Yöntem makalesi

Proton pompalama membran enzimler elektrokimya ve floresan mikroskopisi kullanılarak incelenmesi için tek lipozom ölçümleri

7.1K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/58896

⸱

21 Şubat 2019

 ,  , 
1School of Biomedical Sciences & the Astbury Centre for Structural Molecular Biology, University of Leeds, 2Department of Chemistry and Nano-Science Center, University of Copenhagen

Bu makalede

Özet

Burada, proton translocation moleküler mekanizması tek lipozomlar, lipid membranlar üzerinde çalışmak için bir protokol sitokrom bo3 örnek olarak kullanarak mevcut. Birleştirerek elektrokimya ve floresan mikroskopisi, lumen tek veziküller, tek içeren veya birden fazla enzim, pH değişiklikler algıladı ve ayrı ayrı analiz.

Özet

Elektron, Proton pompa enzimler zincirleri çift Redoks reaksiyonları proton translocation için ATP üretimi için kullanılan bir proton-sebep kuvvet oluşturma membran arasında aktarın. Membran proteinlerinin amfifilik doğası kullandıklarında daha özel dikkat gerektirir ve membran taşıma işlemleri proton translocation gibi okurken sulandırma doğal lipid ortamına vazgeçilmezdir. Burada, biz Escherichia coli örnek olarak sitokrom bo3 alarak membran Redoks enzimler, proton pompa mekanizması soruşturma için kullanılan bir yöntem ayrıntılı. Elektrokimya ve floresan mikroskopi bir arada quinone havuzu ve monitör pH değişiklikleri Lümen Redoks durumunu kontrol etmek için kullanılır. Floresan mikroskopi Uzaysal çözünürlük nedeniyle, lipozomlar yüzlerce enzim içeriği bir tek enzim ya da ışınlama lipozom başına ölçeklendirilebilir iken aynı anda ölçülebilir. İlgili tek enzim analizi okuduğunuzda, aksi takdirde tüm popülasyon davranış tarafından gizlenmiş olabilir enzim fonksiyonel dinamiklerini ortaya çıkarabilir. Otomatik görüntü analizi için bir komut dosyası için bir açıklama içerir.

Giriş

Enzim mekanizmaları ve Kinetik hakkında bilgi genellikle nerede bir istatistiksel ortalama ölçümleri temsil topluluğu veya macroscale düzeyde moleküller, milyonlarca binlerce enzim nüfus ile elde edilir. Bu, ancak, enzim kompleksi oluştururlar heterojenite onların davranış görülebilir ve moleküler mekanizmaları topluluk düzeyinde gözlenen her molekül için mutlaka geçerli değildir bilinmektedir. Bu tür sapmalar bireysel molekül ölçekte kapsamlı çalışmaları tek enzimler tarafından son yirmi yılda1sırasında ortaya çıkan yöntemler ile onaylandı. Özellikle, Floresans algılama bireysel enzim aktivitesinin enzim aktivitesi2,3 heterojen araştırmak veya sözde hafıza etkisi (düşük noktalarla başarılı yüksek enzim etkinlik dönemleri keşfetmek için kullanılan etkinlik ve tersi)4,5.

Birçok tek enzim çalışmaları enzimleri yüzey veya yeterince uzun sürekli gözlem için görüş alanı içinde kalmak için başka bir şekilde dağınık şekilde sabit immobilize gerektirir. Enzim kapsülleme lipozomlar içine herhangi bir olumsuz etkisi nedeniyle yüzey-enzim veya protein-protein etkileşimleri6,7önleme sırasında enzim tutuklaması etkinleştirileceği gösterilmiştir. Buna ek olarak, lipozomlar tek zar proteinleri onların doğal lipid bilayer çevre8,9,10eğitim için benzersiz bir imkanı verir.

Membran proteinlerinin, taşıyıcı, sınıf bir yön translocation maddelerin hücre zarı, proteinler lipid bilayers (örneğin, lipozomlar)11yeniden yükleyen sadece okudu bir davranış karşısında egzersizleri, 12,13. Örneğin, proton translocation prokaryotik ve ökaryotik elektron taşıma zinciri, çeşitli enzimler tarafından sergilenen, ATP sentezi için kullanılan bir proton-güdü güç oluşturarak önemli bir rol hücresel solunum oynar. Bu durumda, her ne kadar bu işlem detaylı mekanizmasının kez zor kalır etkinlik pompalama proton elektron transferi için birleştirilmiştir.

Son zamanlarda, Escherichia coli (sitokrom bo3) terminal ubiquinol oksidaz tek enzim aktivitesi pompalama proton çalışmaya elektrokimya ile çift floresan algılama olasılığı gösterdi lipozomlar14' te yeniden düzenlendi. Bu bir pH duyarlı membran geçirimsiz floresan boya E. hazırlanan lipozomlar Lümen içine encapsulation sağlanır coli kutup lipidler (şekil 1A). Böylece çoğu lipozomlar ya yok ya da sadece bir Sulandırılan enzim molekül (göre Poisson dağılımı) içerdiği protein miktarı optimize edildi. Sitokrom bo3 iki yüzeylerde ubiquinone lipozomlar ve (ortam) oksijen çözümde oluşturulan lipid karışımı ekleyerek temin edilmiştir. Lipozomlar sonra seyrek 6-mercaptohexanol otomatik olarak birleştirilmiş bir monolayer ile kaplı bir yarı saydam yumușak altın elektrot üzerinde adsorbe. Son olarak, elektrot bir basit Spektroelektrokimyasal hücre (şekil 1B) altta monte edilir. Quinone havuzu Redoks durumu elektrokimyasal kontrol sağlar bir esnek tetiklemek için veya pH duyarlı boya proton translocation tarafından bir sonucu olarak lipozomlar Lümen içinde pH değişiklikleri izlemek için kullanıldığı gibi her an enzimatik reaksiyon durdurmak için enzimler. Bir ikinci, lipid bağlı floresan boya, boyutu ve bireysel lipozomlar hacmi floresan yoğunluğu belirlenebilir ve enzim proton pompalama aktivitesi miktar kullanılarak böylece. Bu tekniği kullanarak, sitokrom bo3 molekülleri hızla proton sebep kuvvet kalır bir spontan kaçak durumuna girebilmesi için özellikle bulduk. Bu makalenin amacı tek lipozom ölçümleri ayrıntılı teknik tanıtmaktır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

1. bir Lipid/UQ-10/FDLL karışımı hazırlanması

Not: E. coli lipidler lipozomlar hazırlanması için kullanılan bölünmemeli ve iyice karışık ubiquinone-10 (enzim Substratı) ve uzun dalga boyu floresan boya etiketli lipidler (lipozomlar boyutu tayini için) önce olmalıdır sulandırma.

  1. Cam kullanarak, kloroform stokunun polar lipit transfer 200 µL 5 mg aliquots yapmak için cam şişe Escherichia coli (25 mg/mL) ayıklayın.
  2. 1 mg/mL ubiquinone-10 50 µL ekleyin (UQ-10; kloroform) lipidler UQ-10 son oranı yapmak için: lipidler 1: 100 (% 1 w/w).
  3. 1 mg/mL (% 0,4 w/w) bir uzun dalga boyu floresan boya etiketli lipid (FDLL) 20 µL lipidler/UQ-10 karışıma ekleyin.
  4. Kloroform çözüm tarafından kısa vortexing homojenize ve nazik bir azot veya argon akışı altında kloroform çoğu buharlaşır. Kloroform izleri tamamen tarafından en az 1 h için vakum altında daha fazla buharlaşma.
    Not: Lipid aliquots-20 ° C'de inert bir atmosfer altında birkaç ay depolanabilir.

2. sulandırma sitokrom bo3

Not: sitokrom bo3 E. coliarıtma için protokol Rumbley ve arkizleyin. 15 yüksek saflıkta yerli katlanmış enzim örnekleri sağlamak için boyutu-dışlama Kromatografi Rumbley vd tarafından açıklanan benzeşme arıtma adım sonra ekleyin 15

  1. 4, pH 7.4, lipitler/UQ-10/FDLL kuru bir aliquot için (5 mg, adım 1.4) mix ve girdap ile mix lipit filmin tam 2 dk ultrasonik bir banyosu tedavisinin ardından resuspended kadar 40 mm paspaslar-KOH/60 mM K2312,5 µL ekleyin.
  2. 25 mM 8-hydroxypyrene-1,3,6-trisulphonic asit (HPTS), lipozomlar içinde kapsüllü gereken bir pH duyarlı floresan boya 125 µL ekleyin.
  3. 250 mM n-Oktil β-D-glucopyranoside (OGP) yüzey aktif 137,5 µL eklemek, girdap kullanarak mix ve solüsyon içeren bir ultrasonik su banyosu için tüm lipidler yüzey aktif micelles çözündürüldükten emin olmak 10 dk temizleyicide. Dispersiyon 1,5 mL plastik tüpün içine aktarın.
    Not: Lipidler bulutlu süspansiyon ile yüzey aktif solubilization sonra şeffaf hale gelmelidir.
  4. Sitokrom bo3 gerekli miktarda ekleyin (aşağıdaki nota bakın) ve toplam hacmi 50 µL (sitokrom bo3 çözüm artı su) yapmak için ultrasaf su ekleyin. Bir silindir Mikser üzerinde 10 dk 4 ° C'de kuluçkaya.
    Not: Tipik tek enzim koşulları için 0,1-%0,2 miktardır (w/w protein lipid i.e. 5-10 µg protein), her ne kadar Eğer amaç sadece elektrokimyasal aktivite (aşağıya bakın) gözlemlemek için 1-%2 (50-100 µg protein) kadar artırılabilir. Bir negatif kontrol lipozomlar sitokrom bo3 olmadan hazırlanabilir.
  5. 2 x 50 mg ve 2 x 100 mg polistren lastikteki dört 1.5 mL-tüp kapakları tartmak ve kurutma önlemek için parafin film ile kapatın.
    Not: Kullanmadan önce polistiren lastikteki metanol, su ve Üretici kılavuzuna göre saklı içinde su ile yıkanmalıdır.
    Not: bir su/microbead karışımı kullanılırsa, polistren lastikteki elverişli bir konuma sahip geniş bir ipucu ile bir micropipette kapaklı aktarılabilir. Su sonra bir micropipette olan ince bir ipucu kullanarak lastikteki kaldırılabilir.
  6. Polistren lastikteki 1st50 mg dağılımı ile 1,5 mL-plastik tüp polistren lastikteki kapaklı koyarak ve kısa bir tur birkaç saniye sulandırma karışım (Adım 2.4) içine ekleyin. Yüzey aktif 30 dkiçin absorbe polistren lastikteki bir silindir Mikser üzerinde 4 ° C'de kuluçkaya.
    1. Polistren lastikteki ve incubations eklemeler aşağıdaki gibi yineleyin: 50 mg 60 dk , kuluçka; lastikteki Ekle 100 mg 60 dk , kuluçka için lastikteki ekleyin; ve 100 mg lastikteki 120 dk , kuluçka için ekleyin.
      Not: proteoliposomes oluşmuş gibi çözüm kapatılan lastikteki yukarıda adım 2.6 sırasında yarı saydam dönecek.
  7. Proteoliposome çözüm bir micropipette olan ince bir ipucu kullanarak polistren lastikteki ayırmak. 20 mM paspaslar-KOH/30 mM K290 ml dağılımı çok seyreltik4, pH 7,4 (MOPS arabellek) ve bir Ti45 ultracentrifuge tüp transferi.
  8. Ultracentrifuge dağılım türü 45 Ti kullanarak rotor 125.000 x g (at rmax) 1s proteoliposomes cips için de.
    Not: büyük arabellek birimindeki seyreltme sigara kapsüllü HPTS son süspansiyon konsantrasyon azaltmaya yardımcı olur, ancak daha küçük santrifüj tüpleri kullanılabilir.
  9. Süpernatant atmak,4, pH 7.4 arabellek böylece (Pelet resuspending olmadan) 20 mM paspaslar-KOH/30 mM K2ile granül durulayın. Durulama arabellek discarding sonra proteoliposomes BEZLERİ arabellek 500 µL içinde ileri geri ince uç micropipette ile pipetting tarafından yeniden askıya alma. Ardından 1.5 mL plastik tüp aktarın.
  10. Süspansiyon için enkaz kaldırmak için 12.000 x g de 5 dk santrifüj kapasitesi. Süpernatant (yeniden proteoliposomes) yeni bir şişe aktarın.
  11. Gecede Sulandırılan proteoliposomes dağılım 4 ° C'de depolayın ve 2 gün içinde kullanın.

3. fabrikasyon yarı saydam altın elektrot













  7. figure-protocol-1

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Altın-modified kapak notu (elektrot) kalite 6MH SAM ile elektrokimyasal empedans spektroskopisi ile her deneme önce kontrol edilir. Şekil 2A önce ve sonra lipozomlar adsorbe elektrokimyasal empedans Spektroskopi kullanarak ölçülen temsilci Cole-Cole araziler gösterir. SAM kalitesi yeterli değilse, empedans spektroskopisi yarı daire Cole-Cole mezarlığına çıkan hemen hemen saf bir kapasitif davranış göstermesi gerekmektedir. Cole-Cole arsa yarım dairenin çapı 2...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Açıklanan yöntemi tarafından lipozomlar yeniden solunum membran proteinlerinin pompalama proton çalışmaya uygundur ve quinone havuzu ile elektron alış verişi edebiliyoruz. Proton pompalama aktivitesi, lipozom Lümen (şekil 1A) kapsüllenmiş pH-duyarlı (ratiometric) boyalar kullanılarak tek-enzim düzeyinde izlenebilir.

Yöntemi ile bir SAM18değiştiren elektrotlar ile elektron alışverişi için yeteneğine ubiquinone (veya diğer quinones), lipid bi...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar ifşa gerek yok.

Teşekkürler

Yazarlar mali destek için BBSRC (1/P005454/BB) kabul etmiş oluyorsunuz. NH VILLUM Vakfı genç araştırmacı programı tarafından finanse edildi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
6-Merkapto-1-heksanol (6MH)Sigma451088%97
8-hidroksipiren-1,3,6-trisülfonik asit (HPTS)BioChemika56360
Alüminyum tutucu (Elektrokimyasal hücre)Özel yapım30x30x7 mm; iç çap: 26 mm; delik çapı: 15 mm
Yardımcı elektrotplatin tel
KloroformVWR Kimyasallar83627
E.coli polar lipidlerAvanti100600C25 mg/mL kloroform
EpoksiEPO-TEK301-2FLdüşük floresan epoksi
Fiji (ImageJ 1.52d)Gerekli eklentiler: StackReg ve TurboReg (http://bigwww.epfl.ch/thevenaz/stackreg/)
Filtre küpü ("ATTO633")Chroma Technology CorporationÖrn: 620/60 nm; DM: 660 nm; Em: 700/75 nm
Filtre küpü ("HPTS1")Chroma Technology Corporation Örn: 470/20 nm; DM: 500 nm; Em: 535/48 nm
Filtre küpü ("HPTS2")Chroma Technology Corporation Örn: 410/300 nm; DM: 500 nm; Em: 535/48 nm
Filtre küpü ("Texas Red")Chroma Technology Corporation Ex: 560/55 nm; DM: 595 nm; Em: 645/75 nm
Floresan boya etiketli lipitler (FDLL)ThermoFisher ScientificT1395MPTexasRed-DHPC bu çalışmada kullanılmıştır (λ exc 595 nm; λ em 615 nm)
Floresan boya etiketli lipitler (FDLL) (alternatif)ATTO-TECAD 633-161ATTO633-DOPE alternatif olarak kullanılabilir (λ EXC 630 nm; λ em 651 nm)
Jel filtrasyon kolonuGE Healthcare28-9893-33HiLoad 16/600 Superdex 75 pg, ek protein saflaştırması için
Cam lamellerVWR International631-0172No 1.5
Cam şırıngaHamilton1725 RNR250 µ L
Cam şişelerScientific Glass Laboratories LtdT101 / V11.75 mL kapasite
GoldGoodFellow% 99.99
GramacidinSigmaG5002
Cıva sülfat referans elektrotRadyometre (Hash) E21M012
MikrosantrifüjEppendorfMinispin NL040
MikroskopNikonEclipse Ti
Mikroskop KameraAndorZyla 5.5 sCMOS
Mikroskop LambasıNikonIntensilight C-HGFI
NIS-Elements AR 5.0.2NikonMikroskop edinme yazılımı
n-Oktil ve beta;-D-glukopiranosidMelford LaboratoriesB2007
Nova 1.10MetrohmPotansiyostat kontrol yazılımı
AmaçNikonPlan Apo λ 60x/1.4 yağ
OriginPro 2017OriginLabÇizim yazılımı
O-ring (Elektrokimyasal hücre)Orinokoİç çap: 16 mm; kesit: 1,5 mm
Plastik tüplerEppendorf3810X1.5 mL
Polistiren mikro boncuklarBio-RAD152-3920Biyoboncuklar, 20-50 gözlü
PotansiyostatMetrohm AutolabAutolab 128N
PotansiyostatCH CihazlarıCHI604C
Komut dosyası oluşturma yazılımıMatlabR2017aGerekli araç kutuları: 'Görüntü İşleme Araç Kutusu', 'Paralel Hesaplama Araç Kutusu', 'Eğri Uydurma Araç Kutusu', 'Sistem Tanımlama Araç Kutusu', 'Optimizasyon Araç Kutusu'Silikon
gofretlerIDB Technologies LTDSi-C2 (N< 100>P)& Oslash; 25 mm, 525 um kalınlığında
Teflon hücre (Elektrokimyasal hücre)Özel yapımDış çap: 26 mm; İç Çap: 13,5 mm
Şakak Çizgili Ultra Düz Altın YüzeylerOrnitorenk TeknolojileriAU.1000.SWTSGAlternatif kullanıma hazır ultra düz altın yüzeyler (Talep üzerine 100 nm'nin altında kalınlık)
İnce mikropipet uçlarıSarstedt70.1190.100veya benzer jelloader uçları 200 & L
Ubiquinone-10SigmaC-9538
UltrasantrifüjBeckman-CoulterL-80XP, Ti 45 rotorlu
Ultrasonik banyoFisher ScientificFB15063

Kaynaklar

  1. Claessen, V. I., et al. Single-Biomolecule Kinetics: The Art of Studying a Single Enzyme. Annual Review of Analytical Chemistry. 3 (1), 319-340 (2010).
  2. Rojek, M. J., Walt, D. R. Observing Single Enzyme Molecules Interconvert between Activity States upon Heating. PLoS ONE. 9 (1), e86224(2014).
  3. Velonia, K., et al. Single-Enzyme Kinetics of CALB-Catalyzed Hydrolysis. Angewandte Chemie International Edition. 44 (4), 560-564 (2005).
  4. Lu, H. P., Xun, L., Xie, X. S. Single-molecule enzymatic dynamics. 282 (5395), Science. New York, N.Y. 1877-1882 (1998).
  5. Engelkamp, H., Hatzakis, N. S., Hofkens, J., De Schryver, F. C., Nolte, R. J. M., Rowan, A. E. Do enzymes sleep and work? Chemical Communications. 9 (9), 935-940 (2006).
  6. Boukobza, E., Sonnenfeld, A., Haran, G. Immobilization in Surface-Tethered Lipid Vesicles as a New Tool for Single Biomolecule Spectroscopy. The Journal of Physical Chemistry B. 105 (48), 12165-12170 (2001).
  7. Hsin, T. -M., Yeung, E. S. Single-Molecule Reactions in Liposomes. Angewandte Chemie International Edition. 46 (42), 8032-8035 (2007).
  8. García-Sáez, A. J., Schwille, P. Single molecule techniques for the study of membrane proteins. Applied Microbiology and Biotechnology. 76 (2), 257-266 (2007).
  9. Onoue, Y., et al. A giant liposome for single-molecule observation of conformational changes in membrane proteins. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Biomembranes. 1788 (6), 1332-1340 (2009).
  10. Jefferson, R. E., Min, D., Corin, K., Wang, J. Y., Bowie, J. U. Applications of Single-Molecule Methods to Membrane Protein Folding Studies. Journal of Molecular Biology. 430 (4), 424-437 (2018).
  11. Rigaud, J. L., Pitard, B., Levy, D. Reconstitution of membrane proteins into liposomes: application to energy-transducing membrane proteins. BBA - Bioenergetics. 1231 (3), 223-246 (1995).
  12. Jesorka, A., Orwar, O. Liposomes: Technologies and Analytical Applications. Annual Review of Analytical Chemistry. 1 (1), 801-832 (2008).
  13. Seddon, A. M., Curnow, P., Booth, P. J. Membrane proteins, lipids and detergents: Not just a soap opera. Biochimica et Biophysica Acta - Biomembranes. 1666 (1-2), 105-117 (2004).
  14. Li, M., et al. Single Enzyme Experiments Reveal a Long-Lifetime Proton Leak State in a Heme-Copper Oxidase. Journal of the American Chemical Society. 137 (51), 16055-16063 (2015).
  15. Rumbley, J. N., Furlong Nickels, E., Gennis, R. B. One-step purification of histidine-tagged cytochrome bo3 from Escherichia coli and demonstration that associated quinone is not required for the structural integrity of the oxidase. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Protein Structure and Molecular Enzymology. 1340 (1), 131-142 (1997).
  16. Jeuken, L. J. C., et al. Phase separation in mixed self-assembled monolayers and its effect on biomimetic membranes. Sensors and Actuators, B: Chemical. 124 (2), 501-509 (2007).
  17. Barsoukov, E., Macdonald, J. R. Impedance Spectroscopy Theory, Experiment, and Applications. , John Wiley & Sons. Chapters 1-2 (2005).
  18. Jeuken, L. J. C., Connell, S. D., Henderson, P. J. F., Gennis, R. B., Evans, S. D., Bushby, R. J. Redox Enzymes in Tethered Membranes. Journal of the American Chemical Society. 128 (5), 1711-1716 (2006).
  19. Compton, R. G., Banks, C. E. Chapter 4. Understanding voltammetry. , World Scientific Publishing Europe Ltd. Singapore. (2018).
  20. Girault, H. H. Chapter 10. Analytical and Physical Electrochemistry. , EPFL Press. Lausanne. (2004).
  21. Mazurenko, I., Jeuken, L. J. C. Timelapse (movie) of single vesicles fluorescence change upon potential application. , (2018).
  22. Li, M., Khan, S., Rong, H., Tuma, R., Hatzakis, N. S., Jeuken, L. J. C. Effects of membrane curvature and pH on proton pumping activity of single cytochrome bo3enzymes. Biochimica et Biophysica Acta - Bioenergetics. 1858 (9), 763-770 (2017).
  23. Li, M., Tuma, R., Jeuken, L. J. C. MATLAB code for the analysis of proton transport activity in single liposomes. , (2017).
  24. Li, M., Tuma, R., Jeuken, L. J. C. Time-resolved fluorescence microscopic data (traces) of individual lipid vesicles with proton transport activity. , (2017).
  25. Paula, S., Volkov, A. G., Van Hoek, A. N., Haines, T. H., Deamer, D. W. Permeation of protons, potassium ions, and small polar molecules through phospholipid bilayers as a function of membrane thickness. Biophysical Journal. 70 (1), 339-348 (1996).
  26. Brookes, P. S., Hulbert, A. J., Brand, M. D. The proton permeability of liposomes made from mitochondria) inner membrane phospholipids: No effect of fatty acid composition. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Biomembranes. 1330 (2), 157-164 (1997).
  27. Eriksson, E. K., Agmo Hernández, V., Edwards, K. Effect of ubiquinone-10 on the stability of biomimetic membranes of relevance for the inner mitochondrial membrane. Biochimica et Biophysica Acta - Biomembranes. 1860 (5), 1205-1215 (2018).
  28. Seneviratne, R., et al. A reconstitution method for integral membrane proteins in hybrid lipid-polymer vesicles for enhanced functional durability. Methods. , 1-8 (2018).
  29. Veshaguri, S., et al. Direct observation of proton pumping by a eukaryote P-type ATPase. Science. 351 (6280), 1-6 (2016).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Proton Pompalayan EnzimlerElektrokimyasal Floresans MikroskopisiSitokrom bo3Proteolipozom Rekonstit syonupH Duyarl Boya HPTSFloresan Mikroskopi AnaliziElektrokimyasal Empedans SpektroskopisiTekil Enzim al malarLipid ift Tabaka Ortam

İlgili makaleler