Pluripotent kök hücrelerden özel Retina hücrelerinin üretimini geliştirme retina hastalıkları için kök hücre tabanlı tedavisinin bir dönüm noktası olduğunu. Mevcut kağıt Retina organoids ve Retina pigmentli epitel verimli bir nesil için temel, çevirim ve klinik araştırma için basit bir yöntem açıklanır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Tanımlanmış Xeno-alerjik ve besleyici-Alerjik kültür koşulları üretimi insan IPSC kaynaklı Retina hücre modelleri için
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Özel hücreler pluripotent kök hücrelerinin üretimini rejeneratif tıp için yeni yaklaşımlar geliştirmek için güçlü bir araç sağlar. İnsan kaynaklı pluripotent kök hücreler (iPSCs) nerede Retina hücre IPSC kaynaklı modelleri anlamak ve körlük mücadele için önemli bir adım ileri işaretlemek Retina dystrophies, nörodejeneratif hastalık çalışmaları için özellikle çekici kullanmaktır. Bu yazıda, biz oluşturmak, Olgun ve Retina organoids cryopreserve için basit ve ölçeklenebilir iletişim kuralı tanımlamak. Orta değiştirilmesi hakkında temel, bu yöntemin ana avantajı birden fazla önlemek için ve zaman alıcı adımları yaygın olarak iPSCs bir rehberli farklılaşma içinde gerekli. Retina gelişme erken aşamalarında başarılı değişiklikleri yapisan insan IPSC kültürler üzerinde tanımlanan medya tarafından taklit eden, bu iletişim kuralları, neuroretinal yapıları ve Retina pigmentli epitel (RPE) hücreleri kendi kendini oluşturan eşzamanlı üretimi sağlar bir 4 hafta tekrarlanabilir ve verimli bir şekilde. Retina progenitör hücre (RPC'ler) içeren bu yapılar için daha fazla olgunlaşma RPC farklılaşmaya yetişkin insan retinada mevcut yedi Retina hücre türlerine izin kayan bir kültür durumda kolayca ayrılmış olabilir. Ayrıca, Retina organoids dondurma için hızlı yöntemleri ve RPE hücrelerinin uzun süreli depolama için açıklar. Birlikte birlikte, burada açıklanan yöntemleri üretmek ve insan IPSC kaynaklı Retina hücreleri veya doku temel ve klinik araştırma için banka yararlı olacaktır.
Giriş
Retina Merkezi sinir sistemi (MSS) ayrılmaz bir parçasıdır ve travmatik bir yaralanma veya hastalık kendiliğinden yeniden oluşturmak için sınırlı bir kapasiteye sahip. Bu nedenle, dejeneratif patolojiler kesin Retina hücre kaybı, yaşa bağlı makula dejenerasyonu (AMD), retinitis pigmentosa (RP), glokom ve diyabetik retinopati, gibi neden genellikle geri dönüşü olmayan körlük neden. Dejenere retina tahlisiye kök hücre tabanlı terapiler bozuk veya eksik hücrelerin yerini alır amaçlayan en umut verici yaklaşımlar1,2,3biri olan büyük bir sorun olduğunu. Pluripotent kök hücreler in....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Bu raporda açıklanan protokol Institut de la vizyon'ın Araştırma Etik Komitesi kuralları izler. Institut de la vizyon geçerli Fransız yönetmelik göre insan numune işleme izin verdi. Numune işleme Helsinki ilkeleri doğrultusunda hasta veri koruma ve ulusal düzenlemeler "Comité de koruma des Personnes (CPP) Ile-de-France V" etik onaylandıktan sonra takip eder.
1. hazırlanması Kültür Medya ve yemekleri
-
Kültür medya
- IPSC orta, pluripotent kök hücre kültür besleyici-Alerjik koşulları16adanmış bir kimyasal olarak tanımlanmış ortam kullanın. 500 mL orta üreticinin protokolüne göre hazır....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
İlk insan IPSC farklılaşma besleyici-Alerjik koşulları16 ekili için spontan farklılaşma (Şekil 1A) teşvik için Bi orta kullanarak kendini yenileme makine kapatmaya adımdır. O zaman, D2 Bi orta tamamlanmaktadır sinirsel ve Retina soy karşı ayırt iPSCs hücreleri gösterecek bir N2 takviyesi ile. Bu işlem neuroretinal tomurcukları etrafında D28 görünümünü yol açar (Şekil 1 c - 1E). Kendi kendi.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu iletişim kuralı RPE hücrelerinin ve Retina organoids, Retina RGCs ve photoreceptors, xeno ve besleyici özgür koşullarda insan pluripotent kök hücrelerden içeren üretmek nasıl açıklar. Burada sunulan uyumlu iyi üretim uygulaması (GMP) süreci, ekili yöntemi ile retina hücreleri IPSC kaynaklı büyük bir üretim RPE hücrelerinin, RGCs ve photoreceptors kök hücre tabanlı terapiler ve ilaç geliştirilmesi için izin verir. keşif için Retina Dejeneratif hastalıkları tedavi gelecekte yaklaşıyor. Dondurma bütün Retina organoids ve.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Sacha Reichman, Olivier Goureau ve José-Alain Sahel mucitler Retina hücreleri üretimi için insan pluripotent kök hücre ile ilgili patent bekleyen yanıyor.
Teşekkürler
Yazarlar kendi giriş için Goureau'nın ekibinin sırasında belgili tanımlık yöntem tanımlamak burada ve G. Gagliardi ve M. Garita up kendi eleştirel okuma için teşekkür etmek istiyorum. Bu eser ANR gelen hibe tarafından desteklenmiştir (GPiPS: ANR-2010-RFCS005; SightREPAIR: ANR-16-CE17-008-02), Retina Fransa Derneği ve teknoloji transferi şirket SATT Lutech. Ayrıca Investissements d'Avenir programı (ANR-11-IDEX-0004-02) içinde ANR tarafından desteklenen LABEX LIFESENSES (ANR-10-LABX-65) çerçevesinde gerçekleştirildi.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Vitronektin (VTN-N) Rekombinant İnsan Proteini, Kesilmiş | ThermoFisher Scientific | A14700 | Kaplama |
| CTS Vitronektin (VTN-N) Rekombinant İnsan Proteini, Kesilmiş | ThermoFisher Scientific | A27940 | Kaplama |
| Esansiyel 8 Orta | ThermoFisher Scientific | A1517001 | Orta |
| Boy Esansiyel 6 Orta | ThermoFisher Scientific | A1516401 | orta |
| boy CTS (Hücre Tedavi Sistemleri) N-2 takviyesi | ThermoFisher Scientific | A1370701 | takviyesi CTS |
| N-2 takviyesi (100X) | ThermoFisher Scientific | 17502048 | takviyesi |
| B-27 takviyesi (50X), serum içermeyen | ThermoFisher Scientific | 17504044 | takviyesi |
| CTS B-27 takviyesi, XenoFree | ThermoFisher Scientific | A1486701 | ek CTS |
| DMEM/F-12 | ThermoFisher Scientific | 11320074 | ortamı |
| MEM Esansiyel Olmayan Amino Asit Çözeltisi (100X) | ThermoFisher Scientific | 11140035 | takviyesi |
| Penisilin-Streptomisin (10.000 U/mL) | ThermoFisher Scientific | 15140122 | antibiyotik |
| CellStart CTS | ThermoFisher Bilimsel | A1014201 | Matrisi CTS |
| Geltrex hESC Nitelikli, Kullanıma Hazır, Azaltılmış Büyüme Faktörü Bazal Membran Matrisi | ThermoFisher Scientific | A1569601 | Matrix |
| Nazik Hücre Ayrışması Reaktifi | Kök Hücre Teknolojileri | 7174 | ayrışma çözümü |
| Cryostem Dondurma Ortamı | clinisciences | 05-710-1D | Kriyoprezervasyon ortamı |
| Fibroblast büyüme faktörü 2 (FGF2) | Preprotech | 100-18B | FGF2 |
| Fibroblast büyüme faktörü 2 (FGF2) hayvansız | Preprotech | AF-100-18B | FGF2 Xeno içermeyen |
| AGANI iğnesi 23G | Terumo | AN*2332R1 | İğne |
| Matarası 25 cm² Doku Kültürü Uygulanmış | Falcon | 353109 | T-25 cm² |
| 24 oyuklu plaka Doku Kültürü Tedavi Edilmiş | Costar | 3526 | 24 oyuklu plaka |
| 6 oyuklu plaka Doku Kültürü Tedavi Edilmiş | Costar | 3516 | 6 oyuklu plaka |
Kaynaklar
- Zhao, C., Wang, Q., Temple, S. Stem cell therapies for retinal diseases: recapitulating development to replace degenerated cells. Development. 144, 1368-1381 (2017).
- Dalkara, D., Goureau, O., Marazova, K., Sahel, J. -A. Let There Be Light: Gene and Cell Th....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
Daha fazla makale keşfet
