Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Bitki-mikrop etkileşim: Transkripsiyon yanıt Bacillus Mycoides patates kök Exudates için

11.9K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/57606

⸱

2 Temmuz 2018

 ,  , 
1Department of Molecular Genetics, University of Groningen

Bu makalede

Özet

Burada sunulan Protokolü amacı endosphere izole Bacillus mycoides transcriptomic yanıt patates kök exudates için incelemektir. Bu yöntem önemli bakteriyel genler bitki-mikrop etkileşimlerde yer tanımlamasını kolaylaştırır ve prensip olarak diğer endophytes ve bitkilerle küçük ayarlamalar için geçerli olduğunu.

Özet

Yararlı bitki ilişkili bakterilerin büyüme teşvik ve bitkilerde hastalık önleme önemli bir rol oynamaktadır. Bitki büyüme teşvik rhizobacteria (PGPR) uygulama biofertilizers veya biyolojik ajanlar olarak geleneksel gübre kullanımı için etkili bir alternatif haline gelmiştir ve düşük maliyetle ürün verimliliği artırabilir. Bitki-mikrop etkileşimler ana bitki salgılanan sinyalleri ve onların ilişkili bakteriler tarafından bu andan bir tepki bağlıdır. Ancak, nasıl yararlı bakteriler moleküler mekanizmaları için bunların ilişkili bitki kaynaklı sinyalleri tam olarak anlaşılamamıştır yanıt. Kök exudates bakteri transcriptomic yanıtı değerlendirirken bakteri gen ekspresyonu ve yönetmelik rhizospheric koşullar altında belirlemek için güçlü bir yaklaşımdır. Böyle bir bilgiye temel mekanizmaları bitki-mikrop etkileşimleri dahil anlamak gereklidir. Bu kağıt B. mycoides EC18, patates endosphere patates kök exudates için izole bir yük transcriptomic yanıt çalışmaya detaylı bir protokolünü açıklar. Son yüksek üretilen iş sıralama teknolojisi sayesinde, bu iletişim kuralı birkaç hafta ve üretmek büyük veri kümeleri olarak gerçekleştirilebilir. İlk olarak, kök exudates sonra bunlar B. mycoides kültürler için eklenir steril koşullarda topluyoruz. Bu kültürlerden RNA ticari bir kit ile kombine ve kalite kontrol için otomatik Elektroforez enstrüman tarafından tabi fenol/kloroform yöntemini kullanarak ayrı tutulur. Sonra sıralama, veri analizi T-REx örümcek ağı-esaslı boru hattı ile gerçekleştirilir ve bir grup differentially ifade genlerin tanımlanır. Bu yöntem bakteriyel genler bitki-mikrop etkileşimlerde yer üzerinde yeni keşifler kolaylaştırmak için yararlı bir araçtır.

Giriş

Bitkiler fotosentez kökleri aracılığıyla sırasında sabit rizosferde1, yani, toprak kökleri yakınındaki dar bölge içine karbon % 20'e kadar çıktı olabilir. Daha yüksek besin durumu nedeniyle, rizosferde bitki büyüme teşvik bakteriler de dahil olmak üzere çeşitli mikroorganizmalar için uygun bir yaşam alanı olduğunu. Kök exudates inorganik bileşikler iyonları, İnorganik asitler, oksijen ve su gibi bir dizi içerir. Ancak, kök exudates çoğunluğu düşük moleküler ağırlıklı bileşikler ve yüksek moleküler ağırlıklı bileşikler ayrılabilir organik maddeler tarafından oluşturulur. Düşük moleküler ağırlıklı bileşikler amino asitleri, organik asitler, şekerler, fenolik bileşikler, yağ asitleri ve sekonder metabolitler bir dizi içerir. Yüksek molekül ağırlıklı bileşikler zamk ve proteinler2,3/ oluşur. Rizosferde mikroorganizmaların bu bileşiklerin bazıları büyüme ve gelişme için bir enerji kaynağı olarak kullanabilirsiniz. Kök exudates exudates bitki üretilen bileşikler belirli genlerin ifade etkileyen bakteriler rizosferde ilişkili davranışını etkileyebilir beri rhizobacterial topluluk şekillenmesinde önemli bir rol oynamaktadır.

Bakteriyel yanıt-e doğru kök exudates anlama bitki-mikrop etkileşim mekanizmaları deşifre önemli bir adımdır. Bakteriyel yanıt-e doğru bitki-mikrop etkileşimleri farklı gen ekspresyonu ürün olduğu için transcriptome analizi ile okudu olabilir. Bu yöntemi kullanarak, önceki çalışmalarda birkaç önemli genler bitki-mikrop etkileşimlerde yer tespit edilmiştir. Pseudomonas aeruginosaiçinde genlerin metabolizma, kemotaksis ve tip II salgı şeker pancarı kök exudates4' e cevap gösterilmiştir. Fan ve ark. 5 yanıt olarak Mısır kök exudates B. amyloliquefaciens FZB42 transcriptomic profilleme okudu. Güçlü kök exudates tarafından indüklenen genler, çeşitli gruplar metabolik yollar besin kullanımı, kemotaksis, hareketliliği ve ribozomal sigara Sentezi antimikrobiyal peptidler ve polyketides ilgili söz konusu olduğunu, bunların sonuçları göster.

Bu çalışmalar doğruluğunu kök exudates koleksiyon üzerinde dayanır. Her ne kadar çeşitli yöntemler farklı amaçlar için kök exudates topluluğu tarif var, sofistike aletleri talep ya da iyi denetlenen koşullar6,7,8' gerçekleştirilmez. Ayrıca, rizosferde inhibe mikroorganizmalar bitki hücre membran geçirgenliği etkileyen kök çıktı kompozisyon etkileyebilir ve konsorsiyumlar mikroorganizmaların9durumunda özellikle kök dokulara zarar. Kök exudates mikrobiyal cevaben araştırıyor tarafından diğer mikroorganizmalar10bileşikleri değiştirilmesini önlemek için iyi tanımlanmış koşulları kullanmak önemlidir. Ayrıca, RNA-seq tabanlı transcriptome çalışmaları için yüksek kaliteli RNA gereklidir. Ancak, modeli bakteri suşları ile uğraşırken, standart protokolleri veya ticari kitleri genellikle düşük verimlilik bilinmeyen faktörler veya özel büyüme özellikleri nedeniyle var.

Burada açıklanan protokol Firmicute şube bir gram-pozitif, spor oluşturan bakteri olan B. mycoides,'ı kullanarak doğrulandı. Çeşitli bitki türlerinin rizosferde içinde her yerde. Şeker pancarı11, sönümleme-off patojen Pythium salatalık12yanı sıra azot inhibisyonu indüksiyon sistematik direnç (ISR) dahil olmak üzere bu tür için birkaç bitki büyüme teşvik özellikleri bildirilmiştir Ayçiçeği rizosferde13fiksasyonu. Ancak, bir ana bitki ile etkileşimi moleküler mekanizmaları iyi okudu değil.

Burada sunulan deneyler amacı endosphere izole B. mycoides transcriptomic yanıt patates kök exudates için incelemektir. Kısacası, protokol aşağıdaki adımlardan oluşur: Birincisi, patates kök exudates Steril koşullar altında toplamak. Sonra yüksek kaliteli RNA bakteri hücreleri kök exudates ile tedavi ayıklamak. Son adım, web tabanlı T-REx boru hattı14kullanarak veri analizidir. Bu iletişim kuralı ifade düzeylerinde kök-exudates ile temas üzerine bir kayma göstermek ve böylece bitki-mikrop etkileşimlerde önemli bir rol oynayabileceği B. mycoides genlerin tanımlamak için kullanıldı.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

1. patates steril koşullarda takımıdır

  1. Patates yüzey steril su ile durulayın. % 70 etanol ve daha sonra 5 min için %3 Sodyum hipoklorit patates yıkayın. Tekrar kalan herhangi bir sodyum hipoklorit kaldırmak için steril su ile durulayın.
  2. Takımıdır ve patates yumrular büyüyen için gerekli malzemeleri hazırlamak; plastik kap, engraftment sepetleri, vermikülit, sterilize ve ısıyla tarafından 20 dk için 121 ° C'de su.
    Not: kullanılan tüm malzemelerin autoclavable olduğundan emin olun. Aksi takdirde, sterilizing diğer yöntemleri kullanın.
  3. Engraftment sepet içine yüzey sterilize patates bağlayıp bu ıslak vermikülit içeren autoclaved bir tencereye koyun.
  4. Pot bir iklim odasında 24 ° C'de üç hafta boyunca devam et. 16 h ışık (120 µmol m-2s-1) ve karanlığın 8 h döngüleri üzerinde ayarlayın. Mikrobiyal contaminations önlemek için bir büyük cam elyaf kutu kapak pot kullanın.

2. toplama patates kök Exudates

  1. Sürgünler filiz, transfer autoclaved deiyonize su ile 150 mL steril bir kabı içine bütün patates sepetle doldurdu ile patates yumrular su yüzeyi ve kökleri yer sular altında suda (bkz. Şekil 1). Fide iklim odasında tutmak ve aynı ayarları daha önce olduğu gibi [24 ° C; ışık (120 µmol m-2s-1), karanlığın 8 h 16 h döngüleri] kullanın.
  2. İkinci gün, gelen su exudates içeren toplamak ve kabı steril deiyonize su ile doldurma. Örnekleme gerçekleştirmek fide aktarma sonra yedinci güne kadar her gün.
  3. Her örnek ayrı olarak 4 ° C'de depolayın Her örnek için Luria Bertani üzerinde 100 µL yaymak (LB; % 1'tryptone, % 0.5 maya ekstresi, % 0.5 NaCl) agar plaka için mikrobiyal contaminations kontrol etmek için. Kirlenmiş örnekleri atmak.
  4. Bir fide toplanan örnekleri birleştirir ve onları onları-40 ° c ile 150 mL son hacmi dağılması konsantre.

3. büyüyen bakteriler

  1. B. mycoides zorlanma bir LB agar plaka üzerine bir-80 ° C gliserol stoktan çizgi ve 30 ° c plaka gecede kuluçkaya.
  2. Bir koloni plaka ile bir LB sıvı orta aşılamak ve 30 ° C'de gecede 200 devirde titreyen bir kuluçka kültür büyümek

4. tedavi ve bakterilerin örnekleme

  1. Bir negatif kontrol için kök exudates ile tedavi bakterilerin büyüme eğrisi karşılaştırmak için bir dizi içeren LB sıvı orta 50 mL şişe hazırlayın. Tüm şişeler için gecede bakteriyel kültürünün 0.5 mL ekleyin ve % 0, % 5, % 10 veya % 15 (v/v) kök çıktı ya da steril deiyonize suyla orta olarak sırasıyla ekleyin.
  2. Bir kültür deiyonize su kök exudates yerine bir denetim olarak kullanın. 600 optik yoğunluk ölçmek nm (OD600) her 1 saat sonra. OD600 değerleri zaman karşı komplo tarafından bir büyüme eğrisi oluşturur.
    Not: Biz kök exudates yüzde 10'u B. mycoides gelişimini etkilemez mi gördüm (bkz: Şekil 2); Bu oran RNA-seq deneyler için kullanıldı.
  3. Bir gecede B. mycoides kültürü ile önceden ısıtılmış LB orta ve ilk doz600 itibaren 90 mL seyreltik ~ 0,05 bir 300 mL şişe içinde. Kültür için kök exudates 10 mL ekleyin ve 1 h için 30 ° C'de kuluçkaya.
  4. 10 mL steril deiyonize su arıtma bir denetim olarak kullanın. Santrifüjü 9000 x g 4 ° C'de 2 min için de tarafından kültür hücreleri toplamak Süpernatant, atmak ve hemen Pelet sıvı azot içinde dondurmak, sonra-80 ° C'de kullanmak kadar saklamak.

5. RNA izolasyon

Not: yalıtım başlamadan önce tezgah, raflar ve pipetler RNase dekontaminasyon çözümünü ile temizleyerek hazırlayın ( Tablo malzemelerigörmek). Her zaman eldiven ve tüm tüpler, keyif ve çözümleri RNase ücretsiz olduğundan emin olun. Her zaman örnekleri buz mümkün olduğunda üzerinde tutun.

  1. Ultrasaf Su (100 mL solüsyon başına DEPC, 100 µL) %0.1 dietil pyrocarbonate (DEPC) (v/v) eklemek, iyice karıştırın ve bir gecede oda sıcaklığında saklayın. Otoklav karışımı gece tedaviden sonra DEPC devre dışı bırakabilirsiniz. TE arabellek hazırlamak için bu DEPC tedavi ultrasaf su kullanın [10 mM Tris-HCl (pH = 8); 1 mM EDTA] ve % 10 SDS (w/v) çözüm.
  2. Hücre topakları buz çözme ve her biri 400 µL TE (DEPC) arabelleği askıya alma. Süspansiyonlar 2 mL vidalı kapak tüpler içine aktarın.
  3. Kloroform izoamil alkol (24:1 v/v) 300 µL ve fenol (asit fenol, RNA sınıf) 300 µL premix ve 5 min için durmak karışım izin verin. Resuspended hücrelere eklemek için organik üst aşaması 500 µL al. Daha sonra 50 µL % 10 SDS ve cam boncuk (0.5 µm) 0.5 g tüp içine ekleyin.
  4. Kapağı sıkıca kapatın ve bir boncuk-değirmen homogenizer tüpü yerleştirin (bkz. Tablo malzeme). 3 × 45 s darbe homojenizasyon 1dk aralığı ile buz üzerinde gerçekleştirin.
  5. Örnekleri için 11.000 x g (4 ° C) de 10 dk santrifüj kapasitesi ve üst aşaması için yeni bir tüp aktarın.
  6. Kloroform izoamil alkol (24:1) 500 µL üst aşamaya adım 5.5 ekleyin ve karışımı 11.000 x g (4 ° C) de 5 dk santrifüj kapasitesi.
    Not: Aşağıdaki adımları bir ticari cam elyaf filtre tabanlı RNA izolasyon üreticinin yönergesinden modifiye edildi ( Tablo malzemelerigörmek) kit.
  7. 500 µL üst aşaması için taze bir tüp transferi, 2 cilt (1 mL) bir lizis/bağlama arabellek ve yukarı ve aşağı pipetting tarafından karıştırın.
  8. Filtre ve toplama tüpler (gelen RNA izolasyon kit) birleştirin ve filtre boru 5.7. adımdaki karışıma pipette. 15 tüpler santrifüj kapasitesi 8000 x g ve atma akışı aracılığıyla s.
  9. DNaz arabelleği, DNaz 10 µL 100 µL tüplerini microcentrifuge 1,5 mL hazırlamak ben ve 5 µL bir RNase inhibitörü ( Tablo malzemelerigörmek). Filtre tüp filtre üzerinde hazır çözüm mix ekleyin ve 20-30 dk 15-25 ° C'de için kuluçkaya
  10. Üreticinin yönerge göre çamaşır adımları gerçekleştirin. 50 µL elüsyon arabelleği RNA elute için kullanın.
  11. -80 ° C'de eluted RNA kaydedin ve çevresinde bir plastik parafin film koymak. Aynı zamanda, bir kaç microliters örnek bir kalite denetimi gerçekleştirmek için 1.5 mL microcentrifuge tüp aktarın.

6. RNA kalite kontrol ve sıralama

  1. RNA microvolume Spektrofotometre ile kontrol edin.
    Not: 260/280 oranlarıyla absorbans 1.8 olmalıdır ve 260/230 oranlarıyla en az 1,8, tercihen 2.0 yukarıda yukarıda olmalıdır.
  2. Çalıştır tavsiye RNA analizi kullanarak bir otomatik Elektroforez alet arıtılmış RNA kiti ( Tablo malzemelerigörmek); RNA bütünlüğü (RIN) en az 7 devam etmek için olmalıdır.
  3. RNA 3 µg örnek başına toplam miktarı bir RNA-Seq Kütüphane hazırlık kitaplıklarıyla oluşturmak için kullanın (bkz. Tablo reçetesi) kit üreticinin önerilerini takip.
    Not: Yüksek işlem hacmi sıralama platformda Kütüphane hazırlıklar sıralı ve eşleştirilmiş uç okuma oluşturuldu.

7. veri analizi Web tabanlı boru hattı T-REx

  1. Bir kalite FASTX-Toolkit sürüm 0.0.13 kullanarak filtreleme gerçekleştirmek (> 20 Kalite Puanlarını Phred). Trimmomatic aracı ile bağdaştırıcısı dizilerinden ham RNA-Seq okuma kırpın.
    Not: Yüksek kalite ile temiz veri aşağı akım analizleri dayalı idi.
  2. B. mycoides ATCC 6462 NCBI genom veritabanı indir (NCBI katılım No: CP009692.1) ve Bowtie2/2.2.3 kullanarak temiz okuma eşlemek için bir başvuru genom kullanabilirsiniz.
  3. Kullanım HTSeq v0.6.1 okunma sayıları saymak için her gen için eşlenen ve okuma transkript milyon eşlenen okuma (RPKM) her gen başına kilobaz başına bu gen için eşlenen gen ve Okunma sayısı uzunluğu temel.
  4. T-REx boru hattı tarafından veri analizi için RPKM tablo giriş yanı sıra üç açıklayıcı dosya kullanın: faktörler, deneyde hangi faktörler farklı gen ekspresyonu için Karşılaştırılacak tanımlamak için (II) bir tezat dosya tanımlamak için (i) bir faktörler dosya ve (iii) genleri ilgi grupları tanımlamak için bir sınıf dosyası.
    Not: İn.txt biçimde açıklayıcı dosyalarıdır. Örnekler T-REx (http://genome2d.molgenrug.nl/) Web sayfasında bulunabilir. T-REx kullanarak veri analizi için ayrıntılı bir talimat önceki yayında de Jong vd tarafından bulunabilir 14.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Bitki ilişkili mikroorganizmalar bitki büyüme ve Sağlık olumlu etkileyebilir. Ancak, bitkiler ve onların mikrobiyal simbiont arasındaki karmaşık etkileşimler mekanizmaları tam olarak anlaşılmış değildir. Kök exudates rhizobacterial etkinliği ve davranış düzenlenmesinde önemli bir rol oynamaktadır ve genellikle kökleri mikrobiyal kolonizasyon mikroplar kök exudates için cazibe olan başlatır öne ise. Bu çalışmanın amacı, rhizobacterial B. mycoides patates kök exudates için transcri...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bitki-mikrop etkileşimleri bakteri ve bitkiler arasındaki ince ayarlı bir denge tarafından belirlenecek olan. Bu tür etkileşimler son derece karmaşık ve zor çalışma için doğal bir sistemde, hangi oluşur çeşitli mikrobiyal türler, potansiyel olarak konsorsiyum hareket. Bu kağıt bakteriyel yanıt-e doğru kök exudates iyi kontrollü şartlar altında çalışmak için basitleştirilmiş bir protokolünü açıklar. Rhizobacteria, kök exudates, maruz kalma üzerine transcriptome profil bakteriyel uyum rizosferde niş için ayrıntılı bilgi sa...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar onlar rakip hiçbir mali çıkarları var bildirin.

Teşekkürler

Jakob Viel onun yararlı yorumlar ve öneriler için teşekkür ederiz. Biz de Anne de Jong Biyoinformatik Analizi onun yardım için teşekkür ederim. Yanglei Yi ve Zhibo Li Çin burs Konseyi (CSC) tarafından desteklenir. NWO-TTW Perspectief başına Programma Back2Roots teşekkür ediyoruz (TKI-AF-15510) OPK için finansal destek için.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
sodyum hipokloritSigma  CAS: 7681-52-9 % 10-15 & nbsp aktif klor
Luria-Bertani (LB) et suyu
inkübaterNew Brunswick ScientificInnova 4000
spektrofotometreThermo Fisher ScientificGenesys 20
sıvı nitrojen
cam boncuklarSigmaG88930.5 & mikro; m
2.0 ml vidalı kapaklıRNase içermez
1.5 ml ve 2.0 ml eppendorf tüpRNase içermez
Boncuk değirmeni homojenizatörBioSpec607Mini_beadbeater
santrifüjEppendorf5430
Dietil pirokarbonat (DEPC)sigmaCAS: 1609-47-8
Sodyum Dodesil Sülfat (SDS)sigmaCAS: 151-21-3 DEPC ile arıtılmış MQ su ile hazırlanmış %10'luk çözelti
TE tamponu10 mM Tris-HCl; 1 mM EDTA, pH = 8
fenolSigmaRNA sınıfı
kloroform-izoamil alkol 24:1 kloroform: izoamil alkol hazırlayın, oda sıcaklığında saklayın
Yüksek saflıkta RNA izolasyon kitiRoche11828665001
RNase Dekontaminasyon SolüsyonuInvitrogenAM9780RNase-Zap
Otomatik elektroforez cihazıAgilent2100Biyoanalizör
Mikrohacim spektrofotometresiThermo Fisher ScientificNanodrop ND-1000
RNA kalite analiz kitiAgilentRNA 6000 Nano kiti 
RNase inhibitörüThermo Fisher ScientificRiboLock
Yönlü RNA kütüphanesiIllumina içinNEBUltra
tüp Hazırlık kiti

Kaynaklar

  1. Haichar, F. eZ., et al. Plant host habitat and root exudates shape soil bacterial community structure. The ISME Journal: Multidisciplinary Journal of Microbial Ecology. 2 (12), 1221-1230 (2008).
  2. Badri, D. V., Vivanco, J. M. Regulation and function of root exudates. Plant, Cell & Environment. 32 (6), 666-681 (2009).
  3. Rohrbacher, F., St-Arnaud, M. Root exudation: the ecological driver of hydrocarbon rhizoremediation. Agronomy Journal. 6 (1), 19(2016).
  4. Mark, G. L., et al. Transcriptome profiling of bacterial responses to root exudates identifies genes involved in microbe-plant interactions. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102 (48), 17454-17459 (2005).
  5. Fan, B., et al. Transcriptomic profiling of Bacillus amyloliquefaciens FZB42 in response to maize root exudates. BMC Microbiology. 12 (1), 116(2012).
  6. Yoshitomi, K. J., Shann, J. R. Corn (Zea mays L.) root exudates and their impact on 14C-pyrene mineralization. Soil Biology and Biochemistry. 33 (12), 1769-1776 (2001).
  7. Lambert, M. R. Clover root exudate produces male-biased sex ratios and accelerates male metamorphic timing in wood frogs. Royal Society Open Science. 2 (12), (2015).
  8. Tuason, M. M. S., Arocena, J. M. Root organic acid exudates and properties of rhizosphere soils of white spruce (Picea glauca) and subalpine fir (Abies lasiocarpa). Canadian Journal of Soil Science. 89 (3), 287-300 (2009).
  9. Grayston, S. J., Vaughan, D., Jones, D. Rhizosphere carbon flow in trees, in comparison with annual plants: the importance of root exudation and its impact on microbial activity and nutrient availability. Applied Soil Ecology. 5 (1), 29-56 (1997).
  10. Rovira, A. D. Plant root exudates. Botanical Review. 35 (1), 35-57 (1969).
  11. Bargabus, R. L., Zidack, N. K., Sherwood, J. E., Jacobsen, B. J. Characterisation of systemic resistance in sugar beet elicited by a non-pathogenic, phyllosphere-colonizing Bacillus mycoides, biological control agent. Physiological and Molecular Plant Pathology. 61 (5), 289-298 (2002).
  12. Peng, Y. -H., et al. Inhibition of cucumber Pythium damping-off pathogen with zoosporicidal biosurfactants produced by Bacillus mycoides. Journal of Plant Diseases and Protection. 124 (5), 481-491 (2017).
  13. Ambrosini, A., et al. Diazotrophic bacilli isolated from the sunflower rhizosphere and the potential of Bacillus mycoides B38V as biofertiliser. Annals of Applied Biology. 168 (1), 93-110 (2016).
  14. de Jong, A., van der Meulen, S., Kuipers, O. P., Kok, J. T-REx: transcriptome analysis webserver for RNA-seq expression data. BMC Genomics. 16 (1), 663(2015).
  15. Yi, Y., de Jong, A., Frenzel, E., Kuipers, O. P. Comparative transcriptomics of Bacillus mycoides strains in response to potato-root exudates reveals different genetic adaptation of endophytic and soil isolates. Frontiers in Microbiology. 8, 1487(2017).
  16. Nwokeoji, A. O., Kilby, P. M., Portwood, D. E., Dickman, M. J. RNASwift: a rapid, versatile RNA extraction method free from phenol and chloroform. Analytical Biochemistry. 512, 36-46 (2016).
  17. Ramirez-Gonzalez, R. H., Bonnal, R., Caccamo, M., MacLean, D. Bio-samtools: Ruby bindings for SAMtools, a library for accessing BAM files containing high-throughput sequence alignments. Source Code for Biology and Medicine. 7 (1), 6(2012).
  18. Quinlan, A. R. BEDTools: the Swiss-army tool for genome feature analysis. Current Protocols in Bioinformatics. , (2014).
  19. Boria, I., Boatti, L., Pesole, G., Mignone, F. NGS-trex: next generation sequencing transcriptome profile explorer. BMC Bioinformatics. 14 (7), S10(2013).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Transkriptomik YanıtRNA İzolasyonuYüksek Verimli DizilemeT-REx İşlem HattıDiferansiyel Gen İfadesiKök Eksuda ToplamaBakteriyel Kültür Uygulaması
Bitki-mikrop etkileşim: Transkripsiyon yanıt Bacillus Mycoides patates kök Exudates için
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.