Method Article

Sperm yoğunluğu degrade Santrifüjü kullanarak fark kalitesini topluluğu

DOI:

10.3791/58833

⸱

November 29th, 2018

 ,  , 
1Department of Poultry Science, University of Georgia

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu yazıda, yoğunluk gradient Santrifüjü tekniği ve sperm Fizyoloji araştırma kendi uygulamasında performansını açıklayan hedefliyoruz.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Eşeyli üreme ile fertilizasyon hakkında getirmek için kadın bir gamet bir erkek gamet ya da sperm hücresi sigortalar. Ancak, çok sayıda sperm hücresi yetenek gübreleme ile fertilizasyon emin olmak için bir kadın gamet ile etkileşim gerekir. Bu nedenle, tek tek sperm hücresi gübreden yeteneği başarılı üreme için önemlidir. Yoğunluk gradient Santrifüjü için onlarca yıl yardımlı üreme teknolojisi içinde kullanılmak üzere yalnızca yüksek kaliteli sperm toplamak için tekrarlanabilir, hızlı, verimli, etkili ve son derece uyarlanabilir bir yöntem olarak kullanılmıştır. Biz burada açıklanan protokoller üç ayrı nüfus horoz sperm kalitesini tarafından yalıtmak için kesintili Percoll yoğunluğu degrade Santrifüjü (PDGC) tekniği kullanımı odaklanmak. Düşük, orta ve yüksek kaliteli sperm toplamak başardık. Biz de onların canlılık, hareketlilik ve penetrability değerlendirilmesi sperm belirleyici doğurganlık potansiyelini gerektirecektir tekrarlanabilir iletişim kuralları açıklar. Koleksiyon sperm kalitesini PDGC tekniği kullanarak tarafından doğru bir şekilde için yararlı olacağını ve iyice sperm potansiyel fark doğurganlık ile karakterize.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Omurgalılar, Erkek gamet yoğun seçici basınç geçmesi; Bu nedenle bir erkek üreme fitness başarılı fertilizasyon ulaşmak için çok önemli. Herhangi bir belirli omurgalı türün erkek fertilizasyon ihtiyaçlarını karşılamak için sperm hücrelerinin büyük miktarlarda ve yeterli kalitede üretmek gerekir. Sperm hücresi sperm baş ve bir kamçı sahip, vücuttaki en polarize hücrelerdir. Onlar da çok sperm kalitesinde heterojen vardır (canlı ve ölü, morfolojik normal ve anormal ve hareketsiz, düşük mobil ve yüksek mobil), hangi geniş varyasyon erkeklerin üreme verimliliği saptandı. Yüksek kaliteli sperm, daha az sayıda başarıyla ovum döllemek için gerekli matings büyük oranda. Ancak....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm yöntem tanımlamak burada kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) Gürcistan Üniversitesi tarafından onaylanmıştır.

1. yıkama geleneksel Santrifüjü kullanarak

  1. Fosfat tampon çözüm (PBS) hazırlayın. NaCl, 8.0 g KCl, 1.44 g Na2HPO4 ve KH2PO4 800 ml distile su (dH2O) 0,24 g 0.2 g ekleyin. PH 7.4 0.1 N HCl kullanarak için ayarlamak ve çözüm getirmek için 1 dH2O. kullanarak L
  2. Motilite arabellek hazırlayın. NaCl, 6.5 g glikoz, 0,444 g CaCl2 ve n - tris-[hydroxymethyl] 11,5 g 4,5 g ekleyin dH2O. 800 ml metil-2-amino-ethanesulfoni....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

PDGC tekniği sperm sayısı üç ayrı ayrımı arasında tüm parametreleri tarafından kalite derecesi sonuçlandı. Yüksek kaliteli katman daha yüksek yoğunluklu çözüm, Orta kalite arasındaki bir katmanda yüksek ve düşük yoğunluklu çözüm daha düşük yoğunluklu çözüm üzerinde bir düşük kaliteli katman aşağıda içine sperm ayırır. Kalite bu farklılıklar (Şekil 4) canlılık, hareketlilik (Şekil 5) ve penetrability (Şekil 6<.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Doğurganlık sadece hayvansal üretim karlılığını belirler ama aynı zamanda, bunun doğal seleksiyonun türlerin varlığı için bir araç olarak görür. Bir sperm hücresi nihai bir yumurta döllemek için fonksiyonudur. Bir erkek ovidukt fittest o sperm yumurta23,24fertilizasyon sağlamak için seçer. Vitro çalışmalar da nitel sperm özellikleri ve döllenme başarı4,11,23

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ifşa gerek yok.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
AccudenzDoğru Kimyasal ve Bilimsel Şirketi, Westbury, NY, ABDAN7050
Percoll ve nbsp;Sigma-Aldrich, Corp., St. Louis, MO, ABDP7828
Schiff' s reaktifiSigma-Aldrich, Corp., St. Louis, MO, ABD3952016
TESSigma-Aldrich, Corp., St. Louis, MO, ABDT1375
Eosin YSigma-Aldrich, Corp., St. Louis, MO, ABDE4009
NigrosinSigma-Aldrich, Corp., St. Louis, MO, ABD198285
ST 40R Santrifüj ve nbsp;Thermo Scientific, Waltham, MA, ABD75004524
DU 530 Yaşam Bilimleri UV/Vis SpektrofotometresiBeckman Coulter, Brea, CA, ABDKatalog bulunamadı
Olympus IX 71 Ters Floresan ve Faz Kontrast MikroskobuOlympus America Inc., PA, ABDKatalog bulunamadı

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Spargo, S. C., Hope, R. M. Evolution and nomenclature of the zona pellucida gene family. Biology Reproduction. 68, 358-362 (2003).
  2. Okamura, F., Nishiyama, H. The passage of spermatozoa through the vitelline membrane in the domestic fowl, Gall....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Sperm CollectionDensity Gradient CentrifugationPercoll Density GradientSperm Quality AssessmentViability Mobility PenetrabilityDiscontinuous Percoll TechniqueSemen Sample PreparationLayer Isolation ProtocolAvian Sperm AnalysisFertility Potential Evaluation

Related Articles