Method Article

Kripokus-Amoeba etkileşimlerinde mikroskobik teknikler ve floresans okuma tamamlayıcı kullanımı

DOI:

10.3791/58698

⸱

June 22nd, 2019

 , 
1Department of Microbial, Biochemical and Food Biotechnology, University of the Free State

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu yazıda hala, floresan görüntüler ve yüksek çözünürlüklü iletim elektron mikroskop görüntüleri kullanılarak incelenmiştir kripokal hücreler ve amipler bir ortak kültürü hazırlamak için bir protokol ayrıntıları. Burada gösterildiği gibi nicel veriler bu tür niteliksel bilgileri tamamlayabilir.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kripokus enfeksiyonunu simüle etmek için, ortamdaki kripokal hücrelerin doğal yırtıcı olan Amoeba, makrofajlar için bir model olarak kullanılabilir. Bu yırtıcı organizma, makrofajlar benzer, dışkılmış hücreleri öldürmek için fagositoz istihdam. Konfeti lazer tarama mikroskobu yardımıyla, kripokal hücreler ve anipin arasındaki interaktif anları tasvir eden görüntüler yakalanır. Elektron mikroskobu çözünürlük gücü, aynı zamanda, amip gıda vakum içinde sıkışıp zaman kripokal hücrelerin ultrastran detay açığa yardımcı olur. Fagositoz sürekli bir süreçtir olduğundan, nicel veriler daha sonra bir görüntü yakalanır zaman noktasında ne olduğunu açıklamak için analiz entegre edilir. Spesifik olmak için, kripokal hücrelerde ayipliğin verimliliğini ölçmek için göreceli floresans üniteleri okunur. Bu amaçla, kriptozal hücreler onları bir kez gıda vakidinin asidik çevre içinde sıkışıp floresan kılan bir boya ile lekelenmiş. Birlikte kullanıldığında, bu tür teknikler aracılığıyla toplanan bilgiler, diğer fagositik hücreler tarafından, belki de, amip tarafından ve, muhtemelen, davranış ve hücrelerin kaderi üzerine sonuçlar çekmeye yardımcı olmak için kritik bilgiler sağlayabilir.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Mikroplar, toprak ve suyun açık fiziksel sınırları gibi farklı ekolojik niceler içinde işgal ve gelişmek için zaman içinde evrimleşmiş, diğerleri arasında1. Bu niş, mikroplar genellikle sınırlı kaynaklar için doğrudan rekabet meşgul; önemlisi, onlar genişleyen nüfus2,3karşılamak için gereken onların büyüme veya boşluk, desteklemek için kullanılan besin için. Bazı durumlarda, amip gibi bazı holozotik organizmalar, biyokütle4,5' ten besin çıkarma yolu olarak kripokal hücrelerde bile öncesine olabilir. Buna göre, bu tür organizmala....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kripokus neoformans ve bazı Acanthamoeba castellanii suşları Biyogüvenlik seviyesi-2 (BSL-2) patojenler olarak kabul edilir; Böylece, araştırmacılar bu organizmalar ile çalışırken uygun önlemler almalısınız. Örneğin, laboratuar personeli özel eğitim ve kişisel koruyucu ekipman (PPE) gibi laboratuvar ceket, eldiven ve göz koruması olmalıdır. Enfeksiyona neden olabilecek prosedürler için biyolojik güvenlik dolabı (seviye-2) kullanılmalıdır14.

1. mantar hücrelerin ekimi ve standardizasyonu (Mine ve ark. 15 ' ten değiştirildi)

  1. Test mantar suşları (i.e., c. neoforman....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Mikroplar, çıplak gözle algılanamaz mikroskobik organizmalar vardır. Ancak, etkileri deri enfeksiyonları gibi gözlemlenebilir klinik olarak belirgin hastalıklar, neden olabilir. Mikropların belirli yönlerini okurken, morfoloji, yan ürünler ve etkileşimler arasında değişen, resim ve video kanıtı sağlamak mümkün olmak çok önemlidir.

İlk olarak kripokal hücreler ve Amoeba arasındaki etkileşimi görselleştirmek için çalışmışlardır. B.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Gazetede, ayip kripokal hücrelerle etkileşirken ortaya çıkabilecek olası sonucu ortaya çıkarmak için farklı teknikler başarıyla kullanıldı. Ayrıca, biz kripto Occussonucu 3-hidroksi yağ asitleri etkilerini göstermek için ilgilendi-Amoeba etkileşimleri.

Kullanılan ilk tekniği, hala görüntüler işlenmiş Konfokal mikroskobu oldu. Bu tekniğin önemli dezavantajı, sadece bize belirli bir timepoint ile sınırlı bilgi veriyordu. Sonuçları dayalı çizilmiş olabilir herhangi bir sonuç endüktif akı.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar, rakip finansal çıkarların olmadığını beyan ederler.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Çalışma Güney Afrika Ulusal Araştırma Vakfı (Grant numarası: UID 87903) ve serbest Devlet Üniversitesi 'nden bir hibe tarafından destekleniyordu. Ayrıca mikroskopi çalışmalarımız sırasında Pieter Van Wyk ve Hanlie Grobler tarafından sunulan hizmetler ve yardımlar için minnettarız.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
1,4-Diazabisiklo-[2.2.2]-oktanSigma-AldrichD27802-1.5-mL
plastik tüp Thermo Fisher Scientific69715-15-mL
Santrifüj tüpü ve nbsp;Thermo Fisher Scientific
7252018-50 mL Santrifüj tüpü ve nbsp;Thermo Fisher Scientific
1132017-8-Kuyu odası sürgüsüThermo Fisher Scientific
1109650-AsetonMerckSAAR1022040LC-Amip
suşuATCCÒ < / sup>30234 < sup>TM < / sup>-
ATCC ortamı 712ATCC < sup> & Ograve; 712TMAmip ortamı
Siyah 96 oyuklu mikrotitre plakasıThermo Fisher Scientific152089-Santrifüj
Hermle-
KloroformSigma-AldrichC2432-Konfokal
mikroskopNikonNikon TE 2000-Epoksi
reçine:
[1] NSA[1]ALS[1] R1054-
[2] DER 736[2] ALS[2] R1073-
[3] ERL Y221 reçinesi[3] ALS[3] R1047R-
[4] S1 (2-dimetilaminoetanol)[4] ALS [4] R1067-Floresein
izotiyosiyanatSigma-AldrichF4274-Formik
AsitSigma-Aldrich
489441-Fluoroskan Ascent FLThermo Fisher Scientific374-91038CMikroplaka okuyucu
GlikozSigma-AldrichG8270-Gluteraldehit
ALSR1009-
HemositometreBoeco-
Kurşun sitratALSR1209-Sıvı
Kromatografi Kütle SpektrometresiThermo FisherScientific-Metanol
Sigma-AldrichR 34,860-Orbital
çalkalayıcıLasec -
Osmiyum tetroksitALSR1015-pHrodo
Yeşil Zymosan A BioParticlesLifeP35365Bu pH'a duyarlı boya
Fizyolojik tampon çözeltisiSigma-AldrichP4417-50TAB-Döner
çalkalayıcıLabcon-
Sodyum fosfat tamponu:
[1] Di-sodyum hidrojen ortofosfat dihidrat [1] Merck[1] 106580-
[2] sodyum di-hidrojen ortofosfat dihidrat[2] Merck [2] 106345
Transmisyon elektron mikroskobuPhilipsPhilips EM 100 -
Tripan mavisi Sigma-AldrichT8154-Ultramikrotom
LeicaEM UC7-Uranil
asetatALSR1260A-Vakum
kurutucuLasec --
FlakonSigma-Aldrich29651-U-YNB
Lasec 239210-YPD
agarSigma-AldrichY-1500-
Technologies

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Barton, L. L., Northup, D. E. Microbial Ecology. , Wiley-Blackwell. New Jersey. (2011).
  2. Hunter, P. Entente cordiale: multiple symbiosis illustrates the intricate interconnectivity of nature. EMBO Reports. 7, 861-864 (2006).
  3. Comolli, L. R.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Cryptococcus Amoeba InteractionsConfocal MicroscopyTransmission Electron MicroscopyPhagocytosis AssayFluorescence ReadingpHrodo StainingFungal Cell CultureAmoeba ViabilityCo culture PreparationUltrastructural Analysis

Related Articles