Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Ex Vivo Hücre özgü kalsiyum fare diyafram Üçlü sinaps sinyal görüntüleme

7.4K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/58347

⸱

4 Ekim 2018

 ,  , 
1Department of Physiology and Cell Biology, School of Medicine, University of Nevada, 2Department of Pharmacology, Larner College of Medicine, University of Vermont

Bu makalede

Özet

Burada bir protokol için tek tek hücre tiplerinin fare nöromusküler kavşakta nüfus sinyal görüntü kalsiyum mevcut.

Özet

Doku hücreleri elektriksel aktivitesinin elektrofizyolojik teknikleri tarafından izlenebilir ama bunlar genellikle tek tek hücreler analiz için sınırlıdır. Hücre içi kalsiyum (Ca2 +) sitozol artış kez elektriksel aktivite nedeniyle oluşur veya sayısız diğer uyaranlara yanıt olarak, bu işlem tarafından izlenebilir sonra hücreleri görüntüleme florasan kalsiyum duyarlı ile yüklü boyalar.  Ancak, bu boyalar doku içinde tüm hücre tipleri tarafından alınır çünkü bu yanıtı tüm doku içinde bireysel bir hücreye görüntü zordur. Buna ek olarak, genetik olarak kodlanmış kalsiyum göstergeleri (turk) bir tek hücre türüne göre ifade edilebilir ve böylece tüm nüfus içinde sinyal Ca2 + görüntüleme erişimine izin verme intrasellüler Ca2 +, artış yanıt olarak belli tek hücre türleri. Burada, biz turk GCaMP3/6 Kullanım fare nöromüsküler kavşak uygulamak, motor nöronlar, iskelet kası ve terminal/perisynaptic arasında üçlü bir synapse Schwann hücreleri. Biz bu teknik klasik ex vivo doku müstahzarları yarar göstermek. Bir optik bölücü kullanarak, biz çift dalga boyu görüntüleme dinamik Ca2 + sinyal ve nöromüsküler kavşak (NMJ) statik bir etiket iki hücre özgü GECI veya genetik olarak kodlanmış gerilim izlemek için kolayca adapte olabilir bir yaklaşım yerine Göstergeler (GEVI) aynı anda. Son olarak, biz floresan yoğunluğu uzamsal haritalar yakalamak için kullanılan yordamları tartışıyorlar. Birlikte, bu optik, transgenik ve analitik teknikler farklı hücre altgrupları çeşitli bağlamlarda NMJ, biyolojik aktivitesini incelemek için istihdam edilebilir.

Giriş

Gibi tüm sinapslarda, NMJ üç unsurdan oluşur: presynaptic bir terminal türetilmiş bir nöron, bir postsinaptik nöron/efektör hücre ve bir perisynaptic gliyal hücre1,2. Sinaptik iletimi temel yönlerini ilk bu synapse3' te gösterilen, birçok açıdan, bu işlemin kısmen nedeniyle bu synapse farklı hücresel elementlerin tarafından aynı moleküllerden ifadesi bilinmeyen kalır. Örneğin, omurgalı NMJ, motor nöronlar tarafından ortak yayımlanan, reseptörleri pürin adenin nükleotit ATP ve asetilkolin (ACh), kas, Schwann hücreleri ve motor nöronlar, böylece herhangi bir yorumu karmaşık hale getiren tarafından ifade edilir Bu maddeler (Örneğin, verici yayın veya Yanıt, kas kuvvet oluşturma)4tarafından sarf fonksiyonel etkisi. Basit, NMJ Üçlü bileşenleridir motor nöronlar, kas hücreleri veya Schwann hücreleri bizi canlı tutan göre değişir olup olmadığını Ayrıca, hangi sık sık birden çok sinaptik girdi, sergi, nöronlarda için merkezi sinir sistemi karşılaştırıldığında kendi içsel olarak heterojen (Örneğin, embriyonik türetme, fiber alt tür, morfoloji) belirsiz. Her biri bu sorunları gidermek için aynı anda bir sinaptik öğesi yanı sıra parça, aynı zamanda, böyle bir tepki'a ayrı diğer öğeler içinde birçok hücre yanıtı izlemek için avantajlı olur. Boya banyo uygulanan birden çok hücre tipleri tarafından doku uygulamaya sonra kaplıyor ve intracellularly yüklü boya sadece görselleştirmek için kullanılabilir çünkü geleneksel stratejileri kalsiyum sinyal ölçmek için kimyasal boyalar kullanarak bu iki gol elde edemez hücre bireysel ya da küçük tabur kadar. Burada, transgenik fareler turk ifade kullanan hücre özgü kalsiyum, belirli görüntüleme ve yazılım araçları5, ile birlikte biz bu iki genel hedefleri ilk göstermek ve tartışmak sinyal ölçmek için tasarlanmış nasıl yanı sıra yeni transgenik araçları ikinci elde yardımcı. Bu teknik kalsiyum dynamics veya diğer hücresel olaylar gözlemlenebilir aynı anda birden çok hücre popülasyonlarının gen kodlanmış optik sensörler aracılığıyla sinyal izlemek isteyen herkes için faydalı olacaktır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Hayvancılık ve deneyler için bakım ve kullanım laboratuvar hayvan ve IACUC University of Nevada, Ulusal Sağlık Rehberi Enstitüleri uygun olarak yapıldı.

1. zarlar ve frenik sinir transgenik fareler üzerinden hazırlanması

  1. Transgenik fareler ve oligonükleotid astar genotip için bu fare satın alabilirsiniz.
    Not: Astar her bu fareler için "Bilgi" sayfasında listelenir.
    1. 3 - için 6-ay-yaşlı fare uygun transgenik/knock-in Cre-sürücü alleli bir kopyasını ve sıfır koşullu GCaMP3/6 gen kopyalarını koşullu GCaMP3 bir veya iki kopyasını ifade aynı yaş ikinci bir fare ile ifade etmek üreme / 6 alleli ve Cre-sürücü alleli sıfır kopyalarını.
    2. Genotip Cre ve koşullu GCaMP3/6 gen var pups ve mark olanlar — bunlar bundan böyle çift transgenik fareler olarak adlandırılır (Örneğin, Myf5-Cre, koşullu GCaMP3)6.
      Not: Bu şekilde bir kopyasını Cre ve koşullu GCaMP3/6 gen ifade fareler tüm verileri türetmek. Diğer mutant farelerde (Örneğin, altını gizleme) bu haçlar eklerken bu özellikle önemlidir.
  2. Çift-transgenik fareler uygun yaş olduğunda (Örneğin, Doğum sonrası gün 0 veya 5 [P0 veya P5] veya yetişkin), fareler onları makas (için fareler P10 genç) ile decapitating veya bir isoflurane inhalasyon odasında yerleştirerek ötenazi — ne zaman onlar are kuyruk çifti forseps ile pinching artık duyarlı, kurban için hazırlar.
  3. Hayvan tarafından işten çıkarma makas çifti ile kurban.
  4. Bölüm arasında hemen altında karaciğer ve kalp ve akciğerler iridectomy makasla hemen üstünde tüm hayvan kemiği.
  5. Uzak karaciğer, kalp ve akciğerler frenik sinir bir emme elektrot (yani, 1-2 cm) çizilmesi için yeterince uzun bir süre korumak için dikkatli olmak, incelemek.
    Not: Sol frenik sinir sol diyafram medial kısmı girer doku beyaz bir parça tanımlanabilir. Bu akciğerler kaldırırken kesilmiş olmalı değil. Şu frenik sinir bir parçası da superior vena cava içeren ve daha ince ve daha beyaz daha vena kava şerit içinde çalışır. Birlikte, her ikisi de sağ medial diyafram nüfuz.
  6. Daha fazla göğüs kafesi ve diyafram çevresinde ince ridge dışında vertebral sütunun kaldırın.
  7. Diyafram ve frenik sinir örnek bir microfuge tüp Krebs Ringer solüsyonu 1 µg/mL 594-αBTX 10 dk içinde belgili tanımlık karanlık ile yerleştirin.
    Not: 594-αBTX bu toplama işlevlerine (kişisel gözlem) engellenmeden ACh reseptör (AChRs) Etiketler.

2. uyarımı ve kas aksiyon potansiyelleri kayıt

  1. Minutien iğne kullanarak, diyafram hareketsiz yoluyla 6 cm çanak üzerine silikon dielektrik jel ile kaplı ve ~ 8 mL oksijenli Krebs Ringer çözeltisi ile dolu ve mikroskop sahneye yerleştirin. Diyafram için 30 dk daha fazla Krebs-zil çözüm (8 mL/dk) ile sıvı.
    Not: Bu ilişkisiz 594-αBTX durulama yanı sıra doku diseksiyon sonra sakinleştiği.
  2. Kurulan yöntemleri7göre emme bir elektrot olun.
    1. Bir micromanipulator kullanarak 4 X büyütme, emme elektrot Sol frenik sinir üzerinde taşımak ve emme emme elektrot bağlı olduğu Tüp bağlı 5 mL şırınga varil dışarı çekerek uygulayın.
      Not: başarılı bir şekilde emme elektrot çizildiğinde, frenik sinir gergin olduğu. Uyarıcı üzerinde açmak ve frenik teşvik sinir el ile saygısız tarafından geçiş 1 x.
    2. Diyafram 1-Hz stimülasyon cevaben görsel olarak aydınlık alan aydınlatma ile incelenerek sözleşmeleri olduğunu emin olun. Eğer değilse, artımlı olarak bir görsel inceleme kas kasılması, tarafından doğrulanabilir bir supramaximal darbe ulaşmak için gerilim kolu çevirerek gerilim ayarlayın. Eğer hala görünür değil, şırınga ile sinir darbe ve tekrar emme uygulayarak çiz deneyebilirsiniz.
  3. Perfüzyon açmak ve kas özgü myosin inhibitörü BHC6 veya voltaj kapılı sodyum kanal antagonisti µ-conotoxin8 100 µM son bir konsantrasyon için ekleyin.
    1. 100 µM BHC yapmak, DMSO 200 mM stokunun 4 µL pipet ve 1 mL Krebs Ringer çözeltisi predilute.
    2. 1 mL Krebs Ringer çözeltisi yemek kaldırın.
    3. Prediluted BHC yemek için ekleyin.
      Not: Bu predilution GCaMP3 ifade hücreleri geçici olmayan floresan yanıtta su katılmamış DMSO tarafından indüksiyon önlemeye yardımcı olur.
    4. 30 dakika bekleyin ve sonra başka bir 20-30 dk için taze Krebs-zil çözüm perfüzyon açın.
  4. Kayıt elektrot hazırlayın.
    1. Eldiven giyiyor, bir borosilikat filamented bir dış çap (OD) ile 1 mm ve cam bir 0.4 mm iç çapı (ID) bir micropipette çektirmenin yerleştirin ve yerine kelepçe için aramalar sıkın. Çektirme kapıyı kapat.
    2. P-97 çektirme kullanarak programı aşağıdaki ayarı: 900 ısıda, çekme 120, 75 hızda, 250, 500 ve döngü olmadığını ek basınç anda.
      Not: Yazılım denetimleri amplifikatör kullanarak Resistance (R) ölçülür: veri toplama yazılımı direnç formülü V çözerek onaylar IR. = Yazılım denetleyicisi bir bilinen akım (ı) (genellikle 1 nA) elektrot üzerinden geçer ve böylece bize R. için çözmek etkinleştirme voltaj (V), değişikliği ölçer
    3. Embriyonik diyaframlar için direniş 60 MΩ yakın ve büyük diyaframlar, 10-20 MΩ için olduğundan emin olun. 3 M KCl ile kayıt elektrot yükleyin.
  5. 10 X büyütme oranında elektrot ikinci bir micromanipulator sahne karşı tarafta bir uyarıcı elektrot kullanarak kas içine daha düşük.
  6. Elektrofizyolojik veri toplama yazılımı kullanarak, istirahat membran potansiyeli 0'dan-65 için dönüşünceye kadar bekleyin mV veya aşağıda.
  7. 1 Hz de teşvik ve mütevazı bir kaçmak sergiler için büyük bir potansiyel kontrol ederek bir kas aksiyon potansiyeli varlığını denetlemek (0'ın üzerinde yükselir potansiyel-65 başlatıldığında mV mV veya aşağıda). Stimülasyon artifakı bir aksiyon potansiyeli ile karıştırmayın.
    Not: Süresi (~ 5 ms) stimülasyon eserler önemli ölçüde daha uzun kudretliler.

3. örnek floresans görüntüleme

  1. 594-αBTX-etiketli NMJs yeşil/sarı ışık uyarma altında yaşar kas endplate grup merkezi 20 X büyütme oranında bulun (550 nm). Geçiş için mavi ışık uyarma (470 nm) görüntü Ca2 + yanıt kas, motor nöron veya Schwann hücreleri için.
  2. İsterseniz, resim splitter kadar bant filtreleri ve çift dalga boyu görüntüleme için bir dikroik tek-edge filtresi ayarlayın.
  3. GCaMP3/6-ifade doku tarafından sergilenen maksimal Floresan (Fmax) hesaplamak için diyafram hazırlıklar6' ya 3 M potasyum klorür (KCl) 12 µL eklemek.
    1. Arama tablo Bar GCaMP3/6-ifade doku KCl cevaben binning olmadan 20 X büyütmede doygunluğu sergileyen düzeyinin % 110 set parlaklık çubuğu ile deneyler yapmak.
  4. Kaçırmayın için saniyede 20 kare herhangi bir hızlı olayları kaydetmek.
  5. 1-45 s 20-40 Hz ile sinir stimülasyonu ile bir tren emme elektrot kullanarak impulslarinin sunarak teşvik veya farmakolojik agonistler banyo uygulama veya perfüzyon ekleyin ve dinamik floresan Ca2 + yanıtları bir hücre alt toplamak statik 594-αBTX NMJ sinyal ile birlikte.
    Not: doku özgü kırmızı veya far-red GECI veya GEVI fareler, NMJ kullanılmak yayımlanırsa, onlar NMJ iki ayrı hücresel elemanlar yansıtan iki dinamik sinyal toplamak için kullanılabilir.
  6. İstenen sonuçları elde çünkü görüntüleme veya elektrofizyolojik deneyler sona erdikten sonra perfüzyon hatları üzerinden su sıvı ve su 2 x - 3 x tuzları inşa değil emin olmak için emme elektrot ile emmek.

4. ihracat ve bir standart sapma harita floresan yoğunluğu (SDiu16) tarafından veri analizi

  1. 16-bit TIFF yığınlar kaydedilen görüntü sıralarını kayıt ve analiz için istediğiniz görüntüleme veri analiz sistem içine yükleyin.
  2. Yazılım'ın 8d dosya menüsü, ilgi görüntü yığını seçin ve yüklemek için tıklatın.
    1. Bir kez video yükler, hücresel floresan aktivite vardır bir bölümü tanımlamak için zaman inceden inceye gözden geçirmek.
      Not: Bu bölge bir arka plan örnek oluşturmak için kullanılır.
    2. Shift basılı tutun ve bir bölgesi faiz (ROI) kutusunun arka plan örnek alanı olarak tanımlanan alan çizmek için tıklatın.
    3. Kutusu oluşturduktan sonra arka plan etkinliği değiştirmek bir çizim oluşturmak için boşluk çubuğuna basın.
    4. Izleme sağ tıklatın ve xy koordinat metin dosyası olarak izleme yapmak için Metin olarak yatırım getirisi dökümü seçeneği sunmak için çeşitli seçeneğini belirleyin.
  3. Geri faiz video hareketli, tekrar faiz etkinliğin oluştuğu saat bölgesi tanımlamak için tarayın.
    1. Orta fare düğmesini kullanarak, bu zaman bölgesi sarı zaman kutusunda seçin.
    2. Videoda sağ tıklatın ve seçin Yığın OPS ve sonra Stat göster seçeneği 5.
      Not: Bu sol penceresinde bir standart sapma harita (SD) oluşturur.
    3. SD harita üzerinde tıklatın ve sonra uygun renk ısı haritası uygulamak için 19 x tuşuna basın [ ] .
    4. SD Haritayı sağ tıklatın ve hangi SD harita kaydetme seçeneği stm TIFF olarak kaydetmek sunacak STM yük ve kurtarmak, seçin.
    5. O zaman, basın [ bir gri tonlama renk haritaya dönmek için 19 x anahtar.
    6. C sonra D yoğunluğu haritalama araçları kadar getirmek için tuşuna basın. Sol fare düğmesi ve merkezi fare düğmesini kullanarak, SD Haritada gösterilen tüm floresan etkinlik eklemek için eşik ayarlayın.
    7. Eşik ayarlarını koruyarak yoğunluğu araçları kapatmak için C tuşuna basın.
    8. SD Haritayı sağ tıklatın ve seçin STM parçacıklar ve sonra Bulmak PTCLS.
      Not: Bu tek tek hücreleri floresan etkinliği ifade tanımlar.
    9. Bir kez daha SD Haritayı sağ tıklatın ve Parçacık ROIs oluşturmakseçin.
      Not: Bu orijinal video ilgi temel üst üste.
    10. Shiftbasılı tutarak, özgün video Şimdi tespit parçacık ROIs herhangi birini sağ tıklatın.
    11. Yatırım getirisi Marker ve yatırım getirisi ölçü Intseçin.
      Not: Bu video ilgi tanımlanan her yatırım getirisini floresan faaliyet araziler oluşturur. Bunlar bunlardan herhangi biri sağ tıklatarak kaydedilebilir ve Assorted, seçme Metin olarak yatırım getirisi dökümütarafından takip.
  4. Bu işlemler altında yatan ayrıntılı mantık için kaynak kodu dosyası9bakınız.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Çeşitli değişikliklere örnek olarak artar olan intrasellüler Ca2 + NMJ türleri tanımlanmış hücre içinde tarafından aracılı floresan yoğunluğu, belgili tanımlık yarar bu yaklaşımın göster. Bu sonuçlar yanıt veren hücrelerin konumunu, hem de böylece kaç hücre yanıt ve ne kadar her hücre için belirli bir yanıt değerlendirilmesi için izin verdikleri yanıtlara yoğunluğunu sağlamak kayma floresan yoğunluğu haritalar olarak sunulur uyarıcı. Örneğin, Şekil 1

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Burada biz Ca2 + yanıt sağlam nöromüsküler doku GECI ifade fare kullanarak belirli hücrelerde ölçme bazı örnekler sağlar. Bu deneyler başarıyla gerçekleştirebilmek sırasında diseksiyon frenik sinir incitmek değil zorunludur. CA2 + Schwann hücreleri (Örneğin, 20 X veya 60 X) düşük veya yüksek güçte yanıtlarında görüntüye, ya BHC ya da µ-conotoxin blok hareket için kullanmak gereklidir. Düşük güç görüntüleme için tepkilerin Ca2 + kas hücreleri, onları böylece uzunluğu değişiklikler...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar ifşa gerek yok.

Teşekkürler

Bu eser fonları sağlık (NIH) GM103554 ve GM110767 (T.W.G.) için ulusal Enstitüleri ve araştırma kaynakları 5P20RR018751 Ulusal Merkezi ve Ulusal Enstitüsü genel tıbbi Bilimler 8 P 20 GM103513 (için G.W.H.) ile desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Myf5-Cre fareleriJax#007893E136
Wnt1-Cre fareleriJax#003829kadar erken bir zamanda kas hücresi ekspresyonunu yönlendirir all  E13'te Schwann hücreleri var ancak P209
Sox10-Cre fareleriJax#025807İleri yaşlarda Schwann hücre ekspresyonunu yönlendirir
Koşullu GCaMP3 fareleriJax#029043GCaMP3'ü hücreye özgü bir şekilde ifade eder
Koşullu GCaMP6f fareleriJax#024105GCaMP6f'yi hücreye özgü bir şekilde
ifade ederBHC (3- (N-bütilenimidoyl) -4-hidroksi-2H-krom-2-on)Hit2Lead# 5102862İskelet kası miyozinini bloke eder ancak nörotransmisyonu engellemez6< sup>
CF594-&alfa;-BTXBiotium#00007asetilkolin reseptör kümelerini etiketler
Bloklar Nav1.4 voltaja bağlı sodyum kanalı8
Silikon Dielektrik Jel; aka SylgardEllswoth Yapıştırıcılar# Sil Dielec Jel .9KG Diyaframın minutyen pimler ile hareketsiz hale getirilmesine izin verir
Minutien pimleri (0,1 mm çap)İnce Bilim Araçları26002-10Diyaframı silikon dielektrik jel üzerine hareketsiz hale getirir
Eclipse FN1 dik mikroskop ve nbsp;NikonMBA74100Numunenin evrelenmesine ve gözlemlenmesine izin verir
Manuel XY Mikroskop Çeviricili Temel Sabit Mikroskop Platformu Autom8MXMScrNumunenin hareketine izin verir
Manuel mikromanipülatör NarishigeM-152Kayıt ve uyarıcı elektrotları tutar 
Mikroelektrot amplifikatörü Moleküler CihazlarAxoclamp 900AKeskin elektrot hücre içi elektrofizyolojik kayda izin verir
Mikroelektrot düşük gürültülü veri toplama sistemiMoleküler CihazlarDigidata 1550 Elektrofizyolojik veri toplamaya izin verir
Mikroelektrot veri analiz sistemiMoleküler CihazlarPCLAMP 10 StandardıElektrofizyolojik veri analizi yapar
Kare dalga stimülatörüGrassS48Kası uyarmak için siniri uyarır
Uyaran İzolasyon ÜnitesiÇimPSIU6Stimülasyon artefaktlarını azaltır ve nbsp
Borosilikat filamentler, 1.0 mm dış çap, 0.5mm iç çap SutterFG-GBF100-50-15Sinirle uyarılmış kas potansiyellerini kazığa oturtur ve kaydeder
Borosilikat filamentleri, 1,5 mm dış çap, 1,17 mm iç çap SutterBF150-117-15Uzatılmış ve emme elektrodu için kullanılan
Mikropipet ÇektirmeSutterP-97 Kayıt elektrotlarını çeker ve hazırlar
1200x1200 piksel, arkadan aydınlatmalı cMOS kamera PhotometricsPrime 95bYüksek çözünürlüklü, yüksek hızlı görüntülemeye izin veren hassas kamera
Işık KaynağıLumencorSpectra XFloresan obsevasyonu için LED'lerden aydınlatma sağlar
  Sonsuzluk düzeltmeli floresan suya daldırma objektifleri, W.D. 2mm NikonCFI60Numunenin görselleştirilmesi için uzun çalışma mesafeleri sağlar
Halojen lambalı Fiber Optik AydınlatıcıSumitaLS-DWL-NParlak alan gözlemi için aydınlatma sağlar
W-View Gemini Görüntü Ayırıcı HamamatsuA12801-01Projeler Tek Bantlı
Bant Geçiren Filtreler  (512/25-25 ve 630/92-25) SemRockFF01-512/25-25; FF01-630/92-25Çift bantlı görüntülemeye izin verir
560 nm Tek Kenarlı Dikroik Işın AyırıcıSem RockFF560-FDi01-25x36Çift dalga boylu görüntülemeye izin vermek için ışık huzmelerini ayıran dikroik ayna
Görüntüleme veri toplama sistemiNikonNIS Elements - MQS31000Görüntüleme verilerinin toplanmasına izin verir
Dalga boyu kontrol modülüGörüntülemeMQS41220Modülü satın alma
Emisyon ayırıcı donanım modülü Görüntüleme verilerinin toplanması içinNikonMQS41410
Görüntüleme veri analiz sistemiNAVolumetry 8D5, FijiFloresan yoğunluğunun ve diğer görüntüleme verilerinin analizine izin verir
NMJ ve mikro; -konotoksin GIIIb Peptitleri Int'l#CONO20-01000'de verileri için Nikon Modülü

Kaynaklar

  1. Sanes, J. R., Lichtman, J. W. Development of the vertebrate neuromuscular junction. Annual Review of Neuroscience. 22, 389-442 (1999).
  2. Darabid, H., Perez-Gonzalez, A. P., Robitaille, R. Neuromuscular synaptogenesis: coordinating partners with multiple functions. Nature Reviews Neuroscience. 15 (11), 703-718 (2014).
  3. Fatt, P., Katz, B. An analysis of the end-plate potential recorded with an intracellular electrode. Journal of Physiology. 115 (3), 320-370 (1951).
  4. Todd, K. J., Robitaille, R. Purinergic modulation of synaptic signalling at the neuromuscular junction. Pflugers Archive. 452 (5), 608-614 (2006).
  5. Hennig, G. W., et al. Use of Genetically Encoded Calcium Indicators (GECIs) Combined with Advanced Motion Tracking Techniques to Examine the Behavior of Neurons and Glia in the Enteric Nervous System of the Intact Murine Colon. Frontiers of Cellular Neuroscience. 9, 436(2015).
  6. Heredia, D. J., Schubert, D., Maligireddy, S., Hennig, G. W., Gould, T. W. A Novel Striated Muscle-Specific Myosin-Blocking Drug for the Study of Neuromuscular Physiology. Frontiers of Cellular Neuroscience. 10, 276(2016).
  7. Johnson, B. R., Hauptman, S. A., Bonow, R. H. Construction of a simple suction electrode for extracellular recording and stimulation. Journal of Undergraduate Neuroscience Education. 6 (1), A21-A26 (2007).
  8. Hong, S. J., Chang, C. C. Use of geographutoxin II (mu-conotoxin) for the study of neuromuscular transmission in mouse. British Journal of Pharmacology. 97 (3), 934-940 (1989).
  9. Heredia, D. J., Feng, C. Y., Hennig, G. W., Renden, R. B., Gould, T. W. Activity-induced Ca2+ signaling in perisynaptic Schwann cells of the early postnatal mouse is mediated by P2Y1 receptors and regulates muscle fatigue. Elife. 7, e30839(2018).
  10. Cho, J. H., et al. The GCaMP-R Family of Genetically Encoded Ratiometric Calcium Indicators. ACS Chemical Biology. 12 (4), 1066-1074 (2017).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Nöromüsküler KavşakGenetik Olarak Kodlanmış Kalsiyum İndikatörleriÇift Dalga Boylu GörüntülemeOptik AyırıcıFloresan Alfa BungarotoksinFrenik Sinir StimülasyonuSchwann Hücresi GörüntülemeKas Hücresi Görüntüleme
Ex Vivo Hücre özgü kalsiyum fare diyafram Üçlü sinaps sinyal görüntüleme
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.