Yöntem makalesi

Aksonal büyüme koni çöküşü ve erken amiloid β sonuç kültürlü fare nöronlar içinde görüntülenmesi

DOI:

10.3791/58229

⸱

30 Ekim 2018

1Division of Neuromedical Science, Institute of Natural Medicine, University of Toyama

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada amiloid-β (Aβ) beyindeki erken etkilerini araştırmak için bir protokol sunulmuştur. Bu Aβ clathrin aracılı endositoz ve aksonal büyüme koniler çöküşü indükler gösterir. İletişim kuralı erken etkileri Aβ aksonal büyüme koniler okumak yararlı ve Alzheimer hastalığı önleme kolaylaştırabilir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Amiloid-β (Aβ) bellek bozuklukları Alzheimer hastalığı içinde (Ah) neden olur. Tedavi gösterilen rağmen reklam hastaların beynindeki Aβ düzeyleri azaltmak için bunlar hafıza fonksiyonları geliştirmek değil. Bellek bozuklukları görünümünü önce beyinde Aβ toplar beri Aβ hedefleme zaten bellek açıkları sergileyen reklam hastaları tedavi etmek için verimsiz olabilir. Bu nedenle, aşağı akım Aβ birikimi nedeniyle sinyal reklam geliştirme önce engellenmelidir. Aβ aksonal dejenerasyon, nöronal ağlar ve bellek bozuklukları kesintiye uğraması için önde gelen neden olmaktadır. Aβ toksisite mekanizmalar üzerinde birçok çalışma olmasına rağmen kaynak Aβ toksisitesi bilinmemektedir. Kaynağını belirlemeye yardımcı olması için mikroskopi, gen transfection ve canlı hücre tarafından Aβ kültürlü nöronların aksonal büyüme koni içinde neden erken değişiklikleri öğrenmek için Imaging kullanan yeni bir iletişim kuralı öneriyoruz. Bu iletişim kuralı Aβ endositoz inhibisyonu Aβ toksisite engel olduğunu gösteren clathrin aracılı endositoz büyüme koni çöküntü, takip aksonal büyüme koni içinde indüklenen saptandı. Bu iletişim kuralı Aβ erken etkileri okumak yararlı olacaktır ve daha verimli ve önleyici reklam tedavi neden olabilir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Amiloid-β (Aβ) mevduat Alzheimer hastalığı (Ah) hastalarda beyin bulunur ve nöronal ağlar, bozabilir reklam1 bellek bozuklukları2,3,4' e giden kritik bir nedeni olarak kabul edilir. Birçok klinik ilaç adaylarının etkili amiloid-β (Aβ) üretim önlemek veya Aβ mevduat kaldırma gösterilmiştir. Ancak, hiçbiri reklam hastalar5işlevinde bellek iyileştirmede başarılı olması. Aβ bellek bozuklukları6başlangıcından önce beyinde yatırılır; Bu nedenle, hastaların beyinlerinin seviyelerinde Aβ azalan sergileri bellek bozuklukları etkisiz olabilir. Aβ ifade preklinik reklam hastalarda mevcuttur; Ancak, bu hastaların nadiren nöronal dejenerasyon ve bellek açıkları6ile mevcut. Aβ ifade ve bellek bozuklukları arasında bir zaman farkı vardır. Bu nedenle, reklam önlenmesi için kritik bir strateji Aβ toksisite reklam, önce bellek açıkları gelişimi erken aşamalarında sinyali engelliyor. Aβ ifade için bir bozulma yol açabilir axon dejenerasyon7,8,9,10,11,12,13, neden olmaktadır. sinir ağları ve bellek işlevinin sürekli bozulma. Birçok çalışma mekanizmaları Aβ toksisite araştırdık; Örneğin, dejenere aksonlar, reklam farelerin beyinlerinin autophagy14artış gösterilmiştir. Kalsinörin harekete geçirmek aksonal dejenerasyon Aβ kaynaklı15olası bir mekanizma olarak bildirilmiştir; Ancak, aksonal dejenerasyon doğrudan tetikleyici bilinmeyen kalır.

Bu çalışmada aksonal sonlar büyüme koniler olarak adlandırılan çöküşü odaklanır. Aksonal büyüme koniler çöküşü aksonal büyüme kovucular, semaphorin-3A ve ephrin-A516,17,18,19,gibi20neden olabilir. Çöküşü gibi distrofik aksonal sonlar hastalar21,22yılında beyinlerinde gözlenmiştir. Ayrıca, büyüme koni işleyen bir başarısızlık aksonal dejenerasyon23sebep olabilir. Ancak, ister Aβ büyüme koni Daralt indükler bilinmemektedir. Bu nedenle, bu çalışmada Aβ erken etkileri kültürlü nöronlar içinde gözlemlemek ve Aβ kaynaklı büyüme koni Daralt araştırmak için yeni bir protokol sunar.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm deneyler kılavuzlarınıza uygun olarak bakım ve kullanım Laboratuvar hayvanları Toyama Üniversitesi Sugitani kampüsünde yapılmıştır ve hayvan bakım ve kullanım Laboratuvar hayvanları Sugitani kampüsünde Komitesi tarafından kabul edildi Üniversitesi, Toyama (A2014INM-1, A2017INM-1).

1. Daralt tahlil

  1. Poli-D-lizin kaplama
    1. 8-şey kültür slaytlar ile 5 μg/mL poli-D-lizin (PDL) 400 μL fosfat tamponlu tuz (PBS) kat ve onları gece 37 ° C'de kuluçkaya.
    2. PDL çözümü kaldırmak ve wells 3 kez distile su ile yıkayın.
  2. Nöron kültürü24
    1. Embriyonik gün 14 (E14) ddY fareler microscissors nöron kültürü % 12 at serum, % 0.6 glikoz ve 2 mM L-glutamin (a orta) içeren ortamda ile gelen taze izole serebral cortices kıyma. Antibiyotik eklemeyin.
      Not: Bu protokol için ddY fare kullanılır. Bu Japonya'da yaygın olarak kullanılan outbred bir yük olduğunu. Bu nöron kültürü iletişim kuralı da sıçan kortikal nöronlar7,25için uygulanabilir.
    2. 87 x g 3 dk de doku santrifüj kapasitesi.
    3. Süpernatant kaldırın. Öyleyse Pelet için 2 mL % 0.05 tripsin ekleyin ve 37 ° C'de 15 dakika kuluçkaya Her 5 dk dokunarak karıştırın.
    4. Orta A ve mix 4 mL dokunarak ekleyin.
    5. 178 x g 3 dk de doku santrifüj kapasitesi.
    6. Süpernatant kaldırmak ve ben ve 0.3 mg/mL soya tripsin inhibitörü 37 ° C'de 15 dakika PBS içinde çözünmüş 600 U/mL DNaz kurcalayarak kuluçkaya Her 5 dk dokunarak karıştırın.
    7. Kuluçka sonra dokunarak 4 mL orta A ve karışımı ekleyin.
    8. 178 x g 3 dk de doku santrifüj kapasitesi.
    9. Süpernatant kaldırma sonra orta A 4 mL ekleyin ve cilalı bir Pasteur pipet kurcalayarak triturate.
    10. 70 µm gözenek boyutu kafes triturated kurcalayarak filtre. Filtrasyon sonra bir hemasitometre hücrelerle yoğunluğunu hesaplamak.
    11. 8-şey kültür hücrelerde 0.8 x 104 hücreleri/iyi orta A ile slayt ve CO2 kuluçka 37 ° C'de % 10 CO2 oksijen atmosfere sahip proje kültür
    12. Kültür 4 h sonra nöronal kültür, % 0.6 glikoz ve 2 mM L-glutamin (orta B) içeren %2 ek bir kültür Orta'ya değiştirin.
      Not: Nöronlar saflığı yaklaşık % 75,26daha önce açıklandığı gibi oldu.
  3. Daralt tahlil27
    1. Ticari olarak elde tam uzunlukta amiloid β1-42 (Aβ1-42) 0,5 mM bir konsantrasyon, distile su içinde dağıtılması ve 37 ° C de 7 gün kuluçkaya. Kuluçka sonra toplanan Aβ1-42 çözüm kullanmak kadar-30 ° C buzlukta saklamak.
      Not: Bu kuluçka toplama ve Aβ27,28,29,30toksisite için gereklidir.
    2. Yeni orta b 100 μL Wells'le nöronal kültürünün 4 gün tedavi sonra 0.5 mikron içeren Aβ1-42 ya da araç çözüm (distile su) 1 h için toplanan.
      Not: Aβ1-42 etkileri doz bağımlı 0,1 5 mikron artmış ve27daha önce açıklandığı gibi 0.5 mikron kadar yükseldi. Aβ1-42 tedavi ne zaman 1 h için nöronal kültür313 gün sonra tarafından benzer sonuçlar görülebilmektedir.
    3. Kültür orta kaldırmak ve nöronlar sıcak tabakta 37 ° C'de 1 h için PBS içinde % 4 Sükroz içeren %4 paraformaldehyde ile sorunu hemen.
    4. Fiksasyon sonra PBS ile 3 kez nöronlar yıkayın ve bir sulu montaj orta ile mount. Montaj orta 4 ° C'de 2 – 4 gündür kuru.
    5. Her şey bir 20 X kuru objektif lens üzerinde ters bir mikroskop ile tüm alanı (7,8 x 9 mm2) yakalama.
    6. Her nöron uzun neurites aşamada 3 veya 4 olarak aksonlar, yukarıda açıklanan32,33sınıflandırmak.
    7. Büyüme koniler aşağıdaki ölçütlere göre sınıflandırmak: 1) aksonal büyüme koni lamellipodia eksik veya 2) den az üç filopodia sahip olarak kabul edilir17daha önce açıklandığı gibi büyüme koniler çöktü.
      Not: Sağlıklı büyüme koniler 0 noktası olarak attı; daraltılmış büyüme koniler 1 puan attı. Puanları hesaplanır çöküşü için her tedavi demek.

2. amiloid Beta Immunostaining

  1. Fare kortikal nöronlar 1.2 adımda anlatıldığı gibi 3 gün boyunca kültür.
  2. Tedavi ile toplanan Aβ1-42 (5 mikron) ya da araç CO2 kuluçka 37 ° C'de 4 h için.
  3. Orta çıkarmadan, her şey için PBS içinde % 4 Sükroz içeren %4 paraformaldehyde eşit bir hacmi ekleyin ve 5 min için sıcak tabakta 37 ° C'de kültür korumak.
  4. PBS %4 Sükroz içeren %4 paraformaldehyde 400 μL çözüm yerine ve 1 h için sıcak tabakta 37 ° C'de korumak. Bu fiksasyon Protokolü önceki rapor34güncellenmiştir.
  5. Nöronlar 3 kez PBS ile yıkayın.
  6. % 5 normal keçi serum PBS ile engelleyin.
  7. Nöronlar ile fare Anti-amiloid β immünoglobulin G (IgG) (1:50) ve % 1 sığır serum albümin PBS içinde 4 ° C'de gecede kuluçkaya.
  8. Nöronlar 3 kez PBS ile yıkayın.
  9. Nöronlar bir ikincil antikor (1: 400) Floresan Birleşik ve % 1 sığır serum albümin PBS içinde oda sıcaklığında 2 h için kuluçkaya.
  10. Nöronlar 3 kez PBS ile yıkayın ve bir sulu montaj orta ile mount.
  11. Ters mikroskobunun d. 40 X kuru objektif lens kullanarak floresans görüntüler ve eğik aydınlatmalı parlak alan görüntüleri yakalama

3. aksonal Immunostaining27

  1. 3 kez ile PBS nöronlar 1.3.3. adımda açıklandığı gibi kültürlü nöron fiksasyon sonra yıkayın.
  2. Nöronlar fare anti-tau-1 ile kuluçkaya IgG (1:500), tavşan Anti-Mikrotubul ilişkili protein 2 (MAP2) IgG (1:500) % 5 normal keçi serum ve %0,3 t- octylphenoxypoly-ethoxyethanol içinde PBS gecede 4 ° C'de.
  3. Nöronlar 3 kez PBS ile yıkayın.
  4. İkincil antikorlar (1: 400) Floresan Birleşik ve %0,3 t- octylphenoxypolyethoxyethanol PBS içinde 2 h için oda sıcaklığında nöronlar kuluçkaya.
  5. Nöronlar 3 kez PBS ile yıkayın ve bir sulu montaj orta kullanarak bağlayabilirsiniz.
  6. Floresan ve diferansiyel girişim kontrast (DIC) ters mikroskop A. üzerinde 20 × kuru objektif lens kullanarak çekim

4. canlı hücre27 görüntüleme

  1. Kat cam tabanlı yemekleri ile 500 μL PDL (5 μg/mL), 1.1.1. adımda açıklandığı gibi.
    Not: Bu protokol için ev yemekleri cam tabanlı kullanılmıştır. Piyasada bulunan cam tabanlı yemekleri de canlı görüntüleme için kullanılabilir. Ev yemekleri cam tabanlı aşağıdaki gibi hazırlanan: 1) yol yaklaşık 1.4 mm çapında 35-mm çanak ortasına bir el yumruk ile açın ve 2) silikon ile çanak arka cam coverslip (22 mm çapında) ekleyin.
  2. 1.1.2. adımda açıklandığı gibi plakaları distile su ile yıkama ve kortikal nöronlar, 3 x 104 hücreleri/çanak adım 1.2 açıklandığı gibi orta a cam tabanlı tabak içinde kültür.
  3. Yeni orta B 2 mL ve transferi ile Orta hücre kültürü, 4 gün değiştirdikten sonraki yemek için mikroskop A. koru % 10 CO2 37 ° C'de oksijen bir atmosferde kültür ters

5. endositoz deney

  1. Fare kortikal nöronlar 1.2 adımda anlatıldığı gibi kültür.
  2. Dört gün sonra yeni orta 20 mikron floresans membran sonda 1 dk. için içeren B 100 μL orta yerine.
  3. Pipetting tarafından 1 μL 0,05 mM toplu Aβ1-42 (son 0.5 mikron) veya araç (distile su) çözüm ve karışımı ekleyin. 20 dk için kuluçkaya.
  4. Orta kaldırmak ve wells önceden 37 ° C'ye ısıtılmış oldu iki kez orta B ile yıkayın
  5. Tamir, yıkama ve nöronlar 1.3.3 ve 1.3.4 adımlarda açıklandığı şekilde bağlayın.
  6. Floresan ve petrol objektif lens üzerinde ters mikroskop A. X 63 görüntülerle DIC yakalama
  7. Floresans membran sonda pozitif alan her sağlıklı büyüme koni yoğunluğu bir görüntü yazılımı kullanarak ölçmek.

6. Gene Transfection

  1. Kortikal nöronlar 1.2. adımda açıklandığı şekilde hazırlayın. 1.2.1-1.2.10 adımları tamamladıktan sonra 178 x g 3 dk de nöronların santrifüj kapasitesi.
  2. Süpernatant kaldırmak için Ca2 +4 mL ekleyin-ücretsiz ve Mg2 +-Hanks dengeli tuz solüsyonu (CMF-HBSS) ücretsiz ve mix pipetting tarafından.
  3. 178 x g 3 dk de hücreleri santrifüj kapasitesi.
  4. Süpernatant kaldırmak, 4 mL CMF-HBSS ve pipetting tarafından karıştırın. Daha sonra hücre yoğunluğu 1.2.10 adımda anlatıldığı gibi hesaplayın.
  5. 5 x 106 hücreler bir 1,5 mL tüp ve 1 dk. için 1,677 x g, santrifüj aktarın.
  6. Süpernatant kaldırmak, transfection çözüm eki ile 100 μL ve EGFP veya EGFP-AP180 C-terminus kodlama DNA plazmid 3 μg ekleyin ve pipetting tarafından mix.
  7. Yukarıdaki çözüm (adım 6,6) sertifikalı bir küvet aktarmak ve üreticinin protokole göre bir electroporator ile transfect.
  8. Hemen transfection sonra orta A 500 μL küvet ekleyin ve sertifikalı bir pipet ile 1.5 mL tüp çözüm aktarmak. Daha sonra hücre yoğunluğu 1.2.10 adımda anlatıldığı gibi hesaplayın.
  9. 0.8 x 104 hücreleri/iyi, bir 8-şey kültür slayda hücrelerde 1.2.11 ve 1.2.12 adımlarda açıklandığı gibi kültür.
  10. Hücre kültürü, 4 gün sonra bir çöküş tahlil 1.3 adımda anlatıldığı gibi gerçekleştirin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kuluçka Aβ1-42 toksik formları27,28,30,35üretmek için ihtiyaç vardı çünkü bu protokol için kullanmadan, 7 gün için 37 ° C'de Aβ1-42 inkübe. Bu kuluçka sonra Aβ toplanan formları (Şekil 1A) tespit edildi. Bu Aβ1-42 benzer kuluçka Aβ36fibriller şeklinde üretilen bildirilmiştir. Bu toplanan Aβ1-42 ile tedavi son...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışmada açıklanan protokol aksonal büyüme koniler erken olayları gözlem Aβ1-42 tedaviden sonra etkin. Aβ1-42 endositoz aksonal büyüme koni içinde 20 dk içinde indüklenen ve büyüme koni Daralt tedavinin içinde 1 h gözlendi. Bu endositoz muhtemelen clathrin tarafından aracılık. Bu iletişim kuralını kullanarak, clathrin-aracılı endositoz inhibisyonu Aβ1 42 bağlı büyüme koni çöküşü ve kültürlü nöronlar27aksonal dejenerasyon önlemek için doğrulandı. Ayrıca, clathrin-aracılı endositoz inhibisyonu A...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazar ifşa etmek hiçbir şey vardır.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu eser kısmen JSP'ler gelen araştırma hibe tarafından desteklenmiştir (KAKENHI 18K 07389), Japonya, Takeda Bilim Vakfı, Japonya ve Kobayashi ilaç Co., Ltd., Japonya.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
ddY farelerSLC
Sekiz kuyulu kültür slaydıFalcon354108
poli D lizinWako168-19041
Kültür ortamı, Nörobazal ortamGibco21103-049
ev serumuGibco26050-088
glikozWako049-31165
L-glutaminWako074-00522
%0.05 tripsinGibco25300-054
DNase IWorthingtonDP
soya fasulyesi tripsin inhibitörüGibco17075-029
70 & mikro filtreli; m ağ boyutu, hücre süzgeciFalcon352350
B-27 takviyesiGibco17504-044
CO2< / sub> inkübatörAstecSCA-165DS
Amiloid ve beta; 1-42Sigma-AldrichA9810
paraformaldehitWako162-16065
sükroz Wako196-00015
Sulu montaj ortamı, Aqua-Poly/Mountpolysciences18606-20
Ters mikroskop ACarl ZeissAxio Observer Z1 AxioCam MRm, Isıtma Ünitesi XL S, CO2 Modülü S1 ve TempModule S1 ile bağlantılı
Objektif Plan-Apochromat 20xCarl Zeiss420650-9901
Objektif Plan-Apochromat 63xCarl Zeiss440762-9904
Objektif, CFI Planı Apo Lambda 40XNikon
anti-MAP2 IgG Abcamab32454
anti-tau-1 IgG ChemiconMAB3420
anti-amiloid ve beta; antikorIBL10379klonu 11A1
normal keçi serumuWako143-06561
sığır serum albüminiWako010-25783
t-oktilfenoksipolietoksietanolWako169-21105
AlexaFluor 594 ile konjuge keçi anti-fare IgG AlexaFluor 488 ilekonjuge InvitrogenA11032
keçi anti-tavşan IgGInvitrogenA11029
sıcak plakaNISSINNHP-M30N
kapak camıFisher Scientific12-545-85
35 mm çanakIWAKI1000-035
Silikon RTVShin-EtsuKE42T
el zımbasıRoper WhitneyNo.
Floresan membran probu, FM1-43FXInvitrogenF35355
Ca2+- ve Mg2+ içermeyen Hanks'in dengeli tuz çözeltisiGibco14175-095
Transfeksiyon çözeltisi, Nükleofektör çözeltisiLonzaVPG-1001
Elektroporatör, Nükleofektör IAmaxa
Ters mikroskop BKeyenceBZ-X710
Görüntü yazılımı, ImageJNIHhttps://imagej.nih.gov/ij/
XX

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Selkoe, D. J., Hardy, J. The amyloid hypothesis of Alzheimer's disease at 25 years. EMBO Molecular Medicine. 8 (6), 595-608 (2016).
  2. Dickson, T. C., Vickers, J. C. The morphological phenotype of beta-amyloid plaques and associated neuritic changes in Alzheimer's disease. Neuroscience. 105 (1), 99-107 (2001).
  3. Hardy, J., Selkoe, D. J. The amyloid hypothesis of Alzheimer's disease: progress and problems on the road to therapeutics. Science. 297 (5580), 353-356 (2002).
  4. Perl, D. P. Neuropathology of Alzheimer's disease. Mount Sinai Journal of Medicine. 77 (1), 32-42 (2010).
  5. Graham, W. V., Bonito-Oliva, A., Sakmar, T. P. Update on Alzheimer's Disease Therapy and Prevention Strategies. Annual Review of Medicine. 68, 413-430 (2017).
  6. Jack, C. R. Jr, et al. Hypothetical model of dynamic biomarkers of the Alzheimer's pathological cascade. Lancet Neurology. 9 (1), 119-128 (2010).
  7. Kuboyama, T., Tohda, C., Komatsu, K. Neuritic regeneration and synaptic reconstruction induced by withanolide A. British Journal of Pharmacology. 144 (7), 961-971 (2005).
  8. Tohda, C., Urano, T., Umezaki, M., Nemere, I., Kuboyama, T. Diosgenin is an exogenous activator of 1,25D3-MARRS/Pdia3/ERp57 and improves Alzheimer's disease pathologies in 5XFAD mice. Scientific Reports. 2, 535(2012).
  9. Jawhar, S., Trawicka, A., Jenneckens, C., Bayer, T. A., Wirths, O. Motor deficits, neuron loss, and reduced anxiety coinciding with axonal degeneration and intraneuronal Abeta aggregation in the 5XFAD mouse model of Alzheimer's disease. Neurobiology of Aging. 33 (1), e129-e140 (2012).
  10. Postuma, R. B., et al. Substrate-bound beta-amyloid peptides inhibit cell adhesion and neurite outgrowth in primary neuronal cultures. Journal of Neurochemistry. 74 (3), 1122-1130 (2000).
  11. Tohda, C., Nakada, R., Urano, T., Okonogi, A., Kuboyama, T. Kamikihi-to (KKT) rescues axonal and synaptic degeneration associated with memory impairment in a mouse model of Alzheimer's disease, 5XFAD. International Journal of Neuroscience. 121 (12), 641-648 (2011).
  12. Tsai, J., Grutzendler, J., Duff, K., Gan, W. B. Fibrillar amyloid deposition leads to local synaptic abnormalities and breakage of neuronal branches. Nature Neuroscience. 7 (11), 1181-1183 (2004).
  13. Wirths, O., Weis, J., Kayed, R., Saido, T. C., Bayer, T. A. Age-dependent axonal degeneration in an Alzheimer mouse model. Neurobiology of Aging. 28 (11), 1689-1699 (2007).
  14. Sanchez-Varo, R., et al. Abnormal accumulation of autophagic vesicles correlates with axonal and synaptic pathology in young Alzheimer's mice hippocampus. Acta Neuropathologica. 123 (1), 53-70 (2012).
  15. Wu, H. Y., et al. Amyloid beta induces the morphological neurodegenerative triad of spine loss, dendritic simplification, and neuritic dystrophies through calcineurin activation. Journal of Neuroscience. 30 (7), 2636-2649 (2010).
  16. Campbell, D. S., Holt, C. E. Chemotropic responses of retinal growth cones mediated by rapid local protein synthesis and degradation. Neuron. 32 (6), 1013-1026 (2001).
  17. Jurney, W. M., Gallo, G., Letourneau, P. C., McLoon, S. C. Rac1-mediated endocytosis during ephrin-A2- and semaphorin 3A-induced growth cone collapse. Journal of Neuroscience. 22 (14), 6019-6028 (2002).
  18. Luo, Y., Raible, D., Raper, J. A. Collapsin: a protein in brain that induces the collapse and paralysis of neuronal growth cones. Cell. 75 (2), 217-227 (1993).
  19. Nicol, X., Muzerelle, A., Rio, J. P., Metin, C., Gaspar, P. Requirement of adenylate cyclase 1 for the ephrin-A5-dependent retraction of exuberant retinal axons. Journal of Neuroscience. 26 (3), 862-872 (2006).
  20. Wu, K. Y., et al. Local translation of RhoA regulates growth cone collapse. Nature. 436 (7053), 1020-1024 (2005).
  21. Benes, F. M., Farol, P. A., Majocha, R. E., Marotta, C. A., Bird, E. D. Evidence for axonal loss in regions occupied by senile plaques in Alzheimer cortex. Neuroscience. 42 (3), 651-660 (1991).
  22. Masliah, E., et al. An antibody against phosphorylated neurofilaments identifies a subset of damaged association axons in Alzheimer's disease. American Journal of Pathology. 142 (3), 871-882 (1993).
  23. Zhou, F. Q., Snider, W. D. Intracellular control of developmental and regenerative axon growth. Philosophical transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological sciences. 361 (1473), 1575-1592 (2006).
  24. Teshigawara, K., et al. A novel compound, denosomin, ameliorates spinal cord injury via axonal growth associated with astrocyte-secreted vimentin. British Journal of Pharmacology. 168 (4), 903-919 (2013).
  25. Kuboyama, T., Tohda, C., Komatsu, K. Withanoside IV and its active metabolite, sominone, attenuate A beta(25-35)-induced neurodegeneration. European Journal of Neuroscience. 23 (6), 1417-1426 (2006).
  26. Tanabe, N., Kuboyama, T., Tohda, C. Matrine Directly Activates Extracellular Heat Shock Protein 90, Resulting in Axonal Growth and Functional Recovery in Spinal Cord Injured-Mice. Frontiers in Pharmacology. 9 (446), (2018).
  27. Kuboyama, T., Lee, Y. A., Nishiko, H., Tohda, C. Inhibition of clathrin-mediated endocytosis prevents amyloid beta-induced axonal damage. Neurobiology of Aging. 36 (5), 1808-1819 (2015).
  28. Pike, C. J., Walencewicz, A. J., Glabe, C. G., Cotman, C. W. In vitro aging of beta-amyloid protein causes peptide aggregation and neurotoxicity. Brain Research. 563 (1-2), 311-314 (1991).
  29. Uchida, N., et al. Yokukansan inhibits social isolation-induced aggression and methamphetamine-induced hyperlocomotion in rodents. Biological and Pharmaceutical Bulletin. 32 (3), 372-375 (2009).
  30. Pike, C. J., Burdick, D., Walencewicz, A. J., Glabe, C. G., Cotman, C. W. Neurodegeneration induced by beta-amyloid peptides in vitro: the role of peptide assembly state. Journal of Neuroscience. 13 (4), 1676-1687 (1993).
  31. Kuboyama, T., Hirotsu, K., Arai, T., Yamasaki, H., Tohda, C. Polygalae Radix Extract Prevents Axonal Degeneration and Memory Deficits in a Transgenic Mouse Model of Alzheimer's Disease. Frontiers in Pharmacology. 8, 805(2017).
  32. Dotti, C. G., Sullivan, C. A., Banker, G. A. The establishment of polarity by hippocampal neurons in culture. Journal of Neuroscience. 8 (4), 1454-1468 (1988).
  33. Arimura, N., Kaibuchi, K. Neuronal polarity: from extracellular signals to intracellular mechanisms. Nature Reviews: Neuroscience. 8 (3), 194-205 (2007).
  34. De Felice, F. G., et al. Alzheimer's disease-type neuronal tau hyperphosphorylation induced by A beta oligomers. Neurobiology of Aging. 29 (9), 1334-1347 (2008).
  35. Izuo, N., et al. Toxicity in Rat Primary Neurons through the Cellular Oxidative Stress Induced by the Turn Formation at Positions 22 and 23 of Aβ42. ACS Chemical Neuroscience. 3 (9), 674-681 (2012).
  36. Fujiwara, H., et al. Uncaria rhynchophylla, a Chinese medicinal herb, has potent antiaggregation effects on Alzheimer's beta-amyloid proteins. Journal of Neuroscience Research. 84 (2), 427-433 (2006).
  37. Murakami, K., et al. Monoclonal antibody against the turn of the 42-residue amyloid beta-protein at positions 22 and 23. ACS Chemical Neuroscience. 1 (11), 747-756 (2010).
  38. Ford, M. G., et al. Simultaneous binding of PtdIns(4,5)P2 and clathrin by AP180 in the nucleation of clathrin lattices on membranes. Science. 291 (5506), 1051-1055 (2001).
  39. Tojima, T., Itofusa, R., Kamiguchi, H. Asymmetric clathrin-mediated endocytosis drives repulsive growth cone guidance. Neuron. 66 (3), 370-377 (2010).
  40. Ahmed, G., et al. Draxin inhibits axonal outgrowth through the netrin receptor DCC. Journal of Neuroscience. 31 (39), 14018-14023 (2011).
  41. Brennaman, L. H., Moss, M. L., Maness, P. F. EphrinA/EphA-induced ectodomain shedding of neural cell adhesion molecule regulates growth cone repulsion through ADAM10 metalloprotease. Journal of Neurochemistry. 128 (2), 267-279 (2014).
  42. Tojima, T., et al. Attractive axon guidance involves asymmetric membrane transport and exocytosis in the growth cone. Nature Neuroscience. 10 (1), 58-66 (2007).
  43. Ooashi, N., Futatsugi, A., Yoshihara, F., Mikoshiba, K., Kamiguchi, H. Cell adhesion molecules regulate Ca2+-mediated steering of growth cones via cyclic AMP and ryanodine receptor type 3. Journal of Cell Biology. 170 (7), 1159-1167 (2005).
  44. Biswas, S., Kalil, K. The Microtubule-Associated Protein Tau Mediates the Organization of Microtubules and Their Dynamic Exploration of Actin-Rich Lamellipodia and Filopodia of Cortical Growth Cones. Journal of Neuroscience. 38 (2), 291-307 (2018).
  45. Kuboyama, T., et al. Paxillin phosphorylation counteracts proteoglycan-mediated inhibition of axon regeneration. Experimental Neurology. 248, 157-169 (2013).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Amiloid BetaN ronal K lt rMikroskopi AnaliziH cre Fiksasyonumm nboyamaTau 1 Mark rMAP 2 Mark rCanl H cre G r nt leme

İlgili makaleler