Burada biz akciğer ifade değerlendirmek için bir yöntem tarif tahmin edilmektedir miRNAs inflamatuar genler düzenleyen fare kullanarak ozon için maruz veya hava estrous döngüsünün farklı aşamalarında filtre.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Akciğer mikroRNA profil oluşturma arasında Estrous döngüsünde ozon maruz fareler
Bu makalede
Özet
Özet
MikroRNA (miRNA) profil oluşturma biyoloji ve tıp çeşitli araştırma alanlarında çalışan araştırmacıların ilgi haline gelmiştir. Mevcut çalışmalar tanı ve akciğer hastalıkları Bakımı miRNAs kullanarak gelecekteki bir umut verici göster. Burada, biz miRNA inflamatuar bir ozon kaynaklı hava yolu iltihabı fare modeli akciğer dokusundan genlerinde düzenleyen tahmin miRNAs bir grup göreli bolluk ölçmek için profil oluşturma için bir iletişim kuralı tanımlar. Çünkü seks hormon düzeyleri dolaşan akciğer doğuştan gelen bağışıklık dişilerde Yönetmeliği etkileyebilir gösterilmiştir, bu yöntemin amacı protokolü dikkate alındığında estrous döngüsü dişi farelerde profil oluşturma bir enflamatuar miRNA tarif etmektir Her hayvan ozon pozlama zaman aşaması. Biz de limma, bir R/Bioconductor yazılım kullanarak miRNA bulma ve hedef tanımlama yöntemleri uygulanabilir Biyoinformatik yaklaşımlar adresi ve biyolojik bağlam ve yolları anlamaya fonksiyonel analiz yazılımı ile ilişkili fark miRNA ifade.
Giriş
mikroRNA (miRNAs) çoğu kısa (19-25 nukleotid), doğal olarak meydana gelen, kodlamayan RNA molekülleri. MiRNAs dizisi evrimsel türlerin fizyolojik fonksiyonları1düzenlenmesinde miRNAs önemini telkin, karşıdan karşıya korunmuş. mikroRNA ifade profil oluşturma işlemleri, bağışıklık yanıtı, hücre farklılaşması, gelişimsel süreçleri ve Apoptozis2de dahil olmak üzere çeşitli Yönetmelikte önemli miRNAs belirlemek için yardımcı olmak için kanıtlanmıştır. Daha yakın zamanlarda, miRNAs potansiyel kullanımları hastalığı teşhis ve tedavi için kabul edilmiştir. Özellikle miRNA bilgi mRNA profil oluşturma ve diğer genom ölçekli veri
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm yöntem tanımlamak burada kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) Penn State Üniversitesi tarafından onaylanmıştır.
1. Estrous döngüsü aşamasını değerlendirilmesi
- Düzgün bir erkek C57BL/6 fare (8 – 9 haftalık) kullanarak Machholz ve ark.10içinde açıklanan tek el fare kısıtlama tekniği dizginlemek.
- Steril plastik pipet 10 μL ultra saf su ile doldurun.
- Plastik pipet ucu vajina içine tanıtmak.
- Yavaşça sıvı 4-5 kez sifonu örnek toplamak için.
- Bir cam slayt üzerinde vajinal sıvı içeren son floş yerleştirin.
- 20 x amacı ile hafif bir mikroskop altında....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Smear içinde gözlenen farklı hücre tipleri fare estrous döngüsü aşamasını (Şekil 1) tanımlamak için kullanılır. Bunlar hücre morfolojisi tarafından tanımlanır. Proestrus sırasında neredeyse sadece kümeleri yuvarlak şekilli, iyi biçimlendirilmiş çekirdekli epitel hücresi (Şekil 1A) hücrelerdir. Fare estrus aşamasında olduğunda, cornified skuamöz epitel hücreleri, yoğun paketlenmiş kümelerinde (Şekil 1B
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
MikroRNA profil oluşturma hastalık tanı ve mekanik araştırma için avantajlı bir tekniktir. Bu makale, ozon için farklı estrous döngüsü aşamaları içinde maruz dişi farelerin akciğerlerde inflamatuar genler düzenleyen tahmin edilmektedir miRNAs ifade değerlendirmek için bir protokol tanımlı. Yöntemleri gibi görsel algılama yöntemi, estrous döngüsü belirlenmesi için açıklanan16olmuştur. Ancak, bu tek seferlik ölçümler güveniyor ve bu nedenle güvenilir değildir. Doğru bir şekilde tüm estrous döngüsü a.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar onlar rakip hiçbir ilgi alanlarına sahip bildirin.
Teşekkürler
Bu araştırma hibe NIH K01HL133520 (PS) ve K12HD055882 (PS) tarafından desteklenmiştir. Yazarlar Dr Joanna Floros ozon pozlama deneyleri ile yardım için teşekkür ederiz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| C57BL/6J fareler | Jackson Laboratuvarı | 000664 | 8 haftalık |
| UltraPure Water | Thermo Fisher Scientific | 10813012 | |
| Steril plastik pipet | Fisher Scientific | 13-711-25 | Kapasite: 1.7 mL |
| Buzlu Mikroskop Slaytları | Thermo Fisher Scientific | 2951TS | |
| Işık mikroskobu | Mikroskop Dünyası | MW3-H5 | 10x ve 20x objektif |
| Ketattezi-Ketamin HCl Enjeksiyonu USP | Henry Schein Hayvan Sağlığı | 55853 | 90 mg / kg. Kontrollü ilaç. |
| Ksilazin Steril Çözelti | Lloyd Laboratories | 139-236 | 10 mg / kg. Kontrollü ilaç. |
| Ethanol | Fisher Scientific | BP2818100 | Su ile% 70 etanole seyreltin. |
| 21 G ölçü iğnesi | BD Biosciences | 305165 | |
| Şırınga | Fisher Scientific | 329654 | 1 mL |
| Ameliyat Makası | World Precision Instruments | 501221, 504613 | 14 cm, Keskin/Künt, Kavisli ve 9 cm, Düz, İnce Keskin Uçlu |
| Cımbız Seti | World Precision Instruments | 504616 | |
| Spectrum Bessman Doku Pulverizatörleri | Fisher Scientific | 08-418-1 | Kapasite: 10 ila 50 mg |
| RNaz İçermeyen Mikrofüj Tüpleri | Thermo Fisher Scientific | AM12400 | 1.5 mL |
| TRIzol Reaktif | Thermo Fisher Scientific | 15596026 | |
| Direct-zol RNA MiniPrep Plus | Zymo Research | R2071 | |
| NanoDrop | Thermo Fisher Scientific | ND-ONE-W | |
| miScript II RT kiti | Qiagen | 218161 | |
| Fare İnflamatuar Yanıtı & Otoimmünite miRNA PCR Dizisi | Qiagen | MIMM-105Z | |
| İnce duvarlı, DNaz içermeyen, RNaz içermeyen PCR tüpleri | Thermo Fisher Scientific | AM12225 | ; L reaksiyonları |
| miRNeasy Serum/Plazma Spike-in Kontrolü | Qiagen | 219610 | |
| Microsoft Excel | Microsoft Corporation | https://office.microsoft.com/excel/ | |
| Yaratıcılık Yolu Analizi | Qiagen | https://www.qiagenbioinformatics.com/products/ingenuity-pathway-analysis/ | |
| R Yazılımı | R Vakfı | https://www.r-project.org/ | |
| Termal döngüleyici veya soğutma/ısıtma bloğu | Genel Laboratuvar Tedarikçisi | ||
| Mikrosantrifüj Genel Laboratuvar Tedarikçisi | |||
| Gerçek zamanlı PCR döngüleyici | Genel Laboratuvar Tedarikçisi | ||
| Çok Kanallı pipetleyici | Genel Laboratuvar Tedarikçisi | ||
| RNA yıkama tamponu | Zymo Research | R1003-3-48 | 48 mL |
| DNA sindirim tamponu | Zymo Research | E1010-1-4 | 4 mL |
| RNA ön yıkama tamponu | Zymo Research | R1020-2-25 | 25 mL |
| Ultraviyole ozon analizörü | Teledyne API | Model T400 | http://www.teledyne-api.com/products/oxygen-compound-instruments/t400 |
| Kütle akış kontrolörleri | Sierra Instruments Inc | Flobox 951/954 | http://www.sierrainstruments.com/products/954p.html |
Kaynaklar
- Rebane, A., Akdis, C. A. MicroRNAs: Essential players in the regulation of inflammation. Journal of Allergy and Clinical Immunology. 132 (1), 15-26 (2013).
- Cannell, I. G., Kong, Y. W., Bushell, M. How do microRNAs regulate gene expression? Biochemical....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
