Biz Optik cımbız hafif levha mikroskop ve hücre mekaniği Drosophila embriyo boncuklar olmadan soruşturma için uygulanması için birleştiğinde bir kurulumu mevcut.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Hücre mekanik ile boncuk-Alerjik Optik cımbız Drosophila embriyo sondalama
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Morfogenez genetik desenlendirme ve sağlam hücre ve dokuların şekillendirmek için mekanik kuvvetleri arasındaki koordinasyon gerektirir. Bu nedenle, morfogenetik süreçleri anlamak için bir meydan okuma doğrudan hücresel kuvvetler ve mekanik özellikleri içinde vivo embriyogenez sırasında ölçmek etmektir. Burada, bir Kur Optik cımbız doğrudan kuvvetleri erken Drosophila embriyo hücre-hücre kişiler üzerinde uygulamak için izin verir, bir hafif levha mikroskop birleştiğinde mevcut görüntüleme birkaç kare / saniye hızında iken. Bu teknik genellikle orta sonda üzerinde optik kuvvetleri sarf kullanılan embriyo içine boncuk enjeksiyon gerektirmeyen avantajı vardır. Biz adım adım Kur uygulanması ayrıntı ve deneylerden mekanik bilgi ayıklamak için araçlar önermek. Hücre-hücre kişiler gerçek zamanlı talebiyle izleyerek, bir gerilim ölçümleri gerçekleştirmek ve hücre kişilerinizin Reolojisi araştırmak.
Giriş
Embriyonik gelişim sırasında hücre ve dokulara gelecekteki hayvan şekli deforme son derece tekrarlanabilir bir süreçtir. Bu tür deformasyonlar güçler hücre düzey1,2de etkin nesil gerektirecek şekilde gösterilmiştir. Morfogenetik işlemleri sırasında hücre ve dokuların onların şekli Dönüştür anlamak için o bu nedenle hücreleri ilgili mekanik özelliği değerlendirmek ve doku içinde güçler sırasında işlem3,4 ölçmek için anahtarıdır . Epitel katmanlarda, özellikle Drosophila, yaygın olarak onların yarı-2D geometri nedeniyle ve onların kolayca idare ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. ayarlama hafif levha mikroskop
- Önceki yayın25kurulumunun açıklamasını bakın.
Not: Kurulum bir dik mikroskop sahne ve yatay düzlemde hafif bir levha üreten bir hafif levha modülü oluşur. 10 X uyarma objektif lens hafif levha cam küvet (Şekil 4) yönlendirir. Algılama objektif lens verimli (aşağıya bakın) tweezing için gerekli olan yüksek NA (1.1), var.
2. ayarlama Optik cımbız yolu
Not: Resim 1 optik kurulum genel düzeninin verir.
- 1070 nm lazer birim yerleştirin ve fiber optik masada bir V-kelepçe mon....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Şekil 5 tuzak sinüsoidal bir hareketi koyarak elde edilen deneysel verileri gösterir. Tuzak bir saptırma arabirimin adıyla 3 ardışık arabirimi pozisyonlar (Şekil 5A)23gösterilen 3 anlık görüntüleri tarafından örneği oluşturur. Kaydedilmiş film bir kymograph (Şekil 5B) oluşturmak için kullanılan ve daha fazla her çerçeve için x yön boyunca bir Gauss kullanılarak altpiksel çözüm.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Optik cımbız mutlak mekanik ölçümler doğrudan gelişmekte olan embriyonik epitel içinde non-invaziv bir şekilde gerçekleştirmek için izin verir. Bu anlamda, invaziv ve göreli ölçüler, manyetik kuvvetler, enjeksiyonları gerektiren sağlamak veya güçlü varsayımlara dayanır kesmesi zorla ve aynı zamanda göreceli sağlayan lazer ablasyon gibi diğer yöntemler üzerinde avantajları sunar ölçümleri.
İletişim kuralı birkaç kritik adımları içerir. İlk olarak, objektif lens renk sapmalarını ve lazer tuzağı .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa gerek yok.
Teşekkürler
Bu eser bir FRM Equipe Grant FRM DEQ20130326509, Agence Nationale de la Recherche ANR-Blanc Grant, Morfor ANR-11-BSV5-0008 (için s.-Tayback) tarafından desteklenmiştir. Fransız Ulusal Araştırma Ajansı (ANR-10-INBS-04-01, «Yatırımlar gelecek için») tarafından desteklenen Fransa-BioImaging altyapı anıyoruz. Biz Brice Detailleur ve Claude Moretti PICSL-FBI altyapı teknik destek için teşekkür ederiz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| İterbiyum Fiber Lazer LP, 10 W, CW | IPG Lazer | YLM-10-LP-SC | kolimatör LP dahil: ışın D = 1.6 mm ve kırmızı kılavuz lazer |
| Ø 1/2" Optik Işın Deklanşörü | Thorlabs | SH05 | |
| Küçük Işın Çaplı Galvanometre Sistemleri | Thorlabs | GVS001 | X deplasmanı için 1, Y deplasmanı için 1 |
| 1D veya 2D Galvo Sistemi Lineer Güç Kaynağı | Thorlabs | GPS011 | galvanometre güç kaynağı |
| 2 lens f = 30 mm | Thorlabs | LB1757-B | röle teleskopu 2 galva |
| Lens f = 200 mm | Thorlabs | LB1945-B | 2.5X teleskop |
| Lensi f = 500 mm | Thorlabs | LB1869-B | 2.5X teleskop |
| Dişli Kafes Çubuk Delikli Dik Açılı Kinematik Eliptik Ayna Montajı | Thorlabs | KCB1E | Periskop |
| Lazer Güvenlik Gözlükleri, Açık Yeşil Lensler, %59 Görünür Işık İletimi, Evrensel Stil | Thorlabs | LG1 | |
| 45&derece; AOI, 50.0 mm Çap, Sıcak Ayna | Edmund Optics | #64-470 | |
| Çoklu Foton Yayıcı HC 750/S | AHF | HC 750/SP | |
| CompactDAQ Şasi | National Instruments | cDAQ-9178 | |
| C Serisi Voltaj Çıkış Modülü | National Instruments | NI-9263 | Analog çıkış modülü |
| C Serisi Voltaj Giriş Modülü | National Instruments | NI-9215 | Analog giriş modülü |
| FluoSpheres Karboksilat Modifiye Mikroküreler, 0.5 & m, kırmızı floresan (580/605), %2 katı | madde ThermoFisher Scientific | F8812 | kalibrasyon boncukları |
| C++ (Qt) ev yapımı optik cımbız yazılımı | Olivier Blanc ve Claire Chard's tarafından geliştirilmiştir. Alternatif çözüm: labview |
Kaynaklar
- Lecuit, T., Lenne, P. -F., Munro, E. Force generation, transmission, and integration during cell and tissue morphogenesis. Annual review of cell and developmental biology. 27 (1), 157-184 (2011).
- Heisenberg, C. -P., Bellaïche, Y. Forces in tissue morphogene....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
