Xenopus kurbağa yavrularını içinde vivo sinir sisteminin işlevi araştırmak için benzersiz bir platform sunuyoruz. Biz metodolojileri yaşayan koku bilgi işleme değerlendirmek için tarif Xenopus larva normal yetiştirme koşullarında veya yaralanma sonra.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Fonksiyonel yaşam Xenopus kurbağa yavrularını koku yollar değerlendirilmesi
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Xenopus kurbağa yavrularını sinir sisteminin işlevi araştırmak için benzersiz bir platform sunuyoruz. Onlar çok sayıda görüntüleme yaklaşımlar, elektrofizyolojik teknikleri ve davranışsal deneyleri için erişilebilirlik gibi birden çok deneysel avantajlar sağlar. Xenopus iribaş koku alma sistemi normal gelişim sırasında kurulan veya yaralanma sonra reform sinapslarda işlevi araştırmak için özellikle uygundur. Burada, biz yaşayan koku bilgi işleme değerlendirmek için yöntemleri tarif Xenopus larvaları. Biz bir arada glomeruli koku güdümlü davranış deneyleri ile olfaktör ampul presynaptic kalsiyum tepkilerin içinde vivo ölçümlerin anahat. Yöntemleri Olfaktör sinirler sinaptik bağlantı hızına uyumlanma çalışmaya transeksiyon ile kombine edilebilir. Deneyler vahşi tipi ve genetiği değiştirilmiş hayvanlar GFP gazetecilere merkezi sinir sistemi hücrelerdeki ifade kullanarak sunulmaktadır. Uygulama için genetik olarak değiştirilmiş kurbağa yavrularını açıklanan yaklaşımların omurgalı davranışı tanımlayın moleküler üsleri çözülüyor için yararlı olabilir.
Giriş
Xenopus kurbağa yavrularını sinir sisteminin normal işlevi eğitim için mükemmel bir hayvan model oluşturur. Şeffaflık, tam sıralı genom1,2ve cerrahi, elektrofizyolojik ve görüntüleme teknikleri erişilebilirlik nöronal işlevleri içinde vivo3 soruşturma izin Xenopus larva benzersiz özelliklerdir . Bazı hayvan bu modelin çok deneysel olasılık iribaş duyusal ve motor sistemleri4,5,6tarihinde gerçekleştirilen kapsamlı çalışmalar tarafından gösterilmiştir. Bilgi sinapslarda düzeyind....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm yordamları hayvan Araştırma Etik Komitesi, Barselona Üniversitesi tarafından onaylanmıştır.
Not: X. Tropicalis ve X. laevis kurbağa yavrularını standart yöntemleri13,14göre yetiştirilen. Kurbağa yavrusu su ticari tuzları ( Tablo malzemelerigörmek) ters ozmos tarafından elde edilen su ekleyerek hazırlanır. İletkenlik ∼700 µS ve ∼1, X. tropicalis ve X. laevis kurbağa yavrularını için 400 µS için sırasıyla ayarlanır. Larva doğal çiftleşme veya in vitro fertilizasyon14tarafından elde edileb....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Bu yazıda, biz bir arada Xenopus iribaş koku alma sistemi işlevselliğini vivo içinde çalışma gerçekleştirmek için iki tamamlayıcı yaklaşımlar mevcut: Ben) presynaptic Ca2 + görüntüleme için bir yöntem değiştirir yaşam glomeruli içinde kurbağa yavrularını bir floresan kalsiyum göstergesi ve II kullanarak) bir koku belirli su bazlı odorants cevaben araştırmak için kullanılan davranış tahlil destekli. Bu yaklaşımlar koku işlendikten sonra yaralanma
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu kağıt yaşayan koku yolları işlevselliğini araştırmak yararlı teknikler açıklanır Xenopus iribaşlar. Geçerli protokol işe veya Xenopuserişimi Bu laboratuarlar için yararlıdır; Ancak, bu da nöronal rejenerasyon ve onarım hücresel ve moleküler üsleri eğitim Bu araştırmacılar için ilginçtir. Xenopus elde edilen sonuçlar diğer omurgalı modellerinde korunmuş mekanizmaları tanımlamak için toplanan veriler ile kombine edilebilir. Açıklanan yöntemleri genetiği değiştirilmiş Xenopus
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa gerek yok.
Teşekkürler
Bu eser El "gayri resmi" de Economía y Competitividad (MINECO; dan gelen hibe tarafından desteklenmiştir SAF2015-63568-R) rekabetçi Araştırma Ödülleri M. G. F. Fuortes Memorial Bursu, Stephen W. Kuffler Burs Fonu, Laura ve Arthur Colwin donatılmış yaz araştırma bursu Fonu tarafından Avrupa Bölgesel Kalkınma Fonu (ERDF tarafından), cofunded , Fischbach Bursu ve büyük üretimi Fonu Deniz Biyoloji Laboratuvarı ve ulusal Xenopus kaynak nerede bu eser bir kısmını gerçekleştirilmiştir RRID:SCR_013731 (Woods Hole, MA). Eğer bir Program ayrıca teşekkür ederim / Generalitat de Catalunya kurumsal destek için. Al Serra Húnter biri.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Akvaryumlar için tuzlar (Anlık Okyanus Tuzu) | Tecniplast | XPSIO25R | |
| Trikain (Etil 3-aminobenzoat metansülfonat) | Sigma-Aldrich | E10521 | |
| Cımbız #5 (uç 0,025 x 0,005 mm) | Dünya Hassas Aletleri | 501985 | |
| Vannas Makas (uç 0.015 x 0.015) | Dünya Hassas Aletleri | 501778 | |
| Whatman kalitatif filtre kağıdı | Fisher Scientific | WH3030917 | |
| X. laevis tubb2-GFP | Ulusal Xenopus Kaynağı (NXR), RRID:SCR_013731 | NXR_0.0035 | |
| X.tropicalis NBT-GFP | Avrupa Xenopus Kaynak Merkezi (EXRC) RRID:SCR_007164 | ||
| CellTracker CM-DiI | ThermoFisher Scientific | C-7001 | |
| Kalsiyum Yeşil dekstran, Potasyum Tuzu, 10.000 MW, Anyonik | ThermoFisher Scientific | C-3713 | |
| Mikroenjeksiyon için Borosilikat | kılcal damarlar Sutter Aleti | B100-75-10 | OD = 1.0 mm., ID = 0.75 mm. |
| Çektirme | Sutter Aleti | P-97 | |
| Mikroenjektör | Parker Aletleri | Picospritzer III | |
| Sylgard-184 | Sigma-Aldrich | 761028-5EA | |
| Microfil mikropipetler | Dünya Hassas Aletleri | MF28G-5 | |
| Dik mikroskop | Zeiss | AxioImager-A1 | |
| Master-8 stimülatör | A.M.P.I. | ||
| CCD Kamera | Hamamatsu | Görüntü EM | |
| Solenoid valfler | Warner Instruments | VC-6 Altı Kanal sistemi | |
| Dow Corning Yüksek Vakumlu Gres | VWR Scientific | 636082B | |
| Tubocurarine hidroklorür | Sigma-Aldrich | T2379 | |
| CCD Kamera | Zeiss | MRC-5 Zen | Tarafından Kontrol Edilen Kamera yazılım |
| kamera lensi | Thorlabs | MVL8ML3 | Kullanılan kamera modeline uyarlanması gereken birden fazla olasılık vardır |
| Epoksi reçine | RS Bileşenleri | ||
| Manifold | Warner Instruments | MP-6 perfüzyon manifoldu | |
| Çözeltilerin yerel teslimi için mikromanipülatör | Narishige | MN-153 | |
| Mini manyetik kelepçeler | Warner Instruments | MAG-7, MAG-6 | |
| Polietilen boru | Warner Instruments | 64-0755 | OD = 1.57 mm., ID = 1.14 mm. |
Kaynaklar
- Hellsten, U., et al. The genome of the Western clawed frog Xenopus tropicalis. Science. 328 (5978), 633-636 (2010).
- Session, A. M., et al. Genome evolution in the allotetraploid frog Xenopus laevis. Nature. 538 (7625), 336-343 (2016).
- Zhang, L. I., Tao, H. ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
