Burada, malzemelerin ve Seryum oksit nano tanecikleri (nanoceria) (reaktif oksijen türlerine) için için bir protokol atılmasını vivo içindebitki dokularda düşsel confocal mikroskobu ve in vivo tarafından nanoceria mevcut nanoceria ROS tarafından confocal mikroskobu atma izleme.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Anyonik Seryum oksit nano tanecikleri tarafından bitki reaktif oksijen türleri içinde Vivo katalitik kayıt atma
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Reaktif oksijen türleri (ROS) birikimi bitki abiyotik stres tepkisi bir özelliğidir. ROS bitkilerde sinyal molekülleri düşük seviyelerde ve yüksek düzeyde moleküller zarar olarak hareket ederek ikili bir rol oynar. ROS birikimi stresli bitki metabolitleri, enzim, lipidler ve bitki büyüme ve verim azalması neden DNA, zarar verebilir. Seryum oksit nano tanecikleri (nanoceria) catalytically ROS vivo içinde çöpçülük yeteneğini anlamak için benzersiz aracı ve genetiğinin bitki abiyotik stres toleransı sağlar. Burada, sentez ve poli (Akrilik) asit kaplı nanoceria (PNC) karakterize, nano tanecikleri ile bitkilerin yaprak lamina sızma yolu ile arayüzü ve kendi dağıtım ve ROS atılmasını vivo içinde confocal kullanarak izlemek için bir iletişim kuralı mevcut mikroskobu. ROS birikimi tesislerinde değiştirmek için geçerli moleküler araç modeli türleri için sınırlıdır ve zahmetli dönüştürme yöntemleri gerektirir. Vivo ROS atma bu protokol vahşi türü bitkiler ile geniş yaprakları ve yaprak yapı Arabidopsis thalianagibi uygulanmak üzere potansiyeline sahiptir.
Giriş
Seryum oksit nano tanecikleri (nanoceria) canlı organizmalar, biyomühendislik, yetenek1,2,3atma onların ayrı katalitik reaktif oksijen türleri (ROS) nedeniyle için temel araştırma, yaygın olarak kullanılır. Çok sayıda iki oksidasyon Birleşik Devletleri (Ce3 + ve Ce4 +) 4arasında,5,6alternatif yüzey oksijen açık pozisyonlar nedeniyle yeteneklerini atma ROS Nanoceria var. Kafes suşları nano, redoks reaksiyonları7Bisiklete binme aracılığıyla....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. A. thaliana bitki yetiştirme
- 5 cm x 5 cm tek kullanımlık tencere standart toprak karışımı ile dolu A. thaliana tohumları ekmek. 32 bu tencere içine su dolu bir plastik tepsi koymak (~ 0.5 cm derinlik) ve bitkiler ile plastik tepsi bir bitki büyüme odasına aktar.
- Büyüme odası ayarlarını aşağıdaki gibi ayarlayın: 200 µmol/ms fotosentetik aktif radyasyon (PAR), 24 ± 1 ° C gün ve 21 ± 1 ° C gece, % 60 nem ve 14/10 h gündüz/gece ışık rejimi, anılan sıraya göre.
- Sadece bir bitki çimlenmesi bir hafta sonra terk etmek her pot ince. Her pot fidan benzer boyutta tutmaya dikkat edin.
- Tencere Dökme musluk suy....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
PNC sentezi ve karakterizasyonu .
PNC sentez, saflaştırılmış ve Yöntem iletişim kuralı Bölüm 2'de açıklanan aşağıdaki karakterize. Resim 1 A Seryum nitrat, patır, Seryum nitrat ve PAA ve PNC karışımı çözümleri coloration gösterir. PNC sentezlenir sonra beyaz açık sarı bir renk değişikliği görülür. 10 kDa filtreli arıtma sonra PNC UV-VIS Spektrofotometre ile karakterize. Zirve absorbans PNC için 27.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu protokol için PNC sentezi, karakterizasyonu, floresan boya etiketleme ve in vivo ROS atma faaliyetlerini sergilemek için bitki mesophyll hücreleri içinde nano tanecikleri confocal görüntüleme açıklar. PNC Seryum nitrat ve PAA çözümde amonyum hidroksit karışımı üzerinden sentezledim. PNC emme spectrophotomery ve bira-Lamberts hukuk kullanarak kararlı konsantrasyon ile karakterizedir. Zeta potansiyel ölçümleri PNC olumsuz şarj edilmiş yüzey teslim kloroplast8artırılması için doğruladı. P.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa gerek yok.
Teşekkürler
Bu eser University of California, Riverside ve USDA Ulusal Enstitüsü Gıda ve tarım, Hatch projeye J.P.G. 1009710 tarafından desteklenmiştir Bu malzeme Grant No 1817363 J.P.G. için altında Ulusal Bilim Vakfı tarafından desteklenen çalışma üzerine kuruludur
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Seryum (III) nitrat hekzahidrat | Sigma-Aldrich | 238538-100G | |
| Moleküler Biyoloji Sınıfı Su, Corning | VWR | 45001-044 | |
| Falcon 50 mL Konik Santrifüj Tüpleri | VWR | 14-959-49A | |
| Poli (akrilik asit) 1.800 Mw | Sigma-Aldrich | 323667-100G | |
| Fisherbrand Dijital Vorteks Karıştırıcı Fisher | Scientific | 02-215-370 | |
| Fisherbrand Dijital Vorteks Karıştırıcı Aksesuarı, Tutucu | Ekleme Fisher Scientific | 02-215-391 | |
| Fisherbrand Dijital Vorteks Karıştırıcı Aksesuarları: Köpük Ekleme Seti | Fisher Scientific | 02-215-395 | |
| Amonyum hidroksit çözeltisi | Sigma-Aldrich | 05002-1L | |
| PYREX Griffin Beherler, Mezun, Corning | VWR | 13912-149 | |
| RCT basic | IKA | 3810001 | |
| Eppendorf Mikrosantrifüj 5424 | VWR | 80094-126 | |
| Amicon Ultra-15 Santrifüj Filtre Üniteleri | Millipore-Sigma | UFC901024 | |
| Allegra X-30 Serisi Masaüstü Santrifüj | Beckman Coulter | B06314 | |
| UV-2600 Sptecrophotometer | Shimadzu | UV-2600 120V | |
| Whatman Anotop 10 şırınga filtresi | Sigma-Aldrich | WHA68091102 | |
| BD Luer-Lok Uçlu Tek Kullanımlık Şırıngalar | Fisher Scientific | 14-829-45 | |
| Zetasizer Nano S | Malvern Panalytical | Zen 1600 | |
| 1,1 & prime; -Dioctadesyl-3,3,3 & prime;, 3 & prime; -tetrametilindokarbosiyanin perklorat | Sigma-Aldrich | 42364-100MG | |
| Dimetil Sülfoksit, ACS | VWR | BDH1115-1LP | |
| Güneş Işığı Karışımı #1 LC1 | Green Island Distributors, Inc | 5212601.CFL080P | |
| Adaptis 1000 | Conviron | A1000 | |
| TES, %>99 (titrasyon | Sigma-Aldrich | T1375-100G | |
| Magnezyum klorür | Sigma-Aldrich | M8266-1KG | |
| Air-Tite Tamamen Plastik Norm-Ject Şırınga | Fisher Scientific | 14-817-25 | |
| Kimberly-Clark Professional Kimtech Science Kimwipes Hassas Görev Silecekleri | Fisher Scientific | 06-666A | |
| Carolina Gözlem Jeli Carolina | 132700 | ||
| Corning mikroskop slaytları, bir tarafı buzlu, bir ucu | Sigma-Aldrich | CLS294875X25-72EA | |
| Mantar Delici Kulplu Setler | Fisher Scientific | S50166A | |
| Perflorodekalin | Sigma-Aldrich | P9900-25G | |
| Mikro Kapaklı Gözlükler, Kare, No. 1 | VWR | 48366-045 | |
| Leica Lazer Taramalı Konfokal Mikroskop TCS SP5 | Leica Microsystems | TCS SP5 | |
| 2 & prime ;,7 & prime ;-Diklorofloresan diasetat | Sigma-Aldrich | D6883-250MG | |
| Dihidroetidyum | Sigma-Aldrich | D7008-10MG | |
| Fisherbrand Premium Mikrosantrifüj Tüpleri: 1.5 mL | Fisher Scientific | 05-408-129 | |
| Eppendorf Uvette küvetleri | Sigma-Aldrich | Z605050-80EA | |
| Klorofil ölçer ve nbsp; | Konica Minolta | SPAD-502 |
Kaynaklar
- Xu, C., Qu, X. Cerium oxide nanoparticle: A remarkably versatile rare earth nanomaterial for biological applications. NPG Asia Materials. 6 (3), 90-116 (2014).
- Nelson, B., Johnson, M., Walker, M., Riley, K., Sims, C. Antioxidant cerium oxide nanoparticles in biology and medicine. Antioxidants. 5 (2), 15(2016).
- Gupta, A., Das, S., Neal, C. J., Seal, S.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
