Biz sert keneler laboratuvar tavşan beslemek için basit ve çok yönlü bir sistem geliştirdik. Zahmetli bizim iletişim kuralı kolayca erişilebilir malzemeler kullanır ve çeşitli deneysel ayarları gereksinimlerine bağlı olarak ayarlanabilir. Yöntemi rahat izleme ve/veya keneler örnekleme tüm beslenme süresi boyunca sağlar.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Zor kene istila laboratuvar tavşan çok yönlü bir Model
Bu makalede
Özet
Özet
Deneysel amaçlar laboratuvarda zor kene kolonileri bakım da dahil olmak üzere çeşitli kene araştırma canlı hayvan kullanımı önemlidir. Keneler, hematophagous (yumurta) hariç tüm gelişim dönemleri vardır ve yemek kan omurgalı onların ana bilgisayarlarına bağlı edinme onların yaşam döngüsü başarıyla tamamlanması için esastır. Burada tavşan sert keneler, beslenme için kolayca açılabilir kapsül kullanan basit bir yöntemi gösterir. Önerilen yöntemin avantajları, sadeliği, kısa süreli ve belirli deneysel gereksinimleri ihtiyaçlarına en önemlisi çok yönlü ayar içerir. Yöntem birden çok chambers (irili ufaklı) kullanımı birden fazla aşamaları veya farklı deneysel grup genel olarak hayvan gereksinimi azaltırken besleme izni aynı hayvan üzerinde mümkün kılar. Kullanılan Sigara rahatsız edici ve kolayca erişilebilen malzemelerin rahatsızlık kolayca bir deneyden kurtarıldı ve evlat edinmek için sunulan veya etik Protokolü izin veriyorsa yeniden hayvanlara en aza indirir.
Giriş
Sert keneler (Ixodidae) yavaş beslenme eklembacaklılar bilinen ve bir ana bilgisayarda bir kaç günlüğüne eklenebilir ya da1hafta, bu tür bağlı olarak ve gelişimsel sahne. Bu zorunlu hematophagous eklembacaklılar çok çeşitli virüsler, bakteriler ve tek hücreli gibi bulaşıcı ajanların vektörleridir ve böylece insan ve hayvan sağlığı1için önemli bir risk mevcut. Ne zaman kene biyoloji okuyan veya yeni kontrol yöntemleri değerlendirilmesi, etkili bir kene besleme sistemi kurulması amacıyla etkili bir şekilde deneyler tasarım ve çalışma goal(s) gerçekleştirmek çok önemlidir. Son zamanlarda, birkaç yapay kene besleme sistemleri (canlı hayvan kullanımı kaçınarak) Gelişmiş2,3,4 olmuştur ve mümkün olduğunda kullanılmalıdır. Ancak, bu sistemler üzerinde canlı hayvan besleme kene tamamen değiştirmeyi mümkün olmamıştır ve bilimsel çalışmalar için gerekli birçok fizyolojik koşulları için uygun yerine değildir. Bu nedenle, bazı durumlarda, deneysel hayvan ana kullanımı deneysel sonuçlar uygunluğunu garanti etmek çok önemlidir.
Laboratuvar Yeni Zelanda tavşanları birkaç iksodid kene tür5,6,7,8,9için en uygun ve erişilebilir ana olmak göstermiştir. Tavşan besleme kene iki ortak strateji sık kullanılmıştır: a) tavşan kulakları pamuk bez veya çorap6,7ile kaplı beslenirler ve b) besleme Pamuk çanta9, naylon şişeler10 veya neopren Chambers'ı11 tavşan arkaya yapıştırılmış. Keneler (özellikle erken aşamalarında, larva veya perileri) tarama ve derin kulak hayvan için rahatsız edici ve kene besleme ve/veya kurtarılması izleme yapar kanalda, eklemek çünkü tavşan kulaklara besleme zarif bir sistem değildir tıkanmış keneler zor. Bu sistem Ayrıca hayvan için önemli bir rahatsızlık temsil eden sadece iki kene grup tamamen Elizabethan yaka tarafından korunan çorap kapalı kulakları üzerinde sınırlıdır. Diğer sistemleri9,10,11 kesinlikle daha gelişmiş ve zor kene koloni bakım için uygundur. Ancak, deneysel grupları tavşanı yerleştirilen yanı sıra değiştirilebilir boyutları/şekiller besleme odalarının sınırlıdır. Ayrıca, bu iletişim kuralları kez tırmalamak ve damat önlemek için Elizabethan yaka kullanımını önlemek için arka tavşan bacağı hobbling gerektirir.
Burada biz Elizabethan yaka ihtiyacını ortadan kaldırarak veya deneme sırasında hobbling kapalı odalarında geri bir ceket tarafından kapalı tavşan yapıştırılmış sert keneler birden çok grupları beslemek için basit, zahmetli ve çok etkili bir yöntem öneriyorum. Özellikle, sistemimiz elastik kapsül bir etilen-vinil asetat (EVA) köpük tabakası sivrisinek kafes tarafından kaplı ve traş tavşan geri hızlı (3 dk) güçlendirilerek Sigara rahatsız edici lateks tutkalla yapıştırılmış yapılan kullanır. Bu teknik istenen boyutunu veya şeklini birden fazla kapsül ek sağlar ve birkaç hafta sonra Deney tavşanları tamamen iyileşti. Sistem esas olarak nimf ve yetişkin zor onay aşamaları için uygundur, ama küçük bir değişiklik ile de besleme larva için kullanılabilir. EVA köpük tabanlı yöntemleri zor kene besleme için diğer tür omurgalı ana bilgisayarlar, örneğin (ki bu kağıt seçenekleri olarak gösterilir) koyun adapte.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Not: Bu çalışmada, tavşan gıda ile standart kafeslerde muhafaza ve su ad libitum gıda, çevre ve iş sağlığı ve güvenliği (ANSES) akredite hayvan tesisler Maisons-Alfort, Fransa'da Fransızca ajansı sundu. Hayvanlar iki kez her gün herhangi bir anormal deri reaksiyonları, sağlık sorunları ya da karışıklık için iki deneyimli teknisyenleri tarafından takip. Deneysel oda kapı keneler yanlışlıkla kaçış önlemek için çift taraflı bant ile iç çerçeveleme tarafından ulaşamadılar. Yöntem en iyi iki kişi bir takım olarak çalışırız, ancak bu tek başına bir deneyimli kişi tarafından tamamlanması mümkündür çalışır. Çoğu tavşan uysal ve sakin olmakla birlikte, stres belirtileri düzenleme sırasında ortaya çıkabilir. Bir tavşan kendini mücadele tarafından zarar değil olduğunu emin olmak için el ile kısıtlama öte yandan o çekmek yavaşça, bir yandan boynundan scruff tutarak başarılı arka çeyrek. Altı ay önce Rambouillet dişi koyun Merkezi Biyomedikal araştırma (CRBM) tesisleri için Ulusal Veteriner Okulu, Alfort (ENVA), nerede su ve yiyecek verilen ad libitum olduğunu ve günde iki kez kontrol edildi tutuldu.
Not: Bizim laboratuvar tavşan ve koyun besleme Etik Komitesi tarafından hayvan deneyleri çıkar Anses/ENVA/UPEC, izni numaraları 01741.01 ve 11/10/16-5B, sırasıyla kene için kullanma izni aldı. Biz sadece patojen-Alerjik keneler bizim deneylerde kullanılan bu yana, bu çalışmada kullanılan tüm tavşan evlat edinme yolu ile beyaz tavşan Derneği, Paris, Fransa için teklif edildi.
1. hazırlık kapsül
- EVA köpük tabakası (Şekil 1A) kapsülü istediğiniz boyuta kesti. Dış (Şekil 1B) kapsül yanlışlıkla dekolmanı tavşan cilde yapıştırma en alt düzeyde tutmak için köşeler.
Not: Kapsül çerçeve kalınlığı yaklaşık 8 mm. kullanıma 5 mm kalınlığında köpük tabakası, larva, nimf ve küçük kene yetişkin gibi türlerin Ixodesolmalıdır. 1 cm kalınlığında köpük levha Amblyomma sp., Hyalomma sp., kapsül boyutu değişir vb gibi yetişkin keneler deneysel gereksinimleri temel alarak büyük boy için uygundur. Örneğin, 20 Ixodes yetişkin çiftler, 200 perileri veya 1.000 larva için biz bir iç kapsül boyutu 5 x 5 cm2, 6 x 7 cm2 veya 7 x 9 cm2, sırasıyla kullanın. - 8 mm genişliğinde şeritler kendinden yapışan-kanca kesim ( Tablo malzemelerigörmek) bant da hazırlanan EVA köpük çerçeve (Şekil 1C) sok.
- Kendinden yapışkanlı döngü aynı boyutu şeritler ( Tablo malzemelerigörmek) teyp ve kanca taraf için bağlama kesim EVA köpük çerçeve (Şekil 1D) bağlı.
- İyi sivrisinek mesh (kafes boyutu daha az 50 µm) uygun boyutunu EVA köpük çerçeve boyutuna kesme ve kendinden yapışkanlı-döngü (Şekil 1E ve 1F) sok. Çıkıntılar kesmek.
Not: Bu tür bir kapsül kapsül farklı bir mühürleme sistemi larva (Tamamlayıcı Şekil 1) besleme larva yanlışlıkla kaçış yolu ile sıkıya önlemek gerekli iken perileri ve yetişkin zor kene türlerinin beslemek için kullanılabilir kanca ve loop yan.
2. daha önce kene istila tavşan hazırlanması
- Tavşan geri ve makasları (Şekil 2A) ile kullanılmak üzere iki tarafın tıraş.
- Lateks tutkal Sigara rahatsız edici hazırlanan kapsül tüm yüzeyine uygulamak ve 1 dakika (Şekil 2B) bekleyin.
- Yaklaşık 3 dakika (Şekil 2C ve 2D) (özellikle köşelerde) deriye parmak ile basarak kapsül tutkal.
Not: birden fazla kapsül yapıştırma, aralarında (Şekil 2E ve 2F) en az 5 mm boşluk tutmak emin olun. Biz genellikle bölge omurga önlemek ancak gerektiğinde kullanılabilir. - Biraz görsel olarak cilt kendi eki kontrol etmek için kapsül kaldır. Ekli olmayan bölgeler bulunursa, bir spatula kullanarak yapıştırıcı uygulamak ve için başka bir 3 dakika tuşuna basın.
- Koruyucu bant ceket zarar (Şekil 2G) önlemek için tavşan arka paws için geçerlidir.
Not: Bu adım isteğe bağlıdır ve esas olarak ceket hasar, zarar kene kapsül önlemektir. - Tavşan cekette açıklıklar üzerinden ön ayakları yerleştirerek ve emin tavşan kalır rahat nefes verme boyun, sıkma koymak. Elastik muhafazaları üzerinden arka ayakları Bu adımda yerleştirin ve fermuar açık (Şekil 2H) terk etmeyin.
3. kene istilası
- Keneler (1-5 mL bağlı olarak sayisi) plastik enjektör içine iğne-kesme ve pamuk (Şekil 1G) ile takılı sonuna yerleştirin. Keneler az miktarda musallat istiyorsak, forseps kullanın.
Not: kene koloni bakım izin yönelik tıkanık kene sonraki kuluçkalık ile larva zahmetli manipülasyon zaman önlemek için bir lastik bant12 tarafından sarılmış sivrisinek kafes/EC şırınga (5 veya 10 mL) içinde onlar yumurtalarını bırakmak için female(s) vardır (Şekil 1H) ana bilgisayara uygulanır. Ayrıca, tamamen tıkanmış larva şırıngada tüy dökme için mümkün olmayabilir (Tamamlayıcı şekil 1I; 5 veya 10 mL) tavşan doğrudan istila perileri ile için. - Şırınga yer yolu ile açık kapsül içine köşe ve keneler şırınga pistonu iterek aşılamak. Fırlatıcıya bağlı kalan keneler kaldırmak için dalgıç tavşan derisi doğru yavaş yavaş büküm ve aynı anda kapsül (Şekil 2ben) çıkar.
Not: bazı kişilerin kapsül dışına sürün, onları geri forseps kullanarak. - Kapsül kanca ve loop teyp refastening tarafından kapatın.
- Arka bacaklar tavşan ceket ve ZIP elastik muhafazaları kapalı arka yerleştirin.
Not: bir işaret parmağı ceket boyun ve tavşan arasında konfor sağlamak ve ceket çiğneme önlemek için uygun olun. - Tavşan kafes (Şekil 2J) döndürür.
Not: İstila zaman dolu keneler topluluğu için farklı kene türleri ve gelişim dönemleri arasında değişir. Örneğin, Ixodes scapularis ve Ixodes ricinusiçin yetişkin, perileri ve larva için beslenme süreleri 6 – 9, 3-4 ve 2-3 gün, sırasıyla vardır. Laboratuvar koşullarında 29 farklı sabit kene yaşam döngüleri için referans listesi (2016)9Levin ve Shumacher bulunabilir.
4. toplama ve dilimleri izleme
- Tavşan kafes banka almak ve ceket unzip.
- Yavaşça ellerini tavşan dizginlemek. Kanca ve loop teyp (Şekil 2 K ve 2 L) unfastening tarafından kapsül açmak ve tıkanmış larva (Tamamlayıcı Şekil 1) veya bir plastik tabak için perileri fırçalama ya da yetişkinler için (Şekil 2L forseps kullanarak keneler toplamak ). Kısmen (değil dolu) beslenen, keneler gereklidir, bir kene twister veya forseps onları ayırmak için kullanın.
Not: Eğer kene kolonileri lütfen bakın adım 3.1 notta bakımı. Tıkanık kene içinde uygun nemli ve sıcaklık koşullarına göre belirli kene tür korumak. - Gerekirse, kapsül kapatmak için kanca ve loop teyp refasten.
5. kurtarma tavşan
- Sivrisinek kafes tamamen kapsülü kaldırır ve ceket tavşan (Şekil 2M) bırakır.
- 3-4 hafta bekleyin ve yavaşça köşelerinden (Şekil 2N) çıkararak kapsül kaldırmayı deneyin. Kapsülü hala sıkıca bağlıysa, bir hafta sonra bu işlemi tekrarlayın.
- Çıkarmak belgili tanımlık ceket ve tavşan kafes içinde kurtarmak izin.
Not: kapsül kapalı olduğunda, tavşan anormal reaksiyonlar için cilt kontrol edin. Normalde hiçbir tedavi gerekli olmasına rağmen bir yumuşatıcı losyon tahriş durumunda kullanılabilir. - İletişim kuralı ve deneyler izin verirse, kurtarılan tavşan (Şekil 2O) yeniden ya evlat edinmek için sunulan.
Not: Tavşan bir kez tekrarlanan kene enfestasyonlar13için maruz kene direnç elde gösterilmiştir; Bu nedenle, deneme gerektirmedikçe reinfestations tavsiye edilmez.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Zor kene EVA köpük besleme detaylı adım tarafından adım yöntemi ilk kez burada önerdiğimiz traş tavşan arka için uygulanan kapsül kaplı tarafından bir ceket (resim 1 ve Şekil 2). Bu iletişim kuralı deneyler çeşitli türleri için uygun olduğunda farklı onay grupları aynı ana bilgisayarda gereklidir ve kitle zor dilimleri yetiştirme için de kullanılabilir. Başarı laboratuvarda çoğunlukla besleme kene kene bireylerin...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Tüm bu protokol konusunda en önemli adım traş cilde sıkıca kapsül tutkal etmektir. Bu nedenle, en az 3 dakika sabit basınç özellikle köşelerde önemlidir. Ne zaman kapsül içine keneler aşı, bunları uygulamak önemlidir kene kaçış mühürleme sırasında önlemek için açık bir ters köşeye derin. Deneyler planlarken, tüm kapsül zarar çiğneme veya çizilmemesi önlemek için ceket tarafından tutulduğundan emin ol. Boyun bölgesi ceket yeterince gevşek ama çiğneme tavşan konforlu kalmasını önlemek için sıkı olduğundan emin olun.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa gerek yok.
Teşekkürler
Evelyne Le Naour, Fransız Ulusal Enstitüsü Tarım Araştırma (INRA), Alain Bernier (INRA) ve Océane Le Bidel (ANSES) Teknik yardım anıyoruz. Consuelo Almazán bir laboratuvar mükemmellik, bütünleyici biyoloji, ortaya çıkan bulaşıcı hastalıklar (LabEx IBEID), Pasteur Enstitüsü bursu tarafından desteklenmiştir. Tavşan ve koyun ANSES tarafından satın alındı. Bu eser parçası sağlık grant RO1AI090062 Y. Park Ulusal Enstitüleri tarafından finanse edildi. Dr. Jeffrey L. Blair el yazması gözden geçirmek için kabul edilmektedir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Yeni Zelanda Tavşanları (2.5-3.5 kg) | Charles River | Suş Kodu 571 | |
| Rambouillet koyunu | Yerel sağlayıcı-kene ücretsiz çiftlik | Dişi 6 aylık | |
| EVA köpük 5 mm kalınlığında | Cosplay Shop | EVA-PE451kg (950mm x 450mm) | Cosplay Shop'tan 10 mm PE45 kg köpük, büyük yetişkin kene türleri için kullanılabilir |
| Köpük Levha 9" X 12" 6 mm-Beyaz | Amazon | FOAMSHT6-20 | 6 mm-EVA köpük, Cosplay Shop'tan köpüğe alternatif olarak Amazon üzerinden sipariş edilebilir |
| Tam boy tavşan ceketleri | Harvard Aparatı, Inc. | 620077- Orta, 6270078 - Büyük | |
| Toksik olmayan lateks yapıştırıcı ve nbsp; | Gözyaşı mender | Kumaş & Deri Yapıştırıcı | |
| Borulu pamuklu ortopedik çorap | BSN Medical | 9076 (12-15 cm genişliğinde) | |
| Sivrisinek ağı | Loisirs Creatifs | Çok ince filtreli naylon örgü kumaş | Ağ boyutu 50 &mu'dan az olan herhangi bir sivrisinek ağı veya perde malzemesi; m uygundur. |
| Lökoplast | BSN medical S.A.S | LF 72361-02 | |
| Yapışkanlı cırt cırtlı bant | AIEX store | AIEX 39.37 Feet/12m Cırt Cırt Kendinden Yapışkanlı Bant Rulosu, 20 mm genişlik, beyaz renk | Fullfiled by Amazon |
| Hızlı kuruyan tutkal | Fixtout | Süper yapıştırıcı |
Kaynaklar
- Sonenshine, D. E., Roe, M. Ticks, People and Animals. Biology of Ticks, Vol I. , Oxford University Press. (2014).
- Kröber, T., Guerin, P. M. In vitro feeding assays for hard ticks. Trends in Parasitology. 23 (9), 445-449 (2007).
- Bonnet, S., Jouglin, M., Malandrin, L., Becker, C., Agoulon, A., L'hostis, M., Chauvin, A. Transstadial and transovarial persistence of Babesia divergens DNA in Ixodes ricinus.ticks fed on infected blood in a new skin-feeding technique. Parasitology. 134 (2), 197-207 (2007).
- Bonnet, S., Liu, X. Laboratory artificial infection of hard ticks: A tool for the analysis of tick-borne pathogen transmission. Acarologia. 52 (4), 453-464 (2012).
- Khols, G. M. Tick rearing methods with special reference to the Rocky Mountain Wood Tick, Dermacentor andersoni Stiles. Culture methods for invertebrate animals. , Dover Pubs. New York. (1937).
- Faccini, J. L. H., Chacon, S. C., Labruna, M. B. Rabbits (Oryctolagus cuniculus) as experimental hosts for Amblyomma dubitatum Neumann (Acari: Ixodidae) [Coelhos (Oryctolagus cuniculus) como hospedeiros experimentais de Amblyomma dubitatum Neumann (Acari: Ixodidae). Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia. 58 (6), 1236-1239 (2006).
- Chacon, S. C., Freitas, L. H. T., Barbieri, F. S. Relationship between weight and number of engorged Amblyomma cooperi. Nuttal (sic) and Warburton, 1908 (Acari: Ixodidae) larvae and nymphs and eggs from experimental infestations on domestic rabbits. Brazilian Journal of Veterinary Parasitology. 13, 6-12 (2004).
- Sonenshine, D. E. Maintenance of ticks in the laboratory. Maintenance of Human, Animal, and Plant Pathogen Vectors. , Science Publishers Inc. Enfield. (1999).
- Levin, M. L., Schumacher, L. B. M. Manual for maintenance of multi-host ixodid ticks in the laboratory. Experimental and Applied Acarology. 70 (3), 343-367 (2016).
- Bouchard, K. R., et al. Maintenance and experimental infestation of ticks in the laboratory setting. Biology of Disease Vectors. , Elsevier. San Diego. (2005).
- Jones, L. D., Davies, C. R., Steele, G. M., Nutall, P. A. The rearing and maintenance of ixodid and argasid ticks in the laboratory. Animal Technology. 39, 99-106 (1988).
- Slovák, M., Labuda, M., Marley, S. E. Mass laboratory rearing of Dermacentor reticulatus ticks (Acarina, Ixodidae). Biologia, Bratislava. 57 (2), 261-266 (2002).
- Rechav, Y., Dauth, J. Development of resistance in rabbits to immature stages of the Ixodid tick Rhipicephalus appendiculatus. Medical and Veterinary Entomology. 1, 177-183 (1987).
- Zacarias do Amaral, M. A., Azevedo Prata, M. C., Daemon, E., Furlong, J. Biological parameters of cattle ticks fed on rabbits. Brazilian Journal of Veterinary Parasitology. 21 (1), 22-27 (2012).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
