Method Article

Boyut, şekil ve yön ağlar yönetim eşleşmiş Astrocytes analiz

DOI:

10.3791/58116

⸱

October 4th, 2018

 ,  , 
1Groupe de Recherche sur le Système Nerveux Central, and Département de Neurosciences, Université de Montréal, 2Faculté de Médecine Dentaire, Université de Montréal

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada astrositik ağlar organizasyonu değerlendirmek için bir protokol mevcut. Açıklanan yöntemi hücre sayısı, boyutu, alan ve bir çekirdek içinde pozisyon gibi bu ağların açıklayıcı ölçüleri sağlamak için önyargı en aza indirir. Anizotropi vektörel bir analizi ile değerlendirilir.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Astrocytes nöronal fonksiyon sadece sinaptik ve tek hücre düzeylerinde, aynı zamanda ağ düzeyinde modüle giderek netlik kazanmıştır. Astrocytes güçlü boşluğu kavşak birbirine bağlı ve kaplin yoluyla bu kavşaklar dinamik ve son derece düzenlenir. Astrositik işlevleri uzmanlaşmış ve bunların ilişkili olduğu nöronal devre fonksiyonları için uyarlanmış bir ortaya çıkan kavramdır. Bu nedenle, astrositik ağların çeşitli parametreleri ölçmek için yöntemler daha iyi iletişim yöneten ve kaplin kuralları tanımlamak için ve daha işlevlerini anlamak için ihtiyaç vardır.

Burada, görüntü analiz yazılımı kullanarak (Örn., ImageJFIJI), astrositik ağlar boya-kaplin tarafından ortaya confocal görüntülerini analiz etmek için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yöntemler 1) bir otomatik ve tarafsız algılanması için etiketli hücreleri, ağlar, 3) 4) ilgi alanı içinde ağının yeniden konumlandırma ve ağ içindeki yaymak boya Tercihli yönünü hesaplama hesaplama 2) olanak sağlar .

Bu analiz belirli bir alanda astrositik ağları karakterize, ağları farklı alanlar için farklı işlevler ilişkili karşılaştırmak veya bağlantı üzerinde farklı etkiler farklı koşullar altında elde edilen ağlar karşılaştırmak için kullanılabilir. Bu gözlemler için önemli işlevsel konuları açabilir. Örneğin, biz nereye biz daha önce astrositik kaplin nöronlar tonik onların ateş desenlerini ritmik patlama1' e geçiş yapma yeteneği için gerekli olduğunu göstermiştir trigeminal çekirdeği, astrositik ağlar analiz. Boyutunu, lohusalık ve bu çekirdek astrositik ağlarda Tercihli yönünü ölçerek, onlar çemberlemek işlevsel etki alanları hakkında hipotezler inşa edebilirsiniz. Çeşitli çalışmalarda varil korteks, yanal üstün zeytin, koku glomeruli ve duyusal çekirdeği talamus ve bir kaç isim için görsel korteksin'de dahil olmak üzere çeşitli beyin bölgeleri benzer bir analizinden yararlanabilir öneririz.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Birçok çalışma alt hücresel veya sinaptik düzeyinde nöron-astrocyte diyalog nöronal işlevleri ve sinaptik iletimi nasıl olabilir anlatmıştık. De astrocytes nöronal aktivite çevreleyen duyarlıdır kurulur; Aslında, onlar için glutamat, GABA, asetilkolin ve ATP (daha önce yayımlanmış değerlendirmeleri2,3,4bakınız) de dahil olmak üzere birçok nörotransmitter reseptörlerinin var. Buna karşılık, astrositik ensheath sinaptik öğeleri ve etkisi nöronal aktivite var ve extrasynaptic sitelerdeki ekstraselüler iyonik homeostazı düzenleyen ve çeşitli faktörler veya vericileri glutamat, D-....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm yordamlar tarafından Kanada Sağlık araştırma enstitüleri kuralları abode ve Montreal Üniversitesi hayvan bakımı ve kullanımı Komitesi tarafından kabul edildi.

1. sıçan Beyin dilimleri hazırlanması

  1. 1 litre sükroz tabanlı bir çözümü (Tablo 1) ve standart yapay beyin-omurilik sıvısı (aCSF) (Tablo 2) 1 litre hazırlamak.
  2. % 95'i O2 ve %5 CO2 (carbogen) için 30 dk karışımı ile sükroz tabanlı çözüm çözüm soğuk ama tamamen donmuş olana bu yaklaşık 30 dk,-80 ° C'de yerleştirmeden önce kabarcık. Bu buz gibi sükroz beyni Dilimleme Kesim tampon olarak kullanın. Dondurucudan ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Beyin hücreleri arasında bağlantı statik ama oldukça dinamik olarak birçok faktör tarafından düzenlenmiş değildir. Açıklanan yöntemleri astrositik ağları farklı koşullar altında ortaya çözümlemek ve NVsnpr kuruluşlarındaki anlamak için geliştirilmiştir. Bu sonuçlar zaten yayımlanmış1olmuştur. Biz üç farklı koşullarda NVsnpr dorsal parçası tek astrocytes biocytin dolum yapılan: Ca2 +(koşullarında denetim yokluğunda herhangi bir stimülasyon), istirahat-ücr.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Astrocytes23,24arasında kaplin fonksiyonel değerlendirmek için elektrofizyolojik yöntemlerle bir dizi vardır. Ancak, bu yöntemlerin astrositik ağlar anatomik yerleşimi hakkında bilgi sağlar. Çalışmalar bir dizi zaten "boya - veya izleyici-olarak kancası", burada, yalnızca bir kısmını içinde birleştiğinde düşündüren elektrofizyolojik yöntemleri25,26,27tarafından algılanır.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ifşa gerek yok.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu eser Kanada Enstitüleri Sağlık Araştırma tarafından Grant/ödül numarası finanse edilmektedir: 14392.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
NaClBalıkçı KimyasallarıS671-3
KClBalıkçı KimyasallarıP217-500
KH2< / sub>PO4Fisher KimyasallarıP285-500
MgSO4< / sub>Fisher KimyasallarıM65-500
NaHCO3< / sub>Fisher KimyasallarıS233-500
C6H12O6 Dekstroz susuzFisher KimyasallarıD16-500
CaCl2 susuzSigmaC70-500
SükrozSigmaS9378
D-glukonik asit potasyum tuzuSigmaG45001
MgCl2 susuzSigmaM8266
HEPESSigmaH3375
EGTASigmaE4378
ATPTris TuzSigmaA9062
GTPTris TuzSigmaG9002
BiyositSigmaB4261
Karbenoksolon disodyum tuzuSigmaC4790
avidin-biotin kompleksi: ABC kitiVestor laboratuvarlarıPK-4000
Streptavidine-alexa 594Moleküler ProblarS11227
TritonFisher KimyasallarıBP151-500
KsilenFisher KimyasallarıX5-1
Sulu montaj ortamı 1 : Fluoromount-GSouthernBiotech0100-01
Toluen bazlı sentetik reçine montaj ortamı : PermountFisher ChemicalsSP15-100
Slayt Kurutma TezgahıFisherbrand11-474-470
VibratomLeicaVT 1000S
Mikroskop lamı ColorFrostFisherbrand12-550-413
PFAFisherchemicals04042-500
Olympus FluoView FV 1000 Konfokal mikroskopOlympus
40X suya daldırmalı lensOlympusLUMPLFLN40XW
20X suya daldırmalı lensOlympusXLUMPLFL20XW
4X suya daldırmalı lensOlympusXLFLUOR4X/340
Mikropipet çektirmeSutter EnstrümanP97
MikromanipülatörSutter EnstrümanMP 225
Kamera CCDSonyCX-ST50
Siyah beyaz monitörSonySSM-125
DigidataMoleküler cihazlar1322A
Yama Kelepçesi amplifikatörAkson aletiMulitclamp 700A
Elektrofizyoloji edinim yazılımıMoleküler cihazlarpClamp 8
Elektrofizyoloji analiz yazılımıMoleküler cihazlarClampfit 8
Görüntüleme analiz yazılımıImageJFIJIAçık kaynaklı yazılım. Eklenti paketi dahil FIJI sürümü.
Vektör görüntü düzenleyiciAdobeIllustrator CS4
Elektronik tablo uygulamasıMicrosoft OfficeExcel 2010
Mikroskop kapak camı Fisherbrand 12-544A

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Condamine, S., Lavoie, R., Verdier, D., Kolta, A. Functional rhythmogenic domains defined by astrocytic networks in the trigeminal main sensory nucleus. Glia. 66 (2), 311-326 (2018).
  2. Verkhratsky, A., Orkand, R. K., Kettenmann, H. Glial calcium: homeostasis and sign....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Astrocyte Network AnalysisImageJ FIJIConfocal Image AnalysisDye Coupling DetectionNetwork Size CalculationPreferential Orientation MeasurementCell Detection AutomationROI Tracing MethodVector Normalization TechniqueTrigeminal Nucleus Study

Related Articles