Method Article

Basit ve etkili yönetim ve küçük balıklar böbrek enjeksiyon kullanarak dolaşım sistemi içinde Microparticles görselleştirme

DOI:

10.3791/57491

June 17th, 2018

In This Article

Summary

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu makalede, floresan microparticles hızlı, minimal invaziv enjeksiyon circulatory system küçük balıklar ve balık kan microparticles in vivo görselleştirme içine prensipleri gösterilir.

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Canlı bir organizma içine mikro büyüklükteki parçacıkların yönetim sistemik damarlara görselleştirme, ilaç ve aşı teslim, transgenik hücreleri ve küçük optik sensörler implantasyonu için uygulanabilir. Ancak, biyolojik ve veteriner laboratuvarları çoğunlukla kullanılan, küçük hayvanların içine intravenöz microinjections çok zor ve eğitimli personel gerektirir. Burada, biz balık böbrek içine enjeksiyon tarafından microparticles giriş yetişkin zebra balığı (Danio rerio) dolaşım sistemi içine için sağlam ve verimli bir yöntem göstermek. Damarlara tanıtılan microparticles görselleştirmek için balık solungaçları basit bir intravital görüntüleme tekniği öneriyorum. Vivo zebra balığı kan pH kontrolü başarılı bir enjekte microencapsulated floresan kullanarak sonda, SNARF-1, açıklanan tekniği mümkün uygulamalarından birini göstermek için. Bu makalede pH duyarlı boya encapsulation ayrıntılı bir açıklamasını ve hızlı enjeksiyon prensipleri ve görselleştirme floresan sinyali VIVO içinde kayıt için elde edilen microcapsules gösterir. Enjeksiyon önerilen yöntemi düşük mortalite oranı ile karakterizedir (0-%20) ve yüksek verimlilik (% 70-90 başarı) ve yaygın olarak bulunan cihazlar kullanılıyor Enstitü kolaydır. Tüm açıklanan yordamları süs balıkları ve medaka gibi diğer küçük balık türleri üzerinde gerçekleştirilebilir.

Introduction

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Mikro büyüklükteki parçacıklar yönetim hayvan bir organizma içine ilaç ve aşı teslim1, damarlara görselleştirme2, transgenik hücre implantasyonu3ve küçük optik sensör implantasyon gibi alanlarda önemli bir görevdir 4 , 5. ancak, implantasyon yordam microscale parçacıklar halinde küçük Laboratuvar hayvanlarının damar sistemi için özellikle hassas Sucul organizmalar için zordur. Zebra balığı gibi popüler araştırma numuneler için bu tavsiye edilir bu yordamları açıklık video protokollerini kullanarak.

İntrakardiyak....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm deneysel yordamlar AB Direktifi 2010/63/AB hayvan deneyleri için uygun olarak yapılmıştır ve hayvan konularda araştırma komitesi, Enstitüsü biyoloji Irkutsk State Üniversitesi tarafından onaylanmıştır.

1. Microcapsules imalatı

Not: bir floresan boya taşıyan Microcapsules ters şarj edilmiş polyelectrolytes7,8katman katman Meclisi kullanarak hazırlanır. Tüm yordamları oda sıcaklığında yapıldı.

  1. Gözenekli CaCO3 microcores floresan boya kapsayan sentezlemek için 2 mL (çoğu polimer bağlı floresan boya FITC-BSA gibi kullanılabilir) SNARF....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Elde edilen sonuçları sunulan Protokolü üç ana kategoride birinden gelir: bir floresan boya (Şekil 1), microcapsules daha fazla görselleştirme ile böbrek enjeksiyon encapsulation tarafından floresan microparticles oluşumu Gill kılcal damarlar (Şekil 2 ve 3) ve pH seviyeleri (Şekil 4) kan son olarak, in vivo spektral kayıt SNARF-1 floresans izlemek için.

.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Microparticles enjeksiyon zebra balığı böbrek içine göstermek için yarı geçirgen microcapsules bir göstergesi boya ile yüklenen kullanılmıştır. Böylece, iletişim kuralı kullanarak katman katman derleme ters şarj edilmiş polyelectrolytes7,8,15,16,17 microcapsules imalatı için yönergeler içerir ,18 (Şekil .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ifşa gerek yok.

Acknowledgements

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar büyük ölçüde Bogdan Osadchiy ve Evgenii Protasov (Irkutsk State University, Rusya) yardımıyla video Protokolü hazırlanmasında kabul etmiş oluyorsunuz. Bu araştırma için temel araştırma (#15-29-01003) Rus Bilim Vakfı (#15-14-10008) ve Rus Vakfı tarafından desteklenmiştir.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
SNARF-1-dekstran, 70000 MWThermo Fisher ScientificD3304Floresan probu. Mikrokapsül dolgu maddesi olarak başka herhangi bir uygun polimere bağlı floresan boya
Albümin-floresein izotiyosiyanat konjugatı (FITC-BSA)SIGMAA9771Floresan probu
Rhodamine B izotiyosiyanat-Dekstran (RITC-dekstran)SIGMAR9379Floresan probu
Kalsiyum klorürSIGMAC1016CaCO3 şablon oluşumu
Sodyum karbonatSIGMAS7795CaCO3 şablon oluşumu
Poli(alilamin hidroklorür), MW 50000 (PAH)SIGMA283215Katyonik polimer
Poli(sodyum 4-stirensülfonat), MW 70000 (PSS)SIGMA243051Anyonik polimer
Poli-L-lizin [20 kDa] polietilen glikol [5 kDa], g = 3.0 ila 4.5 (PLL-g-PEG)SuSoSPLL(20)- g[3.5]-PEG(5)Mikrokapsüllerin biyouyumluluğunu artırmak için nihai polimer
Sodyum klorürSIGMAS8776Uygulanan polimerleri çözmek için
Su Arıtma SistemiMilliporeSIMSV0000Deiyonize su hazırlamak için
CaCO3 şablon oluşumu
Eppendorf  Araştırma  artı pipet, 1000 ve mikro; LEppendorfDozaj çözümleri
Eppendorf  Araştırma  artı pipet, 10 & LEppendorfDozajlama çözeltileri
Pipet uçları, hacim aralığı 200 ila 1000 & mikro; LF.L. Medical28093Dozaj çözeltileri
Pipet uçları, hacim aralığı 0.1-10  μ LEppendorfZ640069Dozaj çözümleri
Mini-santrifüj Microspin 12, Yüksek hızlıBioSanMikrokapsül santrifüjleme-yıkama prosedürü için
Mikrosantrifüj tüpleri, 2 mLEppendorfZ666513Mikrokapsül sentezi ve depolanması
Çalkalayıcı Intelli-karıştırıcı RM-1LELMY Ltd.Mikrokapsül agregasyonunu azaltmak için
Ultrasonik temizleyiciMikrokapsül agregasyonunu azaltmak için
Kafa telefonları Kulakları ultrasondan korumak için
Etilendiamintetraasetik asitSIGMAEDSCaCO3 şablonlarını çözmek için
Monosodyum fosfatSIGMAS9638pH tamponlarının hazırlanması
Disodyum fosfatSIGMAS9390pH tamponlarının hazırlanması
Sodyum hidroksitSIGMAS8045EDTA çözeltisinin ve tamponlarının pH'ını ayarlamak için
: Termostat odasıMikrokapsülleri cam slayt üzerinde kurutmak için
, Hemositometre, kan hücresi sayım odasıHazırlanan mikrokapsüllerin boyut, dağılım ve konsantrasyonunu araştırmak
için: Floresan mikroskop, Mikmed 2LOMOBalık kanındaki
mikrokapsüllerin in vivo görselleştirilmesiSNARF-1 için floresan filtre seti (mikroskop modeline bağlı olarak seçilmelidir; örnek verilmiştir)Chroma79010Floresan problarla mikrokapsüllerin görselleştirilmesi
Fiber spektrometresi QE ProOkyanus OptiğiMikrokapsüllerin mikroskop altında kalibrasyonu
Fiber optik QP400-2-VIS NIR, 400 μ m, 2 mOkyanus OptiğiSpektrometreyi mikroskop portuna bağlamak için
Kolimatör F280SMA-AThorlabsSpektrometreyi mikroskop portuna bağlamak için
Cam mikroskop slaytıFisherbrand12-550-A3Mikroskop altında mikrokapsüllerin kalibrasyonu
Lameller, 22 x 22 mmPearlMS-SLIDCVMikrokapsüllerin mikroskop
altında kalibrasyonuCam mikro kılcal damarlar Intra MARK, 10 & mikro; LBlaubrandBR708709Balık kanı toplamak için
Karanfil yağıSIGMAC8392Balık anestezisi
Lancet No 11Apexmed international BVP00588Balık kuyruğunu kesmek ve insülin otoenjektörü
Heparin, 5000 U/mLCalbiochemL6510-BCBalık kanı alımı sırasında balık kanı ile temas eden tüm yüzeyleri tedavi etmek için
Seven 2 Go Pro pH-metre mikroelektrotluMettler ToledoBalık kanı pH'ını belirlemek için
İnsülin kalemi iğneleri Micro-Fine Plus, 0.25 x 5 mmBecton, Dickinson and CompanyEnjeksiyon işlemi için. Herhangi bir ince iğne (Ø 0,33 mm veya daha az) uygundur
Cam kılcal damarlar, 1 x 75 mmHirschmann Laborgerä te GmbH & Co9201075Enjeksiyon prosedürü için
Gaz meşalesiÇelik iğneyi cam kılcal damara lehimlemek
Mikroenjektör IM-9BNARISHIGEMikrokapsüllerin hassas dozlanması için süspansiyon
Petri kapları, 60 mm x 15 mm, polistirenSIGMAP5481Anestezi altında balıklarla yapılan manipülasyonlar için
Plastik kaşıkAnestezi altında balıklarla yapılan manipülasyonlar için
Nemli süngerAnestezi altında balıklarla yapılan manipülasyonlar için
Diseksiyon makasıThermo Scientific31212Solungaç kapağını balık kafasından çıkarmak için
Pasteur pipeti, 3,5 mLMARKAZ331767Balık solungaçlarını nemlendirmek için
kullanılabilir için manyetik karıştırıcı Stegler : , , için

References

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Rivas-Aravena, A., Sandino, A. M., Spencer, E. Nanoparticles and microparticles of polymers and polysaccharides to administer fish vaccines. Biol. Res. 46 (4), 407-419 (2013).
  2. Yashchenok, A. M., Jose, J., Trochet, P., Sukhorukov, G. B., Gorin, D. A.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Microparticle InjectionFish KidneyIntravital ImagingMicrocapsule PreparationFluorescent ProbeBlood pH MonitoringZebrafish Circulatory SystemLayer by Layer EncapsulationGill VisualizationSpectral Analysis

Related Articles