Burada kontrolsüz farelerde sık örnek koleksiyon için bir kuyruk ucu kan örnekleme iletişim kuralı mevcut. Bu yöntem, pulsatil luteinizan hormon salgısı değerlendirilmesi desenleri yararlıdır ve dolaşımdaki diğer faktörleri analiz için adapte.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Pulsatil luteinizan hormon salgısı değerlendirilmesi için kuyruk ucu kan örnekleme farelerde sık
Bu makalede
Özet
Özet
Birçok endokrin sistemlerinde, dolaşımdaki faktörler veya hormonlar sürekli serbest bırakılmaz, ancak yanıt releasing faktör olarak ayrık bir darbe olarak salgılanan. Tek-noktaya örnekleme önlemler tamamen pulsatil hormonlarının normal fizyolojik koşullar altında veya bozukluk koşulları sırasında salgı desen biyolojik önemini anlamak yetersizdir. Luteinizan hormon (LH) anterior hipofiz gonadotrope hücreleri tarafından sentezlenen ve sık sık kan örnekleri topluluğu için nabız değerlendirme gerektiren pulsatil desen salgılanan. İçin bir teknik gelişme sık düşük hacimli örnek koleksiyon, başlangıçta Steyn ve meslektaşları tarafından açıklanan ve bu kadar yüksek-duyarlı LH tahlil gelişimi nedeniyle son zamanlarda, farelerde mümkün olmamıştır. 1 burada tarif biz sık periferik kan örnek koleksiyonundan pulsatil LH salgılanmasını algılamaya yeterli işleme iklimlendirme ile fareler için bir iletişim kuralı. Geçerli protokol LH sağlam ve sürekli darbeleri değerlendirilmesi üzerinde birden fazla saat izin veren bir genişletilmiş iklimlendirme dönemi ayrıntıları. Bu iletişim kuralı, kuyruk ucu kırpılır ve kan el bir pipet kullanarak kuyruk toplanır. Gonadectomized farelerde pulsatil LH değerlendirmesi için seri örneklerdir önemlisi, her 5-6 min 90-180 dakika süreyle toplanan kan toplanması ve LH sağlam darbeleri ölçülmesi yeterli işleme verilen uyanık, özgürce davranmaya farelerde başarılı İklimlendirme ve çevre stresler en aza indirmek için çaba. Yeterli iklimlendirme kan toplama önce 4-5 hafta içinde elde edilebilir. Bu iletişim kuralı tam kan örnekleri pulsatil LH salgılanmasını desenleri değerlendirmesi Mouse, nöroendokrin araştırma için güçlü bir hayvan modeli birden çok saat üzerinde toplama sağlamak için metodoloji gelişmeler vurgulamaktadır.
Giriş
Erbezi işlevi memelilerde gonadotropin salgısını, luteinizan hormon (LH) ve folikül uyarıcı hormon, hipofiz bezi üzerine bağlıdır. Gonadotropins yanıt-e doğru hipotalamik gonadotropin - releasing hormon (GnRH) salgılanmasını pulsatil veya akım desende salgılanan. Sentez ve LH ve FSH salgılanmasını molekülleri hipotalamik GnRH, gonad steroid hormonlar ve aktivin-inhibin-follistatin sisteminin yanı sıra çok sayıda dahil olmak üzere çeşitli endokrin, parakrin ve otokrin eylem ile düzenlenmektedir stres ve enerji dengesi dahil olmak üzere fizyolojik koşullar. 2
LH pulsatil desen kan yaklaşık üstel eleme tarafından takip ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Burada açıklanan yöntemi ulusal kurumları sağlık hayvan bakım ve kullanım yönergeleri ile anlaşma ve kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi San Diego Kaliforniya Üniversitesi tarafından yetkili olmamıştır.
1. İklimlendirme işleme için
- İşlemi ele
- Yer fare Biyogüvenlik kabini kafesleri. Birinci fare kafesi ve Biyogüvenlik kabini içinde (Örneğin bir temiz kafes kapak) uygun bir yüzey üzerinde yer kaldırın.
- Yavaşça çalışma yüzeyinin üzerinde fareyi bir elin başparmak ve işaret parmağı ile kuyruk tabanı tutarak dizginlemek. O zaman, diğer elin başparmak ve işaret parmağı ile kuyruk ucuna tabanından kuyru....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Temsilcisi LH darbe 4 fareler desenlerini Şekil 1 ' de (veri Yang vd., 2017 yeniden basıldı) gösterilir. LH bir akut psiko-sosyal stres sınama yanıt belirlemek için sık sık kan örneklerinde ölçüldü. Yetişkin kadın C57/Bl6 fareler Ovariektomili ve bu iletişim kuralı için sık sık kan toplama içinde ayrıntılı olarak ele alınır. Kan örnekleri ilk 90 dk LH pulsatil salgı bir ön arıtma temel kurmak için tüm hayvanlar için toplanmıştır. İkinci 90 dk örnekle.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Burada tarif biz pulsatil LH salgılanmasını farelerde değerlendirilmesi için tam kan kuyruk ucu örnekleri sık sık kan toplanması için bir iletişim kuralı. Bu iletişim kuralı örnekleri akut değişiklikler psikososyal stres maruz takip pulsatil LH salgılanmasını algılanması için toplama sağlar ve LH darbeleri altında diğer akut veya kronik manipülasyonlar değerlendirilmesi için uygundur.
Yükleme-boşaltma kritik bileşenidir LH bakliyat güvenilir ve sağlam profilleri elde etmek için bu protokolü ik.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa gerek yok.
Teşekkürler
Yazarlar Drs. Jennifer Yang ve Alexander (Sasha) Kauffman yanı sıra çok sayıda yararlı ve önemli tartışmalar bu tekniği ile teknik destek için teşekkür ederiz. Serum hormon testleri tarafından Yang vd., 2017 üreme Ligand tahlil ve analiz çekirdek, Eunice Kennedy Shriver NICHD/NIH (NCTRI) Grant P50-HD28934 tarafından desteklenen araştırma için Virginia Üniversitesi Merkezi'nde yapıldı.
Araştırma Destek kaynakları: R01 NICHD 86100 (KMB), RBM T32 NICHD 007203 tarafından desteklenen.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Biosaftey dolap | Lab Products Inc | L / FB | |
| Sığır serum albümini | Sigma | A5403 | |
| Tween-20 | Sigma | P2287 | |
| KCl | Sigma | P9333 | |
| NaCl | Sigma | S7653 | |
| Na2HPO4 (susuz) | Sigma | S7907 | |
| KH2PO4 | Sigma | P5655 | |
| Ultra saf su | Millipore | Arıtılmış ve filtrelenmiş su | |
| Süpürge Kemirgen Kısıtlama Cihazı | Harvard Aparatı | 52-0460 | Kan alımı için gerekli değildir, ancak temsili verilerin toplanmasında kullanılmıştır. |
| DynPeak | n/a | n/a | http://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0039001 |
Kaynaklar
- Steyn, F. J., et al. Development of a methodology for and assessment of pulsatile luteinizing hormone secretion in juvenile and adult male mice. Endocrinology. 154 (12), 4939-4945 (2013).
- McArdle, C. A., Roberson, M. S. Knobil and Neill's Physio....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
