Method Article

Hepatosellüler karsinom Vivo içinde geliştirilmesi üzerinde mezenkimal kök hücre sayfası potansiyelini keşfetmek

DOI:

10.3791/57805

⸱

September 11th, 2018

 ,  ,  ,  ,  , 
1Stem Cell and Regenerative Medicine Department, King Abdullah International Medical Research Centre, King Abdulaziz Medical City, Ministry of National Guard Health Affairs, 2College of Medicine, Experimental Surgery and Animal Laboratory, King Saud University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada, hücre sayfası teknolojisi kullanarak bir vivo içinde kanser modeli geliştirmek için bir protokol mevcut. Böyle bir model antikanser therapeutics değerlendirme için çok yararlı olabilir.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

İnsan kanseri taklit eden bir in vivo hayvan modeli önemli klinik bilgi sunar çeşitli uygulamalar olabilir. Şu anda kullanılan teknikleri vivo içinde kanser modelleri geliştirilmesi için önemli kısıtlamalar bulunmaktadır. Bu nedenle, bu çalışmada, bir vivo içinde kanser modeli geliştirmek için hücre sayfası teknolojiyi uygulamak için amacımız. Hepatosellüler karsinom (HCC) başarıyla çıplak fareleri HCC hücre satırı hücrelerinden oluşturulan hücre sayfalarını kullanarak geliştirilmiştir. Kanser hücre yaprak hücre içi adezyon ve hücre dışı matriks tarafından kontrollü bir tabakalı yapısı oluşumu aracılığıyla oluşturulur. Bu HCC sac ekimi karaciğer ve bir ay içinde bir tümörü taşıyan hayvan modeli oluşturulması için izin verir. Buna ek olarak, mezenkimal kök hücre (MSC), bu kanser modeli geliştirilmesinde rol araştırıldı. HCC hücre satırı sayfa ek olarak başka bir iki hücre sayfaları oluşturulur: HCC hücreleri ve kemik iliği MSCs (BMMSCs) ve bir levha HCC hücrelerin ve göbek kordonu MSCs (UCMSCs) bir sayfası. HCC hücreleri ve MSCs kombinasyon var sayfaları da bir tümörü taşıyan hayvanı üretme yeteneğine sahiptirler. Ancak, MSCs eklenmesiyle oluşan tümör boyutunu küçültür ve bu tümör gelişimi üzerinde olumsuz etkisi kullanılan MSCs kaynağına bağlı olarak değişir. Bu hücre sabıkası belirli MSC alt türlerinden yapılan tümör yönetimi ve denetimi kullanıldığında olabilir gösterir.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

HCC önemli ölçüde kötü prognoz ile ilişkili karaciğer birincil bir kanserdir. Her yıl, neredeyse yarım milyon yeni hastaların karaciğer kanseri hastaları dünya çapında%185'i temsil eden HCC ile tanısı. Hepatocarcinogenesis bir tek biçimli hastalık değildir; değil, ek olarak farklı histopatolojik özellikler ve genetik ve genomik çeşitliliğine sahip hastalıkları topluluğu prognostik sonuçlar1çeşitli olduğunu. Bu nedenle, ana zorluklar HCC için etkili bir tedavi stratejisi geliştirme HCC Biyoloji sınırlı bilgi ve karmaşık bu hastalığı anlamak yardımcı olabilir uygun bir deneysel hayvan modeli eksikliği vardır. İnsan kanseri....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Protokol Kral Suud Üniversitesi'nin etik kurul hayvan bakımı kuralları izler. Cerrahi, anestezi ve hayvanlar üzerinde kullanılan diğer ilaçlar Kral Suud Üniversitesi'nin etik kurul tarafından onaylanır. Tüm deneysel çalışma uygun eğitimli personel tarafından gerçekleştirilir.

1. hücre sac İnşaat

  1. Kültür yemekleri (3.5 cm sıcaklık duyarlı kültür yemekleri) su katılmamış fetal Sığır serum (FBS) ile ceket ve çanak tüm yüzeyi kapsayacak şekilde sağlamak.
    Not: Bu bir monolayer hücrelerinin büyümesini destekler ve hücre toplama engeller bu adımı hücre sayfası dekolmanı için önemlidir.
  2. Yemekleri için % 5 CO2 ve % 9....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Transplante hücre yaprak sıçanlarda tumorigenicity:

Bir ay sonra nakli, tüm transplante hücre çarşaflarda rats karaciğer tümörleri (Şekil 3) geliştirdik. Gelişmiş tümör HepG2, HepG2/BMMSC ve HepG2/UCMSC hücre sayfaları üzerinden ortalama büyüklüğü 4,5 cm, 4 cm ve 2,5 cm, sırasıyla10vardı.

Ka.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Araştırma geniş bir miktarda insan kanserlerin benzer bir yeterli in vivo preklinik hayvan modeli geliştirmek için adamıştır. Şu anda, genetik mühendisliği ve hücre nakli11kanser hayvan modelleri oluşturmak için kullanılan ana yaklaşımlar gerektirir. Genetiği değiştirilmiş hayvan modelleri tanıma ve onaylama hedef genlerin hem uyuşturucu kaynaklı toksisite temel moleküler mekanizmaları anlama iyi araçlardır. Ancak, bu model bazı sınırlamalar ile ilişkilidir; Örneğin, belirli bir gen modif.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ifşa gerek yok.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar deneysel cerrahi ve tıp Koleji, Kral Suud Üniversitesi, hayvan Laboratuvarı personeli onların işbirliği ve destek-hüseyin Almukhayzim ve özellikle Hisham Aloudah için teşekkür etmek istiyorum. Yazarlar ayrıca medya ekibinin King Saud bin Abdul-Aziz Üniversitesi'nde görsel hazırlanması için kabul etmek istiyorum malzeme özellikle Hüseyin bin Ghannam ve Abdulwahab Alsulami.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Reaktifler 
FBS Gibco/Invitrogen10270106
DMEM yüksek glikoz SigmaD5671-500ML
Penisilin / streptomisin ve nbsp;Yaşam Teknolojisi15070063
Steril fizyolojik serum fizyolojikSigma S0817-1GA
İnsan HepG2 hücre hattıATCC, ABDHB-8065
İnsan kemik iliği MSC'leri hücre hattıPromoCell, ABDC-12974
insan göbek kordonu dokusu MSC'leriPromoCell, ABD C-12971
Ketamin% 50Rompun, Bayer
Ksilazin% 2Rompun23076-35-9
Alfadin >   çözüm.Riyad PharmaLBL0816
Tek Kullanımlık:  < / güçlü>
15mL Polipropilen Yüksek Berraklık PP Santrifüj Tüpü Şahin 
3,5 cm steril UpCell kültür kapları, filtre kağıdı (membran) ileSigma174904-1CS
100-1000 & L   Pipet Uçları SigmaCLS4868-1000EA   
Temel Prosedür DrapeThermofisherPMD5293.0
Equipment 
Plus pipet, değişken hacimliEppendorf®   Araştırma®Z683779-1EA
Doku kültürü inkübatörü 37 & derece; C, %5 CO2Herhangi bir marka
Biyolojik güvenlik kabiniHerhangi bir marka
Doku kültürü inkübatörü 20 & °C; C,% 5 CO2< / sub>Herhangi bir marka
Steril cerrahi aletler ve çıplak fareler: 
Forseps
Makas
neşter 
  Naylon Sütür  5-0AccutomeAB-3854SMonofilament, Lancet
1 ml Tüberkülin ŞırıngalarıFisher Scientific14-826-88
Çıplak sıçanlar Charles nehri
352097

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Marra, M., et al. Molecular targets and oxidative stress biomarkers in hepatocellular carcinoma: an overview. Journal of Translational Medicine. 9, 171(2011).
  2. Yamada, K. M., Cukierman, E. Modeling tissue morphogenesis and cancer in 3D. Cell.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Mesenchymal Stem CellCell Sheet TechnologyHepatocellular CarcinomaNude Rat ModelTumor DevelopmentBone Marrow MSCsUmbilical Cord MSCsCell Sheet TransplantationHepG2 Cancer CellsTemperature Responsive Dishes

Related Articles