Biz daha fazla vivo içinde kısmi karaciğer gelecekte mühendislik eğitimi için bir önkoşul olarak köstebeğiyle vivo içinde tek karaciğer lob perfüzyon modeli için yeni bir cerrahi teknik kurmak.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Biz daha fazla vivo içinde kısmi karaciğer gelecekte mühendislik eğitimi için bir önkoşul olarak köstebeğiyle vivo içinde tek karaciğer lob perfüzyon modeli için yeni bir cerrahi teknik kurmak.
Organ mühendislik kullanılabilir karaciğer organ yerine ekimi oluşturmak için yeni bir stratejidir. Son zamanlarda, vivo içinde karaciğer mühendislik, repopulation tarafından takip vivo içinde organ decellularization de dahil olmak üzere, umut verici bir yaklaşım ex vivo karaciğer mühendislik üzerinde ortaya çıkmıştır. Ancak, ameliyat sonrası hayatta kalma elde değil. Bu çalışmada vivo içinde karaciğer Mühendislik için bir önkoşul olarak vivo içinde seçime bağlı karaciğer lob perfüzyon sıçanlarda bir roman cerrahi teknik geliştirmektir. Biz sadece sol yan lob aracılığıyla devre yan yol oluşturun. Sonra sol lateral lob heparinized serum periosteum. Deneme 4 grup ile gerçekleştirilir (n = 3 fareler grup başına) farklı perfüzyon 20 dk, 2 h, 3 h ve 4 h hayatta kalma, hem de renk macroscopically görünür bir değişiklik ve kan hücreleri histolojik olarak kararlı yokluğu göre Portal triad ve sinusoids başarılı modeli kurulması için bir göstergesi olarak alınır. Sonra seçici perfüzyon sol yan lob sol yan lob, gerçekten de, soluk sarı kırmızı döndü gözlemlemek. Histolojik değerlendirme, hiçbir kan hücreleri portal ven, merkezi ven ve sinusoids dalında görülebilir. Sol yan lob bloke damarları yeniden açılması sonra kırmızıya döner. 12/12 fareler yordamı bir haftadan fazla hayatta kaldı. Vivo içinde tek karaciğer lob perfüzyon bir haftadan daha uzun yaşam süresi ile cerrahi bir modeli rapor için ilk sırada. Daha önce yayımlanmış rapora aksine, burada sunulan tekniğinin en önemli avantajı bu perfüzyon karaciğer % 70 tüm prosedürü korunur. Bu teknik kurulması vivo içinde kısmi karaciğer mühendislik decellularization ve recellularization de dahil olmak üzere sıçanlarda için bir temel sağlar.
Organ nakli için göstergeler sürekli genişletiyoruz. Buna ek olarak, organ bağışı oranları ve organları genel kalitesini, greft için artan bir talep lider kabul etmediğinizi. Karaciğer nakli bekleyen listesine aday sayısı devam artırmak (Örneğin, Amerika Birleşik Devletleri, 11,340 hastaların 2016 yılında eklenen karşılaştırıldığında 10,636 ile 2015 yılında)1. Önemli çabalara rağmen mevcut organ sayısı klinik ihtiyaçlarını karşılamıyor. Karaciğer hastalığı olaylarının artması nedeniyle, birçok hasta ile son aşama karaciğer hastalıkları die önce bir donör organ nakli bekleme listesinde kullanılabilir duruma gelir. Donör karaciğer nakli için büyük talebi karşılamak için2alternatif yaklaşımlar karaciğer dokusu mühendislik prensipleri etkin olarak davranıyorsunuz kullanarak takip etti. Günümüzde karaciğer mühendislik yeni geliştirilen biyolojik tekniği bu sıkıntısı üstesinden gelebilir.
Karaciğer mühendislik iki adımdan oluşur: bir acellular iskele iskele repopulation tarafından takip, nesil. Bir biyolojik acellular karaciğer iskele elde etmek için explanted karaciğer periosteum ile damar sistemi hücresel malzeme karaciğer kaldırabilirsiniz iyonik veya Nonyonik deterjanlar ile gerçekleştirilir. Çoğu önceki çalışmalarda, bir biyolojik acellular karaciğer iskele perfüzyon karaciğer Sodyum Lauryl Sülfat ve TritonX100 bir kombinasyonu ile sağlanır. Tüm hücreleri hücre dışı matriks yapısını devam edildi, ancak sonuç olarak çıkarıldı. Organ iskele olgun hücreler, hepatosellüler, yanı sıra endotel hücre satırları ve birincil tetkikine veya endotel hücreleri veya mezenkimal kök hücre (MSC) eşzamanlı uygulama olmadan reseeded. Çoğu araştırmacılar odak ex vivo karaciğer mühendislik3,4,5,6,7,8,9,10 11,12,13,14. Ancak, çoğu önceki çalışmalarda sadece küçük parçalar halinde yeniden iskele küpleri farklı heterotopik implantasyon siteleri nakledilen. Bazı çalışmalarda, kısmi yeniden iskele yardımcı bir greft nakledilen. Ancak, maksimum bildirilen yaşam süresi sadece 72 h8,14oldu. Bildiğimiz gibi bir repopulated tam karaciğer nakli orthotopic nakli hakkı henüz gerçekleştirilen veya hakkında yayınlandı. Uzun vadeli işlevi ve mühendislik organ nakli hala onların bebeklik vardır. Bu nedenle, ex vivo karaciğer Mühendislik için alternatif bir yaklaşım gereklidir.
Vivo karaciğer mühendislik hepatik repopulation fizyolojik koşullar altında çalışmaya alternatif temsil edebilir. Vivo karaciğer mühendislik ex vivo karaciğer Dairesi'ne göre avantajları manifold. Vivo yeniden kısmi karaciğer iskele fizyolojik kan perfüzyon uygun sıcaklık, yeterli oksijen, besin ve büyüme faktörleri ex vivo perfüzyon yapay kültür orta ile aksine tabi tutulur. Ayrıca, kalan kısmi normal karaciğer başta olmak üzere uzun süreli sağkalım izin hepatik fonksiyon tutar. Bir implant ex vivo mühendislik karaciğer grefti deneysel hayvan uzun vadeli yaşama, karaciğer fonksiyon8tarafından sürdürülmesi hala yetersiz olduğu için biz sonuçta olmak o vivo içinde kısmi karaciğer engineeringwould öngörülüyor bir ex vivodaha uzun hayatta kalma gözlemleri ile mühendislik karaciğerleri evrimi daha fazla çalışmaya gelecek vaat eden model.
Son zamanlarda, bir araştırma grubu (Pan ve iş arkadaşları), ilk kez bir teknik15mühendislik vivo içinde karaciğer sundu. Onlar sağ inferior karaciğer lob anatomik ve teknik sorunlara rağmen yaşayan sıçanlarda izole perfüzyon elde etti. Vivo repopulation bir sıçan birincil hepatosit hücre satırı kullanarak ilk intraoperatif sonuçlarını rapor ettiler. Ancak, Pan ve ark. vivo içinde cerrahi perfüzyon modeli dezavantajları vardır. Onlar tek karaciğer lob perfüzyon içinde rats tamamen engelleme portal ven ve hayvan için ciddi zarar verebilir inferior vena kava pahasına elde etti. Deneysel fareler intraoperatif gözlem zaman sadece 6 saat sonra kurban edildi. Bu nedenle, in vivo karaciğer lob perfüzyon tekniği daha da ameliyat sonrası hayatta kalma ulaşmak için iyileştirilmesi gerektiğini.
Vivo karaciğer lob perfüzyon, hepatik anatomi sıçan16, hemodinamik fareler17ve karaciğer Biyomühendislik izleme için portal ven cannulation teknik önceki çalışmalarda temel için bir roman hayatta kalma model geliştirdik 18 , 19. yordamı için önemli adımlar Şekil 1A - 1Egösterilmiştir.
Bu tekniği bu deneysel vivo içinde perfüzyon modeli temel araştırma kısmi organ tedavi için uyuşturucu ile infüzyon, in vivo decellularization tarafından organ hastalıkları için kimyasal bir rezeksiyon olarak kullanmak isteyenler için uygundur (Örneğin , karaciğer kanseri), in vivo hücre kültüründe ex vivo iki boyutlu ve üç boyutlu karşılaştırma decellularized matris hücre kültür sistemleri20,21,22,23 , 24 , 25 , 26ve in vivo mühendislik decellularization ve repopulation tarafından karaciğer.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Konut ve tüm yordamları yürütülen Alman hayvan refah teşri uygun olarak... Tüm gazlı bez, kaplama giysileri ve cerrahi aletler autoclaved ve operasyon öncesi hazırlanmış. Tüm yordamları Steril koşullar altında yapılmaktadır.
1. cerrahi işlem için fareyi hazırlanması
2. laparotomi farenin
3. sol yan lob içinde bir Bypass geçit kurulması
4. fizyolojik reperfüzyon sol yan lob
5. karın duvarı kapatılması
6. ameliyat sonrası tedavi farenin
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
On iki erkek (Yaş 12 - 13 hafta) Lewis fareler seçici karaciğer lob perfüzyon etkisini değerlendirmek için kullanıldı. Deneme dört gruplar halinde gerçekleştirildi (n = 3 fareler grup başına). 20 dakika dönemlerinde farklı perfüzyon kullanılarak, 2 saat, 3 saat ve 4 saat yukarıda açıklanan adımları izleyerek, biz başarıyla vivo içinde tek lob perfüzyon elde.
Vivo Sol yan lob pe...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Engelleme ve sıvı bir giriş olarak bir kateter ile sol portal ven ve sıvı bir çıkış olarak başka bir kateter ile sol yanal hepatik ven cannulating, biz başarılı bir şekilde sol yan lob içinde bir vivo içinde sıvı yan yol gösteren oluşturulan Teknik cannulation kapları küçük boyutu ve kanama neden yüksek bir risk nedeniyle son derece zor olsa da, mümkün olabilir. 4 saatlik bir uzun perfüzyon süre geçiren fareler bile en az 1 hafta fareler bu cerrahi işlem tahammül olabilir gösterilen, hayatta kaldı.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarlar ifşa gerek yok.
Yazarlar Jens Geiling Anatomi Enstitüsü üzerinden teşekkür etmek istiyorum ben, Jena Üniversitesi Hastanesi sıçan karaciğer anatomi şematik çizimler üretmek için.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Perfüzyon Pompası Perfüzörü | |||
| VI | B. Braun, Melsungen | ||
| Kateter | |||
| Versatus-W Kateter | Terumo | SR + DU2419PX | 24G, 0.74 kez; 19 mm |
| Versatus-W Kateter | Terumo | SR + DU2225PX | 22G, 0.9 ve kez; 25mm |
| mikro cerrahi alet | |||
| mikro makas | F & middot; S· L | No. 14058-09 | |
| mikro serrefine | F & middot; S· L | No.18055-05 | |
| Mikro kelepçeler aplikatör | F & middot; S· L | No. 18057-14 | |
| Düz mikro forseps | F & orta nokta; S· L | No. 00632-11 | |
| Kavisli mikro forseps | F & orta nokta; S· L | No. 00649-11 | |
| mikro iğne tutucu | F & middot; S· L | No. 12061-01 | |
| genel cerrahi aletler | |||
| standart sissors | F & middot; S· L | ||
| sivrisinek kelepçesi | F & middot; S· L | ||
| tırtıklı forsep | F & orta nokta; S· L | ||
| dişli forsep | F & orta nokta; S· L | ||
| iğne tutucu | F & orta nokta; S· L | ||
| sütür | |||
| 4-0 prolen | ethicon | ||
| 4-0 ETHICON*II | ethicon | ||
| 6-0 ipek | ethicon | ||
| 11-0 polyamid | ethicon |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.