Method Article

1,2-Dithiolane malzemelerin ve kendi kendine montaj peptidler değiştirilme tarihi

DOI:

10.3791/58135

⸱

August 20th, 2018

 ,  , 
1Department of Chemistry and Biochemistry, Fairfield University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1,2-dithiolane sentezi için bir protokol peptid ve peptid kendinden montajlı kaynaklanan supramolecular yapıları karakterizasyonu değiştiren.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kendi kendine montaj peptid ve sonucu olan karakterizasyonu bir N-terminus 1,2-dithiolane sentezi üzerinde duruluyor değiştiren bu rapor supramolecular yapıları kendi kendine monte. Katı faz peptid sentez dithiolane habercisi molekülü 3-(acetylthio) -2-reçine MANŞONLA sentetik rota yararlanır-(acetylthiomethyl) propanoic asit ve mikrodalga destekli thioacetate deprotection peptid N-terminus reçine üzerinden son bölünme önce 1,2-dithiolane vermeye peptid değiştiren. Alzheimer hastalığı, ilişkili Aβ peptid nucleating çekirdeğinden elde edilen 1,2-dithiolane peptid, yüksek performanslı sıvı kromatografi (HPLC) arıtma sonra peptid çapraz-β amiloid lifleri kendi kendine montajı gösterilmiştir. Fourier dönüşümü kızılötesi spektroskopi (FT-IR), dairesel dichroism spektroskopisi (CD) ve transmisyon elektron mikroskobu (TEM) amiloid lifler karakterize etmek için protokolleri mevcuttur. N-terminal geliştirmeleriyle 1,2-dithiolane yan iyi karakterize kendi kendine montaj peptidler yöntemleri şimdi sonrası derleme değişiklik stratejiler geliştirmek ve dinamik kovalent kimya üzerinde keşfetmek için model sistemleri olarak keşfedilmeyi olabilir Supramolecular peptid nanofiber yüzeyler.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kimya şekillendirme sağlam peptit bağı katı fazlı peptid sentezinde yer ve sıra uzunluğu ve kompozisyon kontrol yeteneği yapmak supramolecular yapılarına ağır araştırılmış bir alanı kendi kendine araya peptidler. Kontrol ve yan zincir steric dahil olmak üzere peptid kendi kendine monte yapılar ve elektrostatik etkileşimler, hidrojen bağı ve hidrofobik etkileri1, stabilize faktörler tasarım kuralları kümesi olarak hizmet vermektedir. Bu temel tasarım kuralları içine araştırma ilerlemeye devam ediyor gibi peptid mantıksal sonraki adımda kendinden montajlı çeşitliliği peptid temel yapıları ve işlevleri genişletme kapsar. Kendi kendine peptidler mo....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. sentez ve 1,2-Dithiolane arınma peptid modifiye

  1. Sentezi dithiolane habercisi, 3-(acetylthio) -2-(acetylthiomethyl) propanoic asit19.
    1. 3 1 g ekleyin-bromo - 2-(bromomethyl) propiyonik asit (1 eşdeğeri) 1 M NaOH (yaklaşık 4 mL) 55 ° C'de karıştırma ile 25 mL yuvarlak alt tepki şişesi için en az miktarda çözünmüş Reaksiyon şişeye bir septa ile mühür ve azot atmosferi altında yerleştirin.
    2. 1,49 g potasyum thioacetate içeren bir çözüm hazırlamak (3.2 eşdeğeri) 4 ml deiyonize su ve 2 M sülfürik asit 3 mL (H2SO4) Tioasetik asit in situoluşturmak için.
    3. Tioasetik ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dithiolane öncül molekül ilk tek adımlı sentezi kenara 1,2-dithiolane değiştiren peptid sentez geri kalanı sağlam destek (Şekil 1A) oluşur. 3 dönüşüm-bromo - 2-(bromomethyl) propiyonik asit 3-(acetylthio) -2-(acetylthiomethyl) propanoic asit, dithiolane habercisi 1tarafından H doğruladı ve 13C NMR (Şekil 1B ve C) daha önce ücretsiz için birleştiğinde Bir peptid hala-reçine N-terminus Amin. T.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu makalede bir N-terminal 1,2-dithiolane değiştiren Self montaj peptid saflaştırılması ve karakterizasyonu elde edilen supramolecular yapıları ve hem sentezi ayrıntılarını anlatılır. Rapor burada 1,2-dithiolane peptid sentez 3-(acetylthio) -2 dithiolane habercisi üretmek için bir tek adımlı sentez de dahil olmak üzere avantajı vardır-(acetylthiomethyl) propanoic asit ve üzerinde reçine mikrodalga deprotection tepki Grup olarak toksik hidrazin deprotection için daha güvenli bir alternatif daha önce29

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ifşa gerek yok.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar TEM Connecticut Devlet kolej ve üniversite (CSCU) Merkezi nanoteknoloji ve Dr Ishita Mukerji Wesleyan Üniversitesi'nde için erişim için onu CD kullanarak yardım ve Dr. B. Ellen Scanley onun teknik eğitim için teşekkür etmek istiyorum Spektrofotometre. Raporlanan çalışma kısmen Bilim Enstitüsü Üniversitesi Fairfield, NASA Connecticut alan Grant Konsorsiyumu tarafından ve Ulusal Bilim Vakfı Hibe numarası CHE-1624774 altında tarafından desteklenmiştir.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Rink amid MBHA reçinesi, yüksek yükGyros Protein TeknolojileriRAM-5-HLCilt ve gözlerle temasından kaçının;
N,N-Dimetilformamid'iFisher ScientificD119-4Yanıcı sıvı ve buhar; gözleri ve cildi tahriş eder; Kişisel koruyucu ekipman kullanın; açık alevden uzak tutun
Fmoc-L-Val-OHGyros Protein TeknolojileriFLA-25-VKişisel koruyucu ekipman giyin; solumayın
Fmoc-L-Leu-OHGyros Protein TeknolojileriFLA-25-LKişisel koruyucu ekipman giyin; solumayın
Fmoc-L-Lys(Boc)-OHGyros Protein TeknolojileriFLA-25-KBCKişisel koruyucu ekipman giyin; Nefes
almayınFmoc-L-Phe-OHGyros Protein TeknolojileriFLA-25-FKişisel koruyucu ekipman giyin;
solumayın Fmoc-L-Ala-OHGyros Protein TeknolojileriFLA-25-AKişisel koruyucu ekipman giyin; solumayın
Fmoc-L-Gln(Trt)-OHGyros Protein TeknolojileriFLA-25-QTKişisel koruyucu ekipman giyin; Nefes
almayınN, N, N ve asal;, N ve prime;-Tetrametil-O-(1H-benzotriazol-1-il) üronyum heksaflorofosfatGyros Protein Teknolojileri26432Cilt, göz ve solunum yolu tahrişine neden olur; solumayın; kaputun altında veya iyi havalandırılan bir alanda kullanın
DMF'de 0.4 M N-metilmorfolinGyros Protein TeknolojileriPS3-MM-Lson derece yanıcı; kişisel koruyucu ekipman giyin; ısıdan uzak tutun ve kabı sıkıca kapalı tutun; nefes almayın veya yutmayın;
DMF'de %20 piperidinGyros Protein TechnologiesPS3-PPR-LCiddi göz ve cilt yanıklarına neden olur; Yanıcı Sıvı ve buhar;
DiklorometanFisher ScientificD37-4Kansere neden olabilir; Nefes almayın; Kişisel koruyucu ekipman giyin; sadece kaputun altında kullanın; temas halinde en az 15 dakika su ile bekletin ve tıbbi yardım alın
asetonitrilFisher ScientificA998-4yanıcı; gözleri tahriş edici; Kişisel koruyucu ekipman kullanın; Yalnızca çeker ocak altında kullanın; açık alevden veya sıcak yüzeyden uzak tutun; temas halinde en az 15 dakika su ile durulayın ve tıbbi yardım alın
trifloroasetik asitFisher ScientificA116-50Ciddi yanıklara neden olur; soluma; su yaşamına zararlı; kişisel koruyucu ekipman kullanın; sadece çeker ocak altında kullanın; temas halinde en az 15 dakika su ile durulayın ve hemen tıbbi yardım alın.
4 uranil asetatElektron Mikroskobu Bilimleri22400-4Nefes almayın; sucul yaşama zararlı
4- (2-Hidroksietil) piperazin-1-etansülfonik asitAcros OrganicsAC172571000Solumayın; açık havada veya iyi havalandırılan bir alanda kullanın
nitrojen GazıTechAirBasınç altında içerikler, ısıtılırsa patlayabilir
3-bromo-2- (bromometil) propiyonik asitAlfa AesarAAA1963014Solumayın; ciltte ve gözlerde tahrişe neden olur; aşındırıcı
sodyum hidroksitFisher ScientificS318-100Kişisel koruyucu ekipman kullanın; sadece çeker ocak altında kullanın; temas ederseniz durulama alanı en az 15 dakika ve tıbbi yardım alın
potasyum tiyoasetatAcros OrganicsAC221300250Cilt ve göz tahrişine neden olur; nefes almayın; kişisel koruyucu ekipman kullanın
sülfürik asitFisher ScientificSA213Yanıklara neden olur; sudan uzak tutun; yanıcı maddelerden uzak tutun; nefes almayın; kişisel koruyucu ekipman kullanın; temas ederseniz alanı en az 15 dakika durulayın ve tıbbi yardım alın
kloroform-dAcros OrganicsAC320690075Olası kanser tehlikesi; cildi ve gözleri tahriş eder; nefes almayın; Kişisel koruyucu ekipman kullanın; sadece çeker ocak altında kullanın; Temas ederseniz alanı en az 15 dakika durulayın ve tıbbi yardım alın
kloroformFisher ScientificC298-4Olası kanser tehlikesi; cildi ve gözleri tahriş eder; nefes almayın; Kişisel koruyucu ekipman kullanın; sadece çeker ocak altında kullanın; Durulama alanına en az 15 dakika temas ederse ve tıbbi yardım alın
N,N-diizopropiletilaminAcros OrganicsAC367841000Son derece yanıcı; sucul yaşama zararlı; kişisel koruyucu ekipman giyin;
amonyum hidroksitFisher ScientificA669S-500aşındırıcı;
metanolüFisher ScientificA452-4Yanıcı sıvı ve buhar; kişisel koruyucu ekipman kullanın; nefes almayın; Temas halinde, alanı en az 15 dakika durulayın ve tıbbi yardım alın
triizopropilsilanSigma Aldrich233781yanıcı; kişisel koruyucu güvenlik ekipmanı kullanın; kabı sıkıca kapalı tutun
dietil eterFisher ScientificE138-1Son derece yanıcı; Cildi ve gözleri tahriş eder; Kişisel koruyucu ekipman kullanın
2,5-dihidroksibenzoik asitSigma Aldrich39319-10x10MG-Fsolumayın; cildi ve gözleri tahriş eder
Alfa-siyano-4-hidroksisinamik asitAlfa AesarAAJ67635EXK
c18 fermuarlıMiliporeZTC18S096
tris (2-karboksietil) fosin hidroklorürTermo BilimselPI20490
silika jel 60 F254 kaplı alüminyum destekli TLC levhalarEMD Millipore1.05549.0001
İnce duvarlı Hassas NMR tüpleriBel-Art6630005855mm OD
Tamamen plastik Norm-Ject şırıngalarAir TiteAL10
tek kullanımlık iğneBD PrecisionGlideBD 305185kullanılmış iğneler kesici alet atık konteynerine
Tek kullanımlık fritli şırıngaTorviqSF1000LLRaporda 10 mL fritli şırınga kullanılmıştır, ancak daha büyük ölçekli sentez için gerekirse daha büyük şırıngalar mevcuttur.
karbon ızgaraTed Pella, Inc.CF200-CUNumuneleri ve boyamayı, ızgara kendiliğinden kapanan cımbızın parlak bakır tarafında değil, karbon ızgara tarafında hazırladığınızdan emin olun
Elektron Mikroskobu Bilimleri78318-3Xçok keskin uçlar, uzunluk: 120 mm
0,1 mm kısa yol uzunluğu hücreStarna Cells, Inc.20/C-Q-0.1Kırılgan
10mL Kap KapaklarıCEM909210
10mL Basınçlı KaplarCEM908035
Aeris Yarı Hazırlık HPLC sütunuPhenomenex00F-4632-N0150 x 10mm
hücre tutucuStarna Cells, Inc.CH-2049Kısa yol uzunluğuna sahip hücreler kullanılırken gereklidir
PS3 peptit sentezleyiciGyros Protein Teknolojileri
DiscoverSP Mikrodalga ReaktörüCEM
santrifüjHERMLEZ 206 Asabit bir 6x50 mL rotor HPLC
ShimadzuUV Dedektörü
nükleer manyetik rezonans spektrometresiAvance, Bruker kullandı300 MHz
MALDI-TOF kütle spektrometresi, Axima Confidence, Shimadzu
liyofilizatörMillrock TeknolojisiBT85A
, Fourier-Transform Kızılötesi Spektrometresi, Alfa Tensörü, Bruker
Transmisyon Elektron Mikroskobu, Tecnai Spirit, FEIGatan Orius Fiberoptik CCD dijital kamera ile kullanılır. CSCU Nanoteknoloji Merkezi'nde erişildi
Dairesel Dikroizm SpektropolarimetresiJ-810, JASCOAltı hücreli Peltier sıcaklık kontrol cihazı ile kullanılır. Wesleyan Üniversitesi'nde erişildi.
solumayın kullandıktan sonra cildi iyice yıkayın solumayın . % yutmayın solumayın . atılır , , , ,

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Wang, J., Liu, K., Xing, R., Yan, X. Peptide self-assembly: Thermodynamics and kinetics. Chemical Society Reviews. 45, 5589-5604 (2016).
  2. Dong, R., et al. Functional supramolecular polymers for biomedical applications. Advanced Materials. 27, 498-....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

12 Dithiolane PeptideSelf Assembling PeptidesSolid Phase SynthesisMicrowave DeprotectionHPLC PurificationMALDI TOF AnalysisFT IR SpectroscopyCircular DichroismTransmission Electron MicroscopyAmyloid Fibers

Related Articles