MDS tanı morfolojik ölçüt veya bilgilendirici sitogenetik yokluğunda zordur. MFC MDS tanı sürecinin rafine yardımcı olabilir. Klinik uygulamalar için faydalı olmak için MFC analiz parametreleri üzerinde yeterli özgüllük ve duyarlılık ile esas almalıdır ve veri arasında farklı operatör tekrarlanabilir olmalıdır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Veritabanı güdümlü akışı-sitometresi kemik iliği Myeloid hücre olgunlaşma değerlendirilmesi için
Bu makalede
Özet
Özet
Fransızca sitometresi Derneği (AFC) içinde başlatılan bir çalışma grubu miyeloid hastalık tanı Fransa multiparameter akış sitometresi (MFC) uygulama uyum amacıyla geliştirilmiştir. Burada sunulan protokolü üzerinde anlaşılan ve Eylül 2013 ve Kasım 2015 yılları arasında uygulanan altı Fransız tanı Laboratuarı (Üniversite Hastaneleri Saint-Etienne, Grenoble, Clermont-Ferrand, Nice ve Lille ve Institut Paoli-Calmettes oldu Marsilya) ve kemik iliği örnek hazırlama ve veri toplama standardizasyon izin verdi. Üç olgunlaşma veritabanı nötrofil, Monositik, ve erythroid soy "sağlıklı" donör bireyler (bireyler hematopoetik hastalık herhangi bir kanıt olmadan) kemik iliği ile geliştirilmiştir. Analiz sağlam bir yöntem her miyeloid lineage için rutin tanı kullanım için uygulanabilir olmalıdır. Yeni olgu aynı şekilde analiz ve her zamanki veritabanlarının karşı karşılaştırıldığında. Böylece, nicel ve nitel fenotipik anormallikler tespit edilmesi ve bu normal kemik iliği örnekleri verilerle karşılaştırıldığında 2SD yukarıda gösterge patolojisi düşünülmelidir. Daha yüksek değişkenlik Hibridoma teknolojilerini temel alan ve şu anda klinik tanıda kullanılan yöntemleri ile elde edilen monoklonal antikor kullanılarak elde veriler arasında büyük kısıtlamadır. Alınan veri teknik doğrulama ölçütlerini ayar MFC yardımcı programı için MDS diagnostics artırmanıza yardımcı olabilir. Bu kriterler kurulması bir veritabanıyla analiz gerektirir. Veri Analizi araştırmacı öznellik azalma bu yöntemin önemli bir avantajdır.
Giriş
Fenotipik işaretleri myeloid hücrelerin MDS başlama ve ilerleme sırasında meydana gelen displastik değişiklikler için belirli yokluğunda, olgunlaşma yolları (değiştirilmiş ifade değerlendirmesine dayanarak son yıllarda yeni bir yaklaşım önerilmiştir myeloid antijenleri olgun myeloid hücrelerin üretimi sırasında) veya kemik iliği (BM) içinde farklı hücre türleri anormal dağılımı bölmeleri1,2hücre.
Bu makale myelodisplastik sendrom (MDS) veya diğer myeloid hematolojik hastalıklar ile ilgili BM myeloid hücre bölmeleri displastik değişiklikleri algılamak için MFC standart uygulanması iç....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Aşağıda listelenen iletişim kuralı "Comité de koruma des Personnes tarafından" (bağımsız Etik Komitesi) onaylı Sud Est 1 Üniversite Hastanesi Saint-Etienne, Fransa'dan.
1. sitometresi ayarları
Not: Uygun olarak EuroFlow yordam "EuroFlow standart işletim Protokolü (SOP) araç kurulum ve tazminat (https://www.euroflow.org/usr/pub/protocols.php). Fransa akışı öneriler göre sitometresi ayarları yapıldı
- Aylık araç kurulum
- Sitometresi üzerinde açın. Tüm sıvı seviyeleri uygun ve açık Diva 6.1.3 olduğundan emin olun. Akışkanlar başlatmasını gerçekleştirme: menü çubuğunda seçin ' sit....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
K-EDTA antikoagülan hasat 54 BM örnekleri çalışmaya dahil. MFC veri yokluğunda hastalar hakkında herhangi bir bilgi, analiz edildi. Retrospektif çalışma BM örnekleri (5 erkek ve 47.4 [35-48] 2 kadın bir Medyan yaş ile hematopoetik hastalığı (8 ve 57,9 [35-72] bir Medyan yaş ile 3 erkek) kanıtı yok ile 11 kişi ve 36 olgu çeşitli ile 7 sağlıklı bağışçılardan olduğunu gösterdi patolojik koşullar: 1 durumda anemi ve düşük kreatinin düzeyi, anemi ve yüksek kreatinin düzeyi, inflamasyon, anemi.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
BM aspiratı kalitesini final sonuçlarına etkisi olabilir. BM aspiratı hemodilution hücrelerin CSF'den olgunlaşma olmaması nedeniyle, farklı evrelerinde veya öncül hücrelerin dağıtım deforme. Muhtemelen bir toplu yöntemi lysing istihdam hemodilution akış sitometrik analizlerde için BM boğulmadan normalleştirme yardımcı olabilir. Ayrıca, BM miyeloid displazi değerlendirilmesi için kritik adımlar akış sitometresi tarafından işleme ve boyama örnek, veri toplama ve yorumu2,.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar onlar rakip hiçbir mali çıkarları var bildirin. Akış Sitometresi bölümü, Saint-Etienne Üniversitesi Hastanesi Hematoloji Laboratuvarı EuroFlow Konsorsiyumu bir üyesidir.
Teşekkürler
Bu çalışmada kullanılan antikor BD Biosciences tarafından temin edilmiştir. Yazarlar kendi meslektaşı Dr Pascale Flandrin-Gresta, düşük moleküler biyoloji bölümü, Hematoloji Laboratuvarı, Üniversitesi Hastanesi Saint-Etienne, ikinci NGS verilerin yorumlanması için uzmanlık sağlayan Fransa, teşekkür etmek istiyorum MDS durumda. Yazarlar için klinisyen hematolog ve hastalar ve sağlıklı bağış bu çalışmaya katılmak onların anlaşma için ilgi ve bu çalışma katılımı için müteşekkiriz. Yazarlar ayrıca "Les Amis de Rémi" Vakfı yayını için finansal destek için teşekkür etmek istiyorum.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| BD FACSCanto II akış sitometresi | BD Biosciences, CA, ABD | SN: | 3 lazer, 4-2-2 konfigürasyonu, Filtreler ve ayna detayları: https://www.bdbiosciences.com/documents/BD_FACSCanto_II_FilterGuide.pdf |
| Awel C48-R Santrifüj | AWEL Industries, FR | SN: 910120016; model numarası: 320002001 | düşük hızlı santrifüj; kapasite 60 FACS tüp |
| 10 ve mikro pipetler; L ve 200 & mikro; L | |||
| Pasteur pipetleri | |||
| 15 mL Falcon tüpleri | |||
| FACS | |||
| Fare Anti-İnsan HLA-DR | BD Biosciences, CA, ABD | için | klon L243 Fare BALB/c IgG2a, & kappa; Florokrom Horizon V450 (Ex max 404 nm/ Em max 448 nm) |
| Mouse Anti-Human CD45 | BD Biosciences, CA, ABD | 560777 | klonu HI30 Fare IgG1, κ Florokrom Horizon V500 (Ex max 415 nm/ Em max 500 nm) |
| Mouse Anti-Human CD16 | BD Biosciences, CA, ABD | 656146 | klon CLB/fcGran1 Fare BALB/c IgG2a, κ Florokrom FITC (Ex max 494 nm/ Em max 520 nm) |
| Fare Anti-İnsan CD13 | BD Biosciences, CA, ABD | 347406 | klonu L138 Fare BALB/c X C57BL/6 IgG1, κ Florokrom PE (Ex max 496 nm/ Em max 578 nm) |
| Mouse Anti-Human CD34 | BD Biosciences, CA, ABD | 347222 | klonu 8G12 Fare BALB/c IgG1, κ Florokrom PerCP-Cy5.5 (Ex max 482 nm/ Em max 678 nm) |
| Fare Anti-İnsan CD117 | BD Biosciences, CA, ABD | 339217 | klonu 104D2 Fare BALB/c IgG1 Florokrom PE-Cy7 (Ex max 496 nm/ Em max 785 nm) |
| Fare Anti-İnsan CD11b | BD Biyolojik Bilimler, CA, ABD | 333143 | klonu D12 Fare BALB/c IgG2a, κ D12, Florokrom APC (Ex max 650 nm/ Em max 660nm |
| Fare Anti-İnsan CD10 | BD Biosciences, CA, ABD | 646783 | klonu HI10A Fare BALB/c IgG1, κ Florokrom APC-H7 (Ex max 496 nm/ Em max 785nm) |
| Fare Anti-İnsan CD35 | BD Biosciences, CA, ABD | 555452 | klonu E11 Fare IgG1, κ Florokrom FITC (Ex max 494 nm/ Em max 520 nm) |
| Fare Anti-İnsan CD64 | BD Biosciences, CA, ABD | 644385 | klonu 10.1 Fare BALB/c IgG1, κ Florokrom PE (Ex max 496 nm/ Em max 578 nm) |
| Fare Anti-İnsan CD300e | Immunostep | IREM2A-T100 | klonu UP-H2 Fare BALB/c IgG1, k Florokrom APC (Ex max 496 nm/ Em max 578 nm) |
| Fare Anti-İnsan CD14 | BD Biyolojik Bilimler, CA, ABD | 641394 | klon MoP9 Fare BALB/c IgG2b, κ Florokrom APC-H7 (Ex max 496 nm/ Em max 785nm) |
| Fare Anti-İnsan CD36 | BD Biosciences, CA, ABD | 656151 | klonu CLB-IVC7 Fare IgG1, κ Florokrom FITC (Ex max 494 nm/ Em max 520 nm) |
| Mouse Anti-Human CD105 | BD Biosciences, CA, ABD | 560839 | klonu 266 Fare BALB/c IgG1, κ Florokrom PE (Ex max 496 nm/ Em max 578 nm) |
| Fare Anti-İnsan CD33 | 345800 | klonu P67.6 Mouse BALB/c IgG1, κ Florokrom APC (Ex max 496 nm/ Em max 578 nm) | |
| Mouse Anti-Human CD71 | BD Biosciences, CA, ABD | 655408 | klonu M-A712 Fare BALB/c IgG2a, κ Florokrom APC-H7 (Ex max 496 nm/ Em max 785nm) |
| Lizasyon Çözeltisi 10x Konsantre (IVD) | BD Biosciences, CA, ABD | 349202 | |
| FACSFlow Sheath Sıvısı | BD Biosciences, CA, ABD | 342003 | |
| FACSDiva CS& T IVD boncukları | BD Biosciences, CA, ABD | 656046 | |
| GÖKKUŞAĞI KALIBRASYON PARÇACIKLARI, 8 TEPE | Cytognos, Salamanca, İspanya | SPH-RCP-30-5A | çok EAB01, EAC01, EAD05, EAE01, EAF01, EAG01, EAH01, EAI01, EAJ01, EAK01 |
| Kompanzasyon Parçacıkları Çok Renkli CompBeads (CE / IVD) | BD Biosciences, CA, ABD | Referans #51-90-9001229 + #51-90-9001291 | |
| Diva yazılım sürümleri 6.1.2 ve 6.1.3 | BD Biosciences, CA, ABD | ||
| Fosfat tamponlu tuzlu su tabletleri | R& D Systems, Minneapolis, ABD | 5564 | |
| Sığır serum albümini ( BSA) | Sigma-Aldrich, Fransa | A9647 | |
| Sodyum azid% 99 | Sigma-Aldrich, Fransa | 199931 | |
| Infinicyt yazılım sürümü 1.8.0.e | Cytognos, Salamanca, İspanya |
Kaynaklar
- Orfao, A., Ortuño, F., de Santiago, M., Lopez, A., San Miguel, J. Immunophenotyping of Acute Leukemias and Myelodysplastic Syndromes. Cytometry Part A. 58, 62-71 (2004).
- Porwit, A., et al. Revisiting guidelines for integration of flow cytometry results in the WHO classification of Myelodysplastic Syndromes - proposal from the International/European LeukemiaNet Working Group for Flow....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
