Biz cerrahi olarak ortaya çıkarmak ve fare submandibular Tükürük bezi dik intravital mikroskobu kullanılarak intravital görüntüleme için stabilize etmek için bir protokol tanımlamak. Bu iletişim kuralı diğer ekzokrin bezleri için baş ve boyun bölgesinin fareler ve diğer küçük kemirgen kolayca uyarlanabilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Dik Intravital mikroskopi için fare Submandibular Tükürük bezi hazırlanması
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Submandibular Tükürük bezi (SMG) üç büyük tükürük bezleri biridir ve biyolojik araştırma, hücre biyolojisi, Onkoloji, diş hekimliği ve İmmünoloji dahil olmak üzere birçok farklı alanlar için ilgi olduğunu. SMG salgı epitel hücreleri, myofibroblasts, endotel hücreleri, sinirler ve hücre dışı matriks ekzokrin bir bezdir. Fare ve fare SMG dinamik hücresel süreçler daha önce görüntüsü, çoğunlukla kullanarak çoklu foton mikroskop sistemleri ters. Burada, cerrahi hazırlanması ve istikrar için in vivo düşsel dik çok foton mikroskop sistemleri ile imzalat farelerde fare SMG için basit bir protokol açıklayın. Endojen temsilcisi intravital görüntü kümesi sunmak ve adoptively floresan hücreleri, kan damarları veya tükürük kanalları ve fibriler kollajen görselleştirmek için ikinci harmonik üretimi etiketleme de dahil olmak üzere aktarılır. Özetle, bizim iletişim kuralı İmmünoloji alanında intravital görüntüleme için yaygın olarak kullanılan dik mikroskobu sistemlerindeki fare tükürük bezleri cerrahi hazırlanması için izin verir.
Giriş
Tükürük gıda yağlamak, ağız yolu Mukozal yüzeylerin korumak ve sindirim enzimleri gibi antibakteriyel maddeler1,2teslim ekzokrin bezleri tarafından salgılanan. Sözlü submukoza içinde serpiştirilmiş küçük tükürük bezleri yanı sıra göre onların konumu1,2büyük bezleri parotid, dil ve çene, tanımlanan üç ikili kümesi vardır. Epitel hücreleri, Piramit şeklinde düzenlenen şişesi şeklindeki kesesi (acini) veya myoepithelial hücreleri ve bir membran, çevrili demilunes tükürük1seröz ve müköz bileşenleri salgılar. Acini akmak içine onlar ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm hayvan iş hayvan deney için Kanton Komitesi tarafından onaylanmış ve federal kurallarına göre yapılır.
1. anestezi fare
- Önlük ve eldiven dahil olmak üzere kişisel koruyucu ekipman giymek.
- Ketamin, xylazine ve serum 20 mg/mL ve 1 mg/mL, bir çalışma konsantrasyonu sırasıyla karıştırın. Çalışan hisse senedi intraperitoneally enjekte (IP) 8-10 µL/g fare de. Fare kafesin içine yerleştirin.
Not: Bu protokol ile bir C57BL/6 arka plan 6 - için 40-hafta-yaşlı erkek ve dişi fareler için test edilmiştir. - Acepromazine çözüm 2.5 mg/mL, hazırlamak ve 30 µL ı.p., 15 dk sonra ketamin-xylazine enjeksiyon (75 µg/fare) enj....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Bu iletişim kuralı neredeyse tüm dorsal veya ventral yan SMG görüntüleme sağlar. Görüş alanı genellikle biraz SMG hücresel kompozisyon4farklıdır sublingual Tükürük bezi de içerir. Her iki bezleri tarafından fibriler kollajen kapsüllenir ve loblar bölünmüştür. Çoğu 2 de fibriler kollajen etiket içermeyen bir görüntüsünü 2nd harmonik sinyali ölçerek sistemleri oluşturabilir ancak genellikle floresan moleküller hücre ve hücre altı yapıları görselleştirme iç.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu iletişim kuralı için in vivo düşsel bezlerinin fare çene ve sublingual tükürük kez İmmünoloji alanında kullanılan dik doğrusal olmayan mikroskobu kullanarak basit bir yaklaşım sunmaktadır. Yöntem diğer ekzokrin bezleri baş ve boyun bölgesinde görüntüleme için adapte edilebilir. Örneğin, laboratuarımıza gözyaşı bezinin görüntüleme (gösterilmez) benzer bir şekilde sahne aldı.
Kaza sonucu doku hasarı oluşabilir SMG etrafında bağ dokusunu bu Protokolü'nün en önemli adım olduğu için. SM.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Hiçbir çıkar çatışmaları ilan etti.
Teşekkürler
Bu eser İsviçre Ulusal Vakfı (SNF) projesi hibe 31003A_135649, 31003A_153457 ve 31003A_172994 (için JVS) ve Leopoldina dostluk LPDS 2011-16 (için BS) tarafından finanse edildi. Bu eser "Mikroskobu görüntüleme Merkezi" (MIC) Bern Üniversitesi optik kurulumları benefitted.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Narketan 10 % (Ketamin) 20ml (100 mg/ml) | Vetoquinol | 3605877535982 | |
| Rompun %2 (Ksilazin) 25 ml (20 mg/ml) | Bayer | 680538150144 | |
| Salin NaCl %0.9 | B. Braun | 3535789 | |
| Prequillan %1 (Asepromazin) 10 ml (10 mg/ml) | Fatro | 6805671900029 | |
| Elektrikli tıraş makinesi | Wahl | 9818L | veya benzeri |
| Epilasyon krem | Veet | 4002448090656 | |
| Durapore Cerrahi bant (2,5 cm x 9,1 m ve 1,25 cm x 9,1 m) | Durapore (3M) | 1538-1 | |
| Durapore Cerrahi bant (2,5 cm x 9,1 m ve 1,25 cm x 9,1 m) | Durapore (3M) | 1538-0 | |
| Süper yapıştırıcı Ultra jel, anlık yapıştırıcı | Pattex, Henkel | 4015000415040 | |
| Mikroskop kapaklı cam slaytlar 20 mm ve 22 mm | Menzel-Glä ser | 631-1343/ 631-1344 | |
| Laboratuvarlar için gres 60 g glisseal N | Borer (VWR tedarikçisi) | DECO514215.00-CA15 | |
| Cerrahi makas | Güzel Bilim Aletleri (FST ) | 14090-09 | veya benzeri |
| İnce Forseps | Güzel Bilim Aletleri (FST) | 11252-20 | veya benzeri |
| Pamuklu çubuk | Migros | 617027988254 veya benzeri | |
| Gazlı bez Gazin 5 x 5 cm | Lohmann ve Rauscher | 18500 | veya benzeri |
| Stereomikroskop | Leica | MZ16 | veya benzeri |
| Texas Red dekstran 70kDa | Moleküler Problar | D1864 | |
| Cascade Blue dekstran 10kDa | invitrogen | D1976 | |
| İki foton sistemi | LaVision Biotec | TrimScope I ve II veya | benzeri |
| XLUMPLANFL 20x/0.95 W objektif | Olympus | n/a | veya diğer suya daldırma objektifi |
| Dijital termometre | Fluke | 95969077651 |
Kaynaklar
- Pakurar, A. S., Bigbee, J. W. Digestive System. Digital Histology. , John Wiley & Sons. Hoboken, NJ, USA. 101-121 (2005).
- Carpenter, G. Role of Saliva in the Oral Processing of Food. Food Oral Processing. , Wiley-Blackwell. Oxford, UK. 45-60 (2012).
- Masedunskas, A., Weigert, R.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
