Method Article

Blastosist davranış objektif değerlendirme Vitrifiye ve ısınma adımları sırasında için xarakteristikaları Protokolü

DOI:

10.3791/58540

⸱

February 28th, 2019

 , 
1Department of Reproductive Medicine and Gynecological Endocrinology, University Medical Centre Maribor

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada blastosist büzülme ve re-Genleşme yoğunluğunu previtrification müdahaleler sonrası ısınma kurtarma sırasında takip etmek ve hızlandırılmış xarakteristikaları iletişim kuralı mevcut. Uygulama Protokolü'nün in vitro fertilizasyon Laboratuvarları ile hızlandırılmış mikroskoplar donatılmış mümkündür ve bir en iyi blastosist vitrifikasyon yöntemi gelişiminde önerilir.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu makalede önce ve sonra vitrifikasyon bireysel aşamaları sırasında değişen bir blastosist'ın biriminin doğru izleme için hızlandırılmış Mikrofotoğrafi dayalı blastosist morfometri noninvaziv yöntem. Yönteminin blastosist maruz kalma cryoprotectants farklı konsantrasyonlarda en uygun zamanlaması için blastosist büzülme ve re-genişleme farklı öncesi ve sonrası vitrifikasyon aşamaları gözlemleyerek aramada kullanışlı olabilir. Bu metodoloji ile blastosist vitrifikasyon Protokolü getirilebilir. Bu xarakteristikaları yöntem kullanışlılığı daha iyi bir gösteri için iki farklı blastokist hazırlığı protokol vitrifikasyon için karşılaştırılır; çöken bir yapay blastocoel kullanarak ve bu araya vitrifikasyon önce. Hem blastokistlerin cilt değişiklikleri tarafından hızlandırılmış Mikrofotoğrafi takip ve fotoğraf düzenleme yazılımı araçları tarafından ölçülür. Ölçümler her 20 saniyede previtrification aşamasında ve her 5 dakikada sonrası ısınma döneminde alınır. Değişiklikleri zaman birimi başına blastosist boyutlarının satır diyagramlarında grafik olarak sunulmaktadır. Sonuçlar sağlam blastosist ilk küçülür ve sonra yavaş yavaş yenilenir vitrifikasyon ile sıvı dolu blastocoel giren blastocoel, bir uzun denge previtrification faz gösterir. Yapay olarak daraltılmış blastosist küçültülmüş sahne tüm denge faz üzerinden kalır. Vitrifiye aşamasında hacmi de değişmez. Blastosist morfometri yapay olarak daraltılmış blastokistlerin sürekli hacmini previtrification adımı sırasında gösterir, bu bu aşamada daha kısa olabilir görünüyor. Açıklanan protokol sırasında ve sonrasında dondurma hız ve yoğunluk birim değişiklikleri, kısmi blastocoel kasılmalar veya toplam blastosist sayısı temelinde blastosist davranış birçok ek karşılaştırmalı parametreleri sağlar çöker ve bir toplam blastocoel re-genişleme vakti veya tarama için tam zamanı.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Vitro fertilizasyon programından (IVF) insan Preimplantasyon embriyo dondurma günümüzde çoğu IVF Laboratuvarı rutin bir uygulamadır. Yavaş embriyo dondurma yöntemi belirli cryoprotectants ve buz çekirdekleşme (tohum) içinde akımıdır zaman kontrollü embriyo-7 ° C, aşağı soğutma etkin bilgisayar kontrollü Dondurucular getirilmesi ile 1985 yılında klinik olarak kullanılmaya başlandı cryoprotective orta1çevreleyen. Sürekli soğutma tarafından buz kristalleri, hyperosmolality kalan sıvı kesir ve sonuç olarak, dehidrasyon neden büyüyecek ve büzülme embriyonik hücreleri. -30 ° C ya da-80 ° C de, embriyolar daha uzun depolama için sıvı azot içi....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm yöntem tanımlamak burada 19 Nisan 2016 (No 0120-204/2016-2) Ulusal Tıbbi Etik Komitesi tarafından onaylanmış olması.

1. mikroskop kayıt sistemi kurulumu

  1. Mikroskop ısıtma yüzeyi dön.
  2. Herhangi bir tedavi öncesi bir blastosist kamera donanımlı ters mikroskop altında bir fotoğrafını çeker. Hangi blastosist kaydedildi büyütme Not etmeyi unutmayın.

2. seçimi ve blastokistlerin Prepreparation için Vitrifiye

  1. Sadece tam olarak genişletilmiş gün-5 veya gün-6 blastokistlerin dondurma en az bir kaç iç hücre kitle (ICM) hücreleri ve tutarlı trophectoderm için seçin.
  2. Lazer teda....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bir gösteride blastosist morphodynamics tek bir previtrification ve bir sonrası ısınma aşama gösterdi. Blastosist'ın birimindeki bir fark denge aşamasının sonunda ve başında kültür aslında, embriyo büzülme yoğunluğunu gösterdi ortamda buz kristalizasyon karşı embriyo korunması yoğunluğunu kurtarma.

Şekil 1 ve Video 1fark olabilir gibi sağlam blastosist denge çözümde tamamen çökmedi........

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

İletişim kuralı gözlem altında blastosist morphodynamics sırasında ve sonra dondurma da benzer aletler ve diğer üreticilerin yazılım araçları kullanılarak yapılabilir. Hızlandırılmış sistemleri Embriyoloji için ayarlanabilir sürekli embriyo gelişimi izleme izin verir. Bu çalışmanın amacı blastosist davranış miktar Vitrifiye ve onların ısınma sonra blastokistlerin hazırlanması sırasında tanıtmak oldu. Bu kara delik bir zaman ölçeği üzerindeki değişiklikleri nesnel ölçümü tarafından yapıldı. Bu ölçümler elde edilen sonuçla.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ifşa gerek yok.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu eser araştırma programı P3-0327 ve araştırma projesi J3-7177, Sloven Araştırma Vakfı tarafından kurulan bir parçasıdır.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Ters mikroskop Eclipse TE2000-U Nikon, Japonya/
Saturn 5 Lazer SistemiAraştırma Cihazları, Origio, Danimarka/
Dijital kamera DC1Araştırma Cihazları, Origio, Danimarka/
Dijital kamera DC2Araştırma Cihazları, Origio, Danimarka/
Cronus 3.7Araştırma Cihazları, Origio, Danimarka/mikroskop kayıt yazılımı
%6 CO2, %5 O2 Bağlayıcılı İnkübatör, Almanya/
Primo Vision mikroskobuVitrolife, İsveç16600
Primo Vision Capture yazılımıVitrolife, İsveç16608hızlandırılmış kayıt yazılımı
Adobe Photoshop CS6 Extended yazılımıAdobe Systems Incorporated, ABD/video analiz yazılımı
VirtualDub Avery Lee/video düzenleme yazılımı
Microsoft Office Excell Microsoft, ABD/elektronik tablo düzenleyicisi
PrimoVision kültür kabıVitrolife, İsveç16604
G2 artı ortaVitrolife, İsveç10132Blastosist aşaması embriyoları için yetiştirme ortamı
İnsan Serum AlbüminleriVitrolife, İsveç10064
Parafin yağıVitrolife, İsveç10029
Dengeleme çözeltisi ortamıIrvine Scientific, İrlanda90131
Vitrifikasyon çözeltisi ortamıIrvine Scientific, İrlanda90132
Çözdürme çözeltisi ortamıIrvine Scientific, İrlanda90134
Seyreltme çözeltisi ortamıIrvine Scientific, İrlanda90135
Yıkama çözeltisi ortamıIrvine Scientific, İrlanda90136
HSV Vitrifikasyon pipetleriCryoBio System, Fransa025246, 025249, 025250, 025248
Sıvı nitrojen/
Kriyo kabı Biosafe 120 MD ve beta;Cryotherm, Almanya229286
Cryo tankıCryotherm, Almanya
Forseps//Makaslar
//blastosist
manipülasyonu için PippeteJinekoloji, BelçikaID275/10çap 275 ve mikro; m
Oosit denudasyonu için pipetVitromed, AlmanyaV-DEN-135çap 135 ve mikro; m
Pipetör EZ-GripAraştırma Cihazları7-72-2802
Dijital aralık zamanlayıcı AsistanGlaswarenfabrik Karl Hecht41977010
IBM SPSS İstatistikleri 21IBM, ABD/istatistiksel analiz yazılımı
Kendinden ayarlı tel sıyırıcıKnipex, Almanya1262180

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Trounson, A., Mohr, L. Human pregnancy following cryopreservation, thawing and transfer of an eight-cell embryo. Nature. 305 (5936), 707-709 (1983).
  2. Leibo, S. P., McGrath, J. J., Cravalho, E. G. Microscopic observation of in....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Blastocyst MorphometryTime lapse MicrophotographyVitrification ProtocolBlastocoel CollapseCryoprotectant ExposurePhoto editing SoftwareEquilibration MediumLaser Pulse TreatmentBlastocyst Re expansionCryobiology Assessment

Related Articles