Method Article

Doku mühendisliği uygulamaları için bitki dokuların Decellularization için iki yöntem

DOI:

10.3791/57586

⸱

May 31st, 2018

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Surgery, University of Wisconsin-Madison, 2Department of Orthopedics and Rehabilitation, University of Wisconsin School of Medicine and Public Health, 3Department of Biomedical Engineering, University of Wisconsin College of Engineering, 4Department of Biomedical Engineering, Worcester Polytechnic Institute

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada mevcut ve bitki dokularında decellularize için kullanılan kontrast iki protokolleri: deterjan temelli bir yaklaşım ve deterjan-Alerjik bir yaklaşım. Her iki yöntem sonra doku mühendisliği uygulamaları için iskele olarak kullanılabilir hücre dışı matriks kullanılan, bitki dokuların geride.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Şu anda iskele doku yerine kullanılan otolog, sentetik ve hayvan kaynaklı greft nedeniyle düşük kullanılabilirlik, zavallı biyouyumluluk ve maliyet kısıtlamaları bulunmaktadır. Bitki doku yapmak onları benzersiz olarak uygun yüksek yüzey alanı, mükemmel su taşıma ve saklama, gibi iskele olarak birbirine bağlı gözeneklilik, damar ağları ve çok çeşitli mekanik önceden kullanmak uygun özelliklere sahip özellikleri. Doku mühendisliği uygulamaları için bitki decellularization iki başarılı yöntemleri burada açıklanmıştır. Birinci yöntem daha önce kurulan yöntemleri memeli dokuları temizlemek için kullanılan benzer hücresel madde kaldırmak için deterjan banyoları temel alır. İkinci yaprak damarlara yalıtır ve ısıtmalı çamaşır suyu ve sapları ve yaprakları temizlemek için tuz banyosu kullanımı içerir bir protokol adapte deterjan-Alerjik bir yöntemdir. Her iki yöntem iskele karşılaştırılabilir mekanik özellikleri ve böylece daha iyi onların amaçlanan uygulama uygun protokol seçmesini sağlayan düşük hücresel metabolik etkisi ile verim.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Doku mühendisliği canlı bir doku oluşturmak için 1980'lerde ortaya çıkan yerine ve potansiyel olarak adres önemli organ ve doku sıkıntısı1. Bir strateji iskele teşvik ve vücut eksik doku veya organ yeniden oluşturmak için rehber kullandı. 3-b baskı üretilen benzersiz fiziksel özellikleri ile iskele gibi yaklaşımlar üretim gelişmiş rağmen iskele ile ulaşılabilir fiziksel ve biyolojik özellikleri çeşitli bir yelpazede üretim yeteneği mücadelesi2 kalır , 3. Ayrıca, işlevsel bir damar ağı eksikliği nedeniyle, bu teknikleri 3 boyutlu doku Yenileyici sınırlı. İskele olarak decellularized hayv....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. decellularization deterjan dayalı yaklaşım kullanarak bitki dokusunun

  1. Taze veya dondurulmuş F. hispida, yaprak örnekleri kullanın. -20 ° C-dondurucu ve store (en fazla bir yıl) ileride kullanmak üzere kullanılmayan taze örnekler dondur.
    Not: neredeyse istenen herhangi bir bitki kök veya yaprak dokusu kullanın. Genişletilmiş depolama kez dokulara zarar verebilir.
    1. Boyutunu ve şeklini temelinde örnek'ın kullanım işleme örnekleri belirler (yani şeritler halinde kesin örnekleri mekanik test uygulamaları için uygundur, bu arada 8 mm disk örnekleri çok iyi kodlamayla uygulamalarda yararlıdır ). Yaprak keskin, temiz ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Her iki yöntem hücre kültürü ve doku mühendisliği uygulamaları için uygun iskele vermiştir. Şekil 1 decellularization süreci için deterjan tabanlı ve kesim örnekleri (8 mm çap) deterjan ücretsiz yöntemi için sağlam bir yaprak kullanarak genel iş akışını gösterir. Her iki yöntem takip Ficus hispida dokuların başarılı decellularization açık ve sağlam örnekleri (Şekil 1A ve 1B) vermiştir. Bütün bitki doku (.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada, bitki doku decellularize için iki yöntem açıklanmaktadır. Burada anlatılan sonuçları önceki çalışmalar25, sonuçları ile birleştiğinde ortaya koymak protokolleri muhtemeldir önermek geniş bir yelpazede uygun bitki tür ve sapları ve yaprakları üzerinde gerçekleştirilebilir. Bu yordamları basit ve bitki decellularization çoğu laboratuvarlarında yürütülen olabilir bu yüzden özel ekipman gerektirmez. Bu decellularization sonra iskele memeli hücre adezyon kolaylaştırmak için functionalized gerek.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ifşa gerek yok.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

John Wirth bahçeleri Olbrich nezaketle bu projede kullanılan numuneler temini için teşekkür etmek istiyorum. Bu eser kısmen Ulusal Kalp, akciğer ve kan Enstitüsü tarafından desteklenen (G.R.G. R01HL115282) Ulusal Bilim Vakfı (DGE1144804) J.R.G ve G.R.G. ve Wisconsin Üniversitesi cerrahi departmanı ve mezunlar Fonu (H.D.L.). Bu eser de kısmen çevre koruma ajansı (yıldız hibe no. 83573701), Ulusal Sağlık Enstitüleri (R01HL093282-01A1 ve UH3TR000506) ve Ulusal Bilim Vakfı (IGERT DGE1144804) tarafından desteklenmiştir.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Sodyum dodesil sülfatSigma Life Science75746-1KG
Triton X-100MP Biomedicals, LLC807426Makalede atıfta bulunulan iyonik olmayan yüzey aktif madde. Çok viskoz reaktif, çizerken pipet ucunun ucunu kesmeye yardımcı olabilir.
Konsantre çamaşır suyu (% 8.25 sodyum hipoklorit)CloroxÜrün #: 31009Standart konsantre çamaşır suyu.
Sodyum bikarbonatAcros Organics217120010Sodyum hidroksit veya sodyum karbonat ile ikame edilebilir.
8 mm BiopunchHealthLink15111-8024 kuyulu plakaya iyi uyan numuneleri keser
Oryantal Dansçı-Sarsıntı masasıStovall Yaşam BilimleriBDRAA115SDokulara zarar vermemek için düşük hızlar kullanın. Herhangi bir model / marka sarsma masası kullanabilir.
Isotemp sıcak/karıştırma plakasıFisher ScientificHerhangi bir stil/marka sıcak/karıştırma plakası kullanabilir.
Beher:Herhangi BirNumunelerinize uyduğu ve onları aşırı kalabalık olmadığı sürece herhangi bir boyutta beher kullanabilirsiniz.
Tris HidroklorürFisher ScientificBP153-500
DMEMCorningMT50003PC
Quant-iT Picogreen dsDNA testiYaşam TeknolojileriP11496Eldeki herhangi bir dsDNA miktar tayin mehtodunu kullanabilir.

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Vacanti, J. Tissue engineering and regenerative medicine: from first principles to state of the art. Journal of Pediatric Surgery. 45 (2), 291-294 (2010).
  2. Kim, S., et al.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Plant DecellularizationDetergent Bath MethodDetergent Free MethodBleach Salt BathTissue Engineering ScaffoldsPlant Tissue ProcessingMechanical Property AnalysisCellular Metabolic ImpactStem Cell GrowthProtective Equipment Use

Related Articles