Sıçan kemik Iliği Osteoclast precursors yalıtım, arıtma ve farklılaşma

Lining Wang; Suyang Zheng; Yang Guo; Yalan Pan; Jie Sun; Weimin Xu; Jinlan Lu; Weidong Li; Yong Ma

doi:10.3791/58895

Yöntem makalesi

Sıçan kemik Iliği Osteoclast precursors yalıtım, arıtma ve farklılaşma

DOI:

10.3791/58895

⸱

19 Mayıs 2019

Lining Wang¹^,² , Suyang Zheng¹^,² , Yang Guo¹^,² , Yalan Pan¹^,² , Jie Sun¹^,² , Weimin Xu¹^,² , Jinlan Lu³ , Weidong Li³ , Yong Ma¹^,²^,⁴

¹Laboratory of New Techniques of Restoration & Reconstruction, Institute of Traumatology & Orthopedics, Nanjing University of Chinese Medicine, ²TCM Nursing Intervention Laboratory of Chronic Disease Key Laboratory, Nanjing University of Chinese Medicine, ³Jiangsu Key Laboratory of Chinese Medicine Processing, Engineering Center of State Ministry of Education for Standardization of Chinese Medicine Processing, Nanjing University of Chinese Medicine, ⁴Department of Traumatology and Orthopedics, Affiliated Hospital of Nanjing University of Chinese Medicine

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Osteokuzlar, hematopoetik kök hücrelerin monosit-makrophaj soylarından elde edilen dokuya özgü makrophaj polykaryonlarındadır. Bu protokol, kemik iliği hücrelerinin nasıl yalıtılmasını açıklar, böylece geleneksel yöntemlerde bulunan kazaların riskini azaltarak büyük miktarlarda osteocsürer elde edilir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Osteositler, monosit veya makrophaj öncülerinin birleşerek oluşturduğu monoksit-makrophaj sırının büyük, multinükleated ve kemik-resorbing hücrelerdir. Aşırı kemik reorpsiyonu osteolitik hastalıklara yol açan en önemli hücresel mekanizmalardan biridir, osteoporoz dahil, periodontitis, ve periprotez Osteoliz. Osteocsürer ana fizyolojik fonksiyon hem hidroksiatit mineral bileşeni ve kemik organik matris absorbe, kemik yüzeyinde karakteristik reorpsiyon görünümünü üreten. Vücudun diğer hücrelerine kıyasla nispeten az osteocsürer, özellikle yetişkin kemiklerde. Son çalışmalar her zaman bir sorun olmuştur daha az zaman, daha olgun osteocsürer elde etmek için nasıl odaklanmıştır. İzolasyon ve kültür tekniklerinde çeşitli iyileştirmeler daha olgun osteocsürer elde etmek için laboratuvarlarda geliştirdik. Burada, özel ve basit bir cihaz kullanarak, daha az zaman içinde kemik iliği yalıtır ve geleneksel prosedür ile karşılaştırıldığında daha az çaba ile bir yöntem tanıtmak. Yoğunluk degrade santrifüjleme kullanımı ile, biz klasik yöntemlerle tanımlanır sıçan kemik iliği, tam farklılaşmış osteocsürer büyük miktarda elde.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kemik homeostazisi, kemik-reorbing osteoksürer ve kemik oluşturan osteoblastlar¹ile düzenlenmiş karmaşık bir fizyolojik süreçtir. Osteoblastlar ve osteocsürer ile aracılı osteoblastik ve osteoklastik aktivite arasında bir denge, sırasıyla, kemik sağlığı ve homeostaz korumak için son derece önemlidir, çünkü kemik homeostazı perturbations kemik hastalıklarına yol açabilir, böyle anormal kemik büyümesi veya kemik yoğunluğu kaybı olarak. Benzersiz kemik-reorpsiyon hücreleri olarak, osteocsürer anormal kemik imha ile ilgili hastalıklarda önemlidir, osteoporoz dahil, periodontitis, ve periprotez Osteoliz²^,

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada tarif edilen hayvanları içeren tüm yöntemler, Nanjing Çin Tıp Üniversitesi 'nin kurumsal hayvan bakımı ve kullanım Komitesi (ıayuc) tarafından onaylanmıştır.

1. Kurulum

Birkaç boyuna kesilmiş 1 mL pipet uçları (1 cm) ve birkaç 1,5 mL mikrosantrifüjü tüpleri hazırlayın. Pipet uçları ve mikrosantrifüjlerin tüplerini 103 kPa ve 121 °C ' de 20 dakika boyunca koyun ve steril olduklarından emin olun.
Yalıtım prosedürü sırasında izole dokularda korumak için bir kutu buz ve çeşitli steril yemekler hazırlayın.

2. kültür orta hazırlanması

Tam kültür ortamını hazırlayın. Penisilin/....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Protokolün amacı, çok sayıda osteoklast öncülerini rahat bir şekilde izole etmek ve arındırmak ve osteocsürer 'i başarılı bir şekilde teşvik etmektir. M-CSF ve RANKL ile tamamlayıcı olarak, dev osteocsürer gün 5 – 6 görüldü. Osteoksürer oluşumu, TRAP boyama ile başarıyla tespit edilmiştir (Şekil 1a). Büyük ve mor hücreler birden fazla çekirdeklerle TRAP-pozitif hücreler olarak kabul edildi (genellikle ≥ üç çekirdekler). Bu yöntem sayesinde, 24-kuyu plakasında.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kemik emici hastalıkların mekanizmalarını anlamanıza ve yeni terapötik ajanlar geliştirmesine yardımcı olabilecek kemik metabolizmasını incelemek isteyen herhangi bir araştırmacı için osteocsürer in vitro elde etme ve çalışma becerisi, önemli ve temel bir beceridir. Bu çalışmada, önceki yöntemlere dayalı bazı değişikliklerle ilgili bir protokol tanımlanmıştır.

Kemik iliği elde etmek için pipet uçları ve mikrosantrifüj tüpleri kullanarak, büyük ölçüde kemik iliği ve geleneksel yöntemlerle karşı.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların ifşa etmesi gereken hiçbir şey yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma Çin Ulusal Doğal Bilim Vakfı (81473692) tarafından Yong ma için desteklenmektedir. Yazarlar Çin tıp Nanjing Üniversitesi Klinik Tıp Ilk Koleji Tıp Araştırma Merkezi tüm personel teşekkür ederiz.

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Asit Fosfataz, Lekosit (TRAP) kiti	Sigma-Aldrich	387A
Otomatik Sert Doku Dilimleyici	Lecia	RM2265
Sığır femur kemiği			Kendimiz tarafından satın alındı
Hücre İnkübatörü	Heraus	BB16 / BB5060
Fetal Sığır Serumu	Sarana	s-fbs-au-015
Keçi Anti-Tavşan IgG H & L (Alexa Fluor 488)	Abcam	ab150077
Sert Doku Öğütücüler	Lecia	SP-2600
Histopaque Kit	TianJing Haoyang	TBD2013DR	Silislenmiş santrifüj tüp AMD hücre ayırma çözeltisi
Hochest33342	Sigma-Aldrich	B2261
Ters Faz Kontrast Mikroskobu	Olympus	CKX31
Ters Floresan Mikroskobu	Lecia	DMI-3000
MEM, Glutamin yok	Gibco	11090-081
Penisilin-Streptomisin, Sıvı	Gibco	15140122
Tavşan Anti-Kalsitonin reseptörü	Bioss	bs-0124R
Rekombinant Sıçan M-CSF	PeproTech	400-28
Rekombinant Sıçan sRANK Ligand	PeproTech	400-30
Kırmızı Kan Hücresi Lizis Tamponu	Absin	abs47014932
Taramalı Elektron Mikroskobu	FEI	Quanta 200
Toluidin Mavi	Sigma-Aldrich	89649

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Boyle, W. J., Simonet, W. S., Lacey, D. L. Osteoclast differentiation and activation. Nature. 423 (6937), 337-342 (2003).
Kular, J., Tickner, J., Chim, S. M., Xu, J. K. An overview of the regulation of bone remodelling at the cellular level. Clinical Biochemistry. 45 (12)....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Kemik li i zolasyonu Yo unluk Gradyan Santrif gasyonu Osteoklast Diferansiyasyonu TRAP Boyamas Taramal Elektron Mikroskobu Toluidine Blue Boyamas Kemik Rezorpsiyon Analizi M CSF RANKL nd ksiyonu H cre Ay rma Sol syonu

Sıçan kemik Iliği Osteoclast precursors yalıtım, arıtma ve farklılaşma

Bu makalede

Özet

Özet

Giriş

Protokol

Sonuçlar

Tartışma

Açıklamalar

Teşekkürler

Malzemeler

Kaynaklar

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

İlgili makaleler