3 boyutlu (3D)-yüksek işlem hacmi zebra balığı diziliyor embriyo için şablon basılı

Tianyu Yu; Yue Jiang; Sijie Lin

doi:10.3791/57892

Yöntem makalesi

3 boyutlu (3D)-yüksek işlem hacmi zebra balığı diziliyor embriyo için şablon basılı

DOI:

10.3791/57892

⸱

1 Haziran 2018

Tianyu Yu¹^,² , Yue Jiang¹ , Sijie Lin¹

¹College of Environmental Science and Engineering, State Key Laboratory of Pollution Control and Resource Reuse, Tongji University, ²UNEP-Tongji Institute of Environment for Sustainable Development, Tongji University

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada, tasarım ve yüksek işlem hacmi zebra balığı embriyo bir 96-şey plaka diziliyor için böyle şablon kullanımı ayrıntılı yordam tarafından ardından arraying bir zebra balığı embriyo imal için bir protokol mevcut.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Zebra balığı genel olarak tanınan tatlı su organizma gelişim biyolojisi, Çevresel Toksikoloji ve insan hastalığı sık kullanılan ilgili araştırma alanları var. Sayesinde benzersiz özellikleri büyük verimlilik, vb, embriyo kalınlığı, hızlı ve eş zamanlı geliştirme de dahil olmak üzere, zebra balığı embriyolar genellikle büyük ölçekli toksisite değerlendirilmesi kimyasal maddeler için kullanılır ve uyuşturucu/tarama bileşik. Tipik prosedürü yetişkin zebra balığı yumurtlama, embriyo seçimi ve embriyoların çok iyi kalıplara diziliyor içerir. Oradan, embriyo pozlama ve kimyasal toksisitesi tabi olan veya uyuşturucu/bileşikler etkinliği nispeten hızlı bir şekilde bağlı fenotipik gözlemler olarak değerlendirilebilir. Bu işlemler arasında diziliyor embriyo üretilen iş düzeyi sınırlar en zaman alıcı ve emek yoğun adımlardan biridir. Bu protokol için 3D baskılı arraying şablon kullanımı ile birleştiğinde yapar işleme kadar zahmetli Bu adım hızlandırmak için vakum yenilikçi bir yaklaşım sunuyoruz. İletişim kuralı burada genel tasarımı arraying şablon, detaylı deneysel kurulum ve temsilcisi sonuçlarına göre takip adım adım yordamı açıklar. Uygulandığında, bu yaklaşım zebra balığı embriyo konular test olarak kullanarak araştırma uygulamaları çeşitli yararlı ispatlamak zorundadır.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Popüler bir model organizma olarak, zebra balığı¹^,²^,³^,⁴tıp ve toksikoloji alanlarında yaygın olarak kullanılmaktadır. Vitro platformları için karşılaştırıldığında, zebra balığı teklif daha fazla biyolojik karmaşıklığı bir ya da iki hücre tipleri değil sunabilir. Bütün bir organizma modeli, zebra balığı'nın büyük verimlilik, hızlı ve eşzamanlı embriyonik gelişim ve yüksek organ olmasının yanı sıra transparans büyük ölçekli toksisite veya uyuşturucu/bileşik⁵eleme için kullanılmak üzere bu modeli benzersiz avant....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. tasarım ve üretim şablon diziliyor zebra balığı embriyolar

Bir 12 tarafından 8 ile standart bir 96-şey plaka 96-şey düzen arraying şablonu tasarlayın. Boyutları listelenen Şekil 1A ' üst embriyo tuzak odası için kullanım (Ayrıca bkz: ek dosyası).
1. Şekil 1B ve 1 D tuzak için de gösterilen boyutları kullanın.
2. Boyutlar Şekil 1 c içinde alt vakum odası için kullanın.
3. Şekil 1B adımında havada için boyutları kullanın / çıkış.
3D yazıcı (0,1 mm hassasiyetle....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Şekil 3 tipik bir 3D baskılı arraying şablonunu gösterir. Bu şablon ışığa duyarlı reçine hammadde olarak kullanır ve bir 3D printerlere harcama maddeler tarafından yapıldı; siyah boya tabakası embriyo rengini daha iyi bir kontrast sağlamak için uygulandı. 96 wells (12 tarafından 8) konumunu ile standart bir 96-şey plaka uyacak şekilde tasarlanmıştır. Benzer şekilde, 384 (24 den 16) iyi şablon da tasarlanabilir ve aynı yöntemi kullanarak fabrikasyon. Ters odas.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Zebra balığı embriyo diziliyor 3D baskılı şablonu başarılı uygulanması için yakın ilgi gerektiren iki kritik adımlarda bu protokolü vardır.

Tasarımı arraying şablonu, en önemli faktör de tuzaktır. Yapar emin tek embriyo her kuyuda sıkışmış, bir tane çapı ve tuzak kuyunun derinliği ve ile delik çapi yakın dikkat etmelidir. Önerilen çapı içinde (koryon dahil) tipik bir embriyo çapının 1,5-2 katı olduğunu. İyi tuzak derinliği içinde 2 kez (koryon dahil) tipik bir embriyo çapını embriyo aynı iyi i.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar bir patent açıklanan 3D baskılı şablonundaki doldurdu.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu eser "1000plan Gençlik" programı, başlangıç fonlar Kent Üniversitesi ve NSFC Grant # 21607115 ve 21777116 (LIN) tarafından desteklenmiştir.

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Zebra Balığı Tesisi Shanghai	Haisheng Biotech Co., Ltd.	Z-A-S5
Çiftleşme kutusu	Shanghai Haisheng Biotech Co., Ltd.
Yıkama Şişesi, 500 ml	Sangon Biotech	F505001-0001
Sodyum klorür	Vetec	V900058-500G
Potasyum Klorür	Sinopharm Kimyasal Reaktif Co, Ltd	10016318
Kalsiyum klorür	Sinopharm Kimyasal Reaktif Co, Ltd	20011160
Sodyum bikarbonat ve nbsp;	Vetec	v900182-500G
Metilen Mavisi Hidrat	TCI	M0501
Hidroklorik asit	Sinopharm Kimyasal Reaktif Co, Ltd	10011008
Deniz	Tuzları Anında Okyanus	SS15-10
Pipetleyici	Fisherbrand	13-675M
Kontrollü Damla Pastör Pipeti	Fisherbrand	13-678-30
Mikroskop	OLYMPUS	SZ61
Biyokimyasal inkübatör	Şangay Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd.	LRH-250
3D yazıcı	UnionTech	Lite600
Işığa duyarlı reçine	UnionTech	UTR9000
Vakum pompası	Shanghai Yukang Scientific Instrument Co., Ltd.	SHB-IIIA
Yapıştırıcı PCR Plaka Contaları	Solarbio	YA0245
96 kuyulu plaka	Costar	3599
Çok 8 kanallı pipet 30 - 300 μ l	Eppendorf	3122000.051
Sıkıştırılmış Gaz Silgi	Şangay Zhantu Chemical Co., Ltd.	ST1005
DI Su	Thermo	GenPure Pro UV/UF
Kurutma fırını	Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd.	BPG-9106A
Sistem suyu			tesisten su çıkışı s su sistemi
Yumurta suyu			Seyreltik 60mg " Anında Okyanus" deniz tuzları ve 1 L DI suda 0.25 mg/L metilen mavisi
Holtfreter' s çözeltisi			7.0 g Sodyum klorür (NaCl), 0.4 g Sodyum bikarbonat (NaHCO_{3< / sub>), 0.1 g Potasyum Klorür (KCl), 0.235 g Kalsiyum klorür (CaCl_{2< / sub>.2H<>sub2< / sub>O) 1.9 L DI suda çözün. HCl kullanarak pH'ı 7'ye ayarlayın ve Di su kullanarak hacmi 2 L'ye ayarlayın}}

ile

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Howe, K., et al. The zebrafish reference genome sequence and its relationship to the human genome. Nature. 496 (7446), 498-503 (2013).
Leslie, M. Zebrafish larvae could help to personalize cancer treatments. Science. 357 (6353), 745-745 (2017).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

3D Printed Template High Throughput Screening Vacuum Manipulation Embryo Spawning Embryo Selection 96 Well Plate Embryo Trapping Embryo Transfer Template Sterilization

3 boyutlu (3D)-yüksek işlem hacmi zebra balığı diziliyor embriyo için şablon basılı

Bu makalede

Özet

Özet

Giriş

Protokol

Sonuçlar

Tartışma

Açıklamalar

Teşekkürler

Malzemeler

Kaynaklar

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

İlgili makaleler