabilen her türlü standart ofis tarayıcısı yeterli olacaktır.
Dilimleme cihazları	n.a.n.a.Kendi		kendine yapılan dilimleme cihazları için örnekler Knust, et al. Anatomik kayıtta bulunabilir. 292, 113-122, doi: 10.1002/ar.20747 (2009) ve Albl ve ark.  Toxicol Pathol. 44, 414-420, doi: 10.1177/0192623316631023 (2016).
Küresel döküm kalıpları (örneğin, 25,5 mm çapında)	Pralinen-Zutaten.de, Windach, Almanya	Pralinen-Hohlkugeln Vollmilch, 25,5 mm	Küresel döküm kalıpları kendi kendine inşa edilebilir veya diğer şekerleme tedarikçilerinden (pralin için) elde edilebilir. Burada belirtilen döküm kalıpları aslında içi boş pralin gövdelerinin paketi/sargısıdır (önce pralinleri yiyin ve ardından paketi i-sektör bölümlerinin oluşturulması için kullanın)
İnce tel	Basteln & Hobi Schobes, Straß furth, Almanya. www,bastel-welt.de	Messingdraht (0,3 mm) Kat.: 216464742	Başka herhangi bir ince tel de işe yarayacaktır.
Kağıt mendil	NeoLab Migge GmbH, Heidelberg, Almanya	Declcate Task Wipes-White, Cat.: 1-5305	Diğer her türlü laboratuvar kağıt mendili de işe yarayacaktır.
Su geçirmez kalem	Staedler Mars GmbH & Co KG, Nü rnberg, Grmany	Lumocolor permanent 313, 0.4 mm, S, siyah, Cat.: 313-2	Başka herhangi bir su geçirmez kalem de işe yarayacaktır.

Sartorius AG, Göyok