Yöntem makalesi

Antikor-bağımlı donanýmýn birincil insan hücrelerinde Zika şunun miktar

8.3K görüntüleme

DOI:

10.3791/58691

18 Ocak 2019

Bu makalede

Özet

Biz insan serumu, birincil insan hücreleri ve enfeksiyon miktar nicel gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu tarafından kullanarak Zika virüs enfeksiyonu önceden varolan bağışıklık dang virüs karşı etkisini değerlendirmek için bir yöntem açıklanmaktadır.

Özet

Flavivirus Zika ve Guillain-Barré sendromu ve bebeklerde, microcephaly gibi nörolojik komplikasyonlara son ortaya çıkması ciddi genel güvenlik endişeleri getirdi. Son yeniden doğuş Zika virüs (ZIKV) öncelikle alanlarda nerede nüfus maruz kalmış ve öncesi dokunulmazlık için diğer yakından ilgili bir durumda olduğu gibi risk faktörleri arasında en ciddi tehdit, antikor bağımlı geliştirme (ADE) teşkil etmektedir flaviviruses, özellikle dang virüs (DENV). Burada, DENV karşı insan serum antikor ZIKV enfeksiyon birincil insan hücreleri veya hücre hatları üzerinde etkisini miktarının bir protokol açıklayın.

Giriş

Sivrisinekler yoluyla bulaşan viral hastalıklar arasında Zika enfeksiyon en klinik olarak önemli1biridir. Enfeksiyon flavivirus kullandığı, çoğu durumda, Aedes aegypti onun birincil vektör1,2ZIKV neden olur. Ancak, Aedes albopictus bazı ZIKV salgınlar3birincil bir vektör olarak bildirdin çalışma vardır. Enfeksiyon birçok durumda asemptomatik olmakla birlikte, hastalığın en yaygın belirtileri ateş, baş ağrısı ve kas ağrı2vardır. Herhangi bir tedavi veya aşı ZIKV enfeksiyonu için kullanılabilir ve mevcut tedavi çoğunlukla d....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Bu çalışmada kullanılan serum numuneleri bir kohort Columbia insan katılımcılardan elde edilmiştir. Örnek koleksiyon Universidad de Pamplona (Columbia, Güney Amerika) ve Los Potios hastane8iç gözden geçirme Kurulu (IRB) tarafından kabul edildi. Örnekleri anonim olarak verilmiştir ve müfettişler hasta bilgi erişim vardı. Serum numuneleri için DENV serotip kontrol edildi. Örnekleri daha fazla DENV enfeksiyon nötralize etmek için teyit edildi tüp bebek. Kumanda pilleri, serum numuneleri ABD sağlıklı bireylerden (HC) kullanılmıştır.

Not: Bu iletişim kuralı, Fcγ reseptör ifade herhangi bir insan ....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Şekil 1' de, ADE Protokolü taşımak için ilgili tüm adımları adım adım grafiksel gösterimi var. Bu DENV için ZIKV ADE tüm prosedürü önceden varolan dokunulmazlık nedeniyle gösteren bir Şematik diyagramı. Şekil 2 gösterir nasıl insan serum örnekleri üç farklı gruplar halinde kategorize: DENV enfeksiyon doğruladı örnekleri DENV enfekte grup olarak bilinir, DENV antikor-teyit örnekleri DENV maruz kalan grup olarak da adlandırılır ve .......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Olan diğer DENV serotipi ADE için önde gelen DENV antikorların bir etkili aşı11gelişimine engel. ZIKV Flaviviridae, aynı ailesine ait ve diğer flaviviruses, özellikle DENV12ile önemli bir Homoloji vardır. Hem ZIKV hem de DENV için antikorları nötralize ana hedef çok yüksek yapısal ve Kuvaterner sırası Homoloji arasında iki virüs13,14,15hisse zarf proteindir. Ya DENV ya da ZIKV önce.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar bildirmek için bir şey yok.

Teşekkürler

Bu eser cömertçe 1R21AI129881-01 (T.M.C. için) başlangıç fonlar Ulusal ortaya çıkan bulaşıcı hastalıklar laboratuvarları ve Boston Üniversitesi Tıp Fakültesi tarafından desteklenmiştir.

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Fetal Sığır Serumu İKİZLER100-106
iCycler BioRad785BR02188model numarası. CFX96 Optik Modülü
Mikrofüj 18 SantrifüjBeckman Coulter 367160
Nanodrop-1000Termobilimsel 1072
Quantifast SYBR-Tek adımlı RT-PCR kiti ve nbsp;Qiagen 2041541 adımlı RT-qPCR
RNeasy RNA İzolasyon KitiQiagen 74106RNA ekstraksiyonu için kullanılır
RPMI-orta Gibco11875093
için kullanılır.

Kaynaklar

  1. Hayes, E. B. Zika virus outside Africa. Emerging Infectious Diseases. 15, 1347-1350 (2009).
  2. Grard, G., et al. Zika virus in Gabon (Central Africa) - 2007: a new threat from Aedes albopictus. PLoS Neglected Tropical Diseases. 8 (2), ....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Dengue Vir snsan SerumuViral EnfeksiyonKantitatif PCRRNA EkstraksiyonuH cre Lizizimm n Kompleks

İlgili makaleler