Yöntem makalesi

Microrespiration analizi ve mikrodiseksiyon kullanarak soruşturma Teliospore çimlenme

DOI:

10.3791/57628

⸱

13 Mayıs 2018

 ,  , 
1Environmental and Life Sciences Graduate Department, Trent University, 2Forensic Science Department, Trent University

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kurum mantarlar çok yıkıcı tarım hastalıkları neden. Yanıt olarak çevre ipuçları çimlenme uyuyan teliospores olarak dağılmış. Çimlenme sırasında moleküler değişiklikleri öğrenmek için iki yöntem anahat: metabolik aktivasyon algılamak için solunum artış ölçme ve moleküler olayları farklı morfolojik aşamalarında teliospores izole ederek değiştirme değerlendirilmesi.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kurum mantarlar birkaç yıkıcı tarımsal hastalıkların etiyolojik ajanlar. Onlar teliospores, kalın duvarlı dağılma ajanlar üretim tarafından karakterizedir. Teliospores yıllardır atıl kalabilir. Uyuşukluk düşük metabolik oranları ile karakterize, makromoleküllerin biyosentezi durdu ve solunum düzeyde büyük ölçüde azalır. Gerekli çevre sinyalleri aldıktan sonra yeni mermi enfeksiyon başlatabilir haploit hücreleri üretmek için teliospores çimlenme. Teliospore çimlenme makromoleküllerin biyosentezi, artan solunum ve dramatik morfolojik değişiklikler yeniden başlamasını ile karakterizedir. Tam olarak çimlenme erken evrelerinde hücresel solunum değişiklikleri ölçmek için basit bir protokol Clark tipli respirometer istihdam geliştirdik. Çimlenme sonraki aşamalarını belirli morfolojik değişiklikler tarafından ayırt edilir ama çimlenme uyumsuzdur. Biz teliospores ayrı çimlenme aşamalarında toplamamızı sağlayan bir mikrodiseksiyon teknik geliştirilmiştir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kurum mantarlar (Ustilaginales) önemli tahıl bitkileri, Mısır, arpa ve buğday da dahil olmak üzere, milyarlarca dolar kırpma kayıplara yol açan bitkiler enfekte 1,600 türler oluşur her yıl1. Bu mantarlar hücre duvarları koyu pigmentli ve dağıtım aracıları olan teliospores, üretim ile karakterizedir. Teliospores ana bitkiler arasında yayılma stresleri sırasında genetik materyal korumak için çalışır ve yıl2için atıl bir durumda devam edebilir. Bu nedenle, teliospores hastalığı yaymak bir unsuru vardır.

Teliospore Biyoloji çalışma amacıyla modeli kurum mantar hastalığı 'ortak kurum Mısır....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. mısır koçanı enfeksiyon

  1. Zea mays (cv. altın ufak tefek) büyümek kadar koçanı kurulur ve ipek (yaklaşık 60 gün) başlamıştır.
  2. Kültür uyumlu haploit U. maydis daha önce standart protokolleri kullanarak suşları açıklanan7.
  3. Yukarıda açıklanan7olarak standart protokolleri kullanarak mısır koçanı bulaştırmak.

2. teliospore hasat

  1. Otoklav ekipman (Büchner huniler, Büchner şişeler, karıştırıcılar, 250 ml'lik santrifüj şişe, düz spatula ve su) bir standart kuru kullanarak döngüsü ile en az 30 dk sterilizasyon 121 ° c (Standart sıvı döngüs....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Solunum teliospore uyuşukluk ve çimlenme sırasında değişiklikleri ölçme Clark tipli microrespirometer tabanlı yöntem kullanarak, biz uyuyan teliospores takımıdır için karşılaştırıldığında solunum (~ 1,075 µmol/h/mg) düşük düzeyde sergi doğruladı teliospores (~ 2,614 µmol/h/mg; Şekil 1A). Bu ortalama oranı solunum uyuyan teliospores ve çimlenme için indüklenen teliospores arasında bir ~2.4-fold değişiklik gösterir. Buna ek olarak, biz çimlenme için indüklenen .......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Basidiomycete biotrophic bitki patojenleri milyarlarca dolar her yıl ürün kayıplara neden. Bu patojenler büyük çoğunluğu mantar dağılma ve Eşeyli üreme için ayrılmaz teliospores üretmek. Bilgi geliştirme ve teliospores çimlenme kazanıyor bu mantarlar tarafından neden yıkıcı hastalıkların yayılması anlamak için önemlidir. Anahtar kontrol noktalarında moleküler değişiklikleri tanımlamak için fizyolojik vardiya ve teliospores çimlenme farklı aşamalarında yalıtmak için başka bir zamanlama tanımlamak için bir yöntem geliştird.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarının veya diğer çatışmaları ifşa etmek var.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dr Paul Frost onun microrespirometer kullanımı için ve Nicole Wagner ve Alex Bell teknik destek için teşekkür etmek istiyorum. Bu eser finanse edildi B.J.S. için bir NSERC hibe

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Streptomisin SülfatBioShopSTP101
Kanamisin SülfatBioShopKAN201
Patates Dekstroz SuyuBD Difco254920
1 L Waring Laboratuvarı blenderWaring7011S
TülbentVWR470150-438
Nalgene Polipropilen Desikatör MuslukluThermoFisher Scientific5310-0250
Unisense Mikro Solunum sistemi
Mikro Solunum Sensörü (O2)UnisenseOX10
MicroOptode Metre AmplifikatörüUnisenseN/A
MR-CH KüçükUnisenseMR-Ch
SensorTrace Rate YazılımıUnisenseN/A Mikro
Solunum RafıUnisenseMR2-Raf Mikro Solunum
KarıştırıcıUnisenseMR2-Co
Mikrodiseksiyon sistemi
Axio Vert.A1 Ters Işık MikroskobuZeiss
Kaba ManipülatörNarishigeMMN-1
Üç Eksenli Asılı Joystick Yağ Hidrolik MikromanipülatörNarishigeMMO-202ND
Pnömatik MikroenjektörNarishigeIM-11-2
TransferTip (ES)Eppendorf5175107004

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Saville, B. J., Donaldson, M. E., Doyle, C. E. Meiosis - Molecular Mechanisms and Cytogenetic Diversity. Swan, A. , InTech. 411-460 (2012).
  2. Christensen, J. J. Monograph Number 2. , The American Phytopathological Society. Worcester, MA. (1963).
  3. Caltrider, P. D., Gottlieb, D. Respiratory activity and enzymes for glucose catabolism in fungal spores. Phytopathology. 53, 1021-1030 (1963).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Mikrodissection Tekni iClark tipi RespirometreOksijen T ketim H zSpor S spansiyonu Haz rlamaimlenme A amalar n n zolasyonuRNA Stabilizasyon Sol syonuMineral Ya Tabakasimlenen Teliosporlar

İlgili makaleler