Cins Magnetospirillummagnetotactic bakteri büyüyen: suşları MSR-1, AMB-1 ve MS-1

Özet

Biz birkaç soy-in Magnetospirillum iki farklı büyüme ortamının içinde büyüyen bir yordam mevcut. M. magneticum zorlanma AMB-1 ve M. magnetotacticum zorlanma MS-1 sıvı ortamda yetişir iken Magnetospirillum gryphiswaldense zorlanma MSR-1 yarı katı ortam sıvı ve O₂ konsantrasyon gradyanı yetişir.

Özet

Magnetotactic bakteri gram-negatif, hareketli, esas olarak su prokaryotlarda her yerde birden bulunan tatlı su ve deniz yaşam alanları vardır. Onlar içinde lipid bilayer membran tarafından çevrili manyetik nanometre boyutunda kristalleri manyetit (Fe₃O₄) veya greigite (Fe₃S₄) olan biomineralize magnetosomes kendi yeteneği ile karakterizedir onların sitoplazma. En bilinen magnetotactic bakteri için magnetosomes zincirleri böylece hücrelere bir kalıcı manyetik dipol an veriyor ve onları pasif dış manyetik alanlar ile hizalamak neden sitoplazma içine monte edilir. Bu özellikleri nedeniyle, magnetotactic bakteri ticari ve tıbbi uygulamalar için büyük bir potansiyele sahip. Ancak, çoğu türler da mikroaerofilik ve onları düzenli olarak pek çok diğer bakteri Escherichia coligibi daha büyümek daha zor hale belirli O₂ toplama gereksinimleri vardır. Burada üç magnetotactic bakteri, tüm Magnetospirillumait en çok çalışılmış suşlarının büyüyen için detaylı protokolleri mevcut. Bu yöntemler bakteri için normalde büyümek ve magnetosomes sentez sağlamak için kullanılabilir O₂ konsantrasyonu kesin kontrol için olanak sağlar. Magnetotactic bakteriler bu yordamları kullanarak daha fazla çalışmalar için büyüyen mikrobiyoloji uzmanı olmak deneyci gerektirmez. Büyüme medya kimyasal bileşimi değiştirilmesi gerekecektir olasılığı olmasına rağmen bu makalede sunulan genel yöntemleri yalıtmak ve diğer magnetotactic bakteri kültürü için de kullanılabilir.

Giriş

Magnetotactic bakteri (MTB) gram-negatif prokaryot tatlı su ve deniz sucul yaşam alanları¹' her yerde geniş bir temsil eder. Bu bakterilerin içine zincirleri hücrelere toplandı çoğu durumda olan manyetit (Fe₃O₄) veya greigite (Fe₃S₄), oluşan manyetik kristalleri üretmek için yetenek paylaşmak. Bu belirli yapısal motifi hem sitoplazmada bakteri ve her kristal²çevreleyen lipid membran üzerinde hareket birkaç spesifik proteinlerin varlığı nedeniyle var. Her bireysel kristal ve onun çevresindeki zar vezikül bir magnetosome denir ve yaklaşık 30 büyüklükleri ile 50 arasında değişen <....

Protokol

1. N₂ İstasyonu montajı

Not: boru iç çapı en az sızıntı ile gaz tank için bağlanabilir ve 1 mL plastik enjektör silindir sıkıca bu boru içinde uyuyor seçin. Bir illüstrasyon istasyonu gaz tam N₂ Şekil 1' de verilmiştir.

1. Güvenli bir şekilde N₂ benzin deposu bir Bank üzerinde N₂ İstasyonu (yaklaşık 50 cm uzunluğunda) ayarlamak için yeterli yer yakın yükleyin.
2. Tank için yeterince nerede istasyonu inşa edilecek alana ulaşmak için boru bir parça bağlayın. Gerekirse, herhangi bir sızıntı önlemek için tank çıktısını, Teflon bant geçerlidir.
3. Aynı....

Sonuçlar

Büyüme ortamının başarılı hazırlık aşağıdaki gibi tespit edilebilir. İşlemin sonunda, çözümleri temizleyin (i.e., ücretsiz herhangi bir çökelti olarak) alınmalıdır (sıvı medya ve O₂ degrade yarı katı orta için de geçerlidir bu). Önce aşı Şekil 2agörülebilir MSR-1 sıvı orta beklenen yönünü gösteren bir resim. Başarılı bir O₂ konsantrasyon gradyanı yarı katı orta varlığı 1-3 cm pembe orta üst kısmındaki tüp (Ş.......

Tartışma

MTB özel O₂ konsantrasyon gereksinimlerini onları olmayan önemsiz laboratuvarda büyümeye yapmak. Bir anahtar için sıvı orta protokolün tüm O₂ orta ilk kaldırılması O₂, hemen önce aşı kesin hacmi ekleyerek son konsantrasyonu kontrol edebilmek için adımdır. MSR-1 neredeyse tamamen aerobik koşullarda büyür, ancak, manyetizma hücrelerin büyük ölçüde azalır kanıtlanmıştır. Aynı çalışma sonuçlarından suşları AMB-1 ve MS-1 tam aerobik koşulları⁶altında yetişir mi gösterdi.......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
AMB-1	Amerikan Tipi Kültür Koleksiyonu (ATCC)	ATCC 700264
MS-1	ATCC	ATCC 31632
MSR-1	Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen (DSMZ)	DSM 6361
Ferric sitrat	Sigma-Aldrich	F3388-250G
İz mineral takviyesi	ATCC	MD-TMS
KH2PO4	EMD	PX1565-1
MgSO4.7 H2O	EMD	MX0070-1
HEPES	BioShop Canada Inc	HEP001.250
NaNO3	Sigma-Aldrich	S5506-250G
Maya özü	Fischer bilimsel	DF210929
Pepton	Fischer bilimsel	DF0436-17-5
Potasyum L-laktat çözeltisi (%60)	Sigma-Aldrich	60389-250ML-F
D-(-)-Kinik asit	Sigma-Aldrich	138622
FeCl3.6H2O	Fischer scientific	I88-100
Vitamin takviyesi	ATCC	MD-VS
Sodyum süksinat hekzahidrat	Fischer scientific	S413-500
Sodyum L-tartrat dibazik dihidrat	Sigma-Aldrich	228729-100G
Sodyum asetat trihidrat	EMD	SX0255-1
Resazurin	Difco	0704-13
Askorbik asit	Sigma-Aldrich	A4544-25G
K2< / sub>HPO4< / sub>	Caledon	6620-1-65
FeCl2< / sub> .4H2O	Sigma-Aldrich	44939-250G
Sodyum bikarbonat	EMD	SX0320-1
NaCl	Caledon	7560-1
NH4Cl	EMD 1011450500
CaCl2.2 H2O	EMD	1023820500
Agar A	Bio Temel Kanada Inc	FB0010
L-sistein.HCl.H<>sub2O	Sigma-Aldrich	C7880-100G
1.0 mL şırıngalar	Fischer bilimsel	B309659
25G ve nbsp; x 1 iğne	BD	305125
125 mL serum şişeleri	Wheaton	223748
20 mm alüminyum contalar	Wheaton	224223-01
20mm EZ Crimper	Wheaton	W225303
Butil kauçuk tıpalar	Bellco Glass, Inc.	2048-11800
Hungate tüpleri	Chemglass (VWR)	CLS-4208-01
Septum tıpa, 13mm, Hungate	Bellco Glass, Inc.	2047-11600
Cam kültürü Tüpleri	Corning (VWR)	9826-16X
Hidroklorik asit %36,5-38, BioReagent	Sigma-Aldrich	H1758-100ML	11,6 - 12 N