Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Diş implantları için farklı malzemeler üzerinde sözlü biyofilm oluşumu

11.4K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/57756

⸱

24 Haziran 2018

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Dental Materials and Prosthodontics, School of Dentistry of Ribeirão Preto, University of São Paulo, 2Department of Restorative Dentistry, School of Dentistry of Ribeirão Preto, University of São Paulo

Bu makalede

Özet

Burada, sözlü biyofilm oluşumu için diş protez ayakları bakteri hücreleri canlılığı ve morfolojik özellikleri analizi de dahil olmak üzere, titanyum ve zirkon malzemeler üzerinde değerlendirmek için bir protokol mevcut. Güçlü mikroskobu teknikleri ile ilişkili bir in situ modeli sözlü biyofilm analizi için kullanılır.

Özet

Diş implantları ve protez bileşenlerinin bakteriyel kolonizasyon ve biyofilm oluşumu yatkındır. Düşük mikrobiyal yapışma sağlar malzeme kullanımı yaygınlığı ve peri-implant hastalıkların ilerlemesini azaltabilir. Sözlü ortamı karmaşıklığı ve oral biyofilm heterojenite görünümünde, diş ve Diş malzemeleri yüzeylerinin bir biyofilm analiz etkinleştirebilirsiniz teknikleri ihtiyaç vardır mikroskobu. Bu makalede, bir dizi sözlü biyofilm oluşumu titanyum ve protez ayakları için seramik malzemeler üzerinde yanı sıra sözlü biyofilmler analizleri, morfolojik ve hücresel düzeyde dahil yöntemleri karşılaştırmak için uygulanan protokol. Bu çalışmada açıklandığı gibi sözlü biyofilm oluşumu titanyum ve zirkon malzemeler için diş protez ayakları üzerinde değerlendirmek için situ modeli böylece metodolojik yeterliliği gösteren 48 h biyofilm tatmin edici bir koruma sağlar. Multiphoton mikroskobu numuneler üzerinde oluşan biyofilm bir alan temsilcisi analiz sağlar. Buna ek olarak, fluorophores kullanımı ve multiphoton mikroskobu kullanarak görüntü işleme bakteriyel canlılığı analiz mikroorganizmalar çok heterojen bir nüfusa sağlar. Elektron mikroskobu biyolojik numunelerin hazırlanması biyofilm, iyi görüntüler ve hiçbir yapıları yapısal korunması teşvik etmektedir.

Giriş

Bakteriyel biyofilmler karmaşıktır, işlevsel ve yapısal olarak mikrobiyal topluluklar düzenlenen, bir hücre dışı, biyolojik olarak aktif polimer matris1,2sentez mikrobiyal türlerin çeşitliliğinin tarafından karakterize. Bakteriyel yapışma sağlar biyotik veya abiyotik yüzeyleri çoğunlukla oluşan tükürük glikoproteinlerin1,3,4' alınan film tabakası oluşumu ile öncesinde. Mikroorganizmaların ve film tabakası arasındaki zayıf fizikokimyasal etkileşimler başlangıçta kurulan ve bakteriyel adhesins ve glikoprotein reseptörlerinin alınan film tabakası, daha güçlü Hofstede tarafından takip etti. Mikrobiyal çeşitlilik giderek artar ikincil sömürgecilerin reseptörleri zaten ekli bakteri oluşturan bir multispecies topluluk1,3,4, , coaggregation ile 5.

Sözlü microbiota ve ana bilgisayar ile simbiyotik ilişkisi homeostazı ağız sağlığı korunmasında önemlidir. Dysbiosis oral biyofilmler içinde çürük ve periodontal hastalık2,5gelişimi için risk artabilir. Klinik çalışmalar biyofilm diş veya diş implantları birikimi ve dişeti iltihabı veya peri-implant Mukozit6,7gelişimi neden-sonuç ilişkisi göstermektedir. Enflamatuar süreç ilerlemesini peri-implantitis ve implant8sonucu kaybına yol açar.

Diş implantları ve protez bileşenlerinin bakteriyel kolonizasyon ve biyofilm oluşumu9yatkındır. Kimyasal kompozisyon ve düşük mikrobiyal yapışma sağlar yüzey topografyası malzemelerin kullanımı yaygınlığı ve peri-implant hastalıkları9,10ilerlemesini azaltabilir. Titanyum implantlar için protez ayakları üretimi için en çok kullanılan malzemedir; Ancak, seramik malzemeler son zamanlarda kullanılmaya başlanan ve estetik özellikleri ve biyouyumluluk11,12nedeniyle titanyum alternatif olarak popülerlik kazanmaktadır. Da önemlisi, seramik malzemeler mikroorganizmaların, ana toprak dolay iden onların yüzey pürüzlülüğü, wettability ve yüzey serbest enerji10,13uymak için sözde azaltılmış bir potansiyel ile ilişkilendirilmiştir.

Vitro çalışmalar mikrobiyal yapışma anlayış önemli gelişmeler protez ayağına yüzeyler9,14,15,16,17katkıda bulunmuştur. Ancak, farklı sıcaklık ve pH ve besin durumu yanı sıra kesme kuvvetleri, varlığı ile karakterize ağız boşluğu dinamik çevre vitro deneysel protokoller18'tekrarlanabilir değil, 19. Bu sorunu aşmak için bir alternatif in situ modelleri avantajlı ex vivo analiz10,20, , üç boyutlu yapısını korur biyofilm oluşumu kullanmaktır 21 , 22 , 23 , 24.

Sözlü yüzeylerde oluşan biyofilm karmaşık yapısını analiz mikroskobu teknikleri optik yoğun madde25görüntüleme kapasitesine sahip gerektirir. Multiphoton lazer mikroskobu tarama biyofilm yapısal analizi26için modern bir seçenektir. Doğrusal olmayan optik ile femtoseconds27ile Geniş puls kızılötesi dalga boyu, yakın bir aydınlatma kaynak kullanımı ile karakterizedir. Bu yöntem autofluorescence malzeme veya malzeme fluorophores, lineer olmayan optik sinyalleri ikinci harmonik üretimi bilinen bir fenomen türetilen tarafından oluşturulan görüntüler ek olarak işaretlenmiş resim alma için endikedir. Multiphoton mikroskobu avantajları arasında en düşük hücre hasarı uyarma ışık27yoğunluğu ile elde edilen büyük resim derinliğini olduğunu.

Biyofilm multiphoton mikroskobu tarafından abiyotik yüzeylerde canlılığı analizini, floresan nükleik asit kullanımı ile farklı spektral özellikleri Boyayıcılar ve bir penetrasyon bakteri hücreleri içinde gerekli28kapasitesidir. Fluorophores SYTO9 (yeşil-floresan) ve propidium iyodür (kırmızı-floresan) canlı ve ölü bakteriler28,29,30arasındaki görsel bir farklılaşma için kullanılabilir. SYTO9 sağlam ve güvenliği aşılan bir membran ile bakteri hücreleri girer iken Propidium iyodür hasarlı membranlar, tek bakteri nüfuz eder. Her iki boyalar bir hücre içinde bulunduğunda, propidium iyodür nükleik asitler için daha büyük bir ilgi vardır ve SYTO9, kırmızı28,30işaretleme displaces.

Sözlü ortamı karmaşıklığı ve oral biyofilm heterojenite görünümünde, diş ve Diş malzemeleri yüzeylerinin biyofilm analiz etkinleştirebilirsiniz teknikleri ihtiyaç vardır mikroskobu. Bu makalede, bir dizi sözlü biyofilm oluşumu titanyum ve protez ayakları için seramik malzemeler üzerinde yanı sıra sözlü biyofilmler analizleri, morfolojik ve hücresel düzeyde dahil yöntemleri karşılaştırmak için uygulanan protokol.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Bu çalışma okul diş hekimliği Ribeirão Preto, kurumsal inceleme Kurulca kabul edildi ve gönüllü katılımcı yazılı izni (işlem 2011.1.371.583) imzaladı.

1. biyofilm oluşumu içinde in Situ

  1. Katılımcıların seçimi
    1. Aşağıdaki dahil ölçütlere göre hastalar seçin: tam bir diş ve ağız hastalıkları klinik belirtisi ile sağlıklı bir birey.
    2. Aşağıdaki dışlama ölçütleri temel alarak hastalar hariç: gebelik, emzirme, diş çürüğü, periodontal hastalık veya antibiyotik tedavisi son 3 ayda, Sigara içen veya herhangi bir sistemik hastalığı periodontal durum etkileyebilir.
  2. İntraoral aygıt hazırlanması
    1. Kayıt bir aljinat Gösterim aracılığıyla üst kemer.
    2. Türü IV taş taş tozu 100 gr için 19 mL su ekleyerek hazırlayın. Taş bir model üst kemer yapmak için aljinat kalıba dökün.
    3. Tasarım ve test örnekleri (Titanyum ve seramik diskler) desteklemek için bir akrilik intraoral aygıt imal.
      1. NiCr tel (0.7 mm içinde çap) kullanarak ortodontik pense #139 gelen kuvvetli tokalar imal ve model üzerinde pozisyon. Üst premolars arasında kelepçe getirin böylece onlar bir döngü formu her tel bir ucunu bükebilir.
        1. Döngünün interdental papilla ve uyum. Oklüzal, temas noktaları ve oklüzyon ile müdahale etmemek için nazik bir eğrilik yerleştirin. 90 ° akrilik bir saklama için kelepçe sonundaki kat olun.
        2. Kelepçe üst ikinci azı sığdırmak için servikal üçüncü tel eğimi uyum (vestibüler) diş (distal) kontur ve 90 ° akrilik bir saklama için kelepçe sonundaki kat yapmak.
          Not: intraoral aygıt için yeterli saklama/istikrar sağlamak için kuvvetli tokalar üst premolars ve diş kemerinin her iki tarafında ikinci azı distal yönünü arasında konumlandırılmış.
      2. Kendi kendine kür akrilik reçine üreticinin yönergeleri doğrultusunda manipüle ve akrilik reçine arasında 2 cam tabak (3 mm kalınlığında rondela interpoze ile) 3 mm kalınlığında levha yapmak plastik aşamasında, tuşuna basın.
      3. Cihazın tasarım göre model, palatal bölgesindeki akrilik levha yatıyordu ve polimerizasyon önce bir carver ile ihtiyaç fazlası akrilik reçine döşeme.
      4. Kuvvetlendirmek için matrisin içinde erimiş mum yerleştirip balmumu için bekleyen metalik matris [10 mm çapında, 2 mm kalınlıkta (78,5 mm2yüzey alanı)] kullanarak balmumu diskleri imal. El ile 4 balmumu diskleri akrilik reçine, premolars ve diğer 2 yanında ikinci büyük azı dişleri arasında 2-in onları içine embed.
      5. Bir basınç tencerede 20 dk için basınçlı hava altında 20 psi polimerize akrilik reçine izin.
      6. İntraoral aygıt ile bir elektrikli diş Laboratuarı el probu ve kesici bitirmek ve aşındırıcı kauçuk ile Lehçe.
      7. Aygıt için uygun bir uyum yukarıda açıklanan kullanýlýyor ağız içinde ayarlayın.
  3. Titanyum ve zirkon numunelerin hazırlanması
    Not: Numune (n = 14) 10 mm çapında ve 2 mm kalınlıkta olup yüzölçümü 78,5 mm2vardır.
    1. Numuneler yüzeyler aşındırıcılık azalan su soğutmalı sandpapers ile Lehçe (600, 1200 ve 2000 grit), yaklaşık 20 dk için.
      Not: Örnekleri parlatma yüzey pürüzlülüğü, 0.2 µm standartlaştırmak için gerçekleştirildi.
    2. Temiz ve dezenfekte numuneler ve sıvı deterjan ve musluk suyu ile intraoral aygıt ve için onları emici kağıt havlu ile Kuru 15 dk. sonra bir temizlik iÖin izopropil alkol ultrasonik banyo kullanmak.
    3. Numuneler intraoral sözlü cihazda toksik olmayan sıcak eritebilir yapıştırıcı (Şekil 1) yaklaşık 0.1 mL ile düzeltmek.
    4. Oral kavite içinde örnekler içeren aygıtı yükleyin.
      Not: örnekler içeren intraoral aygıtı için 48 h giyilmelidir. Aygıt kaldırıldı ve hasta yeme ve oral temizlik gerçekleştirme fosfat tamponlu tuz (PBS) depolanır.

2. bakteriyel canlılık değerlendirilmesi

Not: Örnek boyutu n = 10.

  1. SYTO9 3 µL ekleyerek bir boyama çözüm hazırlamak (yeşil flüoresan nükleik asit boya) ve propidium iyodür (kırmızı floresan nükleik asit boya) 1 mL steril için 3 µL distile su.
    Not: ışıktan korunan çözümleri hazırlayın.
  2. 24-şey plakasına örnekler aktarmak ve yapışık olmayan hücreler kaldırmak için PBS ile iyice yıkayın.
  3. Uygun hacmi (1 mL) biyofilm içeren numune kapsayacak şekilde floresan boya çözümü ekleyin. Boya biyofilm disorganize vermemek için çok dikkatli bir şekilde ekleyin.
  4. 20-30 dakika oda sıcaklığında ışıktan korunan için numune kuluçkaya.
  5. Yavaşça biyofilm örnek aşırı herhangi bir boya kaldırmak için steril distile su ile yıkayın.
  6. Örnek bir cam alt tabak yerleştirin ve multiphoton lazer mikroskobu biyofilm analizi için tarama gerçekleştirin.
    Not: Bir multiphoton mikroskobu sistemi kullanılarak bakteri hücreleri canlılığı analizi yapılmıştır. Propidium iyodür floresans 546/680 bir uyarma/emisyon dalga boyu ile bir filtre kullanarak algılandı nm ve 477/600 nm SYTO9 için. Elde edilen görüntülerin boyutunu 5.16188 x 5.16188 mm, 26.64 mm2 her numune (78,5 mm2) toplam alanı veya toplam alanı 33.94 %'ye karşılık gelen oldu. Örnek en merkezi bölümünden 1024 x 1024 piksel çözünürlüğe sahip görüntüler yapıldı. Kırmızı kanalı ve yeşil kanal ayrı ayrı Fiji yazılım31kullanarak analiz edildi. Her hücre bir seçim aracını kullanarak seçildi ve floresan yoğunluğu görüntü arka plan çıkarılarak piksel yoğunluğu entegre ölçüldü.

3. analiz örnekleri kimyasal enerji dağıtıcı spektroskopisi (EDS) tarafından

Not: Örnek boyutu n = 3.

  1. 3 her biyofilm ücretsiz numune örnekleri seçin ve taramalı elektron mikroskobu ile 10 kV32bir elektron ışını voltajı bir dağıtıcı enerji spektrometre için birleştiğinde kullanarak her numune kimyasal bileşimi 2 farklı alanlarda değerlendirmek.

4. elektron mikroskobu tarama bakteriyel biyofilm morfolojik Analizi

Not: Örnek boyutu n = 1.

  1. Biyofilm % 2.5 oxazolidin 0.1 M sodyum cacodylate tampon pH 7,0-7.3, 24 h için seyreltilmiş numune çeker tarafından tamir.
  2. Örnek PBS arabellekte yıkayın (pH 7,6 =).
  3. Biyofilm % 1 osmiyum tetroxide için 1 h ile postfix.
  4. Örnek PBS arabellekte yıkayın (pH 7,6 =).
  5. Biyofilm örnekleri dikkatle, koruma onları etanol çözümleri (% 50, % 70, % 90, %95 ve % 100) konsantrasyonları artan dalmış kurutmak.
    Not: %100 konsantrasyon, etanol 3 alışverişleri gerçekleştirmek. Toplam dehidratasyon adım yaklaşık 2 saat sürer.
  6. Kritik nokta kurutma makinesi örnekler aktarmak ve karbondioksit (CO2) ile birkaç oyuncu değişikliği yapmak örnekler kuru olana.
  7. Kurutulmuş numune cihaz kaldır ve taramalı elektron mikroskobu sahipleri mount.
  8. Sputter-ceket altın için 120 Numune'nın yüzeyine 20 nm tabakası s.
  9. Altın kaplı diskler taramalı elektron mikroskobu odasında yerleştirin. Her örnek, 20-30 kV değişken basınç altında ve 650 X büyütme125 farklı alanlardan görüntü elde.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Situ büyüme 48 saat sonra biyofilm kolonizasyon yoğunluğu bu çalışmada kolonize alanı kullanarak multiphoton mikroskobu (numune taranan toplam yüzölçümü ile ilgili olarak titanyum ve zirkon disklerdeki oranı tarafından temsil edildi 26.64 mm2). Şekil 2 3 test edilmiş malzemelerin yüzeyinde bakteriyel kolonizasyon yoğunluk temsil eder. Biyofilm, yüksek yoğunluklu döküm yüzeylerinde ve işlenmiş titanyum disklerdeki gözlenmiştir (0.0292 µm

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bu çalışmada açıklanan protokol biyofilm oluşumu için protez ayakları bakteri hücre canlılığı ve morfolojik özellikleri analizi de dahil olmak üzere, titanyum ve zirkon malzemeler üzerinde değerlendirmek için geliştirilmiştir. Bunu gerçekleştirmek için bir in situ modeli biyofilm oluşumu, test materyalleri örnekleri uyum ve 48 h dinamik ağız ortamına maruz kalmalarını bir intraoral cihaz oluşan tasarlanmıştır. Cihaz rahat ve basit-e doğru eklemek, kaldırmak ve temiz tarafından gönüllü olarak kabul edildi. Henüz,...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar ifşa gerek yok.

Teşekkürler

Yazarlar EDS ve SEM onun cömert yardım için teşekkür ederiz José Augusto Maulin mikroskobu çok kullanıcılı laboratuvar (Tıp Fakültesi, Ribeirão Preto) üzerinden analizleri ve kardeşim Teixeira Machado için video sürüm onun cömert teknik yardım.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Hydrogum 5Zhermack DentalC302070
Durone IVDentsply17130500002
NiCr teli Morelli55.01.070
JET otomatik polimerize akrilikClá ssico
Diş Balmumu Clá ssico
Basınçlı tencere Essencedental
Zımpara Kağıtları 600 kumluNORTONT216
Zımpara Kağıtları 1200 kumluNORTONT401
Zımpara Kağıtları 2000 kumluNORTONT402
Metalografik Parlatma MakinesiArotec
İzopropil alkolSIGMA-ALDRICHW292907
Sıcakta eriyen yapıştırıcıTECSILPAH M20017
Filmtracer CANLI/ÖLÜ Biyofilm Canlılık KitiInvitrogenL10316
Pipet Uçları, 10 & LKASVIK8-10   
Pipet Uçları, 1.000 & mikro; LKASVIK8-1000B   
24 oyuklu plaka KASVIK12-024
Cam Alt ÇanakThermo Scientific150680
AxioObserver ters mikroskop ZEISS
Chameleon vision ii lazerTutarlı
Objektif EC Plan-Neofluar 40x/1.30 Yağ DICZEISS440452-9903-000
SDD sensörleri - X-Max 20mm²Oxford Instruments
Glutaraldehit çözeltisiSIGMA-ALDRICHG5882
Sodyum kakodilat Tamponu SIGMA-ALDRICH97068 
Osmiyum tetroksitSIGMA-ALDRICH201030
Na2HPO4SIGMA-ALDRICHS9638Fosfat tamponlu tuzlu su
< KH>sub2< / sub>PO4< / sub>SIGMA-ALDRICHP9791 
NaClMERK1.06404
KclSIGMA-ALDRICHP9333 
Analiz için mutlak etanol EMSUREMERK1.00983
CPD 030 Kritik Nokta KurutucuBAL-TEC
JSM-6610 Serisi Taramalı Elektron MikroskobuJEOL
SCD 050 Püskürtmeli KaplayıcıBAL-TEC

Kaynaklar

  1. Do, T., Devine, D., Marsh, P. D. Oral biofilms: molecular analysis, challenges, and future prospects in dental diagnostics. Clinical, Cosmetic and Investigational Dentistry. 5, 11-19 (2013).
  2. Samaranayake, L., Matsubara, V. H. Normal Oral Flora and the Oral Ecosystem. Dental Clinics of North America. 61 (2), 199-215 (2017).
  3. Larsen, T., Fiehn, N. E. Dental biofilm infections - an update. Acta Pathologica, Microbiologica, et Immunologica Scandinavica. 125 (4), 376-384 (2017).
  4. Marsh, P. D., Do, T., Beighton, D., Devine, D. A. Influence of saliva on the oral microbiota. Periodontology 2000. 70 (1), 80-92 (2016).
  5. Marsh, P. D., Zaura, E. Dental biofilm: ecological interactions in health and disease. Journal of Clinical Periodontology. 44 Suppl 18, S12-S22 (2017).
  6. Zitzmann, N. U., Berglundh, T., Marinello, C. P., Lindhe, J. Experimental peri-implant mucositis in man. Journal of Clinical Periodontology. 28 (6), 517-523 (2001).
  7. Meyer, S., et al. Experimental mucositis and experimental gingivitis in persons aged 70 or over. Clinical and biological responses. Clinical Oral Implants Research. 28 (8), 1005-1012 (2017).
  8. Salvi, G. E., Cosgarea, R., Sculean, A. Prevalence and Mechanisms of Peri-implant Diseases. Journal of Dental Research. 96 (1), 31-37 (2017).
  9. Hahnel, S., Wieser, A., Lang, R., Rosentritt, M. Biofilm formation on the surface of modern implant abutment materials. Clinical Oral Implants Research. 26 (11), 1297-1301 (2015).
  10. Nascimento, C., et al. Bacterial adhesion on the titanium and zirconia abutment surfaces. Clinical Oral Implants Research. 25 (3), 337-343 (2014).
  11. Nakamura, K., Kanno, T., Milleding, P., Ortengren, U. Zirconia as a dental implant abutment material: a systematic review. The International Journal of Prosthodontics. 23 (4), 299-309 (2010).
  12. Scarano, A., Piattelli, M., Caputi, S., Favero, G. A., Piattelli, A. Bacterial adhesion on commercially pure titanium and zirconium oxide disks: an in vivo human study. Journal of Periodontology. 75 (2), 292-296 (2004).
  13. Nascimento, C., et al. Microbiome of titanium and zirconia dental implants abutments. Dental Materials. 32 (1), 93-101 (2016).
  14. Rimondini, L., Cerroni, L., Carrassi, A., Torricelli, P. Bacterial colonization of zirconia ceramic surfaces: an in vitro and in vivo study. The International Journal of Oral & Maxillofacial Implants. 17 (6), 793-798 (2002).
  15. de Avila, E. D., Avila-Campos, M. J., Vergani, C. E., Spolidorio, D. M., Mollo Fde, A. Jr Structural and quantitative analysis of a mature anaerobic biofilm on different implant abutment surfaces. Journal of Prosthetic Dentistry. 115 (4), 428-436 (2016).
  16. de Avila, E. D., et al. Impact of Physical Chemical Characteristics of Abutment Implant Surfaces on Bacteria Adhesion. Journal of Oral Implantology. 42 (2), 153-158 (2016).
  17. de Avila, E. D., et al. Effect of titanium and zirconia dental implant abutments on a cultivable polymicrobial saliva community. Journal of Prosthetic Dentistry. 118 (4), 481-487 (2017).
  18. Lin, N. J. Biofilm over teeth and restorations: What do we need to know? Dental Materials. 33 (6), 667-680 (2017).
  19. Prada-Lopez, I., Quintas, V., Tomas, I. The intraoral device of overlaid disk-holding splints as a new in situ oral biofilm model. Journal of Clinical and Experimental Dentistry. 7 (1), e126-e132 (2015).
  20. Prada-Lopez, I., Quintas, V., Vilaboa, C., Suarez-Quintanilla, D., Tomas, I. Devices for in situ Development of Non-disturbed Oral Biofilm. A Systematic Review. Frontiers in Microbiology. 7, 1055(2016).
  21. Burgers, R., et al. In vivo and in vitro biofilm formation on two different titanium implant surfaces. Clinical Oral Implants Research. 21 (2), 156-164 (2010).
  22. do Nascimento, C., et al. Oral biofilm formation on the titanium and zirconia substrates. Microscopy Research and Technique. 76 (2), 126-132 (2013).
  23. Al-Ahmad, A., et al. In vivo study of the initial bacterial adhesion on different implant materials. Archives of Oral Biology. 58 (9), 1139-1147 (2013).
  24. Al-Ahmad, A., et al. Bacterial adhesion and biofilm formation on yttria-stabilized, tetragonal zirconia and titanium oral implant materials with low surface roughness - an in situ study. Journal of Medical Microbiology. 65 (7), 596-604 (2016).
  25. Thomsen, H., et al. Delivery of cyclodextrin polymers to bacterial biofilms - An exploratory study using rhodamine labelled cyclodextrins and multiphoton microscopy. International Journal of Pharmaceutics. 531 (2), 650-657 (2017).
  26. Lakins, M. A., Marrison, J. L., O'Toole, P. J., van der Woude, M. W. Exploiting advances in imaging technology to study biofilms by applying multiphoton laser scanning microscopy as an imaging and manipulation tool. Journal of Microscopy. 235 (2), 128-137 (2009).
  27. Zipfel, W. R., Williams, R. M., Webb, W. W. Nonlinear magic: multiphoton microscopy in the biosciences. Nature Biotechnology. 21 (11), 1369-1377 (2003).
  28. Stocks, S. M. Mechanism and use of the commercially available viability stain, BacLight. Cytometry Part A. 61 (2), 189-195 (2004).
  29. Johnson, M. B., Criss, A. K. Fluorescence microscopy methods for determining the viability of bacteria in association with mammalian cells. Journal of Visualized Experiments. (79), e50729(2013).
  30. Stiefel, P., Schmidt-Emrich, S., Maniura-Weber, K., Ren, Q. Critical aspects of using bacterial cell viability assays with the fluorophores SYTO9 and propidium iodide. BMC Microbiology. 15, 36(2015).
  31. Schindelin, J., et al. Fiji: an open-source platform for biological-image analysis. Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).
  32. Placko, H. E., Mishra, S., Weimer, J. J., Lucas, L. C. Surface characterization of titanium-based implant materials. The International Journal of Oral & Maxillofacial Implants. 15 (3), 355-363 (2000).
  33. So, P. T., Dong, C. Y., Masters, B. R., Berland, K. M. Two-photon excitation fluorescence microscopy. Annual Review of Biomedical Engineering. 2, 399-429 (2000).
  34. Benninger, R. K., Piston, D. W. Two-photon excitation microscopy for the study of living cells and tissues. Current Protocols in Cell Biology. , Chapter 4, Unit 4.11 11-24 (2013).
  35. Gardi, J. E., Nyengaard, J. R., Gundersen, H. J. The proportionator: unbiased stereological estimation using biased automatic image analysis and non-uniform probability proportional to size sampling. Computers in Biology and Medicine. 38 (3), 313-328 (2008).
  36. Melvin, N. R., Poda, D., Sutherland, R. J. A simple and efficient alternative to implementing systematic random sampling in stereological designs without a motorized microscope stage. Journal of Microscopy. 228 (Pt 1), 103-106 (2007).
  37. Neu, T. R., Kuhlicke, U., Lawrence, J. R. Assessment of fluorochromes for two-photon laser scanning microscopy of biofilms. Applied and Environmental Microbiology. 68 (2), 901-909 (2002).
  38. Neu, T. R., Woelfl, S., Lawrence, J. R. Three-dimensional differentiation of photo-autotrophic biofilm constituents by multi-channel laser scanning microscopy (single-photon and two-photon excitation). Journal of Microbiological Methods. 56 (2), 161-172 (2004).
  39. Neu, T. R., Lawrence, J. R. Innovative techniques, sensors, and approaches for imaging biofilms at different scales. Trends in Microbiology. 23 (4), 233-242 (2015).
  40. Lacroix-Gueu, P., Briandet, R., Leveque-Fort, S., Bellon-Fontaine, M. N., Fontaine-Aupart, M. P. In situ measurements of viral particles diffusion inside mucoid biofilms. Comptes Rendus Biologies. 328 (12), 1065-1072 (2005).
  41. Briandet, R., et al. Fluorescence correlation spectroscopy to study diffusion and reaction of bacteriophages inside biofilms. Applied and Environmental Microbiology. 74 (7), 2135-2143 (2008).
  42. Berney, M., Hammes, F., Bosshard, F., Weilenmann, H. U., Egli, T. Assessment and interpretation of bacterial viability by using the LIVE/DEAD BacLight Kit in combination with flow cytometry. Applied and Environmental Microbiology. 73 (10), 3283-3290 (2007).
  43. Bergmans, L., Moisiadis, P., Van Meerbeek, B., Quirynen, M., Lambrechts, P. Microscopic observation of bacteria: review highlighting the use of environmental SEM. International Endodontic Journal. 38 (11), 775-788 (2005).
  44. Hannig, C., Follo, M., Hellwig, E., Al-Ahmad, A. Visualization of adherent micro-organisms using different techniques. Journal of Medical Microbiology. 59 (Pt 1), 1-7 (2010).
  45. Knutton, S. Electron microscopical methods in adhesion. Methods in Enzymology. 253, 145-158 (1995).
  46. Fischer, E. R., Hansen, B. T., Nair, V., Hoyt, F. H., Dorward, D. W. Scanning electron microscopy. Current Protocols in Microbiology. , Chapter 2, Unit 2B.2 (2012).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Titanyum MateryallerZirkonya MateryallerÇok Fotonlu MikroskopiTaramalı Elektron MikroskobuBiyofilm AnaliziBakteriyel CanlılıkNumune HazırlamaIn Situ Model
Diş implantları için farklı malzemeler üzerinde sözlü biyofilm oluşumu
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.